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    重庆时时彩有定位胆: 基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检测方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201511026302.7

    申请日:

    2015.12.31

    公开号:

    CN105606587A

    公开日:

    2016.05.25

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 21/65申请日:20151231|||公开
    IPC分类号: G01N21/65 主分类号: G01N21/65
    申请人: 宁波大学
    发明人: 周骏; 封昭; 周露; 陈栋
    地址: 315211 浙江省宁波市江北区风华路818号
    优先权:
    专利代理机构: 宁波奥圣专利代理事务所(普通合伙) 33226 代理人: 周珏
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201511026302.7

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2018.09.28|||2016.06.22|||2016.05.25

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检测方法,其包括以下步骤:取银纳米粒子溶液并进行离心清洗,去除上清液,再使得到的沉积物悬浮于乙醇溶液中得到悬浮溶液;加入恩氟沙星标准样品溶液形成恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液;再将混合溶液滴加到SERS基底上,得到标准检测基片;之后测量标准检测基片的SERS光谱;检测时,提取检测物并溶解形成待检测样品溶液,将待检测样品溶液与悬浮溶液混合,接着将该混合溶液滴加到SERS基底上,得到待检测基片,测量待检测基片的SERS光谱;如果两个SERS光谱相同,则表明待检测基片中含有恩氟沙星;优点是实现了基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底对恩氟沙星的检测应用,且具有很高的检测灵敏度。

    权利要求书

    1.一种基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检测方法,其特征在
    于结合纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底对恩氟沙星进行检测,具体步骤如下:
    步骤一:取银纳米粒子溶液注入离心管,然后对银纳米粒子溶液进行离心清洗,接
    着在离心清洗结束后去除上清液,保留沉淀在离心管底部的银纳米粒子,再将银纳米粒
    子沉积物悬浮于质量百分浓度为50%的乙醇溶液中,得到单分散的均匀银纳米粒子的悬
    浮溶液;
    步骤二:取步骤一中制备得到的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液,同时将纯度
    大于或等于98%的恩氟沙星粉末配制成浓度为0.01~5毫克/升的恩氟沙星标准样品溶
    液,然后将恩氟沙星标准样品溶液加入到所取的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液中
    混合形成恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液,再对恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液进
    行超声处理;
    步骤三:取步骤二制备得到的恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液,并滴加到碳化硅
    砂纸SERS基底上,再在室温下干燥,得到恩氟沙星的标准检测基片;
    步骤四:使激光器发射的激光经聚焦后垂直照射于恩氟沙星的标准检测基片上,照
    射的激光经恩氟沙星的标准检测基片反射后由拉曼光谱仪接收,拉曼光谱仪显示出恩氟
    沙星的标准检测基片的SERS光谱;
    步骤五:实际检测前,提取检测物,并溶解检测物得到待检测样品溶液;然后取步
    骤一中制备得到的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液;接着将制备的待检测样品溶液
    加入到所取的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液中混合形成恩氟沙星与银纳米粒子
    的混合溶液,再对恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液进行超声处理;之后将经超声处理
    后的恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液滴加到碳化硅砂纸SERS基底上,再在室温下干
    燥,得到恩氟沙星的待检测基片;
    步骤六:实际检测时,使激光器发射的激光经聚焦后垂直照射于恩氟沙星的待检测
    基片上,照射的激光经恩氟沙星的待检测基片反射后由拉曼光谱仪接收,拉曼光谱仪显
    示出恩氟沙星的待检测基片的SERS光谱;然后比对恩氟沙星的标准检测基片的SERS
    光谱与恩氟沙星的待检测基片的SERS光谱,如果恩氟沙星的待检测基片的SERS光谱
    与恩氟沙星的标准检测基片的SERS光谱相同,则表明恩氟沙星的待检测基片中含有恩
    氟沙星,即表明检测物中含有恩氟沙星;如果恩氟沙星的待检测基片的SERS光谱与恩
    氟沙星的标准检测基片的SERS光谱不相同,则表明恩氟沙星的待检测基片中未含有恩
    氟沙星,即表明检测物中未含有恩氟沙星。
    2.根据权利要求1所述的基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检
    测方法,其特征在于所述的步骤一中银纳米粒子溶液的制备过程为:a1、在室温下取分
    析纯的硝酸银粉末,并溶解于去离子水中再搅拌均匀,得到质量百分浓度为0.009%~
    0.018%的硝酸银溶液;然后对硝酸银溶液进行搅拌的同时加热至沸腾;a2、将分析纯的
    柠檬酸钠溶液逐滴加入到沸腾的硝酸银溶液中,并持续搅拌得到柠檬酸钠的质量百分比
    为0.03%~0.06%的混合溶液,直至沸腾的混合溶液的颜色变为灰绿色后,在室温下冷
    却,得到单分散的直径为25~80纳米的均匀银纳米粒子溶液。
    3.根据权利要求2所述的基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检
    测方法,其特征在于所述的步骤一中银纳米粒子溶液的所取量的范围为100~500微升;
    所述的步骤一中乙醇溶液的所取量的范围为25~500微升;所述的步骤二中恩氟沙星标
    准样品溶液的所取量的范围为25~150微升;所述的步骤三中恩氟沙星与银纳米粒子的
    混合溶液的所取量的范围为25~50微升。
    4.根据权利要求1至3中任一项所述的基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底
    的恩氟沙星检测方法,其特征在于所述的步骤一中对银纳米粒子溶液进行离心清洗的转
    速为5000~11000转/分钟、清洗时间为5~30分钟。
    5.根据权利要求4所述的基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检
    测方法,其特征在于所述的步骤二中对恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液进行超声处理
    的处理时间为10~30分钟。
    6.根据权利要求2所述的基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检
    测方法,其特征在于所述的步骤三和所述的步骤五中碳化硅砂纸SERS基底的制备过程
    为:将形状规则的碳化硅砂纸置于射频磁控溅射系统中,并控制磁控溅射系统的工作压
    力为0.1~1.4帕,溅射功率为50~150瓦,并在碳化硅砂纸上沉积厚度为
    的银,得到以碳化硅砂纸为模板的碳化硅砂纸SERS基底。
    7.根据权利要求6所述的基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检
    测方法,其特征在于所述的碳化硅砂纸的目数为240~5000目。
    8.根据权利要求1或2或6所述的基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩
    氟沙星检测方法,其特征在于所述的步骤四和所述的步骤六中采集SERS光谱的积分时
    间为1~10秒,照射激光的功率为3~30毫瓦,激光波长为785纳米。
    9.根据权利要求2所述的基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检
    测方法,其特征在于所述的步骤五中待检测样品溶液与所取的单分散的均匀银纳米粒子
    的悬浮溶液的体积比为3:2;超声处理的处理时间为10~30分钟;经超声处理后的恩
    氟沙星与银纳米粒子的混合溶液的所取量为25~50微升。

    说明书

    基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检测方法

    技术领域

    本发明涉及一种恩氟沙星(Enrofloxacin,C19H22FN3O3)的检测技术,尤其是涉及
    一种基于纳米银颗粒与碳化硅(SiC)砂纸SERS(Surface-enhancedRamanscattering,
    表面增强拉曼散射)基底的恩氟沙星检测方法。

    背景技术

    由于表面增强拉曼散射(SERS)光谱技术具有高灵敏度、无损和指纹谱特征等优点
    而被广泛应用于分析化学、环境科学和生物医学等众多领域。对于SERS光谱技术而言,
    制备的贵金属(如金、银和铜等)纳米粒子与贵金属SERS基底的表面形貌对于SERS
    信号的增强具有严重影响。一般地,贵金属纳米粒子与贵金属SERS基底的表面越粗糙,
    SERS信号的增强越大。因此,人们制备了各种形貌的贵金属纳米粒子和贵金属SERS
    基底,以期获得样品的高灵敏度SERS光谱检测。贵金属纳米粒子的制备主要有物理方
    法和化学方法。物理方法制备得到的贵金属纳米粒子的尺寸均匀、大小可控,但是步骤
    多、耗时长、成本高,而化学方法可以低成本批量制备多种形貌的贵金属纳米粒子。贵
    金属SERS基底的制备方法主要有以下三种:第一种是直接将化学合成制备的贵金属纳
    米粒子溶胶涂覆在承载模板上作为SERS基底;第二种是在刻有阵列图案的承载模板上
    利用物理、化学或电化学等方法沉积金属纳米粒子,得到金属纳米粒子阵列SERS基底;
    第三种是利用双亲分子,通过静电或化学方法将金属纳米粒子自组装固定在承载模板
    (如硅片或玻璃等)上形成SERS基底。比较而言,第一种方法相对简单,可批量生产,
    但制备的SERS基底产生的SERS信号较弱;第二种方法制备的SERS基底可得到强的
    SERS信号,并且具有良好的稳定性和重复性,但制作工艺复杂,成本较高;第三种方
    法得到的SERS基底具有较高的SERS信号,但稳定性和重复性较差不足。

    另一方面,恩氟沙星是一种合成氟喹诺酮类抗生素,由于其具有广谱抗菌活性和很
    强的渗透性,可以有效的杀灭动物体内的多种细菌。虽然恩氟沙星是一种有效的抗菌剂,
    但是过量使用恩氟沙星也会导致环境污染、提升水生环境中抗生素耐药性细菌的增殖,
    以及改变人体肠道内的微生物群等副作用,给人们的健康带来巨大威胁。因此,对食品
    与环境中的恩氟沙星的含量进行检测,是十分必要的。目前,对恩氟沙星的检测方法主
    要有液相色谱-串联质谱法、时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术、化学发光酶联免疫
    检测。这几种方法具有高的检测灵敏度,但检测费用高、时间消耗长,以及对检测者专
    业素质的要求高,因而影响到它们的普遍应用。

    发明内容

    本发明所要解决的技术问题是提供一种基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的
    恩氟沙星检测方法,其通过SERS信号的增强实现了对恩氟沙星的高灵敏度检测。

    本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为:一种基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸
    SERS基底的恩氟沙星检测方法,其特征在于结合银纳米粒子与碳化硅砂纸SERS基底
    对恩氟沙星进行检测,具体步骤如下:

    步骤一:取银纳米粒子溶液注入离心管,然后对银纳米粒子溶液进行离心清洗,接
    着在离心清洗结束后去除上清液,保留沉淀在离心管底部的银纳米粒子,再将银纳米粒
    子沉积物悬浮于质量百分浓度为50%的乙醇溶液中,得到单分散的均匀银纳米粒子的悬
    浮溶液;

    步骤二:取步骤一中制备得到的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液,同时将纯度
    大于或等于98%的恩氟沙星粉末配制成浓度为0.01~5毫克/升的恩氟沙星标准样品溶
    液,然后将恩氟沙星标准样品溶液加入到所取的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液中
    混合形成恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液,再对恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液进
    行超声处理;

    步骤三:取步骤二制备得到的恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液,并滴加到碳化硅
    砂纸SERS基底上,再在室温下干燥,得到恩氟沙星的标准检测基片;

    步骤四:使激光器发射的激光经聚焦后垂直照射于恩氟沙星的标准检测基片上,照
    射的激光经恩氟沙星的标准检测基片反射后由拉曼光谱仪接收,拉曼光谱仪显示出恩氟
    沙星的标准检测基片的SERS光谱;

    步骤五:实际检测前,提取检测物,并溶解检测物得到待检测样品溶液;然后取步
    骤一中制备得到的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液;接着将制备的待检测样品溶液
    加入到所取的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液中混合形成恩氟沙星与银纳米粒子
    的混合溶液,再对恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液进行超声处理;之后将经超声处理
    后的恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液滴加到碳化硅砂纸SERS基底上,再在室温下干
    燥,得到恩氟沙星的待检测基片;

    步骤六:实际检测时,使激光器发射的激光经聚焦后垂直照射于恩氟沙星的待检测
    基片上,照射的激光经恩氟沙星的待检测基片反射后由拉曼光谱仪接收,拉曼光谱仪显
    示出恩氟沙星的待检测基片的SERS光谱;然后比对恩氟沙星的标准检测基片的SERS
    光谱与恩氟沙星的待检测基片的SERS光谱,如果恩氟沙星的待检测基片的SERS光谱
    与恩氟沙星的标准检测基片的SERS光谱相同,则表明恩氟沙星的待检测基片中含有恩
    氟沙星,即表明检测物中含有恩氟沙星;如果恩氟沙星的待检测基片的SERS光谱与恩
    氟沙星的标准检测基片的SERS光谱不相同,则表明恩氟沙星的待检测基片中未含有恩
    氟沙星,即表明检测物中未含有恩氟沙星。

    所述的步骤一中银纳米粒子溶液的制备过程为:a1、在室温下取分析纯的硝酸银粉
    末,并溶解于去离子水中再搅拌均匀,得到质量百分浓度为0.009%~0.018%的硝酸银
    溶液;然后对硝酸银溶液进行搅拌的同时加热至沸腾;a2、将分析纯的柠檬酸钠溶液逐
    滴加入到沸腾的硝酸银溶液中,并持续搅拌得到柠檬酸钠的质量百分比为0.03%~0.06%
    的混合溶液,直至沸腾的混合溶液的颜色变为灰绿色后,在室温下冷却,得到单分散的
    直径为25~80纳米的均匀银纳米粒子溶液。

    所述的步骤一中银纳米粒子溶液的所取量的范围为100~500微升;所述的步骤一
    中乙醇溶液的所取量的范围为25~500微升;所述的步骤二中恩氟沙星标准样品溶液的
    所取量的范围为25~150微升;所述的步骤三中恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液的所
    取量的范围为25~50微升。

    所述的步骤一中对银纳米粒子溶液进行离心清洗的转速为5000~11000转/分钟、
    清洗时间为5~30分钟。

    所述的步骤二中对恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液进行超声处理的处理时间为
    10~30分钟。

    所述的步骤三和所述的步骤五中碳化硅砂纸SERS基底的制备过程为:将形状规则
    的碳化硅砂纸置于射频磁控溅射系统中,并控制磁控溅射系统的工作压力为0.1~1.4帕,
    溅射功率为50~150瓦,并在碳化硅砂纸上沉积厚度为的银,得到以碳化硅
    砂纸为模板的碳化硅砂纸SERS基底。

    所述的碳化硅砂纸的目数为240~5000目。

    所述的步骤四和所述的步骤六中采集SERS光谱的积分时间为1~10秒,照射激光
    的功率为3~30毫瓦,激光波长为785纳米。

    所述的步骤五中待检测样品溶液与所取的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液的
    体积比为3:2;超声处理的处理时间为10~30分钟;经超声处理后的恩氟沙星与银纳
    米粒子的混合溶液的所取量为25~50微升。

    与现有技术相比,本发明的优点在于:

    1)利用本发明方法可以对恩氟沙星进行微量的高灵敏检测。

    2)本发明方法将恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液滴加到碳化硅砂纸SERS基底
    上,进一步增强了碳化硅砂纸SERS基底的SERS信号强度,提高了检测灵敏度。

    3)在本发明方法中,利用不同浓度的银纳米粒子溶液制备而成的恩氟沙星与银纳
    米粒子的混合溶液对于SERS信号的增强效果不同,可以应用于多种情况下恩氟沙星的
    检测。

    4)在本发明方法中,采用不同目数的碳化硅砂纸和在不同磁控溅射条件下制备的
    碳化硅砂纸SERS基底对于SERS信号的增强效果不同,可以应用于多种情况下恩氟沙星
    的检测。

    5)在本发明方法中,以碳化硅砂纸为模板制备的碳化硅砂纸SERS基底可弯曲、
    可裁剪、易携带,制备工艺简单、成本低廉、耗时小、产率高,易于推广,便于应用。

    附图说明

    图1a为实施例一采用2000目的碳化硅砂纸制备得到的碳化硅砂纸SERS基底的电
    子显微镜照片;

    图1b为实施例一的步骤二中得到的恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液滴加到2000
    目的碳化硅砂纸制备得到的碳化硅砂纸SERS基底上并经干燥处理后得到的恩氟沙星的
    标准检测基片的电子显微镜照片(右上角的小图为分布在碳化硅砂纸SERS基底上的银
    纳米粒子的电子显微镜照片);

    图2为SERS光谱图,曲线1为实施例一的步骤四中得到的恩氟沙星的标准检测基
    片的SERS光谱,曲线2为实施例一的步骤二中得到的恩氟沙星标准样品溶液直接滴加
    到2000目的碳化硅砂纸制备得到的碳化硅砂纸SERS基底上经干燥后得到的基片上检
    测得到的SERS光谱,曲线3为实施例一的步骤二中得到的恩氟沙星与银纳米粒子的混
    合溶液滴加到石英片上经干燥后得到的基片上检测得到的SERS光谱;

    图3为SERS光谱图,曲线1为实施例一的步骤四中得到的恩氟沙星的标准检测基
    片的SERS光谱,曲线2为从含有恩氟沙星的鸡肉中提取出检测物制备的恩氟沙星的待
    检测基片的SERS光谱,曲线3为从不含有恩氟沙星的鸡肉中提取检测物制备的恩氟沙
    星的待测基片的SERS光谱;

    图4为实施例二中对不同浓度的恩氟沙星标准检测样品溶液制备得到的恩氟沙星的
    标准检测基片进行检测得到的SERS光谱;

    图5a为实施例三采用800目的碳化硅砂纸制备得到的SERS基底的电子显微镜照
    片;

    图5b为实施例三的步骤二中得到的恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液滴加到800
    目的碳化硅砂纸制备的碳化硅砂纸SERS基底上并经干燥处理后得到的恩氟沙星的标准
    检测基片的电子显微镜照片(右上角的小图为分布在碳化硅砂纸SERS基底上的银纳米
    粒子的电子显微镜照片);

    图6为SERS光谱图,曲线1为实施例三的步骤四中得到的恩氟沙星的标准检测基
    片的SERS光谱,曲线2为实施例三的步骤二中得到的恩氟沙星标准样品溶液直接滴加
    到800目的碳化硅砂纸制备得到的碳化硅砂纸SERS基底上经干燥后得到的基片上检测
    得到的SERS光谱;

    图7a为实施例四采用1200目的碳化硅砂纸制备得到的碳化硅砂纸SERS基底的电
    子显微镜照片;

    图7b为实施例四的步骤二中得到的恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液滴加到1200
    目的碳化硅砂纸制备的碳化硅砂纸SERS基底上并经干燥处理后得到的恩氟沙星的标准
    检测基片的电子显微镜照片(右上角的小图为分布在碳化硅砂纸SERS基底上的银纳米
    粒子的电子显微镜照片);

    图8为SERS光谱图,曲线1为实施例四的步骤四中得到的恩氟沙星的标准检测基
    片的SERS光谱,曲线2为实施例四的步骤二中得到的恩氟沙星标准样品溶液直接滴加
    到1200目的碳化硅砂纸制备的碳化硅砂纸SERS基底上经干燥后得到的基片上检测得
    到的SERS光谱;

    图9a为实施例五采用3000目的碳化硅砂纸制备得到的碳化硅砂纸SERS基底的电
    子显微镜照片;

    图9b为实施例五的步骤二中得到的恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液滴加到3000
    目的碳化硅砂纸制备的碳化硅砂纸SERS基底上并经干燥处理后得到的恩氟沙星的标准
    检测基片的电子显微镜照片(右上角的小图为分布在碳化硅砂纸SERS基底上的银纳米
    粒子的电子显微镜照片);

    图10为SERS光谱图,曲线1为实施例五的步骤四中得到的恩氟沙星的标准检测
    基片的SERS光谱,曲线2为实施例五的步骤二中得到的恩氟沙星标准样品溶液直接滴
    加到3000目的碳化硅砂纸制备的碳化硅砂纸SERS基底上经干燥后得到的基片上检测
    得到的SERS光谱;

    图11为实施例六中制备而成的恩氟沙星的标准检测基片上检测得到的SERS光谱;

    图12为实施例七中制备而成的恩氟沙星的标准检测基片上检测得到的SERS光
    谱;;

    图13为实施例八中制备而成的恩氟沙星的标准检测基片上检测得到的SERS光谱。

    具体实施方式

    以下结合实施例及其附图对本发明作进一步详细描述。

    实施例一:

    本实施例提出的一种基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检测方
    法,其结合银纳米粒子与采用2000目的碳化硅砂纸制备得到的SERS基底对恩氟沙星
    进行检测,具体步骤如下:

    步骤一:取300微升的银纳米粒子溶液注入离心管,然后以11000转/分钟的转速
    对银纳米粒子溶液进行离心清洗,清洗30分钟后去除上清液,保留沉淀在离心管底部
    的银纳米粒子,再将银纳米粒子沉积物悬浮于质量百分浓度为50%的100微升的乙醇溶
    液中,得到浓度为360毫克/升的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液。

    在此,银纳米粒子溶液的制备过程为:a1、在室温下取一定量的分析纯的硝酸银粉
    末,并溶解于去离子水中再搅拌均匀,得到质量百分浓度为0.018%的硝酸银溶液;然
    后,对所述的硝酸银溶液进行搅拌的同时加热至沸腾;a2、将一定量的分析纯的柠檬酸
    钠溶液逐滴加入到沸腾的硝酸银溶液中,并持续搅拌得到柠檬酸钠的质量百分比为
    0.06%的混合溶液,直至沸腾的混合溶液的颜色变为灰绿色后,在室温下冷却,得到单
    分散的直径约为50纳米的均匀银纳米粒子溶液。

    步骤二:取步骤一中制备得到的100微升的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液,
    同时将纯度大于或等于98%的恩氟沙星粉末配制成浓度为5毫克/升的恩氟沙星标准样
    品溶液,然后取150微升配制的恩氟沙星标准样品溶液并加入到100微升的单分散的均
    匀银纳米粒子的悬浮溶液中混合形成恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液,再对恩氟沙星
    与银纳米粒子的混合溶液进行超声处理10分钟。

    步骤三:取步骤二制备得到的40微升的恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液,并滴
    加到碳化硅砂纸SERS基底上,然后在室温下干燥,得到恩氟沙星的标准检测基片。

    在此,碳化硅砂纸SERS基底的制备过程为:将形状规则的2000目的碳化硅砂纸
    置于射频磁控溅射系统中,并控制磁控溅射系统的工作压力为1.4帕,溅射功率为50
    瓦,并在碳化硅砂纸上沉积厚度为的银,得到以碳化硅砂纸为模板的碳化硅砂纸
    SERS基底。

    步骤四:使激光器发射的功率为30毫瓦且波长为785纳米的激光束经数值孔径为
    0.65的物镜聚焦后垂直照射于恩氟沙星的标准检测基片上,照射的激光经恩氟沙星的标
    准检测基片反射后由拉曼光谱仪接收,SERS光谱采集10秒后拉曼光谱仪显示出恩氟沙
    星的标准检测基片的SERS光谱。

    步骤五:实际检测前,按照文献“Anovelquantumdot-basedfluoroimmunoassay
    methodfordetectionofEnrofloxacinresidueinchickenmuscletissue,FoodChemistry,
    2009,”(一种基于新型量子点的荧光免疫分析法用于检测鸡肉组织中残留的恩氟沙星,
    食品化学,2009)给出的提取检测物的方法,从1克鸡肉中提取出检测物并溶解到1毫
    升的质量百分浓度为50%的乙醇溶液中得到待检测样品溶液,然后取出225微升的待检
    测样品溶液与步骤一制备得到的150微升的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液中混合
    形成恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液,再对恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液进行超
    声处理10分钟后,取经超声处理后的恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液40微升滴加到
    2000目的碳化硅砂纸制备得到的碳化硅砂纸SERS基底上,再在室温下干燥,得到恩氟
    沙星的待检测基片。

    步骤六:使激光器发射的功率为30毫瓦且波长为785纳米的激光束经数值孔径为
    0.65的物镜聚焦后垂直照射于恩氟沙星的待检测基片上,照射的激光经恩氟沙星待检测
    基片反射后由拉曼光谱仪接收,SERS光谱采集10秒后拉曼光谱仪显示出恩氟沙星的待
    检测基片的SERS光谱,并与恩氟沙星的标准检测基片的SERS光谱进行对比,如果恩
    氟沙星的待检测基片的SERS光谱与恩氟沙星的标准检测基片的SERS光谱相同,则表
    明待检测基片中含有恩氟沙星,也就是检测物中含有恩氟沙星;如果恩氟沙星的待检测
    基片的SERS光谱与恩氟沙星的标准检测基片的SERS光谱不相同,则表明检测物中未
    含有恩氟沙星。

    由本实施例采用2000目的碳化硅砂纸制备得到的碳化硅砂纸SERS基底的电子显
    微镜照片如图1a所示。从图1a中可以看出,沉积在碳化硅砂纸上的银颗粒的大小以及
    间距在微米量级,其颗粒的大小为11±5.4微米,并且显示出许多尖锐的边角,这种粗糟
    的银表面有助于SERS信号的增强。

    本实施例的步骤二中得到的恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液滴加到制备的碳化
    硅砂纸SERS基底上后,其上的银纳米粒子分布的电子显微镜照片如图1b所示。从图
    1b中可以看出,银纳米粒子呈现明显的团聚,从而进一步增强SERS信号的强度。

    图2分别给出了实施例一的步骤四中得到的恩氟沙星的标准检测基片的SERS光谱
    (曲线1)和步骤二中得到的恩氟沙星标准样品溶液直接滴加到2000目的碳化硅砂纸制
    备得到的碳化硅砂纸SERS基底上经干燥后得到的基片上检测得到的SERS光谱(曲线
    2),以及步骤二中得到的恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液滴加到石英片上经干燥后
    得到的基片上检测得到的SERS光谱(曲线3)。从图2中可以看出,直接滴加恩氟沙
    星标准样品溶液到碳化硅砂纸SERS基底上没有检测到拉曼信号,滴加恩氟沙星与银纳
    米粒子的混合溶液到石英片上只检测到弱的SERS信号,而由恩氟沙星的标准检测基片
    检测到强的SERS信号,其在1386cm-1处的拉曼信号强度达到37118。对比曲线1和曲
    线2,可以看出银纳米粒子的对于恩氟沙星SERS信号的增强作用,对比曲线1和曲线
    3,可以看出碳化硅砂纸SERS基底对于恩氟沙星SERS信号的增强的贡献。

    图3分别给出了实施例一的步骤四中得到的恩氟沙星的标准检测基片的SERS光谱
    (曲线1)和从含有恩氟沙星的鸡肉中提取出检测物制备的恩氟沙星的待检测基片的
    SERS光谱(曲线2),以及从不含有恩氟沙星的鸡肉中提取检测物制备的恩氟沙星的
    待测基片的SERS光谱。从图3中可以清晰地分辨出鸡肉中是否含有恩氟沙星。

    实施例二:

    本实施例提出一种基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检测方法,
    其结合银纳米粒子与采用2000目的碳化硅砂纸制备得到的SERS基底对恩氟沙星进行
    检测。本实施例对恩氟沙星的检测方法以及检测过程与实施例一给出的对恩氟沙星的检
    测方法以及检测过程相同,不同之处仅在于本实施例制备恩氟沙星的标准检测基片所采
    用的恩氟沙星标准样品溶液的浓度不同,具体是将纯度大于或等于98%(HPLC)的恩
    氟沙星粉末配制成浓度分别为0.01、0.05、0.1、0.5、1毫克/升的五种恩氟沙星标准样品
    溶液,然后分别取150微升配制的不同浓度的恩氟沙星标准样品溶液并加入到五份100
    微升的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液中各自混合形成恩氟沙星与银纳米粒子的
    混合溶液,再对五份恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液分别进行超声处理10分钟,接
    着分别取40微升的恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液,并滴加到碳化硅砂纸SERS基
    底上,在室温下干燥后得到五种恩氟沙星的标准检测基片。

    由本实施例对制备的五种不同浓度的恩氟沙星的标准检测基片进行检测的结果如
    图4所示,从图4中可以看到利用本发明的恩氟沙星检测方法对于五种不同浓度的恩氟
    沙星的标准检测基片均检测到SERS信号,且检测浓度可以低到0.01毫克/升。

    实施例三:

    本实施例提出一种基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检测方法,
    其结合银纳米粒子与采用800目的碳化硅砂纸制备得到的SERS基底对恩氟沙星进行检
    测。本实施例对恩氟沙星的检测方法以及检测过程与实施例一给出的对恩氟沙星的检测
    方法以及检测过程相同,不同之处仅在于本实施例制备碳化硅砂纸SERS基底的所采用
    的碳化硅砂纸的目数不同,具体是采用800目的碳化硅砂纸制备得到碳化硅砂纸SERS
    基底。

    由本实施例采用800目的碳化硅砂纸制备得到的碳化硅砂纸SERS基底的电子显微
    镜照片如图5a所示。从图5a中可以看出,沉积在碳化硅砂纸上的银颗粒的大小以及间
    距在微米量级,其颗粒的大小为18.5±9.8微米,并且显示出许多尖锐的边角,这种粗糟
    的银表面有助于SERS信号的增强。

    本实施例的步骤二中得到的恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液滴加到800目的碳化
    硅砂纸制备的碳化硅砂纸SERS基底上后,其上的银纳米粒子分布的电子显微镜照片如
    图5b所示。从图5b中可以看出,银纳米粒子呈现明显的团聚,从而进一步增强SERS
    信号的强度。

    图6分别给出了实施例三的步骤四中得到的恩氟沙星的标准检测基片的SERS光谱
    (曲线1)和步骤二中得到的恩氟沙星标准样品溶液直接滴加到800目的碳化硅砂纸制
    备得到的碳化硅砂纸SERS基底上经干燥后得到的基片上检测得到的SERS光谱(曲线
    2)。从图6中可以看出,直接滴加恩氟沙星溶液到碳化硅砂纸SERS基底上没有检测
    到拉曼信号,而由恩氟沙星的标准检测基片检测到强的SERS信号,其在1386cm-1处
    的拉曼信号强度达到10819。根据实施例二中的检测极限可以推算出本实施例的恩氟沙
    星检测极限约为0.034毫克/升。

    实施例四:

    本实施例提出一种基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检测方法,
    其结合银纳米粒子与采用1200目的碳化硅砂纸制备得到的SERS基底对恩氟沙星进行
    检测。本实施例对恩氟沙星的检测方法以及检测过程与实施例一给出的对恩氟沙星的检
    测方法以及检测过程相同,不同之处仅在于本实施例制备碳化硅砂纸SERS基底的所采
    用的碳化硅砂纸的目数不同,具体是采用1200目的碳化硅砂纸制备得到碳化硅砂纸
    SERS基底。

    由本实施例采用1200目的碳化硅砂纸制备得到的碳化硅砂纸SERS基底的电子显
    微镜照片如图7a所示。从图7a中可以看出,沉积在碳化硅砂纸上的银颗粒的大小以及
    间距在微米量级,其颗粒的大小为13.8±7.5微米,并且显示出许多尖锐的边角,这种粗
    糟的银表面有助于SERS信号的增强。

    本实施例的步骤二中得到的恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液滴加到1200目的碳
    化硅砂纸制备的碳化硅砂纸SERS基底上后,其上的银纳米粒子分布的电子显微镜照片
    如图7b所示。从图7b中可以看出,银纳米粒子呈现明显的团聚,从而进一步增强SERS
    信号的强度。

    图8分别给出了实施例四的步骤四中得到的恩氟沙星的标准检测基片的SERS光谱
    (曲线1)和步骤二中得到的恩氟沙星标准样品溶液直接滴加到1200目的碳化硅砂纸制
    备得到的碳化硅砂纸SERS基底上经干燥后得到的基片上检测得到的SERS光谱(曲线
    2)。从图8中可以看出,直接滴加恩氟沙星溶液到碳化硅砂纸SERS基底上没有检测
    到拉曼信号,而由恩氟沙星的标准检测基片检测到强的SERS信号,其在1386cm-1处
    的拉曼信号强度达到20569。根据实施例二中的检测极限可以推算出本实施例的恩氟沙
    星检测极限约为0.018毫克/升。

    实施例五:

    本实施例提出一种基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检测方法,
    其结合银纳米粒子与采用3000目的碳化硅砂纸制备得到的SERS基底对恩氟沙星进行
    检测。本实施例对恩氟沙星的检测方法以及检测过程与实施例一给出的对恩氟沙星的检
    测方法以及检测过程相同,不同之处仅在于本实施例制备碳化硅砂纸SERS基底的所采
    用的碳化硅砂纸的目数不同,具体是采用3000目的碳化硅砂纸制备得到碳化硅砂纸
    SERS基底。

    由本实施例采用3000目的碳化硅砂纸制备得到的碳化硅砂纸SERS基底的电子显
    微镜照片如图9a所示。从图9a中可以看出,沉积在碳化硅砂纸上的银颗粒的大小以及
    间距在微米量级,其颗粒的大小为6.7±2.7微米,并且显示出许多尖锐的边角,这种粗
    糟的银表面有助于SERS信号的增强。

    本实施例的步骤二中得到的恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液滴加到3000目的碳
    化硅砂纸制备的碳化硅砂纸SERS基底上后,其上的银纳米粒子分布的电子显微镜照片
    如图9b所示。从图9b中可以看出,银纳米粒子呈现明显的团聚,从而进一步增强SERS
    信号的强度。

    图10分别给出了实施例五的步骤四中得到的恩氟沙星的标准检测基片的SERS光
    谱(曲线1)和步骤二中得到的恩氟沙星标准样品溶液直接滴加到3000目的碳化硅砂纸
    制备得到的碳化硅砂纸SERS基底上经干燥后得到的基片上检测得到的SERS光谱(曲
    线2)。从图10中可以看出,直接滴加恩氟沙星溶液到碳化硅砂纸SERS基底上没有检
    测到拉曼信号,而由恩氟沙星的标准检测基片检测到强的SERS信号,其在1386cm-1处
    的拉曼信号强度达到17981。根据实施例二中的检测极限可以推算出本实施例的恩氟沙
    星检测极限约为0.021毫克/升。

    比较实施例一、实施例三、实施例四和实施例五给出的恩氟沙星检测方法检测得到
    的恩氟沙星的表面增强拉曼散射光谱,可以看出不同目数的碳化硅砂纸SERS基底对于
    恩氟沙星的拉曼信号强度有一定的影响,而当碳化硅砂纸SERS基底为2000目时检测
    得到的恩氟沙星的拉曼信号最强。

    实施例六:

    本实施例提出的一种基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检测方
    法,其与实施例一提出的恩氟沙星检测方法的不同之处在于步骤一,即:使银纳米粒子
    沉积物悬浮于300微升的质量百分浓度为50%的乙醇溶液中,形成浓度为120毫克/升
    的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液。

    本实施例制备而成的恩氟沙星的标准检测基片上检测得到的SERS光谱如图11所
    示。检测时所用激光的功率为30毫瓦,SERS光谱采集时间为10秒。从图11中可以
    看出,由本实施例检测恩氟沙星的标准检测基片得到较强的SERS信号,其在1386cm-1
    处的拉曼信号强度达到11673。

    实施例七:

    本实施例提出的一种基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检测方
    法,其与实施例一提出的恩氟沙星检测方法的不同之处在于步骤一,即:使银纳米粒子
    沉积物悬浮于150微升的质量百分浓度为50%的乙醇溶液中,形成浓度为240毫克/升
    的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液。

    本实施例制备而成的恩氟沙星的标准检测基片上检测得到的SERS光谱如图12所
    示。检测时所用激光的功率为30毫瓦,SERS光谱采集时间为10秒。从图12中可以
    看出,本实施例检测恩氟沙星的标准检测基片得到较强的SERS信号,其在1386cm-1处
    的拉曼信号强度达到17316。

    实施例八:

    本实施例提出的一种基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检测方
    法,其与实施例一提出的恩氟沙星检测方法的不同之处在于步骤一,即:使银纳米粒子
    沉积物悬浮于75微升的质量百分浓度为50%的乙醇溶液中,形成浓度为480毫克/升的
    单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液。

    本实施例制备而成的恩氟沙星的标准检测基片上检测得到的SERS光谱如图13所
    示。检测时所用激光的功率为30毫瓦,SERS光谱采集时间为10秒。从图13中可以
    看出,本实施例检测恩氟沙星的标准检测基片得到强的SERS信号,其在1386cm-1处
    的拉曼信号强度达到25326。

    对比实施例一、实施例六、实施例七和实施例八给出的恩氟沙星检测方法检测得到
    的表面增强拉曼散射光谱,发现虽然都有较强的SERS信号,但是实施例一给出的恩氟
    沙星检测方法检测得到的SERS信号最强,因此在实施例二至实施例五中均将300微升
    的银纳米粒子溶液离心后的银纳米粒子沉积物悬浮于质量百分浓度为50%的100微升的
    乙醇溶液中。

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