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    重庆时时彩10年经验: 一种肾活检电镜样品制备方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201510667800.3

    申请日:

    2015.10.16

    公开号:

    CN105606413A

    公开日:

    2016.05.25

    当前法律状态:

    撤回

    有效性:

    无权

    法律详情: 发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):G01N 1/28申请公布日:20160525|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 1/28申请日:20151016|||公开
    IPC分类号: G01N1/28; G01N1/30 主分类号: G01N1/28
    申请人: 中南大学
    发明人: 吴晓英
    地址: 410083 湖南省长沙市岳麓区麓山南路932号
    优先权:
    专利代理机构: 长沙市融智专利事务所 43114 代理人: 颜勇
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201510667800.3

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2018.10.26|||2016.06.22|||2016.05.25

    法律状态类型:

    发明专利申请公布后的视为撤回|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种肾活检电镜样品制备方法,包括以下步骤:将已固定的肾穿刺组织移至载玻片上,置于具有光源的显微镜下用双面刀片截取为1-3mm长且有肾小球的肾组织段;将截取的肾组织进行清洗、脱水、浸泡处理;将肾组织进行包埋处理;将已包埋、聚合成块的样品进行修块、定位;根据光镜观察结果再进行精准修整、定位;用超薄切片机切成超薄切片。采用本本发明进行肾活检电镜样品制备,可早期发现不良误穿标本并及时纠正,避免了重复制样;并具有修块快、定位耗时少、定位精准的优点,有效缩短了样品制备时间,显著提高了肾穿刺标本的可诊断率及诊断的精准度。

    权利要求书

    1.一种肾活检电镜样品制备方法,包括以下步骤:
    取材:将已固定的肾穿刺组织移至载玻片上,置于具有光源的显微镜下,选用2.5倍的
    物镜,并将聚光镜旋到最高位,用双面刀片截取有肾小球的肾组织段,每段长度约1-3mm;
    将肾组织段进行清洗、脱水、浸泡处理;
    将肾组织段进行包埋处理:包埋时,如果只有1段肾组织,则先将组织段与包埋孔的长
    轴斜交叉放置,并将肾小球密集的一端置包埋孔的尖端;如果有2段肾组织,则垂直于长轴
    放置于包埋孔的两端;如果有3段以上组织段,则面包片式前后错开堆叠、垂直放置于包埋
    孔的两端;
    将已包埋的肾组织聚合成块,将已聚合成块的样品进行修块、定位,即削去多余的包埋
    介质和组织,让待观察的部位露出在样品包埋块的尖端,再将组织截面修成锥形小塔,切成
    l微米厚的半薄切片,经美蓝或甲苯胺蓝染色、光镜观察;根据光镜观察结果再进一步精准
    定位、修小,截面不超过0.5毫米2,再用超薄切片机切成超薄切片。
    2.根据权利要求1所述的肾活检电镜样品制备方法,其特征在于,所述肾组织段是在
    光镜下预选的有肾小球的肾组织段。
    3.根据权利要求1所述的肾活检电镜样品制备方法,其特征在于,所述有球肾组织段
    的包埋方向、方式取决于穿刺标本可切取的组织段数及含肾小球的多少与分布,即如果只
    有1段肾组织,则先将组织段与包埋孔的长轴斜交叉放置,即与孔的长轴成45o角,并将肾小
    球密集的一端置包埋孔的尖端;如果有2段肾组织,则垂直放置于包埋孔的两端;如果有3段
    以上组织段,则面包片式前后错开堆叠、垂直放置于包埋孔的两端。

    说明书

    一种肾活检电镜样品制备方法

    技术领域

    本发明涉及一种肾活检电镜样品制备方法。

    背景技术

    肾活检即经皮肾穿刺活检,既是病理学的一个重要分支,也是肾脏病学一个不可
    少的组成部分,肾活检对于了解肾脏疾病的病理变化、病理类型、病变进展及不断优化个体
    化治疗方案、判断预后具有重要意义。20世纪50年代,肾活检电镜检查尤其是透射电镜的应
    用,对肾脏病理变化的观察深入到了亚细胞水平。目前,肾活检电镜检查已成为肾病研究和
    诊断的常规检查方法之一,尤其对原发性肾小球疾病的分类起着不可替代的作用,但由于
    临床经皮肾穿刺获取标本常有失误(如组织为皮肤或脂肪或仅为无球的髓质等),以及后续
    将穿刺标本盲目制样或常规纵向包埋肾组织段等原因,导致修块、半薄定位观察时才发现
    标本有误或难以定位到肾小球,常在电镜下找不到肾小球结构而无法进行诊断,浪费人力、
    物力,又延缓了诊断时间。

    发明内容

    为了解决肾活检电镜样品制备存在的上述技术问题,本发明提供一种快速、准确
    的肾活检电镜样品制备方法。

    本发明解决上述技术问题的技术方案包括以下步骤:

    取材:将肾穿刺组织移至载玻片上,置于具有光源的显微镜下,选用2.5倍的物镜,并将
    聚光镜旋到最高位,用双面刀片截取有肾小球的肾组织段,每段长度约1-3mm;

    将截取的肾组织段进行清洗、脱水、浸泡处理;

    将肾组织块进行包埋处理:包埋时,如果只有1段肾组织,则先将组织与包埋孔的长轴
    斜交叉放置,并将肾小球密集的一端置包埋孔的尖端;如果有2段肾组织,则分别垂直放置
    于包埋孔的两端;如果有3段以上组织段,则面包片式前后错开堆叠、垂直放置于包埋孔的
    两端;

    将已包埋、聚合、凝固成块的肾组织块削去多余的包埋介质和组织,让待观察的部位露
    出在样品包埋块的尖端,将包埋块尖端粗略地修成梯形,并削去一个角作为方位标记,再切
    成约l微米厚的半薄切片,经美蓝或甲苯胺蓝染色,置光镜下观察,根据光镜观察结果确定
    需要电镜观察的部位后,再进行修整、精准定位,进一步修整、修小,截面不超过0.5毫米2,
    再用超薄切片机切成超薄切片。

    本发明的技术效果在于:

    本发明在具有强光源的显微镜下进行肾穿刺组织预选、取材,可及时发现不良标本并
    提早纠正,避免了重复制样及人力、物力浪费;

    用双面刀片截取有肾小球的肾组织段长度约为1-3mm,这样其可视性好,后续操作方
    便;

    本发明在包埋时注意将肾小球密集的一端置包埋块前端,又利于尽快发现、定位到肾
    小球;如果一个患者有2段组织,则垂直放置于包埋孔的两端,如果一个患者有3段以上组织
    段,则面包片式前后错开堆叠、垂直放置于包埋孔的两端,这样修块、定位时很易定位到肾
    小球,而且同一半薄切片上出现多个肾小球的几率增多,在肾组织及肾小球多时,垂直或堆
    叠包埋可更快定位到肾小球、同时定位到多个肾小球,而且同一半薄切片上出现多个肾小
    球的几率大大增多,有利于通过光镜观察了解肾小球的不同病变程度,更有利于选取有代
    表性病变的肾小球做超薄切片、电镜观察,提高诊断率及诊断的精准度。采用本发明的肾活
    检标本,表明肾穿刺标本可诊断率从75%上升为100%,定位耗时大为减少,平均每例修块、
    定位时间从1.5小时降为30~40分钟,大大降低了劳动力成本。

    具体实施方式

    下面对本发明作进一步的详细说明。

    将送检电镜诊断的已固定的肾穿刺组织移至干净载玻片上,置于具有灯光源的显
    微镜下,选用2.5倍的物镜,并将聚光镜旋到最高位,首先判断标本是否为肾组织,如为肾组
    织再判断标本是否有肾肾小球及肾小球的多少及分布情况。再用双面刀片截取有肾小球的
    肾组织段,每段长度约1-3mm,注意尽可能将肾小球密集处集中截取。将有球的组织段画图
    标记备用(此操作宜迅速,组织标本上要用生理盐水或固定液保湿,以防干燥)。如标本的光
    通透性差,可翻转标本双向观察或滴加甘油以提高光通透性。

    将截取的肾组织进行清洗、脱水、浸泡处理;将肾组织进行包埋处理,包埋方向及
    方式取决于肾组织段的段数、肾小球的多少与及分布状况,分情况处理:如果一个患者只有
    1段组织,则先将组织段与包埋孔的长轴斜交叉放置(约呈45o角)并注意将肾小球密集的一
    端置包埋孔的尖端;如果一个患者有2段组织,则分别垂直放置于包埋孔的两端,如果一个
    患者有3段以上组织段,则面包片式前后错开堆叠、垂直放置于包埋孔的两端,待聚合凝固
    后修块、定位。将组织块截面修成锥形小塔,切成约l微米厚的半薄切片,经美蓝或甲苯胺蓝
    染色,置光镜下确定需要电镜观察的部位后,进一步修整、修小(截面不超过0.5毫米2),再
    在超薄切片机上切成厚度为20~100nm的超薄切片。

    关 键 词:
    一种 活检 样品 制备 方法
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