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    重庆时时彩带人挣钱: 胱天蛋白酶募集域蛋白9的新用途.pdf

    关 键 词:
    蛋白酶 募集 蛋白 用途
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    摘要
    申请专利号:

    CN201410614227.5

    申请日:

    2014.11.04

    公开号:

    CN105603051A

    公开日:

    2016.05.25

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):C12Q 1/68申请日:20141104|||公开
    IPC分类号: C12Q1/68; G01N33/68; G01N33/577 主分类号: C12Q1/68
    申请人: 上海市松江区中心医院
    发明人: 徐萍; 杨志文; 王静; 翁成钊; 孟潇潇
    地址: 201600 上海市松江区中山中路748号中心医院
    优先权:
    专利代理机构: 上海脱颖律师事务所 31259 代理人: 钟艳
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201410614227.5

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2018.10.09|||2016.06.22|||2016.05.25

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明涉及胱天蛋白酶募集域蛋白9的新用途。本发明一方面公开了胱天蛋白酶募集域蛋白9作为生物标志物在制备诊断急性胰腺炎严重程度的试剂盒中的用途。另一方面,本发明还公开了一种诊断急性胰腺炎严重程度的试剂盒。本发明以胱天蛋白酶募集域蛋白9为指标诊断急性胰腺炎严重程度,相比RANSON评分的敏感性更高。

    权利要求书

    1.CARD9作为生物标志物在制备诊断急性胰腺炎严重程度的试剂盒中的用途。
    2.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述诊断急性胰腺炎严重程度的试
    剂盒以检测CARD9的mRNA表达水平或CARD9蛋白表达水平为检测指标。
    3.一种诊断急性胰腺炎严重程度的试剂盒,所述试剂盒包括CARD9的特异性引
    物、内参引物、阴性对照和阳性对照。
    4.如权利要求3所述诊断急性胰腺炎严重程度的试剂盒,其特征在于,所述试
    剂盒还包括正常对照。
    5.如权利要求3所述诊断急性胰腺炎严重程度的试剂盒,其特征在于,所述
    CARD9的特异性引物为:
    上游引物:5’-GCAGGTGTTCCAGTGTGAG-3’
    下游引物5’-GGCAGCCTTTGTCTGAGAG-3’。
    6.如权利要求3所述诊断急性胰腺炎严重程度的试剂盒,其特征在于,所述内
    参引物为GAPDH或β-actin的引物。
    7.如权利要求3所述诊断急性胰腺炎严重程度的试剂盒,其特征在于,所述阴
    性对照为DEPC去离子水,所述阳性对照为CARD9基因质粒DNA。
    8.如权利要求3所述诊断急性胰腺炎严重程度的试剂盒,其特征在于,所述试
    剂盒中还包括以下试剂中的一项或多项:人外周血单核细胞提取试剂、RNA
    提取试剂、逆转录试剂、除引物以外的PCR试剂。

    说明书

    胱天蛋白酶募集域蛋白9的新用途

    技术领域

    本发明涉及生物技术及医药领域,具体涉及胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)
    的新用途。

    背景技术

    急性胰腺炎(AP)是常见的急腹症之一,常伴发全身炎症反应综合征和多器官
    功能障碍综合征,严重危及患者生命。因此,早期诊断和预测胰腺炎的严重程度
    具有十分重要的临床意义。

    20世纪70年代初,Ranson在研究了100名急性胰腺炎患者入院48小时的情
    况后,提出了Ranson评分系统。该评分系统包括入院时的5项临床指标和48小
    时的6项指标各项1分,合计11分,评分在3分以上时即为重症胰腺炎。3分以
    下病死率0.9%,3-4分为16%,5-6分为40%,6分以上为100%。Ranson评
    分系统在重症胰腺炎的诊疗过程中曾发挥了很大的作用,但对比CT等影像学检查
    发现其敏感性不高。

    迄今为止,急性胰腺炎起始和发展的确切发病机制仍未完全阐明。而单核巨
    噬细胞系统的激活已被证实是AP发展的最初事件的启动因子,在多器官功能衰竭
    发展过程中是重要的病理生理步骤。CARD9是在巨噬细胞内高度表达的一种新型衔
    接蛋白,CARD9在抗微生物感染的天然免疫反应发挥着重要作用,而重症急性胰腺
    炎(SAP)病程早期的特点无菌性炎症,因此CARD9在急性胰腺炎发病期早是否起
    着作用是未知的。

    发明内容

    为了克服现有技术中的缺陷,本发明提供了胱天蛋白酶募集域蛋白CARD9的
    新用途及相应检测急性胰腺炎严重程度的试剂盒。

    本发明检测了AP患者外周血单核细胞中的CARD9mRNA和蛋白的表达,惊奇地
    发现,AP外周血单核细胞中CARD9mRNA和蛋白的表达在入院24小时内高于健康对照
    组,尤其是SAP患者CARD9mRNA和蛋白表达明显高于健康对照组和MAP(轻症AP)组,
    提示早期检测CARD9可能有助于判断AP病情,CARD9水平越高,病情越严重。

    本发明首先提供了CARD9作为生物标志物在制备诊断急性胰腺炎严重程度的
    试剂盒中的用途。

    所述诊断急性胰腺炎严重程度的试剂盒以检测CARD9的mRNA表达水平或
    CARD9蛋白表达水平为检测指标。

    当以检测CARD9的mRNA表达水平为检测指标时,所述试剂盒至少包括CARD9
    的特异性引物、内参引物、阴性对照和阳性对照。

    进一步的,所述试剂盒还应当包括正常对照。

    在获得CARD9的特异性引物的情况下,可配合常规的外周血单核细胞提取试
    剂、RNA提取试剂、逆转录试剂、realtimePCR试剂,通过从样本中分离出外周
    血单核细胞,进一步提取外周血单核细胞的RNA,经反转录和realtimePCR的方
    法来检测CARD9的mRNA的表达水平。

    当以检测CARD9蛋白表达水平为检测指标时,所述试剂盒至少包括CARD9的
    单克隆抗体。

    在获得CARD9的单克隆抗体的情况下,可配合常规的westernblot试剂、SDS-
    聚丙烯酰胺凝胶电泳,采用westernblot检测CARD9蛋白表达水平。

    考虑CARD9蛋白表达滞后于基因层次表达,且SAP患者CARD9高表达,虽然治疗
    后,mRNA表达有所下降仍高于正常水平,故蛋白表达仍然处于高水平。所以认为
    选择CARD9的mRNA表达比蛋白表达能更准确评估急性胰腺炎严重程度。

    本发明还进一步公开了一种诊断急性胰腺炎严重程度的试剂盒,所述试剂盒
    包括CARD9的特异性引物、内参引物、阴性对照和阳性对照。

    进一步的,所述试剂盒还应当包括正常对照。

    如实施例列举的,所述CARD9的特异性引物为:

    上游引物:5’-GCAGGTGTTCCAGTGTGAG-3’(SEQIDNO:1)

    下游引物5’-GGCAGCCTTTGTCTGAGAG-3’(SEQIDNO:2)

    内参选用GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶),所述内参引物为:

    上游引物5’-AATCCCATCACCATCTTC-3’(SEQIDNO:3)

    下游引物5’-AGGCTGTTGTCATACTTC-3’(SEQIDNO:4)

    内参引物亦可选择β-actin的引物。

    所述阴性对照为:DEPC去离子水

    所述阳性对照为:构建的CARD9基因质粒DNA

    所述正常对照为:健康成人的静脉血

    进一步的,所述试剂盒中还可以包括以下试剂中的一项或多项:人外周血单
    核细胞提取试剂、RNA提取试剂、逆转录试剂、除引物以外的PCR试剂。

    所述人外周血单核细胞提取试剂、RNA提取试剂、逆转录试剂、除引物以外的
    PCR试剂均为现有技术。

    所述人外周血单核细胞提取试剂可采用常规,如Ficoll淋巴细胞分离液、PBS
    缓冲液、细胞培养基等。

    所述RNA提取试剂可采用常规,如Trizol(或RNAIsoPlus)、氯仿、异丙醇、
    75%的乙醇、去离子水等。

    所述逆转录试剂可采用常规,如PrimeScript1stStrandCdnaSynthesisKit
    等。

    所述除引物以外的PCR试剂一般包括:Taq酶、dNTPs、荧光染料(如SYBRGreen
    染料等)、Mg2+及PCR缓冲液等。均为常见组分,其用量亦为常规。

    以上PCR试剂可与引物一起配置成PCR扩增反应液,也可直接以市售的不含引
    物的通用PCR扩增反应液加入引物及染料配置获得。

    具体的,基于本发明,可采用下列方法诊断急性胰腺炎严重程度:

    (1)提取人外周血单核细胞:使用Ficoll淋巴细胞分离液按照密度梯度
    离心法分人外周血单核细胞。

    (2)提取外周血总RNA:使用Trizol提取外周血单核细胞中总RNA。

    (3)逆转录:

    (4)荧光定量PCR。

    (5)根据荧光定量PCR检测的CARD9水平,相比健康对照,CARD9水平越
    高则急性胰腺炎越严重。

    本发明基于CARD9的表达与急性胰腺炎严重程度的关联的揭示,提供了早期
    检测急性胰腺炎严重程度的新方法。采用本发明的方法及试剂盒诊断急性胰腺炎
    严重程度,相比RANSON评分的敏感性更高。

    附图说明

    图1离心管中PBMC沉淀加入1mlPBS液吹打均匀后接种于Φ60mm玻璃培养平皿
    (40×10倍镜下)

    图2CARD9蛋白在急性胰腺炎中的表达。*SAP组与正常组相比P<0.05;#MAP组入
    院第三天与SAP组相比P<0.05,##MAP组入院第五天与SAP患者相比P<0.05。

    图3CARD9mRNA在急性胰腺炎的表达。*与正常组相比P<0.05;#AP患者入院第
    五天与第一天相比P<0.05;##SAP与MAP入院第一天相比P<0.05。

    图4AP患者入院后第一天CARD9mRNA表达水平、RANSON评分、LDH、血淀粉酶
    的ROC曲线

    具体实施方式

    以下列举具体实例以进一步阐述本发明,应理解,实例并非用于限制本发明
    的?;し段?。

    实施例1试剂盒的制备

    将以下试剂装配成试剂盒:

    1)CARD9的特异性引物对:

    上游引物:5’-GCAGGTGTTCCAGTGTGAG-3’

    下游引物5’-GGCAGCCTTTGTCTGAGAG-3’

    2)内参引物对:

    上游引物5’-AATCCCATCACCATCTTC-3’

    下游引物5’-AGGCTGTTGTCATACTTC-3’

    3)阴性对照:DEPC去离子水

    4)阳性对照:构建CARD9基因质粒DNA

    4.1引物设计:

    从GenBank中查询目的基因上下游的序列,用VectorNTI软件进行引物设计。

    引物序列为:

    上游引物:5’-GCAGGTGTTCCAGTGTGAG-3’

    下游引物5’-GGCAGCCTTTGTCTGAGAG-3’

    模板来源:正常人外周血单核细胞

    PCR扩增目的片段:

    使用高保真的PrimeSTAR酶扩增目的片段,反应体系和条件如下:


    PCR反应条件:98℃10秒55℃5秒72℃1分钟/kb30个循环

    4.2琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增结果:

    目的片段PCR扩增成功后,进行琼脂糖凝胶电泳检测,通过和DNAMarker
    的对比,目标片段大小为:62.3kb,判断目的片段扩增成功。

    4.3胶回收目的片段:

    把目的片段条带从琼脂糖凝胶电泳后的胶中割下来,用
    TaKaRaMiniBESTAgaroseGelDNAExtractionKitVer.3.0做胶回收,具体
    步骤参考试剂盒说明书。

    4.4线性化表达载体的制备:

    用限制性内切酶使用EcoRI和BamHI双酶切(构建好以后的Card9的C端带
    有3Flag标签)或者用限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切(构建好以后的
    Card9的C端不带标签),酶切反应体系为:质粒2μg,10x反应Buffer5
    μl,限制性内切酶各1μl,去离子水补足50μl,于37℃水浴锅孵育2h以
    上。酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测酶切效果,并把目的载体条带从琼脂糖
    凝胶电泳后的胶中割下来,用TaKaRaMiniBESTAgaroseGelDNAExtraction
    KitVer.3.0做胶回收。

    4.5目的片段同源重组到线性化表达载体中:

    将目的DNA片段和线性化载体以摩尔比2:1加到离心管中进行重组反应:


    混匀后在42℃孵育30min,然后转移到冰上。放置2-3min后取10μl反应液
    体转化到感受态细胞中。

    4.6感受态细胞的制备和转化:

    DH5α感受态细胞的制备和转化,详见《精编分子生物学实验指南》。

    4.7菌落PCR鉴定阳性转化子:

    挑取平板上长出的转化子重悬于10μlLB培养液中,取1μl做模板进行菌落
    PCR鉴定。反应体系和PCR循环条件如下:

    引物序列:

    上游引物:5’-GCAGGTGTTCCAGTGTGAG-3’

    下游引物5’-GGCAGCCTTTGTCTGAGAG-3’


    PCR反应条件:98℃10秒55℃5秒72℃1分钟/kb30个循环

    4.8阳性克隆送测序:

    菌落鉴定得到的阳性克隆,送公司进行测序验证。软件比对测序结果并分析
    符合预期。

    4.9质粒小提:

    测序通过的阳性克隆,安排质粒小提。具体步骤见试剂盒说明书获得CARD9基
    因质粒DNA。

    5)Ficoll淋巴细胞分离液

    6)TrizolRNA提取试剂

    7)逆转录试剂

    8)PCR试剂:dNTP、Mg2+、PCR反应液、DNA聚合酶、水

    试剂盒中应至少含有1)-4)项,其余试剂由于是通用试剂,因此可以不必装
    配入试剂盒而是与现有的试剂配合使用。

    试剂盒中正常对照亦可由使用者自行采集。

    按以下步骤使用该试剂盒:

    1)用Ficoll淋巴细胞分离液按Ficoll密度梯度法从样本中分离PBMC;

    2)按Trizol提取外周血单核细胞中的总RNA;

    3)采用逆转录试剂将总RNA逆转录为cDNA;

    4)Real-timePCR可在7300实时荧光定量PCR仪(ABI)上进行,采用两步法,
    进行引物扩增,反应条件为:预变性95℃10min,然后按95℃15s,60℃45s,进
    行40个循环。GAPDH为内参,将目的基因Ct值减去内参Ct值作为△Ct值,mRNA
    相对定量是用2-△△CT表示。其中△△CT=△CT实验组-△CT对照组;而△CT=△CT目的基
    因-△CT内参。

    实施例1CARD9与AP严重程度的关联试验

    1材料与方法

    1.1主要试剂:Ficoll淋巴细胞分离液购自GEHealthcare,实时荧光定量
    PCR(real-timePCR)相关试剂购自Thermo,逆转录试剂盒购自Thermo,Trizol
    购自invitrogen,引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成,CARD9抗体购自Santa,
    羊抗鼠HRP标记二抗购自碧云天生物公司,蛋白提取试剂盒购自凯基生物公司,
    BCA蛋白定量试剂盒购自thermo。

    1.2研究对象:选取2013年2月至2014年5月医院收治的AP患者36例作为研究对象,
    均符合中国急性胰腺炎诊治指南(草案)中的临床诊断及AP分类标准(中华医学
    会消化病学分会胰腺疾病学组.中国急性胰腺炎诊治指南(草案)[J].中华消化杂
    志,2004,24(3):62-64),以同期20名健康志愿者作为正常对照(正常对照组),其
    中男性9例,女性11例;平均年龄39.25±3.64岁。所有患者均未在外院接受过治
    疗,入院后均接受内科治疗,治疗方法参照指南(中华医学会消化病学分会胰腺
    疾病学组.中国急性胰腺炎诊治指南(草案))],均给予禁食、补液、抑制胰酶分泌
    等常规治疗,根据感染情况予以抗感染治疗。各组在年龄、性别构成上均无统计
    学差异。实验均得到所有观察对象同意后进行,且所有患者及健康志愿者的均签
    署知情同意书。

    1.3方法:

    1.3.1外周血单核细胞提?。壕颊咄夂?,分别于入院后第一天、入院第三天、
    入院第五天清晨空腹抽取MAP患者静脉血10ml,EDTA抗凝;健康体检志愿者只抽
    取一次静脉血10ml,EDTA抗凝。用Ficoll淋巴细胞分离液按Ficoll密度梯度法
    分离PBMC(图1)。PBMC分成两份,一份是加入trizol后,冻存在-70℃,然后
    统一再行外周血总RNA提??;另一部分是加入细胞快速裂解液、蛋白酶抑制剂等
    冻存在-70℃,然后统一进行Westernblot检测蛋白含量。

    1.3.2外周血总RNA提取及外周血单核细胞CARD9mRNA表达检测:按Trizol提取
    外周血单核细胞中的总RNA,按逆转录试剂盒操作说明书将总RNA逆转录为cDNA。
    Real-timePCR在7300实时荧光定量PCR仪(ABI)上进行,采用两步法,进行引
    物扩增。CARD9上游引物:5’-GCAGGTGTTCCAGTGTGAG-3’,下游引物5’-
    GGCAGCCTTTGTCTGAGAG-3’,GAPDH上游引物5’-AATCCCATCACCATCTTC-3’,下
    游引物5’-AGGCTGTTGTCATACTTC-3’,加入荧光染料。
    PCR体系:

    试剂
    体积
    SYBR Premix Ex Taq
    10μl
    上游引物
    0.8μl
    下游引物
    0.8μl
    Template
    2μl
    dH2O
    6.4μl

    将来自样本的外周血cDNA、对照、阳性对照分别作为模板进行PCR

    反应条件为:预变性95℃10min,然后按95℃15s,60℃45s,进行40个循环。GAPDH
    为内参,将目的基因Ct值减去内参Ct值作为△Ct值,不同标本采用2-△△Ct值进
    行比较,表示mRNA的相对表达量。

    1.3.3Westernblot检测CARD9蛋白含量:收集的PBMC经细胞快速裂解液后提取
    蛋白,然后经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、封闭、加入一抗、4℃过夜、加入二抗、
    ECL化学放光试剂发光,并显色。QuantityOne软件分析蛋白条带。目的蛋白定
    量采用灰度比值(CARD9/GAPDH)进行计算。

    1.4统计学分析

    应用SPSS20.0软件包进行统计学分析,采用GraphPadPrism5软件作图。正
    太分布数据用均数±标准误表示,偏态分布采用M(P25,P75)表达,两组间比较
    采用非参数检验MannWhitney分析,多组间比较采用非参数检(Kruskal-Wallis
    单因素ANOVA检验)。Pearson方法进行相关性分析,ROC曲线分析急性胰腺炎病情
    评估的准确性、敏感度及特异性,计算曲线下面积,最佳截值,P<0.05为差异具
    有统计学意义。

    2结果

    2.1AP患者的一般情况

    急性胰腺炎患者的一般情况(表1),MAP患者均被治愈,而10例SAP患者1例死亡,
    其余均被治愈。MAP组、SAP组、正常对照组三组间性别构成、平均年龄差异无统
    计学意义(P>0.05)。SAP组Ranson评分、LDH明显高于MAP组,差异有统计学意义
    (P<0.05),SAP组血钙明显低于MAP组,差异有统计学意义(P<0.05)。

    表1急性胰腺炎患者的临床资料



    *M(P25,P75)表达,#SAP组与MAP组相比P<0.05。

    2.2AP患者外周血单核细胞CARD9蛋白表达的变化

    CARD9蛋白的表达在MAP患者入院后第一天、第三天外周血单核细胞中的表达
    高于正常对照组,但差别无统计学意义(P>0.05),SAP组患者CARD9蛋白的表达
    明显高于正常对照组,差别有统计学意义(P<0.05)。SAP组CARD9蛋白的表达在
    患者入院第一天、第三天、第五天表达显著高于MAP组,其中SAP组入院第三天、
    第五天分别与MAP组入院第三天、第五天相比,差别有统计学意义(P<0.05),(图
    2)。

    2.3AP患者外周血单核细胞CARD9mRNA水平的变化

    提取外周血单核细胞总RNA,通过Real-TimePCR检测CARD9mRNA的变化。结
    果显示:MAP患者和SAP患者入院后第一天、第三天外周血单个核细胞中CARD9mRNA
    表达显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05),MAP和SAP患者入院后
    第一天外周血单个核细胞中CARD9mRNA表达显著高于入院后第五天的表达水平
    (P<0.05),所有AP患者经过治疗后CARD9mRNA表达水平逐渐下降,在入院第五
    天后CARD9mRNA表达仍高于正常对照组,但与正常对照组无显著性差异,且SAP组
    CARD9mRNA在入院时表达显著高于MAP组(P<0.05),在入院5天后,SAP组与MAP
    组无明显差异(P>0.05)(图3)。

    2.4Pearson相关性分析:AP患者入院后第一天外周血单核细胞中CARD9mRNA
    表达水平与RANSON评分呈正相关、与有无盆腔积液并发症呈正相关,与白细胞数、
    血淀粉酶无明显相关(表2)

    表2CARD9mRNA表达水平与患者临床资料相关性分析



    2.5CARD9表达、RANSON评分、LDH的ROC分析

    36例AP患者,以轻症胰腺炎患者为阴性指标,重症胰腺炎患者为阳性指标,
    分别做AP患者入院后第一天外周血单核细胞中CARD9mRNA表达水平、RANSON评
    分的ROC曲线,结果如下:急性胰腺炎患者入院后第一天外周血单核细胞中CARD9
    mRNA表达水平的最佳截值点是5.27,通过最佳截值点,可把出现假阳性概率降低
    到最低程度。

    约登指数(Youdenindex):是评价筛查试验真实性的方法,假设其假阴性(漏
    诊率)和假阳性(误诊率)的危害性同等意义时,即可应用约登指数。约登指数
    是灵敏度与特异度之和减去1。表示筛检方法发现真正的患者与非患者的总能力。
    指数越大说明筛查实验的效果越好,真实性越大。取约登指数最大的点作为最佳
    截值点。

    对一筛检方法的真实性的评价使用灵敏度、特异度和约登指数三个指标。

    ①灵敏度:又称敏感度,是指筛检方法能将实际有病的人正确地判定为患者的比
    例;

    ②特异度:是指筛检方法能将实际无病的人正确地判定为非患者的比例;

    ③约登指数:是灵敏度与特异度之和减去1。表示筛检方法发现真正的患者与非患
    者的总能力。

    ROC曲线下的面积为0.810(P<0.01),敏感度和特异性分别为90.0%、70.0%;
    RANSON评分的最佳截值点是2.5,ROC曲线下的面积为0.845(P<0.01),敏感度
    和特异性分别为70.0%,90.O%;LDH的最佳截值点是229,ROC曲线下的面积为0.775
    (P<0.05),敏感度和特异性分别为90.0%,65.5%;以上结果显示AP患者入院后
    第一天外周血单核细胞中CARD9mRNA表达水平曲线下的面积低于RANSON评分,
    但高于血清中LDH,CARD9表达在评估急性胰腺炎病情严重程度的敏感性高于
    RANSON评分(图4)。

    3讨论

    本发明检测了AP患者外周血单核细胞中的CARD9mRNA和蛋白的表达,结果表
    明AP外周血单核细胞中CARD9mRNA和蛋白的表达在入院24小时内高于健康对照组,
    尤其是SAP患者CARD9mRNA和蛋白表达明显高于健康对照组和MAP组,提示早期检测
    CARD9可能有助于判断AP病情,CARD9水平越高,病情越严重?;颊呔诳浦瘟?br />后,CARD9mRNA和蛋白表达水平逐渐下降,MAP患者在入院后第五天CARD9mRNA和蛋
    白表达水平与健康正常人无明显差异,而SAP患者CARD9蛋白表达水平虽然有所降
    低,但仍处于较高水平,考虑CARD9蛋白表达滞后于基因层次表达,且SAP患者CARD9
    高表达,虽然治疗后,mRNA表达有所下降仍高于正常水平,故蛋白表达仍然处于
    高水平。所有认为选择CARD9的mRNA表达比蛋白表达能更准确评估急性胰腺炎严重
    程度。

    为了进一步说明CARD9指标可作为评价急性胰腺炎严重程度的指标。本发明对
    实验数据进行Pearson相关分析表明:AP患者入院后第一天外周血单个核细胞中
    CARD9mRNA表达水平与RONSAN评分相关、与有无盆腔积液并发症相关,与白细胞数、
    CRP等无明显相关。

    为了解CARD9表达对急性胰腺炎病情诊断的准确性、敏感度及特异性,本发
    明对急性胰腺炎患者外周血单核细胞CARD9表达进行ROC分析,并与RANDON评分系
    统、LDH进行比较。结果发现虽然CARD9表达在对预测AP病情的诊断效能略低于
    RANSON评分,但是在对急性胰腺炎病情严重程度判断的敏感性高于传统RANSON评
    分。提示CARD9表达可作为评估急性胰腺炎病情的预测指标。血清LDH升高可反映
    细胞损害,可作为胰腺坏死的敏感标志物(ShinzekiM,UedaT,TakeyamaY,et
    a1.Predictionofearlydeathinsevereacutepancreatitis[J].JGastroenterol,
    2008,43(2):152—158),本发明研究发现CARD9指标、RANSON评分在评估AP病情
    严重程度上诊断效能高于LDH。

    综上所述,急性胰腺炎外周血单核细胞中CARD9在AP发病早期显著增高,并与病情
    严重程度相关,早期检测胰腺炎外周血单核细胞中CARD9有助于为AP的诊断和病情
    严重程度的判断提供依据。



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