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    重庆时时彩20181019002: 一种同时测定制黄草乌中滇乌碱和8去乙?;嵛谕芳畹姆椒?pdf

    关 键 词:
    一种 同时 测定 制黄 草乌 中滇乌碱 乙酰 乌头 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201510101815.3

    申请日:

    2015.03.09

    公开号:

    CN104678020A

    公开日:

    2015.06.03

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 专利权人的姓名或者名称、地址的变更 IPC(主分类):G01N 30/02变更事项:专利权人变更前:云南云河药业股份有限公司变更后:云南云河药业股份有限公司变更事项:地址变更前:661000 云南省个旧市云河大道1号云南云河药业股份有限公司变更后:661000 云南省红河哈尼族彝族自治州个旧市云河大道1号|||专利权的转移IPC(主分类):G01N 30/02登记生效日:20181114变更事项:专利权人变更前权利人:云南中医学院变更后权利人:云南云河药业股份有限公司变更事项:地址变更前权利人:云南省昆明市呈贡新区雨花路1076号变更后权利人:661000 云南省个旧市云河大道1号云南云河药业股份有限公司变更事项:共同专利权人变更前权利人:云南云河药业股份有限公司|||授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 30/02申请日:20150309|||公开
    IPC分类号: G01N30/02 主分类号: G01N30/02
    申请人: 云南中医学院; 云南云河药业股份有限公司
    发明人: 马晓霞; 周志宏; 杨竹雅; 杨树德; 钱子刚
    地址: 云南省昆明市呈贡新区雨花路1076号
    优先权:
    专利代理机构: 昆明知道专利事务所(特殊普通合伙企业)53116 代理人: 姜开侠; 谢乔良
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201510101815.3

    授权公告号:

    ||||||||||||

    法律状态公告日:

    2019.02.26|||2018.12.04|||2016.06.29|||2015.07.01|||2015.06.03

    法律状态类型:

    专利权人的姓名或者名称、地址的变更|||专利申请权、专利权的转移|||授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开一种同时测定制黄草乌中滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳畹姆椒?,包括:对照品溶液制备,称取滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳?,加盐酸甲醇配制成滇乌碱、8-去乙?;嵛谕芳畹幕旌先芤?,得到对照品溶液;供试品溶液制备,取制黄草乌粉末,精密称定,置具塞锥形瓶中,加浓氨水,加乙醚,超声处理提取,循环提取后合并提取液,蒸干,残渣加入盐酸甲醇溶解并定容到容量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,微孔滤膜滤过,得到供试品溶液;将对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪进行检测。本发明建立了以制黄草乌中滇乌碱及其转化产物8-去乙?;嵛谕芳钗副甑募觳夥椒?,对于黄草乌炮制过程的科学检测和制黄草乌饮片的质量控制研究具有重要意义。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种同时测定制黄草乌中滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳畹姆椒?,其特征在于包括对照品溶液制备、供试品溶液制备、检测步骤,具体包括:
    A、对照品溶液制备:分别精密称取滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳?,加0.1%的盐酸甲醇配制成滇乌碱浓度16.11 mg/mL、8-去乙?;嵛谕芳钆ǘ任?0.13 mg/mL的混合溶液,得到对照品溶液;
    B、供试品溶液制备:取制黄草乌粉末2.00 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加浓氨水2 mL润湿,加乙醚20 mL,超声处理提取,循环提取2~4次,合并提取液,蒸干,残渣加0.1%的盐酸甲醇溶解并定容到10 mL容量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,0.45 μm微孔滤膜滤过,得到供试品溶液;
    C、检测:将对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪进行检测。

    2.  根据权利要求1所述的同时测定制黄草乌中滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳畹姆椒?,其特征在于B步骤中所述的制黄草乌粉末的粒度为50目。

    3.  根据权利要求1所述的同时测定制黄草乌中滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳畹姆椒?,其特征在于B步骤中所述的超声处理的功率为200 W,频率为40 KHz,超声处理的时间为5 min。

    4.  根据权利要求1所述的同时测定制黄草乌中滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳畹姆椒?,其特征在于C步骤中所述的高效液相色谱仪进行检测的色谱条件为:色谱柱:Agilent Zorbax Extend-C18 柱 (4.6×250 mm,5 μm);流动相:三乙胺水溶液-乙腈,梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:260 nm;柱温:30℃;进样量10 μL。

    5.   根据权利要求4所述的同时测定制黄草乌中滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳畹姆椒?,其特征在于所述的三乙胺水溶液浓度为0.2%,并用磷酸调pH值为3.1。

    6.  根据权利要求4所述的同时测定制黄草乌中滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳畹姆椒?,其特征在于所述的梯度洗脱条件为:
    。

    说明书

    说明书一种同时测定制黄草乌中滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳畹姆椒?
    技术领域
    本发明属于检测技术领域,具体涉及一种同时测定制黄草乌中滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳畹姆椒?。  
    背景技术
    黄草乌(Aconitum vilmorinianum Komarov)为云南地方习用的乌头类伤科药物,因其毒性剧烈,大多经过炮制后入药,其炮制饮片(制黄草乌)为虎力散、云南红药、百宝丹等云南著名和特色中成药制剂中的重要处方药?;撇菸谏┎牡幕С煞盅芯勘砻?,滇乌碱(yunaconitine)等二萜生物碱是其主要成分。滇乌碱具有明显的镇痛抗炎、解热和免疫调节等作用,但其毒性较强,治疗窗狭窄。近期研究表明黄草乌在炮制过程中,其滇乌碱成分能够部分转化为8-去乙?;嵛谕芳?,后者仍具有较强的镇痛活性,且其毒性显著降低。因此,建立同时测定制黄草乌中滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳盍街稚锛畛煞趾康募觳夥椒?,对于黄草乌炮制过程的科学监测和制黄草乌饮片的质量控制研究具有重要意义。
    发明内容
    本发明的目的在于提供一种同时测定制黄草乌中滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳畹姆椒?。
    本发明的目的是这样实现的,包括对照品溶液制备、供试品溶液制备、检测步骤,具体包括:
    A、对照品溶液制备:分别精密称取滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳?,加0.1%的盐酸甲醇配制成滇乌碱浓度16.11 mg/mL、8-去乙?;嵛谕芳钆ǘ任?0.13 mg/mL的混合溶液,得到对照品溶液;
    B、供试品溶液制备:取制黄草乌粉末2.00 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加浓氨水2 mL润湿,加乙醚20 mL,超声处理提取,循环提取2~4次,合并提取液,蒸干,残渣加0.1%的盐酸甲醇溶解并定容到10 mL容量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,0.45 μm微孔滤膜滤过,得到供试品溶液;
    C、检测:将对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪进行检测。
    本发明建立了同时测定制黄草乌中滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳盍街稚锛畛煞趾康募觳夥椒?,对于黄草乌炮制过程的科学检测和制黄草乌饮片的质量控制研究具有重要意义。
    附图说明
    图1为对照品溶液的高效液相色谱图:滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳畹谋A羰奔浞直鹞?2.78 min和15.41min;
    图2为制黄草乌样品溶液的高效液相色谱图:滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳畹谋A羰奔浞直鹞?2.73min和15.47min。
    具体实施方式
    下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明,但不以任何方式对本发明加以限制,基于本发明教导所作的任何变换或替换,均属于本发明的?;し段?。
    本发明所述的同时测定制黄草乌中滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳畹姆椒?,包括对照品溶液制备、供试品溶液制备、检测步骤,具体包括:
    A、对照品溶液制备:分别精密称取滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳?,加0.1%的盐酸甲醇配制成滇乌碱浓度16.11 mg/mL、8-去乙?;嵛谕芳钆ǘ任?0.13 mg/mL的混合溶液,得到对照品溶液;
    B、供试品溶液制备:取制黄草乌粉末2.00 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加浓氨水2 mL润湿,加乙醚20 mL,超声处理提取,循环提取2~4次,合并提取液,蒸干,残渣加0.1%的盐酸甲醇溶解并定容到10 mL容量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,0.45 μm微孔滤膜滤过,得到供试品溶液;
    C、检测:将对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪进行检测。
    B步骤中所述的制黄草乌粉末的粒度为50目。
    B步骤中所述的超声处理的功率为200 W,频率为40 KHz,超声处理的时间为5 min。
    C步骤中所述的高效液相色谱仪进行检测的色谱条件为:色谱柱:Agilent Zorbax Extend-C18 柱 (4.6×250 mm,5 μm);流动相:三乙胺水溶液-乙腈,梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:260 nm;柱温:30℃;进样量10 μL。
    所述的三乙胺水溶液浓度为0.2%,并用磷酸调pH值为3.1。
    所述的梯度洗脱条件为:

    实施例1
    1、仪器和材料
    高效液相色谱仪(LC-2010A HT,日本岛津):四元低压梯度泵、在线脱气单元、UV 检测器、柱温箱/带制冷、自动进样器、系统控制器、岛津CLASS-VP色谱数据工作站;色谱柱:Agilent Zorbax Extend-C18 柱(4.6×250 mm,5  μm);手提式高速万能粉碎机(型号:DFT-200,温岭市林大机械有限公司),电子分析天平(型号:AUW220D,日本岛津),KH5200B型超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)。
    滇乌碱、8-去乙?;嵛谕芳罹杀臼笛槭掖又苹撇菸谝蟹掷氲玫?,经高效液相色谱分析(检测波长260 nm),纯度分别为96.12%,94.25%。;液相分析用制黄草乌饮片分别为:购自云南白药基团(批号:YP20100902);取自昆明中药厂炮制生产车间;购自大理三月街药材市??;实验室自制。其中实验室自制品是将收集自云南省玉溪市黄草乌种植基地的黄草乌药材按照《云南省中药饮片炮制规范》(1986年)中炙草乌“煮蒸炙”的方法炮制所得。所有制黄草乌饮片均由云南中医学院中药鉴定教研室杨树德教授鉴定为黄草乌(Radix Aconitum vilmoriniani)的炮制品。氨水、磷酸、三乙胺、乙醚(分析纯、西陇化工股份有限公司);甲醇、乙腈(色谱纯,Fisher 公司);超纯水。
    2、实验方法
    2.1色谱条件
    色谱柱:Agilent Zorbax Extend-C18 柱 (4.6×250 mm,5 μm);流动相:0.2%三乙胺水溶液(磷酸调节pH值至3.1)-乙腈,梯度洗脱(梯度洗脱程序见下表1);流速:1.0 mL·min-1;检测波长:260 nm;柱温:30℃;进样量10 μL;外标法。在本色谱条件下,滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳畹纳追逵肫渌榉址寰玫浇虾玫姆掷?,结果见图1。
    表1 梯度洗脱程序

    2.2 供试品溶液的制备
    取制黄草乌粉末约2.00 g(过三号筛),精密称定,置具塞锥形瓶中,加浓氨水2 mL润湿,加乙醚20 mL,超声处理(功率200 W,频率40 KHz)5分钟,取上清液,药渣再按上述方法提取两次,合并三次乙醚提取液,蒸干,残渣加0.1%的盐酸甲醇溶解并定容到10 mL容量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,0.45 μm微孔滤膜滤过,得供试品溶液。
    2.3 对照品溶液的制备
    分别精密称取滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳钍柿?,加0.1%的盐酸甲醇配制成滇乌碱浓度为16.11 mg/mL、8-去乙?;嵛谕芳钆ǘ任?0.13 mg/mL的溶液,作为对照品溶液。
    3、方法学研究
    3.1 线性关系考察
    取浓度为180 mg/mL的对照品储备液适量,加0.1%的盐酸甲醇溶液配制得2.5 mg/mL、5 mg/mL、 15 mg/mL、30 mg/mL、60 mg/mL、120 mg/mL的对照品溶液,摇匀。按上述色谱条件进行分析,记录色谱峰面积。以峰面积(Y)对浓度(X)进行回归计算,回归方程见表2。结果表明各对照品在各自浓度范围内线性关系良好。
    表2 各成分的回归方程及线性范围

    3.2 精密度实验
    精密吸取照品溶液按上述色谱条件连续进样6次,进样量为10 μL,测定峰各自的峰面积并计算其RSD值。结果显示,对照品滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳畹腞SD分别为0.3689 %,0.3405 %,表明色谱系统稳定、精密度良好。
    3.3 稳定性实验
    取新制备的制黄草乌供试品溶液,分别在室温放置0,2,4,6,8,10,12,24 h后,按上述色谱条件进行色谱分析。滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳畹腞SD分别为0.26%和0.42%,表明供试品溶液在24 h内稳定。
    3.4重复性实验
    精密称取实验室自制的制黄草乌饮片粉末2.00 g,共6份,按上述供试品溶液制备方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进行色谱分析。滇乌碱、8-去乙?;嵛谕芳畹腞SD值分别为0.0142%、0.0130%,结果表明该方法重现性良好。
    3.5 加样回收实验
    精密称取制黄草乌(实验室自制)样品粉末1.00 g,共6份,分别按已知含量的80%、100%、120%三个水平加入上述滇乌碱(百分含量为96.12%)、8-去乙?;嵛谕芳睿ò俜趾课?4.25%)混合对照品溶液,按上述供试品溶液制备方法制备供试品溶液,再按上述色谱条件进行色谱分析。根据滇乌碱和8-去乙?;嵛谕芳畹募尤肓亢筒獾昧考扑闫淦骄厥章?,分别为98.36%、99.48%,RSD分别为2.40%,3.33%,表明该方法回收率良好。
    4、样品的含量测定
    将不同来源的制黄草乌饮片分别粉碎,过三号筛,精密称取各样品粉末2.00 g,每个样品平行称取3份,按上述方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进行色谱分析,并计算不同来源的制黄草乌中2种生物碱成分的含量,结果见表3。
    表3不同来源制黄草乌中2种生物碱的含量测定结果(n=3)

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