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    重庆时时彩平台源码: 马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201610058138.6

    申请日:

    2016.01.28

    公开号:

    CN105606556A

    公开日:

    2016.05.25

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 21/33申请日:20160128|||公开
    IPC分类号: G01N21/33 主分类号: G01N21/33
    申请人: 广西壮族自治区中医药研究院
    发明人: 张赟赟; 杨海船; 李燕婧; 李嘉; 姜平川
    地址: 530022 广西壮族自治区南宁市青秀区东葛路20-1号
    优先权:
    专利代理机构: 广西南宁公平专利事务所有限责任公司 45104 代理人: 杨立华
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201610058138.6

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2018.09.21|||2016.06.22|||2016.05.25

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,以无水葡萄糖为对照,使用紫外分光光度计测定马蹄蕨多糖提取物中多糖的含量。本发明完善了马蹄蕨药材的质量检测标准,为马蹄蕨药材质量标准的建立奠定了基??;而且,该法灵敏度高、操作简便、结果准确;推广和应用本发明,可以确保马蹄蕨药材质量,保障其临床用药的安全、有效、稳定。

    权利要求书

    1.一种马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,其特征在于以无水葡萄糖为对照,
    使用紫外分光光度计测定马蹄蕨多糖提取物中多糖的含量。
    2.根据权利要求1所述的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,其特征在于:
    所述无水葡萄糖的浓度为5-500mg/L,所述马蹄蕨多糖提取物的浓度为10-200μg/ml。
    3.根据权利要求1所述的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,其特征在于包
    括以下步骤:
    A、将无水葡萄糖对照品用蒸馏水配制成浓度为5-500mg/L的对照品溶液;
    B、将蒽酮溶解于浓硫酸溶液中,配制成1-3g/L的蒽酮-硫酸试剂;
    C、将对照品溶液与蒽酮-硫酸试剂反应,放入紫外分光光度计进行检测,检测波长为
    620nm,所得吸光度绘制标准曲线,并按照标准曲线根据比尔朗伯定律得出回归曲线方程;
    D、将马蹄蕨多糖提取物样品按对照品溶液方法制备,并进行吸光度测定,根据回归曲线
    方程计算样品中多糖的含量。
    4.根据权利要求1所述的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,其特征在于步
    骤A按以下操作进行:精密称取无水葡萄糖对照品100mg,置于100mL容量瓶中,加水
    适量使溶解,稀释至刻度,摇匀;精密吸取10mL置于100mL容量瓶中,加水稀释至刻
    度,即得0.1g/L的葡萄糖对照品溶液。
    5.根据权利要求1所述的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,其特征在于步
    骤B按以下操作进行:准确称取0.2g蒽酮,溶解于100mL浓硫酸溶液中,配制成0.2%
    蒽酮-硫酸试剂。
    6.根据权利要求1所述的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,其特征在于步
    骤C按以下操作进行:精密量取0.1g/L的葡萄糖对照品溶液0.05、0.1、0.2、0.3、
    0.4、0.6、0.8ml,分别置10ml具塞刻度试管中,各加蒸馏水至1.0ml,摇匀,分别加
    入0.2%蒽酮-硫酸试剂4ml,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,
    水浴煮沸10分钟,取出,用自来水冷却,室温放置10分钟,以蒸馏水为空白,照紫
    外-可见分光光度法,在620mn波长处测定吸光度;以吸光度值为纵坐标,葡萄糖浓度
    为横坐标,绘制标准曲线。
    7.根据权利要求1所述的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,其特征在于步
    骤D按以下操作进行:精密吸取浓度为50μg/ml的马蹄蕨多糖提取物1ml,加入0.2%
    蒽酮-硫酸试剂4ml,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,水浴煮
    沸10分钟,取出,用自来水冷却,室温放置10分钟,依法测定吸光度值,根据标准
    曲线计算样品中多糖含量。

    说明书

    马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法

    技术领域

    本发明马蹄蕨药材质量控制技术领域,尤其涉及一种马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分
    光光度测定法。

    背景技术

    马蹄蕨,观音座莲科植物福建莲座蕨(AngiopterisfokiensisHieron.),作为广西
    的民族特色药材,既属于壮药又属于瑶药,壮药名为Maenzdaezma,瑶药名为麻蹄涯。其
    通常以根茎人药,在广西主要分布于金秀、恭城、马山等地,具有消炎止痛、清热解毒、
    利湿、凉血止血等功效;主治肠炎、痢疾、胃痛、胃十二指肠溃疡、肺结核咯血、肾炎水
    肿、功能性子宫出血、风湿性关节炎、淋巴结结核、淋巴结炎、跌打损伤、痈疮肿毒、枪
    炮伤、毒蛇毒虫咬伤。长久以来,在广西的壮族、瑶族聚集地,马蹄蕨是当地居民的常用
    药材之一。由于壮、瑶人民长期生活在山区,跌打损伤和虫蛇咬伤经常发生,马蹄蕨即被
    作为常用药材,常备家中。近些年来,在当地的民族特色医院中,也被医生常用于各类患
    者,有着较好的药用价值。

    马蹄蕨作为常用民族药材先后被收入《中国现代瑶药》和《壮药质量标准》(第三册),
    然而标准中也仅有简单的理化鉴别。

    发明内容

    本发明要解决的技术问题是提供一种灵敏度高、操作简便、结果准确的马蹄蕨药材中
    多糖含量的紫外分光光度测定法,以确保药材质量,保障其临床用药的安全、有效、稳定。

    为解决上述技术问题,本发明采用以下技术方案:马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光
    光度测定法,以无水葡萄糖为对照,使用紫外分光光度计测定马蹄蕨多糖提取物中多糖的
    含量。

    8.无水葡萄糖的浓度为5-500mg/L,马蹄蕨多糖提取物的浓度为10-200μg/ml。

    上述马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,包括以下步骤:

    A、将无水葡萄糖对照品用蒸馏水配制成浓度为5-500mg/L的对照品溶液;

    B、将蒽酮溶解于浓硫酸溶液中,配制成1-3g/L的蒽酮-硫酸试剂;

    C、将对照品溶液与蒽酮-硫酸试剂反应,放入紫外分光光度计进行检测,检测波长
    为620nm,所得吸光度绘制标准曲线,并按照标准曲线根据比尔朗伯定律得出回归曲线方
    程;

    D、将马蹄蕨多糖提取物样品按对照品溶液方法制备,并进行吸光度测定,根据回归
    曲线方程计算样品中多糖的含量。

    步骤A按以下操作进行:精密称取无水葡萄糖对照品100mg,置于100mL容量瓶中,
    加水适量使溶解,稀释至刻度,摇匀;精密吸取10mL置于100mL容量瓶中,加水稀释至
    刻度,即得0.1g/L的葡萄糖对照品溶液。

    步骤B按以下操作进行:准确称取0.2g蒽酮,溶解于100mL浓硫酸溶液中,配制成
    0.2%蒽酮-硫酸试剂。

    步骤C按以下操作进行:精密量取0.1g/L的葡萄糖对照品溶液0.05、0.1、0.2、0.3、
    0.4、0.6、0.8ml,分别置10ml具塞刻度试管中,各加蒸馏水至1.0ml,摇匀,分别加入
    0.2%蒽酮-硫酸试剂4ml,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,水浴
    煮沸10分钟,取出,用自来水冷却,室温放置10分钟,以蒸馏水为空白,照紫外-可见
    分光光度法,在620mn波长处测定吸光度;以吸光度值为纵坐标,葡萄糖浓度为横坐标,
    绘制标准曲线。

    步骤D按以下操作进行:将马蹄蕨多糖提取物加蒸馏水溶解,配置成浓度为50μg/ml,
    精密吸取1ml,加入0.2%蒽酮-硫酸试剂4ml,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起
    浸于沸水浴中,水浴煮沸10分钟,取出,用自来水冷却,室温放置10分钟,依法测定吸
    光度值,根据标准曲线计算样品中多糖含量。

    针对目前马蹄蕨药材质量控制中缺乏含量测定的问题,发明人在前期对该药材化学成
    分的研究中发现,马蹄蕨中含有大量多糖类成分,并对其多糖含量进行定量研究,据此建
    立了一种马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,以无水葡萄糖为对照,使用紫外
    分光光度计测定马蹄蕨多糖提取物中多糖的含量。本发明完善了马蹄蕨药材的质量检测标
    准,为马蹄蕨药材质量标准的建立奠定了基??;而且,该法灵敏度高、操作简便、结果准
    确;推广和应用本发明,可以确保马蹄蕨药材质量,保障其临床用药的安全、有效、稳定。

    附图说明

    图1是无水葡萄糖标准品的紫外吸收曲线图。

    图2是应用本发明根据吸光度绘制的葡萄糖标准曲线图。

    具体实施方式

    马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法的研究

    1.测定原理

    采用蒽酮-硫酸法进行马蹄蕨多糖含量的测定。因为糖类遇浓硫酸脱水生成糖醛或其
    衍生物,可与蒽酮试剂缩合产生颜色物质,反应后溶液呈蓝绿色,并于620nm处有最大吸
    收,显色与多糖含量呈线性关系。

    2.研究过程

    2.1马蹄蕨多糖提取物的制备

    A将1kg马蹄蕨药材粉碎成粗粉,加60%乙醇8L加热回流2次,每次2小时,过滤,弃滤
    液,收集药渣,除去脂溶性成分。

    B药渣加0.3mol/L稀盐酸8L加热回流提取2次,每次2小时,过滤,弃药渣,收集滤液
    并浓缩,得膏150g。

    C浓缩液加乙醇使乙醇浓度达到80%,静置过夜,过滤,收集沉淀,加水溶解沉淀,过滤,
    滤液浓缩成膏,经真空冷冻干燥即得马蹄蕨多糖提取物。

    2.2马蹄蕨多糖提取物中多糖含量测定

    将马蹄蕨多糖提取物做为待测样品进行分析,使用紫外分光光度计(岛津UV-2550型
    可见-紫外分光光度计)用400-800nm的波长范围对葡萄糖标准品溶液进行扫描(图1),
    得出紫外吸收曲线,其最大吸收波长为λmax=620nm,因此选用波长为620nm进行测定。按
    照《中国药典》2015四部通则0401紫外-可见分光光度法进行:

    A对照品溶液的制备

    精密称取无水葡萄糖对照品(105℃干燥至恒重)100mg,置于100mL容量瓶中,加水适
    量使溶解,稀释至刻度,摇匀;精密吸取10mL置于100mL容量瓶中,加水稀释至刻度,
    即得0.1g/L的葡萄糖对照品溶液。

    B蒽酮-硫酸试剂的制备

    准确称取0.2g蒽酮,溶解于100mL浓硫酸溶液中,配制成0.2%(2g/L)蒽酮-硫酸
    试剂,当日配制使用。

    C标准曲线的制备

    精密量取0.1g/L的葡萄糖对照品溶液0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8ml,分
    别置10ml具塞刻度试管中,各加蒸馏水至1.0ml,摇匀,分别加入0.2%蒽酮-硫酸试剂
    4ml,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,水浴煮沸10分钟,取出,
    用自来水冷却,室温放置10分钟,以蒸馏水为空白,照紫外-可见分光光度法(2015版中
    国药典),在620mn波长处测定吸光度;以吸光度值(A)为纵坐标,葡萄糖浓度(C)为
    横坐标,绘制标准曲线(图2)。所得回归方程为Y=0.0532X+0.0193(R=0.99906)。结果
    表明,标准品在0-16.00μg/ml范围内成良好的线性关系。

    表1葡萄糖标准曲线


    D测定法

    将马蹄蕨多糖提取物加蒸馏水溶解,配制成浓度为50μg/ml左右,精密吸取1ml,加
    入0.2%蒽酮-硫酸试剂4ml,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,水
    浴煮沸10分钟,取出,用自来水冷却,室温放置10分钟,依法测定吸光度值,根据标准
    曲线计算样品中多糖含量。结果见表2。

    表2

    取样量(ml)
    吸光度
    测得值(μg/ml)
    含量(%)
    1.00
    0.2164
    3.7041
    37.04%

    实施例1

    参照上述测定法,但使用0.1%的蒽酮-硫酸试剂进行反应并测定,得到马蹄蕨多糖提
    取物中多糖的含量,结果见表3。

    表3

    取样量(ml)
    吸光度
    测得值(μg/ml)
    含量(%)
    1.00
    0.2152
    3.6821
    36.82%

    实施例2

    参照上述测定法,但使用0.3%的蒽酮-硫酸试剂进行反应并测定,得到马蹄蕨多糖提
    取物中多糖的含量,结果见表4。

    表4

    取样量(ml)
    吸光度
    测得值(μg/ml)
    含量(%)
    1.00
    0.2201
    3.7740
    37.74%

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    马蹄 药材 多糖 含量 紫外 分光 光度 测定法
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