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    重庆时时彩破译: 治疗关节炎的祖师麻片及用于代谢综合症的护理辅助用药.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201610083482.0

    申请日:

    2016.02.10

    公开号:

    CN105596559A

    公开日:

    2016.05.25

    当前法律状态:

    实审

    有效性:

    审中

    法律详情: 专利申请权的转移IPC(主分类):A61K 36/83登记生效日:20170913变更事项:申请人变更前权利人:陈武变更后权利人:连云港西莫生物科技有限公司变更事项:地址变更前权利人:222004 江苏省连云港市海州区新潮社区新孔南路30号公安小区5号楼3单元101室变更后权利人:222023 江苏省连云港市海州区海宁西路11号|||实质审查的生效IPC(主分类):A61K 36/83申请日:20160210|||公开
    IPC分类号: A61K36/83; A61K9/30; A61K9/28; A61P19/02; A61P29/00; A61P3/00; G01N30/02 主分类号: A61K36/83
    申请人: 陈武
    发明人: 吴平安
    地址: 222004 江苏省连云港市海州区新潮社区新孔南路30号公安小区5号楼3单元101室
    优先权:
    专利代理机构: 代理人:
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201610083482.0

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2017.10.03|||2016.06.22|||2016.05.25

    法律状态类型:

    专利申请权、专利权的转移|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明涉及中药领域,具体涉及治疗关节炎的祖师麻片及用于代谢综合症的护理辅助用药。该药物是由以下的原料制成的:取祖师麻,加水煎煮三次,第一次2小时,第二次、第三次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.22?1.26的清膏,加乙醇使含醇量达75%,静置使沉淀,取上清液,回收乙醇并浓缩,加入碳酸钙、淀粉、糊精,混匀,制成颗粒,干燥,压制成片,包薄膜衣或糖衣,即得。该药物用于制备治疗关节炎、代谢综合征的药物或保健品。

    权利要求书

    1.一种祖师麻片药物,其特征在于,该药物是由以下的原料制成的:祖师麻。
    2.如权利要求1所述的药物,其特征在于,该药物采用如下方法制备:取祖师麻,加水煎
    煮三次,第一次2小时,第二次、第三次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为
    1.22?1.26的清膏,加乙醇使含醇量达75%,静置使沉淀,取上清液,回收乙醇并浓缩,加入
    碳酸钙、淀粉、糊精,混匀,制成颗粒,干燥,压制成片,包薄膜衣或糖衣,即得。
    3.如权利要求1~2中任意一项所述的药物用于制备治疗代谢综合征药物或保健品中
    的应用。
    4.如权利要求1~2中任意一项所述的药物用于制备治疗关节炎药物或保健品中的应
    用。
    5.如权利要求1~2中任意一项所述的药物,其特征在于,采用高效液相色谱法对黄瑞
    香苷A进行含量测定:
    (1)色谱条件:采用HypersilDs色谱柱;流动相:比例为20~40:60~80的乙腈-水;检测
    波长:190~210nm;柱温:15~25℃;流速:0.5~1.5mL·min-1;进样量:5~20μL;
    (2)对照品溶液制备:精密称取干燥至恒重的黄瑞香苷A对照品适量,加甲醇溶解制成
    对照品溶液;
    (3)供试品溶液的制备:精密称取本发明药物,加甲醇,加热回流,提取液回流溶剂并浓
    缩至干,残渣加水溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取,合并正丁醇提取液,用氨试液洗涤,正
    丁醇提取液回收溶剂至干,残渣加甲醇溶解,摇匀,滤过,取滤液,即得供试品溶液;
    (4)测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5~20μL,注入高效液相色谱
    仪,进行检测。
    6.如权利要求5所述的药物,其特征在于,采用高效液谱法对黄瑞香苷A进行含量测定:
    (1)色谱条件:采用HypersilDs色谱柱;流动相:比例为30:70的乙腈-水;检测波长:
    200nm;柱温:20℃;流速:1.0mL·min-1;进样量:10μL;
    (2)对照品溶液制备:精密称取80℃干燥至恒重的黄瑞香苷A对照品适量,加甲醇溶解
    制成每1mL含0.2mg的对照品溶液;
    (3)供试品溶液的制备:精密称取本发明药物10mL,加甲醇40mL,加热回流4h,提取液回
    流溶剂并浓缩至干,残渣加水10mL溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取5次,每次20mL,合并正
    丁醇提取液,用氨试液洗涤3次,每次15mL,正丁醇提取液回收溶剂至干,残渣加甲醇溶解并
    转移至10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取滤液,即得供试品溶液;
    (4)测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,进
    行检测。
    7.如权利要求1~2中任意一项所述的药物,其特征在于,采用气相色谱法对4-甲基-7-
    羟基香豆素、罗汉松脂醇进行含量测定:
    (1)色谱条件:色谱柱:ZB-WAX弹性石英毛细管柱;载气:N2,0.5~1.5mL·mL-1;氢气,30
    ~50mL·mL-1;空气,300~500mL·min-1;分流比:5~15:1;进样口温度:240~260℃,检测
    器温度:290~310℃;程序升温:初始80℃,每分钟5℃升至120℃,每分钟10℃升至180℃,保
    持3.5min;内标法;
    (2)内标溶液的制备:取环己酮适量,加无水乙醇溶解并稀释制成溶液,摇匀,作为内标
    溶液;
    (3)供试品溶液的制备:精密量取本品,置容量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,再精密量
    取,置容量瓶中,精密加入内标溶液,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀;
    (4)对照品溶液的制备:精密称取4-甲基-7-羟基香豆素对照品、罗汉松脂醇对照品适
    量,加无水乙醇溶解并稀释制成含4-甲基-7-羟基香豆素及罗汉松脂醇的对照品储备溶液,
    备用;
    (5)测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5~20μL,注入气相色谱仪,进
    行检测。
    8.如权利要求7所述的药物,其特征在于,采用气相色谱法对4-甲基-7-羟基香豆素、罗
    汉松脂醇进行含量测定:
    (1)色谱条件:色谱柱:ZB-WAX弹性石英毛细管柱;载气:N2,1.0mL·mL-1;氢气,40mL·
    mL-1;空气,400mL·min-1;分流比:10:1;进样口温度:250℃,检测器温度300℃;程序升温:
    初始80℃,每分钟5℃升至120℃,每分钟10℃升至180℃,保持3.5min;内标法;
    (2)内标溶液的制备:取环己酮适量,加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶
    液,摇匀,作为内标溶液;
    (3)供试品溶液的制备:精密量取本品1.0mL,置10mL容量瓶中,加无水乙醇稀释至刻
    度,再精密量取1.0mL,置10mL容量瓶中,精密加入内标溶液1.0mL,加无水乙醇稀释至刻度,
    摇匀;
    (4)对照品溶液的制备:精密称取4-甲基-7-羟基香豆素对照品、罗汉松脂醇对照品适
    量,加无水乙醇溶解并稀释制成含4-甲基-7-羟基香豆素0.301mg·mL-1及罗汉松脂醇
    0.901mg·mL-1的对照品储备溶液,备用;
    (5)测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL,注入气相色谱仪,进行检
    测。

    说明书

    治疗关节炎的祖师麻片及用于代谢综合症的护理辅助用药

    技术领域

    本发明涉及中药领域,具体涉及一种祖师麻片及其制法与新用途。

    背景技术

    祖师麻为瑞香科(Thymelaeaceae)瑞香属植物黄瑞香(Daphnegiraldii
    Nitsche)的根皮和茎皮。祖师麻片为祛湿剂,具有祛风除湿,活血止痛之功效。主治风寒湿
    闭阻,瘀血阻络所致的痹,症见肢体关节肿痛、畏寒肢冷;类风湿关节炎见上述证候者。常用
    于治疗关节炎,类风湿性关节炎;也可用于坐骨神经痛、肩周炎。祖师麻片的药品标准收载
    于2015年版《中国药典》一部第1321页。

    在现有报道中显示,2000年,杨?;?,涂小文,王艳侠等人在《第六届全国中西医结
    合肾脏病学术会议论文汇编》上报道,祖师麻可以用于治疗肾小球肾炎。2008年,林志翔,郑
    良成,戴益琛,戴禄寿,周明宣等人在《海南医学》上报道,祖师麻片可用于治疗类风湿性关
    节炎。2009年,陈建乐在其福建中医学院的硕士研究生毕业论文中报道,祖师麻片可以治疗
    老年性膝关节炎。2013年,郭兴富,武丽娟,余晋云,宋玉萍等人在《实用中医药杂志》上报
    道,祖师麻片可以治疗急性下腰痛。中国专利CN201310600707.1公开了一种治疗脾胃虚弱
    型胃癌的中药及其制备方法,中药各原料药材包括:胃寒草,地椒,白芥子,祖师麻,杏叶防
    风,大叶山桂,小草寇,巴豆树根,树腰子,土木香,草豆蔻,钉头果和梧桐子,本发明中药温
    中散寒,健脾和胃,能显著改善脾胃虚弱型胃癌患者的症状。中国专利CN201310714450.2中
    公开了一种治疗瘀血阻络型偏头痛的中药制剂及其制备方法,中药制剂各原料药材包括:
    岗梅根,鹿藿,冬凌草,枫荷梨,罗勒,萝芙木,巴山虎,香茅,红母鸡草,祖师麻,走马风,游
    草,白桂木根和三角风,本发明中药制剂活血化瘀,通络止痛,对瘀血阻络型偏头痛有确切
    疗效。中国专利CN201010195115.2中公开了一种具有抗肿瘤作用的中药组合物及其制备方
    法和应用,该中药组合物由下列重量份数的原料组成:川芎10~100份、夏天无10~200份、制
    川乌1~50份、祖师麻10~300份、秦艽10~100份、蟾酥1~50份;本发明提供的中药组合物具有
    很好的抑制肿瘤细胞生长和能促进肿瘤细胞凋亡的作用,且对多种肿瘤细胞均具有较强的
    杀灭作用。中国发明专利CN201310299158.9公开了一种用于辅助治疗抑郁症的中药制剂及
    制备方法,该中药制剂有效成分的组成原料为白首乌、竹沥、列当、山苦荬、茉莉、红参、狐
    心、天麻、铁精、秦艽、含笑花、甘遂、石楠叶、白千层、龙眼独活和祖师麻;本发明药物具有疏
    肝解郁,养血安神,镇定祛烦的作用,对于辅助心理治疗因各种病因引起的神经衰弱、精神
    分裂,抑郁症等具有良好的效果。

    本发明提供的药物可以用于治疗关节炎及代谢综合征。经研究表明,本发明药物
    对关节炎及代谢综合征具有较好的治疗效果。

    发明内容

    本发明的目的是提供一种祖师麻片的药物。

    本发明的另一目的是提供该药物的制备方法。

    本发明还提供了该药物的制药新用途。

    本发明的目的是由以下方式实现的:

    一种祖师麻片的药物,是由以下的原料制成的:祖师麻。

    该药物采用如下方法制备:取祖师麻,加水煎煮三次,第一次2小时,第二次、第三
    次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.22?1.26的清膏,加乙醇使含醇量达
    75%,静置使沉淀,取上清液,回收乙醇并浓缩,加入碳酸钙、淀粉、糊精,混匀,制成颗粒,干
    燥,压制成片,包薄膜衣或糖衣,即得。

    该药物可以用于制备治疗关节炎、代谢综合征药物或保健品。

    实验一:本发明药物治疗代谢综合征的实验研究

    一、材料和方法

    1.实验材料

    1.1仪器试剂

    血糖试纸及快速血糖仪购自美国雅培公司,血脂四项试剂购自北京世界诊中拓生物技
    术有限公司,微量注射泵购自德国贝朗公司,胰岛素使用诺和灵R,掌上型FEJ-1000B电子
    秤,购自福州福日电子有限公司。

    1.2实验动物

    清洁级雄性6周龄SD大鼠50只,饲料、实验场地均由南京中医药大学医学部动物部提
    供,每笼4~5只,自由饮用食水,12h昼夜周期喂养。

    1.3实验药物

    本发明药物:参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备。

    文迪雅的成分是马来酸罗格列酮片(RM),4mg/片,由美国葛兰素史克(天津)有限公司
    生产,国药准字H20020475。

    2.模型的建立

    正常对照组大鼠以普通标准饲料(碳水化合物60%、脂肪11%、蛋白质29%)喂养;模型组
    大鼠以高脂饲料(78.8%基础饲料、1%胆固醇、10%蛋黄粉、10%猪油、0.2%胆盐)喂养8周后成
    模,体质量和内脏脂肪质量均显著升高。

    3.分组及给药

    随机将大鼠分为4组,正常对照组、代谢综合征组、文迪雅组、本发明药物组,每组各10
    只大鼠;正常对照组喂饲普通标准饲料,其余大鼠喂饲高脂饲料。

    投喂药物:成模后将模型组大鼠随机分为代谢综合征组、文迪雅组、本发明药物
    组;自第9周开始文迪雅组按2mg·kg-1·d-1,喂饲文迪雅,本发明药物组按60mg·kg-1·d-1
    喂饲本发明药物,药物均以生理盐水溶解;正常对照组、代谢综合征组投喂相同比例体积的
    生理盐水,持续喂养4周后,行钳夹试验。

    4.实验指标测定

    清醒状态下取血,用EDAT抗凝,TG、TC、HDL-C,LDL-C用生化法测定??崭挂鹊核兀↖FNS)
    测定用放免法。所有大鼠在试验过程中,每周测量1次体质量。用RBP-l型大鼠血压计,采用
    鼠尾袖带加压阻断法测量血压,每两周测量1次。

    5.内脏脂肪质量称取方法

    将大鼠处死后,剖开腹腔,取右侧附肇旁脂肪湿质量代替内脏脂肪质量。

    6.测定胰岛素敏感性

    用正常血糖高胰岛素钳夹(GC)法评价胰岛素的敏感性。各组大鼠用10%的水合氯醛(按
    每300g大鼠体质量1ml)经腹腔麻醉,向右颈动脉和左颈静脉插人导管(PE-50)第2天,在清
    醒状态下测定空腹血糖(FBS)后,分别以25mU/kg的初始浓度和4mU·kg-1·min-1维持浓度,
    持续150min静脉滴注胰岛素;血糖值每7min测定1次,同时以12.5%葡萄糖液持续静脉滴注;
    为维持空腹血糖水平,适当调整;其输注速度。待血糖值稳定后,用GC法(最后35min内葡萄
    糖输注速度的平均值,M值)评价胰岛素敏感性。

    7.数据分析

    所有数据以±s表示;各组基本统计量及方差齐性检验和两组间比较均用SPSS统计
    学软件分析。

    二、结果

    1.各组体质量及内脏脂肪的比较见表1-1、表1-2。

    表1-1各组大鼠体质量的变化(±s,g)


    注:与正常对照组比较,*P<0.05。

    表1-2各组大鼠12周时体质量及内脏脂肪的比较(n=10,±s)


    注:与正常对照组比较,*P<0.05。

    代谢综合征组较正常对照组体质量和内脏脂肪增加明显(P<0.05);表2可以看出
    文迪雅和本发明药物组较代谢综合征组,体质量和内脏脂肪均有下降趋势,两组之间无差
    异。

    2.各组FBS、FINS、M值的比较

    见表1-3。代谢综合征组较正常对照组M值明显降低(P<0.01),FINS明显升高(P<0.01);
    本发明药物组较代谢综合征组M值明显升高(P<0.05),FINS明显降低(P<0.05)。

    表1-3各组FBS、FINS及M值的比较(±s)


    注:与正常对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;与代谢综合征组比较,△P<0.05。

    3.各组血脂水平的比较

    见表1-4。代谢综合征组较正常对照组TC、TG、LDL-C明显增高,HDL-C无差异;本发明药
    物组较代谢综合征组TC、TG、LDL-C明显降低,对HDL-C改善不明显。

    表1-4各组TC、TG、LDL-C、HDL-C之间的比较(±s,mmol/L)


    注:与正常对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;与代谢综合征组比较,△P<0.05。

    三、结论

    实验数据显示,造模8周后,模型组较正常对照组胰岛素敏感性指数(M值)明显降低,体
    质量和内脏脂肪明显增加,血脂水平明显升高,同时血清胰岛素也有升高趋势;提示以中心
    性肥胖和胰岛素抵抗为中心,合并血压增高、血脂紊乱、高胰岛素血症的代谢综合征模型成
    功建立。临床研究及流行病调查发现肥胖、超重者常伴有胰岛素抵抗和脂质代谢异常,脂肪
    组织在胰岛素抵抗的发病机制中起重要作用。

    实验结果显示本发明药物可以明显改善代谢综合征组的胰岛素敏感性有降低内
    脏脂肪和血清胰岛素水平的趋势,明显地改善了血清TC、TG、LDL-C水平。本发明药物能够有
    效治疗综合治疗代谢综合征。

    实验二:本发明药物高效液相色谱法质量检测方法研究

    1仪器与试药

    1.1仪器

    高效液相色谱仪(Agilent110高效液相色谱仪及工作站,G1311Aquat泵,G1314紫外检
    测器)。

    1.2试药

    黄瑞香苷A对照品(中国药品生物制品检定研究院);本发明中药组合物:参照本发明说
    明书具体实施方式中的实施例1制备;中药材(康济连锁药店提供);甲醇(色谱醇,上海生化
    工助剂厂);其他试剂为分析纯。

    2方法与结果

    2.1处方

    祖师麻1100g

    2.2制备

    取祖师麻,加水煎煮三次,第一次2小时,第二次、第三次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓
    缩至相对密度为1.22?1.26的清膏,加乙醇使含醇量达75%,静置使沉淀,取上清液,回收乙
    醇并浓缩,加入碳酸钙、淀粉、糊精,混匀,制成颗粒,干燥,压制成1000片,包薄膜衣或糖衣,
    即得。

    2.3黄瑞香苷A的含量测定

    2.3.1HPLC色谱条件

    采用HypersilDs(4.0mm×125mm,5μm)色谱柱;流动相:比例为30:70的乙腈-水;检测波
    长:200nm;柱温:20℃;流速:1.0mL·min-1;进样量:10μL;在该色谱条件下,对照品及样品色
    谱峰良好,无祖师麻阴性对照对测定无干扰。

    2.3.2对照品溶液的制备

    精密称取80℃干燥至恒重的黄瑞香苷A对照品适量,加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液。

    2.3.3供试品溶液与阴性对照液的制备

    精密称取本发明药物10g,加甲醇40mL,加热回流4h,提取液回流溶剂并浓缩至干,残渣
    加水10mL溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取5次,每次20mL,合并正丁醇提取液,用氨试液洗
    涤3次,每次15mL,正丁醇提取液回收溶剂至干,残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中,加
    甲醇至刻度,摇匀,滤过,取滤液即得;另按处方比例制备不含祖师麻的阴性对照品,同法制
    成阴性对照液。

    2.3.4标准曲线的绘制

    精密称取80℃干燥至恒重的黄瑞香苷A对照品适量,用甲醇制成10.4,20.8,41.6,
    83.2,166.4μgmL-1系列浓度的溶液,分别精密量取上述5种浓度溶液各10μL,注入高效液相
    色谱仪进行测定。

    以峰面积比值与浓度进行线性回归,得回归方程为:A=21.2763C-0.1391,r=
    0.9999。表明黄瑞香苷A在10.4~166.4μgmL-1浓度范围内呈良好的线性关系。

    2.3.5稳定性试验

    精密吸取供试品溶液10μL,分别于0,1,2,4,8h进样,并计算黄瑞香苷A含量。结果8h内
    RSD为0.45%(n=5)。表明样品溶液在8h内稳定。

    2.3.6重复性试验

    按供试品溶液制备方法平行处理样品5份,依法测定黄瑞香苷A含量并计算。结果测得
    黄瑞香苷A平均含量为0.12mg·mL-1,RSD为1.3%。

    2.3.7精密度实验

    精密吸取黄瑞香苷A对照品溶液,重复进样5次,依法测定峰面积。结果RSD为0.23%(n=
    5)。表明精密度较好。

    2.3.8回收率实验

    精密称取已知黄瑞香苷A含量的同一批号的样品6份,按高、中、低浓度分别精密加入适
    量的黄瑞香苷A对照品溶液,按样品测定项下操作,依法测定,计算回收率。结果平均回收率
    为100.3%,RSD为0.45%(n=5)。

    2.3.9样品含量测定

    分别量取对照品溶液和供试品溶液适量,用微孔滤膜滤过,各进样10μL,按上述色谱条
    件测定3批样品,平行测定5次。按外标法以峰面积计算供试品溶液黄瑞香苷A的含量。本品
    含黄瑞香苷A应为标示含量的95%~105%,以每1g本品含黄瑞香苷A计,不得少于0.12mg。3批
    样品含量分别为100.8%(RSD=1.2%),101.7%(RSD=1.3%),99.2%(RSD=1.1%)。

    实验三:本发明药物气相色谱法同步测定4-甲基-7-羟基香豆素、罗汉松脂醇的含

    1仪器与试药

    Agilent7890N气相色谱仪:FID检测器,A.01.12.1色谱工作站;SGH-300高纯氢气发
    生器(北京东方精华科技苑科技有限公司);色谱柱弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm,0.25μ
    m);梅特勒-托利多十万分之一电子分析天平;4-甲基-7-羟基香豆素对照品(含量99.9%,
    中国食品药品检定研究院);罗汉松脂醇对照品(含量99.9%,中国食品药品检定研究院);本
    发明药物(参照本发明说明书具体实施方式中的实施例1制备),试剂:环己酮,无水乙醇均
    为色谱纯。

    2色谱条件

    色谱柱:ZB-WAX弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm,0.25μm);载气:N2,1.0mL·mL-1;氢
    气,40mL·mL-1;空气,400mL·min-1;分流比:10:1;进样口温度:250℃,检测器温度300℃;
    程序升温:初始80℃,每分钟5℃升至120℃,每分钟10℃升至180℃,保持3.5min;内标法。

    3试验方法与结果

    3.1内标溶液的制备

    取环己酮适量,加无水乙醇溶解并稀释制成每1g含12.5mg的溶液,摇匀,作为内标溶
    液。

    3.2供试品溶液的制备

    精密量取本品1.0g,置10mL容量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,再精密量取1.0mL,置
    10mL容量瓶中,精密加入内标溶液1.0mL,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀。

    3.3对照品储备溶液的制备

    精密称取4-甲基-7-羟基香豆素对照品、罗汉松脂醇对照品适量,加无水乙醇溶解并稀
    释制成含4-甲基-7-羟基香豆素0.301mg·mL-1及罗汉松脂醇0.901mg·mL-1的对照品储备
    溶液,备用;

    3.4阴性对照溶液的制备

    取按处方中未加4-甲基-7-羟基香豆素与罗汉松脂醇的空白溶液,按“3.2”项下制备方
    法,制成阴性对照溶液。

    3.5线性关系的考察

    分别精密移取0.2、0.5、1.0、1.5、3.5mL对照品储备液于10mL容量瓶中,加内标溶液
    1.0mL,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液,分别取1μL进样,记录色谱图,以4-
    甲基-7-羟基香豆素、罗汉松脂醇与内标的峰面积比值为纵坐标(Y),浓度(C)为横坐标(X),
    分别绘制标准曲线,得回归方程分别为:Y(4-甲基-7-羟基香豆素)=1.1148X-0.0016,R2=
    0.9999,4-甲基-7-羟基香豆素浓度在0.146~2.555mg·mL-1范围内,线性关系良好;Y(罗汉
    松脂醇)=1.1347X+0.0035,R2=0.9998,罗汉松脂醇浓度在0.198~3.465mg·mL-1范围内,线
    性关系良好。

    3.6精密度试验

    取4-甲基-7-羟基香豆素浓度为0.230mg·mL-1和罗汉松脂醇浓度为0.290mg·mL-1的
    对照品溶液,重复进样6次,记录峰面积,分别计算2种成分与内标的峰面积比值(A/A内标),
    4-甲基-7-羟基香豆素、罗汉松脂醇的RSD分别为0.24%和1.2%(n=6)。

    3.7重复性试验

    取同一批样品,按样品测定项下的方法重复测定6次,结果4-甲基-7-羟基香豆素、罗汉
    松脂醇的RSD分别为0.36%、1.8%(n=6)。

    3.8稳定性试验

    取同一批样品溶液,分别在室温下放置0、2、4、6、8、12h后测定,结果按4-甲基-7-羟基
    香豆素、罗汉松脂醇的RSD分别为0.38%、1.7%,说明样品溶液在12h内测定,结果稳定。

    3.9加样回收率试验

    取已知含量的样品溶液9份,并加入适当的低、中、高对照品溶液,按样品测定法测定4-
    甲基-7-羟基香豆素、罗汉松脂醇含量,分别计算回收率,结果见表3-1。

    表3-1回收率测定结果(n=9,%)


    结果表明,本方法的回收率较好,4-甲基-7-羟基香豆素的回收率分别在99.4%~
    100.2%,罗汉松脂醇的回收率在98.1%~100.7%之间,相对标准偏差分别为0.28%与0.86%,
    本测定方法能满足本发明药物中4-甲基-7-羟基香豆素与罗汉松脂醇的含量测定。

    3.10定量限与检测限

    采用“信噪比法”来确定本研究的定量限和检测限,取线性标准溶液适量,采用加无水
    乙醇逐步稀释法进行稀释,当进样浓度为6.27、9.90μg·mL-1时,取1μL进样,连续进样3次,
    得到4-甲基-7-羟基香豆素、内标、罗汉松脂醇信噪比平均值分别接近10.0,可以以此浓度
    为定量限;继续稀释进样,当进样浓度为1.044、1.65μg·mL-1,连续进样3次,得到4-甲基-7-
    羟基香豆素、内标、罗汉松脂醇信噪比平均值接近3.0,可以以此浓度为检测限。

    3.11耐用性试验

    经不同色谱柱考察和溶液稳定性考察,以及柱温,进样口温度和检测器温度考察,表明
    本方法耐用性良好,适用于本发明药物中两组分的含量测定。

    3.11.1色谱柱的影响

    选用3根不同商品规格的色谱柱,测定同一批样品的含量,计算含量值的RSD%分别为
    1.3、1.7、1.6。结果表明,样品用不同的PEG色谱柱测定含量,4-甲基-7-羟基香豆素、罗汉松
    脂醇与内标均可有效分离,说明方法耐用性良好。

    3.11.2柱温的影响

    柱温对分离的影响主要为影响主峰的出峰时间,温度越高,主峰出峰时间越短,在第一
    阶段为80℃时,4-甲基-7-羟基香豆素主峰4-甲基-7-羟基香豆素与杂质峰能保证基线分
    离,第二阶段120℃时罗汉松脂醇主峰与杂质峰能保证基线分离,且各温度下含量的RSD小
    于2.0%。

    3.11.3进样口温度的影响

    进样口温度高于柱温时,4-甲基-7-羟基香豆素与杂质峰能够保证基线分离,罗汉松脂
    醇与杂质分离良好,且各温度下含量的RSD小于2.0%。

    3.11.4检测器温度的影响

    检测器温度高于进样口温度时,4-甲基-7-羟基香豆素与杂质峰能够保证基线分离,罗
    汉松脂醇与杂质分离良好,且各温度下含量的RSD小于2.0%。

    3.12样品含量测定结果

    经过方法学验证,本含量测定方法操作简便、准确度高、重现性好,能更有效地控制产
    品质量。因此应用该方法对10批样品,按照前述方法采用内标法进行含量测定,结果见表3-
    2。

    表3-2样品含量测定结果


    4讨论

    4.1系统适应性试验

    在本试验气相色谱系统下,分别吸取样品测定用混合对照品溶液、供试品溶液与阴性
    对照溶液各1μL,记录色谱图。2种组分与内标物均能够较好地分离,阴性无干扰。该系统适
    应性结果见表3-3。

    表3-3系统适应性试验


    4.2内标物的选择

    曾试用过环己酮、萘、联苯、水杨酸甲酯等,因样品挥发性成分多,结果以环己酮的保留
    时间及分离效果最合适。

    4.3柱温的选择

    4-甲基-7-羟基香豆素、环己酮和罗汉松脂醇的沸点相差比较大,柱温低时,罗汉松脂
    醇的保留时间过长,柱温高时,4-甲基-7-羟基香豆素与杂质不能有效分离,经采用两段程
    序升温方式能满足两种成分的同时分析。

    4.4本品的含量限度

    由10批次产品测定结果,暂定本品的含量限度为:本品每1g含4-甲基-7-羟基香豆素不
    得少于0.200mg,含罗汉松脂醇不得少于0.200mg。

    本方法对2种成分同时进行分离与检测,方法快速、灵敏,分离度好、专属性好,能
    有效地控制药品质量。

    具体实施方式:

    实施例1:本发明药物

    处方:祖师麻1100g

    制法:取祖师麻,加水煎煮三次,第一次2小时,第二次、第三次1小时,合并煎液,滤过,
    滤液浓缩至相对密度为1.22?1.26的清膏,加乙醇使含醇量达75%,静置使沉淀,取上清液,
    回收乙醇并浓缩,加入碳酸钙、淀粉、糊精,混匀,制成颗粒,干燥,压制成1000片,包薄膜衣
    或糖衣,即得。

    主治:用于治疗关节炎、代谢综合征。

    用法与用量:口服。一次1?3片,一日2?3次。

    检测方法:

    1、采用高效液谱法对黄瑞香苷A进行含量测定:

    (1)色谱条件:采用HypersilDs色谱柱;流动相:比例为30:70的乙腈-水;检测波长:
    200nm;柱温:20℃;流速:1.0mL·min-1;进样量:10μL;

    (2)对照品溶液制备:精密称取80℃干燥至恒重的黄瑞香苷A对照品适量,加甲醇溶解
    制成每1mL含0.2mg的对照品溶液;

    (3)供试品溶液的制备:精密称取本发明药物10g,加甲醇40mL,加热回流4h,提取液回
    流溶剂并浓缩至干,残渣加水10mL溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取5次,每次20mL,合并正
    丁醇提取液,用氨试液洗涤3次,每次15mL,正丁醇提取液回收溶剂至干,残渣加甲醇溶解并
    转移至10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取滤液,即得供试品溶液;

    (4)测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,进
    行检测;

    (5)测定结果:以每1g本品含黄瑞香苷A计,不得少于0.12mg。

    2、采用气相色谱法对4-甲基-7-羟基香豆素、罗汉松脂醇进行含量测定:

    (1)色谱条件:色谱柱:ZB-WAX弹性石英毛细管柱;载气:N2,1.0mL·mL-1;氢气,40mL·
    mL-1;空气,400mL·min-1;分流比:10:1;进样口温度:250℃,检测器温度300℃;程序升温:
    初始80℃,每分钟5℃升至120℃,每分钟10℃升至180℃,保持3.5min;内标法;

    (2)内标溶液的制备:取环己酮适量,加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶
    液,摇匀,作为内标溶液;

    (3)供试品溶液的制备:精密量取本品1.0g,置10mL容量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,
    再精密量取1.0mL,置10mL容量瓶中,精密加入内标溶液1.0mL,加无水乙醇稀释至刻度,摇
    匀;

    (4)对照品溶液的制备:精密称取4-甲基-7-羟基香豆素对照品、罗汉松脂醇对照品适
    量,加无水乙醇溶解并稀释制成含4-甲基-7-羟基香豆素0.301mg·mL-1及罗汉松脂醇
    0.901mg·mL-1的对照品储备溶液,备用;

    (5)测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL,注入气相色谱仪,进行检
    测;

    (6)测定结果:本品每1g含4-甲基-7-羟基香豆素不得少于0.200mg,含罗汉松脂醇不得
    少于0.200mg。

    此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包
    含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当
    将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员
    可以理解的其他实施方式。

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