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    重庆时时彩技巧之稳赚不赔: 一种化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒及其制备方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201610053054.3

    申请日:

    2016.01.26

    公开号:

    CN105606596A

    公开日:

    2016.05.25

    当前法律状态:

    实审

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效IPC(主分类):G01N 21/76申请日:20160126|||公开
    IPC分类号: G01N21/76; G01N33/68 主分类号: G01N21/76
    申请人: 河南生生医疗器械有限公司
    发明人: 王嘎; 程自卿; 王辉武
    地址: 450046 河南省郑州市郑东新区金水东路南、东风东路东1幢东1单元8层06号
    优先权:
    专利代理机构: 郑州先风专利代理有限公司 41127 代理人: 黄伟
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201610053054.3

    授权公告号:

    |||

    法律状态公告日:

    2016.06.22|||2016.05.25

    法律状态类型:

    实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明涉及医疗用品技术领域,具体公开了一种化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括70R-17194抗体包被微孔板、10R-1128抗体酶结合物、缓冲液、底物工作液、发光底物、洗涤液、质控品;其中70R-17194抗体和10R-1128抗体为购自Fitzgerald的脑型脂肪酸结合蛋白抗体。该试剂盒特异性强,具有非常好的线性范围,其线性范围为0.05ng/ml~1500ng/ml,最低检测限为0.01ng/ml,阳性预测值≥9ng/ml,检测结果准确度高,批间精密度<11%,批内精密度<6%,为缺血性脑卒中的早期诊断、疗效观察及预后判断提供了一种可靠的检测方法。

    权利要求书

    1.一种化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒,其特征在于,
    包括70R-17194抗体包被微孔板、10R-1128抗体酶结合物、缓冲液、底物工
    作液、发光底物、洗涤液、质控品;其中70R-17194抗体和10R-1128抗体为
    购自Fitzgerald的脑型脂肪酸结合蛋白抗体。
    2.如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒,
    其特征在于,所述质控品为市售脑型脂肪酸结合蛋白标准品。
    3.如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒,
    其特征在于,所述10R-1128抗体酶结合物为10R-1128抗体碱性磷酸酶结合
    物。
    4.如权利要求3所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒,
    其特征在于,所述发光底物为CSPD。
    5.如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒,
    其特征在于,所述微孔板为24孔、48孔或96孔微孔板。
    6.如权利要求5所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒,
    其特征在于,所述微孔板为96孔微孔板。
    7.如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒,
    其特征在于,所述缓冲液由以下方法制备而得:向浓度为0.01mol/L、pH=8.5
    的Tris-HCl缓冲液中加入BSA和NaN3,混合均匀,即得所述的缓冲液;其
    中缓冲液中BSA的质量百分比浓度为1%;NaN3的质量百分比浓度为0.02%。
    8.如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒,
    其特征在于,所述底物工作液由以下方法制备而得:取400~700μl二乙醇胺、
    100μl浓度为1mol/L的NaOH溶液、100μl浓度为1mol/L的MgCl2溶液、
    100μl质量百分比浓度为10%的NaN3溶液,混匀,灭菌,制得底物缓冲液;
    取800μl底物缓冲液,然后向底物缓冲液中加入200μl发光底物增强剂和50
    μl发光底物,混匀,灭菌,即得底物工作液。
    9.如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒,
    其特征在于,所述洗涤液由以下方法制备而得:在浓度为0.01mol/L、pH值
    为7.4的PBS缓冲液中加入吐温20和NaN3,混合均匀,即得所述的洗涤液;
    其中洗涤液中吐温20的质量百分比浓度为0.05%,NaN3的质量百分比浓度为
    0.2%。
    10.一种如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用
    试剂盒的制备方法,其特征在于,包括以下操作步骤:
    1)制备70R-17194抗体包被微孔板:
    A:取浓度为0.05mol/L、pH值为8.5的碳酸盐缓冲液,向其中加入NaN3
    至NaN3的质量百分比浓度为0.02%,制得包被缓冲液;将70R-17194抗体用
    包被缓冲液稀释至0.05~0.3㎎/μl,制得70R-17194抗体包被液;
    B:取步骤A制备的70R-17194抗体包被液加入到微孔板中,37℃包被2
    小时,弃去孔内液体,4℃过夜后用生理盐水冲洗微孔板,然后向微孔板中加
    入封闭液,37℃封闭2小时,弃去孔内液体,然后用生理盐水冲洗微孔板,
    冷冻干燥,即得70R-17194抗体包被板,密封4℃保存备用;其中封闭液的制
    备方法为:向浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入BSA和NaN3,
    制得封闭液;封闭液中BSA的质量百分比浓度为1%,NaN3的质量百分比浓
    度为0.02%;
    2)制备10R-1128抗体酶结合物:
    a:取1.3mg的酶、1~4mg的10R-1128抗体,加入PBS缓冲液中,然后
    再加入0.05ml戊二醛,室温下搅拌30分钟,避光反应4小时,然后再加入乙
    醇胺至乙醇胺的浓度为0.1~0.3mol/L,室温下搅拌2小时,4℃下PBS透析过
    夜,然后与等体积的甘油混合,再加入NaN3至NaN3的质量百分比浓度为
    0.01%,即得10R-1128抗体酶结合物,于4℃条件下保存备用;
    3)制备缓冲液:向浓度为0.01mol/L、pH=8.5的Tris-HCl缓冲液中加入
    BSA和NaN3,混合均匀,即得所述的缓冲液;其中缓冲液中BSA的质量百
    分比浓度为1%;NaN3的质量百分比浓度为0.02%;
    4)制备底物工作液:取600μl二乙醇胺、100μl浓度为1mol/L的NaOH
    溶液、100μl浓度为1mol/L的MgCl2溶液、100μl质量百分比浓度为10%的
    NaN3溶液,混匀,灭菌,制得底物缓冲液;取800μl底物缓冲液,然后向底
    物缓冲液中加入200μl发光底物增强剂和50μl发光底物,混匀,灭菌,即
    得底物工作液;
    5)制备洗涤液:在浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入
    吐温20和NaN3,混合均匀,即得所述的洗涤液;其中洗涤液中吐温20的质
    量百分比浓度为0.05%,NaN3的质量百分比浓度为0.2%;
    6)取发光底物、质控品、步骤1)制备的70R-17194抗体包被微孔板、
    步骤2)制备的10R-1128抗体酶结合物、步骤3)制备的缓冲液、步骤4)制
    备的底物工作液、步骤5)制备的洗涤液,组装,即得所述的化学发光免疫检
    测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒。

    关 键 词:
    一种 化学 发光 免疫 检测 脂肪酸 结合 蛋白 试剂盒 及其 制备 方法
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