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    重庆时时彩作弊码: 一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒及其检测方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201511015703.2

    申请日:

    2015.12.30

    公开号:

    CN105606418A

    公开日:

    2016.05.25

    当前法律状态:

    实审

    有效性:

    审中

    法律详情: 专利申请权的转移IPC(主分类):G01N 1/28登记生效日:20161207变更事项:申请人变更前权利人:李新华变更后权利人:山东省内分泌与代谢病研究所变更事项:地址变更前权利人:250062 山东省济南市文化西路115号齐鲁医院专家公寓楼2号楼0102变更后权利人:250062 山东省济南市经十路18877号|||著录事项变更IPC(主分类):G01N 1/28变更事项:发明人变更前:黄亚丽 魏芳 赵柯 丁文宇变更后:李新华 黄亚丽 魏芳 赵珂 丁文宇|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 1/28申请日:20151230|||公开
    IPC分类号: G01N1/28; G01N30/00 主分类号: G01N1/28
    申请人: 李新华
    发明人: 黄亚丽; 魏芳; 赵柯; 丁文宇
    地址: 250062 山东省济南市文化西路115号齐鲁医院专家公寓楼2号楼0102
    优先权:
    专利代理机构: 济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业) 37240 代理人: 李茜
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201511015703.2

    授权公告号:

    |||||||||

    法律状态公告日:

    2016.12.28|||2016.12.28|||2016.06.22|||2016.05.25

    法律状态类型:

    专利申请权、专利权的转移|||著录事项变更|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明提供一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒及其检测方法,所述试剂盒包括反应分析垫、位于所述反应分析垫右侧的装有亲和反应液的亲和反应液微孔、位于所述亲和反应液微孔右侧的装有清洗液的清洗液微孔和位于所述清洗液微孔右侧的条码区。本发明提供的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒,检测时只需要微量的全血样本,即可在3-5分钟内实现定量检测糖化血红蛋白的含量,大大提高了筛查的速度,具有灵敏度高、特异性好和结构简单的优点,且制备方法简单,易于大规模生产。其检测方法,只需要微量的全血样本,即可在3-5分钟内实现定量检测糖化血红蛋白的含量,灵敏度高、特异性好。

    权利要求书

    1.一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒,其特征在于,包括:反应分析垫、位于反应分析垫右侧的装有亲和反应液的亲和反应液微孔、位于亲和反应液微孔右侧的装有清洗液的清洗液微孔和位于所述清洗液微孔右侧的条码区。2.根据权利要求1所述的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒,其特征在于,所述亲和反应液微孔的孔径为5mm~6mm,高度8mm~10mm,内装有250μL亲和反应液。3.根据权利要求2所述的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒,其特征在于,所述亲和反应液包括如下组分:甘氨酸20~150mmol/L,氯化锌2~50mmol/L,氯化镁5~50mmol/L,氯化钾50~500mmol/L,叠氮化钠0.1~1.5g/L,蓝色苯硼酸染料0.05~0.50mmol/L,甲醇体积浓度为1.5~5.0%,乙基苯基聚乙二醇质量体积浓度为0.05~0.1%。4.根据权利要求3所述的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒,其特征在于,所述亲和反应液的PH值为8.5~10.5。5.根据权利要求1所述的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒,其特征在于,所述清洗液微孔的孔径为5mm~6mm,高度为8mm~10mm,内装有60~80μL的清洗液。6.根据权利要求5所述的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒,其特征在于,所述清洗液包括如下组分:三羟甲基氨基甲烷20~200mmol/L,叠氮化钠0.1~1.5g/L,聚乙二醇辛基苯基醚体积浓度为0.05~0.5%。7.根据权利要求6所述的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒,其特征在于,所述清洗液的PH值为7.6~8.6。8.根据权利要求1所述的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒,其特征在于,所述亲和反应液微孔和/或清洗液微孔由铝箔或透明塑料膜密封。9.根据权利要求1所述的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒,其特征在于,所述反应分析垫为12mm*12cm的正方形状,包括上盖和下盖,所述上盖中央设有一检测孔,孔径为1~2mm,所述上盖和下盖之间放置三层10mm*10mm的分析滤纸。10.一种使用权力要求1-9任一所述的试剂盒检测糖化血红蛋白的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:a、取5μL全血样本加入到装有250μL亲和反应液的亲和反应液微孔中,混匀2-3秒,静置2-3分钟后,再次混匀反应液;b、取25μL上述混匀后的反应液置于反应分析垫上的检测卡孔中;c、待上述反应液在检测卡孔中渗滤完全后取25μL清洗液冲洗检测孔;d、待上述清洗液渗滤完全后将其反应分析垫置于糖化血红蛋白分析仪上进行检测。

    说明书

    一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒及其检测方法

    技术领域

    本发明涉及糖化血红蛋白检测技术领域,尤其涉及一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒及其检测方法。

    背景技术

    糖尿病是一组病因和发病机制尚未完全明了的内分泌代谢疾病,目前发病率仅次于心血管疾病和肿瘤。目前,糖尿病的发病率呈不断上升趋势,是严重威胁人类健康的世界性公共卫生问题。传统的糖尿病诊断和治疗监测采用空腹血糖、餐后血糖和口服葡萄糖耐量试验等,但是血糖参数仅代表抽血时的瞬间血糖水平,而糖化血红蛋白(glycosylatedhemoglobin,GHb)作为反映长期血糖水平的金标准,也是监测糖尿病治疗的重要指标

    GHb是指结合了任何形式碳水化合物的血红蛋白(hemoglobin,Hb)。人类Hb主要是HbA(95%~97%)、HbA2(<3%)、HbF(<1%)。HbA中未结合糖的为HbA0(90%)、结合糖的为HbA1(5%~7%)即GHb。其中HbA1包括结合果糖-1,6-二磷酸葡萄糖的HbA1a1、结合葡萄糖-6-磷酸的HbA1a2、结合未知碳水化合物的HbA1b和结合葡萄糖的HbA1c,HbA1c占GHb的70%~90%。HbA1c在组织中由葡萄糖的游离醛基与HbA的β链N末端缬氨酸的氨基进行不可逆的非酶促的反应,此过程称为糖基化,GHb的形成主要取决于血糖浓度及血糖与Hb的接触时间。GHb可以反映最近2~3个月的平均血糖水平。2002年美国糖尿病协会已明确规定应定期检测HbA1c,并将其作为监测糖尿病血糖控制的金标准。

    GHb的测定方法有几十种之多,目前常用的基本上可分为两大类:一类是基于GHb和Hb的电荷不同,如离子交换层析法、电泳法;另一类是基于Hb上糖化基团的结构特点,如亲和层析法、免疫法和酶法等。多个研究表明不同的原理测定的结果存在差别,而糖尿病患者治疗目标要求测定值不受测定方法的影响,因此在实验室里应用不同GHb测定方法所产生的结果可比性非常重要。

    离子交换层析法主要有高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)和手工微柱法。此方法是基于血红蛋白β链N末端缬氨酸糖化后所带电荷不同而建立。但由于此方法所使用的仪器昂贵,难以在比较基层的医院和实验室普及;微柱法手工操作步骤繁琐,层析时间和微柱的质量不易控制,易产生操作技术误差,重复性欠佳;而且干扰因素很多,尤其对pH值和温度的变化敏感,HbF及变异血红蛋白(HbS、HbC、HbE等)对结果干扰,干扰程度根据柱的分离能力而定,所以一定要仔细观察图谱。

    电泳法(以琼脂凝胶电泳为例)Hb于酸性缓冲液条件下(pH6.0)在琼脂糖凝胶上的电泳迁移取决于Hb在凝胶上的吸附情况及其所带的电荷。该方法标本用量少,分辨率高,重复性好,有研究发现血糖值与HbAlc值有显著相关性,且结果不受温度及胎儿血红蛋白的影响。另外,因为它可测定的Hb线性范围较宽(13.0-39.0g/L),可发现异常Hb。该方法的缺点是每次测定均需成批进行样本分析,速度比较慢,无法进行实时个体检测,自动化程度较差,所测结果与技术人员扫描和对电泳的波峰判断有关,受主观因素影响,并且费用昂贵,因此并不适合临床实验室常规使用。

    亲和层析法硼酸具有与整合在Hb分子上葡萄糖的顺位二醇基作可逆结合反应的性质。通常使用的是间-氨基苯硼酸琼脂糖,将血样本加到层析柱后,所有的GHb与硼酸结合留在柱中,非GHb直接流出层析柱;再加入高浓度也包含顺位二醇基的多羟基复合物(如山梨醇),GHb与硼酸的结合被替换而被洗脱下来,分别测量两组分,并计算比值。亲和层析法对变异血红蛋白和病理血红蛋白的影响相对其他方法不敏感,但测定的是HbA1即GHb总量。另外,金标法和硼酸亲和层析法密切相关,操作均简便易行、快速准确、试剂稳定。据报道,该法不受除HbS和HbC之外的任何血红蛋白变异体和降解产物的干扰,结果可靠,比较适用于临床随时检测。

    免疫比浊法利用抗原、抗体反应的原理进行测定。GHb的β链N末端提供了一个容易被抗体识别的抗原表位,可以用单克隆抗体或多克隆抗体,特异识别GHb的β链N末端最后4~6个氨基酸组成的抗原表位,结合比色或比浊法,以GHb为标准,测定HbA1c的含量,再测定Hb的含量,最后计算出HbA1c占总Hb的百分含量。此类方法只能作为判断糖尿病血糖水平的指标,不可用于变异血红蛋白的研究。与其相比,免疫比浊法检测的方法更为简单,不需要额外添加仪器,为临床提供了一种快速、准确、可靠、简便的常规方法,在临床应用中有着更为广阔的前景。

    酶法全血经溶血处理后,用特异蛋白内切酶将Hb酶解消化成果糖氨基酸,再经果糖氨基酸氧化酶作用下产生过氧化氢(hydrogenperoxide,H2O2),H2O2的浓度与血液中GHb的含量成正比,H2O2在过氧化物酶的作用下与相应的色原耦联,从而根据颜色变化程度可得H2O2浓度,进而得知样本中GHb的含量;同时测定同一管消化液的总Hb浓度,计算GHb和Hb的浓度比值,即为GHb结果。此法提供了一个像临床生化反应一样快速均一的反应系统(如葡萄糖、谷氨酸氨基转移酶),有很好的精密度,可同时检测GHb和Hb,且与常规HPLC法和免疫测定法有很好的相关性。

    离子捕获法应用抗原抗体反应原理,并联以荧光标志物,通过连接带负电的多阴离子复合物,吸附到带正电的的纤维表面,经过一系列彻底清洗等步骤后,测定荧光强度变化率,计算GHb浓度。其检测系统易于规范和重复,可减少操作技术误差,检测的敏感度和特异度高,批内、批间变异系数小。有文献报道此法影响因素少,准确度高,回收率达98.85%,交叉污染率﹤0.01%。该方法是近几年发展起来的新方法,采用自动分析仪,适用于批量标本的检测。

    对基层医疗单位而言,上述几种方法,要么试剂、仪器成本高,要么操作复杂、要么准确度低,稳定性差,且均不适合社区及基层医院。因此,需要对现有的测定糖化血红蛋白比例的方法进行改进,提出一种新方法来解决这些问题。

    发明内容

    本发明的目的在于,克服现有技术的不足,提供了一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒,只需要微量的全血样本,即可在3~5分钟内实现定量检测糖化血红蛋白的含量,且结构简单,适合大规模生产。

    本发明的另一目的在于提供一种使用上述试剂盒检测糖化血红蛋白的检测方法,只需要微量的全血样本,即可在3~5分钟内实现定量检测糖化血红蛋白的含量,特异性好,灵敏度高。

    为解决上述技术问题,本发明的技术方案为:提供一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒,包括:反应分析垫、位于所述反应分析垫右侧的装有亲和反应液的亲和反应液微孔、位于所述亲和反应液微孔右侧的装有清洗液的清洗液微孔和位于所述清洗液微孔右侧的条码区。

    优选的,上述检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒中,所述亲和反应液微孔的孔径为5mm~6mm,高度8mm~10mm,内装有250μL亲和反应液。

    优选的,上述检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒中,所述亲和反应液包括如下浓度的组分:

    甘氨酸20~150mmol/L,

    氯化锌2~50mmol/L,

    氯化镁5~50mmol/L,

    氯化钾50~500mmol/L,

    叠氮化钠0.1~1.5g/L,

    蓝色苯硼酸染料0.05~0.50mmol/L,

    甲醇体积浓度为1.5~5.0%,

    乙基苯基聚乙二醇质量体积浓度为0.05~0.1%。优选的,上述检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒中,所述亲和反应液的PH值为8.5~10.5。

    优选的,上述检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒中,所述清洗液微孔的孔径为5mm~6mm,高度为8mm~10mm,内装有60~80μL的清洗液。

    优选的,上述检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒中,所述清洗液包括如下浓度的组分:

    三羟甲基氨基甲烷20~200mmol/L,

    叠氮化钠0.1~1.5g/L,

    聚乙二醇辛基苯基醚体积浓度为0.05~0.5%。

    优选的,上述检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒中,所述清洗液的PH值为7.6~8.6。

    优选的,上述检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒中,所述亲和反应液微孔和/或清洗液微孔由铝箔或透明塑料膜密封。

    优选的,上述检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒中,所述反应分析垫为12mm*12cm的正方形状,包括上、下盖,所述上盖中央设有一检测孔,孔径为1~2mm,所述上、下盖之间放置三层10mm*10mm的分析滤纸。

    为解决上述技术问题,本发明的另一技术方案为:提供一种使用上述试剂盒检测糖化血红蛋白的检测方法,,包括以下步骤:

    a、取5μL全血样本加入到装有250μL亲和反应液的亲和反应液微孔中,混匀2-3秒,静置2-3分钟后,再次混匀反应液;

    b、取25μL上述混匀后的反应液置于反应分析垫上的检测卡孔中;

    c、待上述反应液在检测卡孔中渗滤完全后取25μL清洗液冲洗检测孔;

    d、待上述清洗液渗滤完全后将其反应分析垫置于糖化血红蛋白分析仪上进行检测。

    本发明提供的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒使用时,将全血样本加入亲和反应液中,红细胞被裂解释放血红蛋白,糖化血红蛋白的顺式二醇基特异性结合蓝色苯硼酸染料偶联成蓝色结合物,血红蛋白全部被反应液中试剂沉淀。将适量的上述完成反应的亲和反应液,置于反应分析垫检测孔过滤吸附,然后使用清洗液除去多余的蓝色染料,最后使用糖化血红蛋白检测仪对蓝色(糖化血红蛋白)和红色(总血红蛋白)的颜色进行色谱分析,计算二者的比率,即为样本中糖化血红蛋白的含量。

    本发明提供的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒及其检测方法,检测时只需要微量的全血样本,即可在3-5分钟内实现定量检测糖化血红蛋白的含量,大大提高了筛查的速度,具有灵敏度高、特异性好和结构简单的优点。

    附图说明

    图1是本发明实施例一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒的结构示意图。

    图2为本发明线性检测标准工作曲线。

    图3为本发明回归曲线图。

    图4为本发明亲和反应液中蓝色苯硼酸燃料的反应原理图。

    图中:1反应分析垫、亲和反应液微孔2、清洗液微孔3、条码区4、检测孔5。

    具体实施方式

    这里将详细地对示例性实施例进行说明,其示例表示在附图中。下面的描述涉及附图时,除非另有表示,不同附图中的相同数字表示相同或相似的要素。以下示例性实施例中所描述的实施方式并不代表与本发明相一致的所有实施方式。相反,它们仅是与如所附权利要求书中所详述的、本发明的一些方面相一致的装置的例子。

    实施例1

    请参照附图1,附图1是本发明实施例一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒的结构示意图。

    如图1所示,本发明实施例提供一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒,包括:反应分析垫1、位于所述反应分析垫1右侧的装有亲和反应液的亲和反应液微孔2、位于所述亲和反应液微孔2右侧的装有清洗液的清洗液微孔3和位于所述清洗液微孔3右侧的条码区4。

    本实施例的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒中,所述亲和反应液微孔2的孔径为5mm,高度8mm,内装有250μL亲和反应液,所述亲和反应液包括如下浓度的组分:

    甘氨酸50mmol/L,

    氯化锌10mmol/L,

    氯化镁23mmol/L,

    氯化钾200mmol/L,

    叠氮化钠0.5g/L,

    将上述亲和反应液的PH值调整到9.3,之后添加:

    蓝色苯硼酸染料0.19mmol/L,

    甲醇至体积浓度为4.2%,

    乙基苯基聚乙二醇至质量体积浓度为0.1%。

    本实施例的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒中,所述清洗液微孔3的孔径为5mm,高度为8mm,内装有60μL的清洗液,所述清洗液包括如下组分:

    三羟甲基氨基甲烷100mmol/L,

    叠氮化钠0.5g/L,

    将上述清洗液的PH值调整到8.1,之后添加:

    聚乙二醇辛基苯基醚至体积浓度为0.1%。

    本实施例的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒中,所述亲和反应液微孔2和/或清洗液微孔3由铝箔或透明塑料膜密封;所述反应分析垫1为12mm*12cm的正方形状,包括上、下盖,所述上盖中央设有一检测孔5,孔径为1mm,所述上、下盖之间放置三层10mm*10mm的分析滤纸。

    实施例2

    如图1所示,本发明实施例提供一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒,包括:反应分析垫1、位于所述反应分析垫1右侧的装有亲和反应液的亲和反应液微孔2、位于所述亲和反应液微孔2右侧的装有清洗液的清洗液微孔3和位于所述清洗液微孔3右侧的条码区4。

    本实施例的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒中,所述亲和反应液微孔2的孔径为6mm,高度10mm,内装有250μL亲和反应液,所述亲和反应液包括如下组分:

    甘氨酸150mmol/L,

    氯化锌20mmol/L,

    氯化镁20mmol/L,

    氯化钾500mmol/L,

    叠氮化钠1.0g/L,

    将上述亲和反应液的PH值调整到8.6,之后添加:

    蓝色苯硼酸染料0.33mmol/L,

    甲醇至体积浓度为1.5%,

    乙基苯基聚乙二醇至质量体积浓度为0.05%。

    且所述亲和反应液的PH值为8.6。

    本实施例中,所述清洗液微孔3的孔径为6mm,高度为10mm,内装有80μL的清洗液,所述清洗液包括如下组分:

    三羟甲基氨基甲烷200mmol/L,

    叠氮化钠0.1g/L,

    将上述清洗液的PH值调整到7.8,之后添加:

    聚乙二醇辛基苯基醚至体积浓度为0.05%。

    且所述清洗液的PH值为7.8。

    本实施例中,所述亲和反应液微孔2和/或清洗液微孔3由铝箔或透明塑料膜密封;所述反应分析垫1为12mm*12cm的正方形状,包括上、下盖,所述上盖中央设有一检测孔5,孔径为2mm,所述上、下盖之间放置三层10mm*10mm的分析滤纸。

    实施例3

    如图1所示,本发明实施例提供一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒,包括:反应分析垫1、位于所述反应分析垫1右侧的装有亲和反应液的亲和反应液微孔2、位于所述亲和反应液微孔2右侧的装有清洗液的清洗液微孔3和位于所述清洗液微孔3右侧的条码区4。

    本实施例的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒中,所述亲和反应液微孔2的孔径为5mm,高度8mm,内装有250μL亲和反应液,所述亲和反应液包括如下组分:

    甘氨酸100mmol/L,

    氯化锌15mmol/L,

    氯化镁35mmol/L,

    氯化钾150mmol/L,

    叠氮化钠0.35g/L,

    将上述亲和反应液的PH值调整到9.6,之后添加:

    蓝色苯硼酸染料0.28mmol/L,

    甲醇至体积浓度为3.6%,

    乙基苯基聚乙二醇至质量体积浓度为0.08%。

    本实施例的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒中,所述清洗液微孔3的孔径为5mm,高度为8mm,内装有60μL的清洗液,所述清洗液包括如下组分:

    三羟甲基氨基甲烷150mmol/L,

    叠氮化钠0.35g/L,

    将上述清洗液的PH值调整到8.5,之后添加:

    聚乙二醇辛基苯基醚至体积浓度为0.35%。

    本实施例的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒中,所述亲和反应液微孔2和/或清洗液微孔3由铝箔或透明塑料膜密封;所述反应分析垫1为12mm*12cm的正方形状,包括上、下盖,所述上盖中央设有一检测孔5,孔径为1mm,所述上、下盖之间放置三层10mm*10mm的分析滤纸。

    以上三种实施例,经过检测,实施例1中所述的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒,其灵敏度高,测试糖化血红蛋白一体化试剂盒的性能的方法为本领域技术人员普遍应用的方法,在此不做赘述。

    使用所述的一体化试剂盒检测糖化血红蛋白的具体步骤为:

    a、取5μL全血样本加入到装有250μL亲和反应液的亲和反应液微孔2中,混匀2-3秒,静置2-3分钟,再次混匀反应液;

    b、然后取25μL混匀后的反应液置于反应分析垫1上的检测卡孔5中;

    c、待所述反应液渗滤完全后取25μL清洗液冲洗检测孔5;

    d、待清洗液渗滤彻底后将反应分析垫1置于糖化血红蛋白分析仪上进行检测。

    当全血样本加入亲和反应液中,红细胞被裂解释放血红蛋白,HbA1c的顺式二醇基特异性结合蓝色苯硼酸染料偶联成蓝色结合物,血红蛋白全部被反应液中试剂沉淀。将适量的上述完成反应的亲和反应液,置于反应分析垫检测孔过滤吸附,然后使用清洗液除去多余的蓝色染料,最后使用糖化血红蛋白检测仪对蓝色(糖化血红蛋白)和红色(总血红蛋白)的颜色进行色谱分析,计算二者的比率,即为样本中HbA1c的含量。其中,所述亲和反应液中蓝色苯硼酸燃料反应原理如附图4所示。

    本发明提供的一种检测糖化血红蛋白一体化试剂盒及其检测方法,只需要微量的全血样本,即可在3~5分钟内实现定量检测糖化血红蛋白的含量,大大提高了筛查的速度,具有灵敏度高、特异性好和结构简单的优点,且其制备方法简单,易于大规模生产。

    标准工作曲线的绘制:

    取HbAlc为20.0%的人工制备的??鼓瓯?、HbAlc为0.0%的??鼓瓯九涑蒆bAlc为18.0%、15.0%、12.0%、9.0%、6.0%、3.0%、0.0%的全血标本,再分别测定其HbAlc,以配成值为X,颜色光信号测定值为Y用以绘制标准工作曲线,经统计拟合标准工作曲线的表达式列出曲线方程为:Y=0.567+0.108X-0.001X2+2.90×10-6X3,R2=0.999,P<0.05。线性检测标准工作曲线如附图2所示,糖化血红蛋白测定范围为3.0%~18.0%。

    为了进一步体现实施例1在POCT应用方面的性能优势,对以下指标进行测试:

    (1)重复性试验:

    批内重复性试验:取同一患者抗凝全血标本,同时连续重复检测10次,计算出变异系数值;

    批间重复性试验:将同一患者抗凝全血标本分装成10份,贮存于冰箱,每天取1份检测,共10天,计算出变异系数值。

    经计算得到,批内变异系数值为3.22%,批间(日间)变异系数值为4.38%,按照美国临床试验室标准化委员会(NCCLS)文件要求的批内、批间不精密度水平应小于5%,本发明提供的一种检测糖化血红蛋白的一体化试剂盒符合要求。

    由上述检测可见,本发明检测方法具有更高的灵敏度,且在实现批内、批间精确定量检测的同时具有很好的重复性。

    (2)抗干扰试验:

    1、将一新鲜抗凝全血标本,分成3份,每份1000μL,第1份加入葡萄糖为140mmol/L的100μL高糖物质,第2份加入总胆红素为430.3μmol/L的血清100μl,第3份加入甘油三酯为39.8mmol/L的血清100μl,混匀后分别测定HbAlc值。

    2、采集一患者全血标本,分别注入含EDTA-K2、肝素、枸橼酸钠的3种抗凝剂管中混匀,然后分别测定HbAlc值,其测定结果见下表1所示:

    表1:不同的抗凝剂对测定HbAlc值的影响干扰项浓度HbAlc理论浓度HbAlc实测浓度回收率葡萄糖140mmol/L9.6%9.8%102%总胆红素430.3μmol/L9.6%9.7%101%甘油三酯39.8mmol/L9.6%10.1%105%EDTA-K2---9.6%9.5%99%肝素---9.6%9.7%101%枸橼酸钠---9.6%9.5%99%

    上表结果表明,在葡萄糖为140mmol/L以下高糖标本、总胆红素为430.3μmol/L以下的黄疸标本及甘油三酯为39.8mmol/L以下的脂血对本方法测定HbAlc无明显干扰。不同的抗凝剂对本发明方法测定HbAlc也无明显干扰。

    (3)实际检测对比试验

    为了验证实施例1的性能,对实施例1的试纸条进行性能方面的测定,取417例患者的空腹新鲜全血肝素抗凝标本,每份分别用美国Bio-Rad-HbA1c液相色谱分析仪与本发明YKY-HbA1c一体化试剂进行双盲法检测。将结果应用相关回归和配对t检验分析方法进行比较。结果显示,两方法相关性良好,差异无统计学意义(回归方程为YBio-Rad=0.180+1.006XYKY,R2=0.988,P<0.01,n=417),回归曲线图如附图3所示。

    本发明提供的实用上述试剂盒检测糖化血红蛋白的检测方法,只需要微量的全血样本,即可在3~5分钟内实现定量检测糖化血红蛋白的含量,灵敏度高,特异性好。

    以上所述的本发明实施方式,并不构成对本发明?;し段У南薅?。亲和反应液、清洗液其物质的量浓度、pH值及组分可以相同,可以不同,其均在本发明的?;し段е?,对于具体实施例中所列举出来的不同组分只是本发明人所做试验中的其中一些优选实施例。任何在本发明的精神和原则之内所做的修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的?;し段е?。

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    一种 检测 糖化 血红蛋白 一体化 试剂盒 及其 方法
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