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    重庆时时彩官网是什么: MALDITOFMS辅助鉴定单增李斯特氏菌的方法.pdf

    关 键 词:
    MALDITOFMS 辅助 鉴定 李斯特 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201110154723.3

    申请日:

    2011.06.09

    公开号:

    CN102253111A

    公开日:

    2011.11.23

    当前法律状态:

    驳回

    有效性:

    无权

    法律详情: 发明专利申请公布后的驳回IPC(主分类):G01N 27/64申请公布日:20111123|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 27/64申请日:20110609|||公开
    IPC分类号: G01N27/64 主分类号: G01N27/64
    申请人: 曹际娟; 曹冬梅
    发明人: 曹际娟; 曹冬梅
    地址: 116001 辽宁省大连市中山区长江东路60号
    优先权:
    专利代理机构: 大连东方专利代理有限责任公司 21212 代理人: 刘晓琴
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201110154723.3

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2014.05.07|||2012.01.04|||2011.11.23

    法律状态类型:

    发明专利申请公布后的驳回|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    MALDI-TOF?MS辅助鉴定单增李斯特氏菌的方法,包括如下步骤:①选取35~40株单增李斯特氏菌新鲜培养物,进行样品预处理;②采集所有菌株样品的图谱;③使用BioTyper软件对所得的图谱进行分析统一化得单增李斯特氏菌标准图谱;④使用同步骤①的方法制备待检测微生物的样品;⑤按照步骤②的方法采集待检测样品的MALDI-TOF-MS图谱;⑥将步骤⑤所得的待检测样品的MALDI-TOF-MS图谱与步骤③所得的单增李斯特氏菌标准图谱对比,根据匹配分数判定检测结果。本发明成功创建了单增李斯特氏菌鉴定质谱图数据库及标准图谱,可以实现对单增李斯特氏菌简便、可微量化、高度自动化的准确鉴定。

    权利要求书

    1.MALDI-TOF?MS辅助鉴定单增李斯特氏菌的方法,包括如下步骤:
    ①选取35~40株单增李斯特氏菌新鲜培养物,进行MALDI-TOF-MS检测
    前的样品预处理;
    ②采集所有菌株样品的MALDI-TOF-MS图谱;
    ③使用BioTyper软件对所得的图谱进行分析统一化,处理所得图谱作为单
    增李斯特氏菌标准图谱;
    ④使用同步骤①的方法制备待检测微生物的样品;
    ⑤按照步骤②的方法采集待检测样品的MALDI-TOF-MS图谱;
    ⑥将步骤⑤所得的待检测样品的MALDI-TOF-MS图谱与步骤③所得的单
    增李斯特氏菌标准图谱对比,根据匹配分数判定检测结果。
    2.权利要求1所述的方法,其特征在于所述的步骤①的预处理方法是:取
    单增李斯特氏菌新鲜培养物,在Eppendorf管中加入300μL纯净水,挑取5~10
    mg微生物培养物,混匀,再加入900μL无水乙醇,混匀后以13000r/min离心
    2min,弃去上清液,加入50μL70%甲酸,混匀,再加入50μL乙腈,混匀,同
    样以13000r/min离心2min,吸取上清液,涂布于96孔样品板上,自然晾干
    1h后,用基质溶液(CHCA)覆盖菌苔,用标准肽溶液覆盖校准孔,每孔1μL,
    晾干5min后用于后续检测。
    3.权利要求1所述的方法,其特征在于所述的步骤②使用基质辅助激光解
    吸电离飞行时间质谱仪进行图谱采集,仪器参数设定为:线性操作模式,正离
    子模式;检测质量范围:3000~13000Da;激光点击数:每个图谱50;激光频率:
    30.0Hz;离子源加速电压:20kv;采用氮激电源,质荷比(m/z)数据采集范围
    为800~17378Da。
    4.权利要求1所述的方法,其特征在于所述的步骤⑥根据匹配分数判定检
    测结果的标准为:
    当2.300≤匹配分数≤3.000,表示菌种鉴定的可信度很高;
    当2.000≤匹配分数<2.300,表示保守的菌属鉴定或可能的菌种鉴定;
    当1.700≤匹配分数<2.000之间,表示可能的菌属鉴定;
    在0.000≤匹配分数<1.700之间,表示不可信的鉴定。
    5.权利要求1所述的方法,包括如下步骤:
    ①选取37株单增李斯特氏菌,取新鲜培养物进行MALDI-TOF-MS检测前
    的样品预处理:取单增李斯特氏菌新鲜培养物,在Eppendorf管中加入300μL
    纯净水,挑取5~10mg微生物培养物,混匀,再加入900μL无水乙醇,混匀
    后以13000r/min离心2min,弃去上清液,加入50μL70%甲酸,混匀,再加入
    50μL乙腈,混匀,同样以13000r/min离心2min,吸取上清液,涂布于96孔
    样品板上,自然晾干1h后,用基质溶液(CHCA)覆盖菌苔,用标准肽溶液覆
    盖校准孔,每孔1μL,晾干5min后用于后续检测;
    ②使用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪采集所有样品的
    MALDI-TOF-MS图谱,器参数设定为:线性操作模式,正离子模式;检测质量
    范围:3000~13000Da;激光点击数:每个图谱50;激光频率:30.0Hz;离子源
    加速电压:20kv;采用氮激电源,质荷比(m/z)数据采集范围为800~17378Da;
    ③使用BioTyper软件对所得的图谱进行分析统一化,处理所得图谱作为单
    增李斯特氏菌标准图谱;
    ④使用同步骤①的方法制备待检测微生物的样品;
    ⑤按照步骤②的方法采集待检测样品的MALDI-TOF-MS图谱;
    ⑥将步骤⑤所得的待检测样品的MALDI-TOF-MS图谱与步骤③所得的单
    增李斯特氏菌标准图谱对比,根据匹配分数按照下述原则判定检测结果:
    当2.300≤匹配分数≤3.000,表示菌种鉴定的可信度很高;
    当2.000≤匹配分数<2.300,表示保守的菌属鉴定或可能的菌种鉴定;
    当1.700≤匹配分数<2.000之间,表示可能的菌属鉴定;
    在0.000≤匹配分数<1.700之间,表示不可信的鉴定。
    6.建立MALDI-TOF?MS单增李斯特氏菌标准图谱的方法,包括权利要求
    1的步骤①~③。
    7.权利要求6的方法建立的单增李斯特氏菌标准图谱。

    说明书

    MALDI-TOF MS辅助鉴定单增李斯特氏菌的方法

    技术领域

    本发明涉及单增李斯特氏菌的检测新方法,尤其是利用基质辅助激光解吸
    电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF?MS)辅助鉴定的方法。

    背景技术

    单增李斯特氏菌是一种人畜共患病病原菌。该菌可引起人和动物患脑膜炎、
    脑炎、败血症及造成孕妇流产、死胎等疾病。孕妇、新生儿、老年人和免疫缺
    陷人是易感人群。食源性李斯特氏菌发病率虽不高,但死亡率有时可达20%~
    50%。WHO在20世纪90年代已将其列为食品四大致病菌之一。该菌在自然界
    分布广泛,以家畜、家禽为主要宿主,很容易污染食品而引起食物中毒和李斯
    特病暴发[4]。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证实是李斯特
    氏菌的感染源[5]。

    单增李斯特氏菌检测方法是进行增菌、选择性分离培养、初筛试?b验、鉴定
    等步骤。这种方法耗时长,程序繁琐,试剂和人力成本均较高。此外,还有免
    疫磁性分析法(用免疫磁珠捕集法快速检测食品中的单核细胞增生李斯特菌.检
    验检疫学,2001,11(6):12-13)、PCR法(Application?of?5′-Nuclease?PCR?for?
    quantitative?detection?of?L?isteria?monocy?tog?enes?in?pure?cultures,water,skim?milk,
    and?unpasteurized?milk.Applied?and?E?nvironment?Microbiology,2000,66(10):
    4266-4271)、实时PCR法(Rapid?detection?of?L?isteria?monocy?tog?enes?in?food?
    using?culture?enrichment?combined?with?real-time?PCR.Food?Microbiology,2009,
    26(1):4-7.)等许多快速检测方法?;矢ㄖす饨馕龅缋敕尚惺奔渲势?br />(matrix-assisted?laser?desorption?ionisation?time-of-flight?mass?spectrometry,
    MALDI-TOF-MS)是近几年发展起来的一种新型软电离生物质谱。它能完成细
    菌多种成分的分析,包括蛋白质、脂类、脂多糖和脂寡糖、DNA、多肽及其它
    能被离子化的分子。细菌含有一些成分,能给出唯一的质荷比,作为生物标志
    分子特异鉴定细菌。由于其具有快速、准确、灵敏、分辨率高和高质量检测范
    围等优点,MALDI-TOF-MS已经逐渐成为临床诊断、食品生产、环境检测以及
    军事领域研究的一种有力手段。但是细菌比对标准数据库的资源不足是其局限
    性之一(Rapid?typing?of?bacteria?using?matrix-assisted?laser?desorption?ionisation?
    time-of-flight?mass?spectrometry?and?pattern?recognition?software.?J?Microbiol?
    Methods?2002;48:127-38)。目前,Biotyper数据库仍需要不断补充单增李斯特氏
    菌的特征谱图。因此,需要获得特征指纹图谱,添加创建质谱图数据库,并进
    一步开展单增李斯特氏菌鉴定和分子分型研究。

    发明内容

    本发明的目的之一在于提供MALDI-TOF?MS辅助鉴定单增李斯特氏菌的
    方法,包括如下步骤:

    ①选取35~40株单增李斯特氏菌新鲜培养物,进行MALDI-TOF-MS检测
    前的样品预处理;

    ②采集所有菌株样品的MALDI-TOF-MS图谱;

    ③使用BioTyper软件对所得的图谱进行分析统一化,处理所得图谱作为单
    增李斯特氏菌标准图谱;

    ④使用同步骤①的方法制备待检测微生物的样品;

    ⑤按照步骤②的方法采集待检测样品的MALDI-TOF-MS图谱;

    ⑥将步骤⑤所得的待检测样品的MALDI-TOF-MS图谱与步骤③所得的单
    增李斯特氏菌标准图谱对比,根据匹配分数判定检测结果。

    上述本发明的方法中所述的步骤①的预处理方法是:取单增李斯特氏菌新
    鲜培养物,在Eppendorf管中加入300μL纯净水,挑取5~10mg微生物培养物,
    混匀,再加入900μL无水乙醇,混匀后以13000r/min离心2min,弃去上清液,
    加入50μL70%甲酸,混匀,再加入50μL乙腈,混匀,同样以13000r/min离
    心2min,吸取上清液,涂布于96孔样品板上,自然晾干1h后,用基质溶液
    (CHCA)覆盖菌苔,用标准肽溶液覆盖校准孔,每孔1μL,晾干5min后用于
    后续检测。

    上述本发明的方法中所述的步骤②使用基质辅助激光解吸电离飞行时间质
    谱仪进行图谱采集,仪器参数设定为:线性操作模式,正离子模式;检测质量
    范围:3000~13000Da;激光点击数:每个图谱50;激光频率:30.0Hz;离子源
    加速电压:20kv;采用氮激电源,质荷比(m/z)数据采集范围为800~17378Da。

    上述本发明中所述的步骤⑥根据匹配分数判定检测结果的标准为:

    当2.300≤匹配分数≤3.000,表示菌种鉴定的可信度很高;

    当2.000≤匹配分数<2.300,表示保守的菌属鉴定或可能的菌种鉴定;

    当1.700≤匹配分数<2.000之间,表示可能的菌属鉴定;

    在0.000≤匹配分数<1.700之间,表示不可信的鉴定。

    最为优选地,本发明所述的MALDI-TOF?MS辅助鉴定单增李斯特氏菌的方
    法包括如下步骤:

    ①选取37株单增李斯特氏菌,取新鲜培养物进行MALDI-TOF-MS检测前
    的样品预处理:取单增李斯特氏菌新鲜培养物,在Eppendorf管中加入300μL
    纯净水,挑取5~10mg微生物培养物,混匀,再加入900μL无水乙醇,混匀
    后以13000r/min离心2min,弃去上清液,加入50μL70%甲酸,混匀,再加入
    50μL乙腈,混匀,同样以13000r/min离心2min,吸取上清液,涂布于96孔
    样品板上,自然晾干1h后,用基质溶液(CHCA)覆盖菌苔,用标准肽溶液覆
    盖校准孔,每孔1μL,晾干5min后用于后续检测;

    ②使用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪采集所有菌株样品的
    MALDI-TOF-MS图谱,器参数设定为:线性操作模式,正离子模式;检测质量
    范围:3000~13000Da;激光点击数:每个图谱50;激光频率:30.0Hz;离子源
    加速电压:20kv;采用氮激电源,质荷比(m/z)数据采集范围为800~17378Da;

    ③使用BioTyper软件对所得的图谱进行分析统一化,处理所得图谱作为单
    增李斯特氏菌标准图谱;

    ④使用同步骤①的方法制备待检测微生物的样品;

    ⑤按照步骤②的方法采集待检测样品的MALDI-TOF-MS图谱;

    ⑥将步骤⑤所得的待检测样品的MALDI-TOF-MS图谱与步骤③所得的单
    增李斯特氏菌标准图谱对比,根据匹配分数按照下述原则判定检测结果:

    当2.300≤匹配分数≤3.000,表示菌种鉴定的可信度很高;

    当2.000≤匹配分数<2.300,表示保守的菌属鉴定或可能的菌种鉴定;

    当1.700≤匹配分数<2.000之间,表示可能的菌属鉴定;

    在0.000≤匹配分数<1.700之间,表示不可信的鉴定。

    本发明的目的之二在于提供建立MALDI-TOF?MS单增李斯特氏菌标准图
    谱的方法,包括上述本发明的“MALDI-TOF?MS辅助鉴定单增李斯特氏菌的方
    法”技术方案中的步骤①~③,即:

    ①选取35~40株单增李斯特氏菌新鲜培养物,进行MALDI-TOF-MS检测
    前的样品预处理;

    ②采集所有菌株样品的MALDI-TOF-MS图谱;

    ③使用BioTyper软件对所得的图谱进行分析统一化,处理所得图谱作为单
    增李斯特氏菌标准图谱。

    其中各个步骤的优选手段与前文所述的相同?;诖?,建立MALDI-TOF?MS
    单增李斯特氏菌标准图谱的方法的最优选技术方案是:

    ①选取37株单增李斯特氏菌,取新鲜培养物进行MALDI-TOF-MS检测前
    的样品预处理:取单增李斯特氏菌新鲜培养物,在Eppendorf管中加入300μL
    纯净水,挑取5~10mg微生物培养物,混匀,再加入900μL无水乙醇,混匀
    后以13000r/min离心2min,弃去上清液,加入50μL70%甲酸,混匀,再加入
    50μL乙腈,混匀,同样以13000r/min离心2min,吸取上清液,涂布于96孔
    样品板上,自然晾干1h后,用基质溶液(CHCA)覆盖菌苔,用标准肽溶液覆
    盖校准孔,每孔1μL,晾干5min后用于后续检测;

    ②使用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪采集所有菌株样品的
    MALDI-TOF-MS图谱,器参数设定为:线性操作模式,正离子模式;检测质量
    范围:3000~13000Da;激光点击数:每个图谱50;激光频率:30.0Hz;离子源
    加速电压:20kv;采用氮激电源,质荷比(m/z)数据采集范围为800~17378Da;

    ③使用BioTyper软件对所得的图谱进行分析统一化,处理所得图谱作为单
    增李斯特氏菌标准图谱。

    本发明的另一目标在于提供由上述方法建立的单增李斯特氏菌标准图谱。

    本发明通过采集37株单增李斯特氏菌分离株的数据并获得特征指纹图谱,
    成功创建了单增李斯特氏菌鉴定质谱图数据库及标准图谱,可以实现对单增李
    斯特氏菌的准确鉴定。并且该方法操作上制样简便、可微量化、高度自动化。

    附图说明

    本发明附图2幅,

    图1是本发明的单增李斯特氏菌的MALDI-TOF?MS标准图谱;

    图2是本发明的37株单增李斯特氏菌MALDI-TOF?MS聚类分型树状图。

    具体实施方式

    下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明的
    技术方案及其应用,但不以任何方式限制本发明。如无特殊说明,本发明所使
    用的仪器和试剂包括:

    基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(Microflex?LRF20,Bruker?Daltonik?
    GmbH公司);

    全自动细菌生化分析仪(BD?PHOENIX-100,美国BD公司)。

    α-氰-4-羟基肉桂酸(α-Cyano-4-hydroxy-cinnamic?acid,CHCA),

    乙腈(Acetonitrile,ACN),

    三氟乙酸(Trifluoroacetic?acid,TFA),

    肽标准品,蛋白标准品。

    上述试剂均购自Bruker?Daltonik?GmbH公司。

    检测样品配置基质的溶剂为ACN∶TFA∶水(50∶2.5∶47.5)。标准肽溶
    液配置基质的溶剂为ACN∶TFA∶水(30∶0.1∶69.9)。

    MALDI-TOF-MS基质溶液是用溶剂将基质配成饱和溶液,基质溶液现用现
    配。营养琼脂(Nutrient?Agar,NA),均购于美国BD公司。API-20E生化鉴定
    试剂盒购于法国梅里埃公司。

    实施例1

    (1)选取标准单增李斯特氏菌菌株

    选取由辽宁出入境检验检疫局收集保藏的37株单增李斯特氏菌,具体信息
    见表1。表1中所涉及的单增李斯特氏菌菌株经API-20E生化鉴定和全自动细菌
    生化分析仪鉴定,进一步确认为单增李斯特氏菌无误,可用于建立MALDI-TOF?
    MS鉴定标准图谱。

    表1

    ??序号
    ??菌株编号
    ??序号
    ??菌株编号
    ??序号
    ??菌株编号
    ??序号
    ??菌株编号
    ??1
    ??DD-L20
    ??11
    ??DD-L37
    ??21
    ??SD-L-A5-6
    ??31
    ??GD-L16
    ??2
    ??DD-L21
    ??12
    ??DD-L44
    ??22
    ??SD-L-DAH1-11
    ??32
    ??GD-L17
    ??3
    ??DD-L25
    ??13
    ??DD-L51
    ??23
    ??SD-L-F1-1
    ??33
    ??GD-L18
    ??4
    ??DD-L26
    ??14
    ??DD-L52
    ??24
    ??GD-L5
    ??34
    ??GD-L19
    ??5
    ??DD-L29
    ??15
    ??DD-L54
    ??25
    ??GD-L6
    ??35
    ??GD-L26
    ??6
    ??DD-L31
    ??16
    ??DD-L55
    ??26
    ??GD-L9
    ??36
    ??GD-L27
    ??7
    ??DD-L32
    ??17
    ??DD-L58
    ??27
    ??GD-L10
    ??37
    ??GD-L28
    ??8
    ??DD-L33
    ??18
    ??SD-L-A2-5
    ??28
    ??GD-L12
    ??9
    ??DD-L35
    ??19
    ??SD-L-A5-5
    ??29
    ??GD-L14
    ??10
    ??DD-L36
    ??20
    ??SD-L-A5-15
    ??30
    ??GD-L15

    (2)样品处理:

    将单增李斯特氏菌分离株分别接种于NA培养基上,37℃培养24h,得到新
    鲜菌株培养物。取单增李斯特氏菌新鲜培养物,在Eppendorf管中加入300μL
    纯净水,挑取适量(5~10mg)细菌,混匀,再加入900μL无水乙醇,混匀后
    以13000r/min离心2min,弃去上清液,加入50μL70%甲酸,混匀,再加入
    50μL乙腈,混匀,同样以13000r/min离心2min,吸取上清液,涂布于96孔
    样品板上,自然晾干1h后,用基质溶液(CHCA)覆盖菌苔,用标准肽溶液覆
    盖校准孔,每孔1μL。晾干5min后进样。

    (3)MALDI-TOF?MS图谱采集

    将上样的样品板小心置于板孔中,加有样品一面朝上。盖上盖子,抽真空。
    打开仪器控制软件FlexControl,调好仪器参数,校准仪器。采集标准品及样品
    的质谱图。对采集的数据进行保存,每次试验前都要在采集数据的质量范围内
    使用标准肽蛋白进行校准,校正后进行质谱数据采集,通过Biotyper软件进行
    分析鉴定。

    取每个菌株培养物再分别平行接种5个NA斜面,37℃培养24h,得到5个
    平行样品。按1.2.2.1的方法进行样品处理与点样,每个平行样品重复点两个样
    品孔。每株菌共点10个样品孔。校准仪器后,点击样品孔采集数据,每个样品
    孔点击10次,采集2个质谱图。每株菌可以采集20个质谱图。使用BioTyper
    软件,分别调入所采集的每株单增李斯特氏菌的20个质谱图,将此20个质谱
    图汇总生成整合图谱,对所得的图谱进行分析统一化,该图谱便是单增李斯特
    氏菌质谱图数据库的标准图谱(如附图1所示),显示单增李斯特氏菌
    MALDI-TOF?MS标准图谱的主要离子峰为m/z3252.30、3702.88、4325.83、
    4878.28、6365.26、7405.70、9757.97。

    (4)待测样品制备,待测样品包括:

    A组:标准菌株单增李斯特氏菌1a血清型ATCC?19111、2a血清型ATCC
    19112、4a血清型ATCC?19114、4b血清型ATCC?19115、4e血清型ATCC?19118、
    不溶血型ATCC?15313、ATCC?BAA-751、ATCC?7644、NCTC?10890;

    A组标准菌株分别购自美国典型菌种保藏中心(ATCC)和中国国家标准菌
    库(NCTC);

    B组:50株待测微生物(菌落形态疑似单增李斯特氏菌),分离自:进口
    自朝鲜的冻章鱼、冻海螺、冻青柳蛤;进口自美国的冻猪耳;进口自新西兰的
    冻带鱼等样品。

    该部分微生物样品的制备方法同上述步骤(2)。

    (5)待测样品MALDI-TOF?MS图谱采集,方法同上述步骤(3)。

    (6)图谱比对及分析,采用的判断标准是:

    当2.300≤匹配分数≤3.000,表示菌种鉴定的可信度很高;

    当2.000≤匹配分数<2.300,表示保守的菌属鉴定或可能的菌种鉴定;

    当1.700≤匹配分数<2.000之间,表示可能的菌属鉴定;

    在0.000≤匹配分数<1.700之间,表示不可信的鉴定。

    对比分析结果如下:

    A组样品图谱分别与本发明所建立的单增李斯特氏菌标准图谱比对,匹配
    分数均大于2.300,报告为单增李斯特氏菌,与已知值完全符合,鉴定结果的可
    信度很高;

    B组样品图谱分别与本发明所建立的单增李斯特氏菌标准图谱比对,其中
    15株匹配分数大于2.300,报告为单增李斯特氏菌。该15株菌采用经典的生化
    鉴定方法进行验证检测,主要生理生化特征为革兰氏阳性小杆菌,菌株刺种到
    5%的绵羊血或马血琼脂平板上,35℃培养48h,在明亮的光照下,观察经穿刺
    的血琼脂平板,可见产生界限明显的较大溶血环现象;做进一步的生化试验,
    生化反应表现为:触酶试验阳性;分解葡萄糖、鼠李糖、水杨苷,不分解蔗糖、
    木糖、甘露醇;吲哚、尿素酶和硝酸盐还原试验阴性,甲基红、VP和CAMP
    试验阳性。上述反应都符合单增李斯特氏菌的生化特性,与MALDI-TOF?MS鉴
    定结果相一致。

    实施例2

    37株单增李斯特氏菌MALDI-TOF-MS聚类分型分析

    在实施例1的基础上,通过模式匹配计算所得单增李斯特氏菌
    MALDI-TOF-MS数据库中37株单增李斯特氏菌主要谱图的相似性,采用相似
    分值构建系统树,对37株菌进行聚类分型分析,所得聚类分型树状图如附图2
    所示。差异水平代表彼此间的亲缘关系,其值在0到1.6之间。差异为0表示
    二个MALDI-TOF-MS质谱图完全相同,可归属为同一类;差异为1.6时表示两
    株菌之间的亲缘关系最远。所选择的差异水平不同,则单增李斯特氏菌被分型
    的数目不一。在差异水平为0.7~0.8之间时,MALDI-TOF-MS分型结果将37
    株菌分成4大型;在差异水平为0.5时,将37株菌分成7个型;在差异水平为
    0.3~0.4之间时,将37株菌分成9个型。

    由图2的聚类分型结果来看,编号为DD-L21、DD-L25、DD-L26、DD-L36、
    DD-L37、DD-L44的单增李斯特氏菌与编号为DD-L51、DD-L58的单增李斯特
    氏菌属于同一型,亲缘关系非常近,表明这些菌株可能为同一个污染源。

    编号为DD-L20、DD-L31、DD-L52、DD-L54、DD-L55的单增李斯特氏菌
    与编号为DD-L29、DD-L32、DD-L33、DD-L35的单增李斯特氏菌属于同一型,
    亲缘关系非常近,表明这些菌株可能为同一个污染源。

    编号为GD-L12、GD-L15、GD-L16、GD-L17、GD-L18、GD-L19、GD-L27、
    GD-L28的单增李斯特氏菌,属于同一型,亲缘关系比较近,表明这些菌株可能
    为同一个污染源。

    关于本文
    本文标题:MALDITOFMS辅助鉴定单增李斯特氏菌的方法.pdf
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