• 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03
    • / 8
    • 下载费用:30 金币  

    重庆时时彩组三技巧: 一种胶乳颗粒增强型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒.pdf

    关 键 词:
    一种 胶乳 颗粒 增强 中性 粒细胞 明胶 相关 运载 蛋白 检测 试剂盒
      专利查询网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
    摘要
    申请专利号:

    CN201110086369.5

    申请日:

    2011.04.07

    公开号:

    CN102253217A

    公开日:

    2011.11.23

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 专利权质押合同登记的生效IPC(主分类):G01N 33/68登记号:2018420000024登记生效日:20180612出质人:武汉生之源生物科技股份有限公司质权人:武汉农村商业银行股份有限公司光谷分行发明名称:一种胶乳颗粒增强型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒申请日:20110407授权公告日:20130807|||专利权人的姓名或者名称、地址的变更IPC(主分类):G01N 33/68变更事项:专利权人变更前:武汉生之源生物科技有限公司变更后:武汉生之源生物科技股份有限公司变更事项:地址变更前:430223 湖北省武汉市东湖开发区大学园路武大科技园创业楼四楼西13号变更后:430223 湖北省武汉东湖开发区高新大道818号高科医疗器械园B11号2楼|||授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/68申请日:20110407|||公开
    IPC分类号: G01N33/68; G01N33/566; G01N21/31 主分类号: G01N33/68
    申请人: 武汉生之源生物科技有限公司
    发明人: 华权高; 沈鹤霄; 周*; 许可
    地址: 430223 湖北省武汉市东湖开发区大学园路武大科技园创业楼四楼西13号
    优先权:
    专利代理机构: 代理人:
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201110086369.5

    授权公告号:

    ||||||102253217B||||||

    法律状态公告日:

    2018.07.06|||2016.06.22|||2013.08.07|||2012.01.04|||2011.11.23

    法律状态类型:

    专利权质押合同登记的生效、变更及注销|||专利权人的姓名或者名称、地址的变更|||授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明提供一种胶乳颗粒增强型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及其制备方法。使用本发明的试剂盒能检测人尿液、血清或血浆中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的含量。所述的胶乳颗粒增强型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒,其胶乳颗粒直径为30-220nm。本发明的试剂盒具有特异性好,灵敏度高,及抗干扰能力强等优点。

    权利要求书

    1.一种胶乳颗粒增强型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒。
    2.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒,
    其特征在于,它包含试剂R1和R2,而且任选地含有中性粒细胞明胶酶相关脂
    质运载蛋白标准品,所述的试剂R1为含有多聚物的缓冲液;所述的试剂R2为
    结合抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳溶液,胶乳
    颗粒直径为30-220nm。
    3.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒,
    其特征在于,它是基于免疫比浊法定量检测样本中中性粒细胞明胶酶相关脂质
    运载蛋白含量的试剂盒。
    4.根据权利要求1和2所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试
    剂盒,其特征在于,所述的试剂R1,R2的缓冲液是Tris缓冲液,缓冲液PH值
    为7.0-8.5;所述的多聚物包括TritonX,PEG6000等多聚物,其含量按体积比为
    0.2-2.0%。
    5.据权利要求1和2所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试
    剂盒,其特征在于,在试剂R2中,结合有抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载
    蛋白抗体的苯聚乙烯胶乳溶液的含量为0.2-2.0mg/ml。
    6.根据权利要求1和2所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试
    剂盒,其特征在于,试剂R2中胶乳与抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白
    抗体的包被实验采用物理吸附法或化学交联法制备。
    7.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒,
    其特征在于,该试剂盒具有特异性高、灵敏度高及抗干扰力强等优异性能。

    说明书

    一种胶乳颗粒增强型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒

    技术领域

    本发明属于生物技术领域,涉及一种胶乳颗粒增强型中性粒细胞明胶酶相
    关脂质运载蛋白检测试剂盒。

    背景技术

    中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)是1993年在中性粒细胞内
    首先被发现的,也叫lipocalin2,是lipocalin家族的一个新成员,其结构和功能
    已经引起国内外的关注。NGAL蛋白广泛分布在人体组织细胞中,如支气管、
    胃、小肠、胰腺、肾、前列腺、胸腺等。NGAL蛋白具有运输疏水性小分子、
    调节明胶酶B(MMP-9)活性等功能,并可能参与免疫炎症反应以及肿瘤的发
    生发展,特别是肿瘤的浸润转移等过程。研究表明,NGAL基因可能是人类的
    一种新的癌基因或促癌基因。

    通常50%以上重症监护的病人都有不同程度的肾损伤,同时,发生急性肾
    损伤也是急性病病患死亡率明显升高的原因之一。在过去的40年中,对急性肾
    衰竭的预测并没有得到明显发展,目前的诊断方法只能针对肾衰竭中后期。最
    近研究发现,在发生局部出血或肾损伤时,NGAL的含量水平会明显升高。通
    常在肾损伤发生后1-2小时内,就可检测到尿液和血液中NGAL水平升高。因
    此,使用NGAL?ELISA检测试剂盒检测血清或尿液中NAGL的含量,可以在肾
    衰竭早期根据NAGL含量变化做出诊断,从而解决传统方法不能检测早期肾损
    伤的难题,将治疗时间提前。

    近年来国内外的研究表明,NGAL蛋白在多种疾病发病过程中具有特异性
    表达变化的特点,使得NGAL成为检测疾病的生物标志物。关于NGAL在临床
    上的应用,目前主要有丹麦Bioporto诊断公司开发了NGAL快速诊断ELISA检
    测试剂盒,主要运用于急性肾功能衰竭(APF)的早期诊断。Bioporto诊断公司
    的NGAL试剂盒应用的是竞争酶联免疫法,相对本研究的胶乳增强免疫比浊检
    测法来说,耗时长,且不能实现自动化。而采用传统免疫比浊法检测NGAL含
    量时,为了使抗原抗体反应产生的复合物改变溶液的浊度以达到仪器的检测限,
    要求待检测样本中的NGAL需达到一定浓度。而尿液或血浆中NGAL浓度有限,
    导致了传统免疫比浊法检测结果的灵敏度和准确性不高。本项目的创新性在于
    将胶乳与NGAL的多克隆抗体在一定条件下偶联,形成抗体-胶乳的复合物,当
    偶联了胶乳的抗体与较低浓度的NGAL发生特异性的免疫反应时,能显著改变
    溶液的浊度,使得检测结果的灵敏度更高,背景更低,且能在几分钟内完成检
    测。

    胶乳增强免疫透射比浊法的基本原理是:样品中的NGAL与试剂盒中的胶乳
    颗粒增强的抗NGAL抗体试剂发生抗原-抗体反应,使反应液浊度增加,并在一
    定范围内反应液浊度与所加的抗原的量呈正相关,在546nm波长处测定反应液吸
    光度变化,其变化程度与样本中的NGAL的含量呈正比。

    发明内容

    本发明所要解决的技术问题在于提供一种特异的高灵敏度的测定NGAL含
    量的胶乳颗粒增强型NGAL试剂盒。另外,本发明的目的还在于提供使用本发明
    胶乳颗粒增强型免疫测定试剂盒测定NGAL含量的方法。

    本发明提供以下的技术方案。

    根据权利要求1-5记载的胶乳颗粒增强型免疫测定试剂盒,其用于测定
    NGAL的含量,所述试剂盒包含试剂R1和R2,而且任选地含有中性粒细胞明胶
    酶相关脂质运载蛋白标准品。所述的试剂R1为含有多聚物的缓冲液;所述的试
    剂R2为结合抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体的聚苯乙烯胶乳溶
    液,胶乳颗粒直径我们采用了200nm胶乳进行抗体的交联,交联方法选择化学交
    联法。本发明的方法灵敏度高,能够检测较低水平(约0.00363mg/L)的NGAL,
    具有很高的临床实用价值。另外,本发明的试剂盒为液体双试剂,因此具有特
    异性好,灵敏度高,准确性好及抗干扰能力强等优点,可用于检测人尿液、血
    清或血浆中NGAL的浓度,适用于临床全自动生化分析仪。

    附图说明

    图1显示6种不同含量的NGAL参考标准的标准曲线,每个点代表不同含量的
    NGAL参考标准,其中,x轴表示NGAL的含量,y轴表示吸光度。

    图2显示本发明的试剂和对照试剂(某国际知名公司NGAL试剂盒)的相关
    性。图中的X、Y轴均为测定值(NGAL含量mg/L)。

    具体实施方式

    实施例1

    一种胶乳颗粒增强型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒的制
    备方法。

    1.本发明试剂R1的制备

    试剂R1为100mM?Tris缓冲液(PH7.2),向该缓冲液中分别添加
    Tritonx100、PEG6000,终浓度为0.5%。

    2.本发明试剂R2的制备

    采用化学交联法进行抗体和胶乳的连接。步骤如下:

    (1)EDC和硫代NHS活化15min(PB?Buffer),振荡,20000rpm离心
    30min;

    (2)弃上清后用PB复溶,加抗体室温振荡反应2小时;

    (3)加等量0.1M?PH=8.0的甘氨酸缓冲液和10%BSA使终浓度为1%,反
    应半小时,0000rpm离心30min;

    (4)用R1试剂的缓冲液复溶。

    实施例2工作曲线测定

    本发明的用量:本发明试剂R1和R2用量分别为200μl和50μl,样本用
    量为3μl。

    本发明采用终点法进行测定:200μl?R1加入3μl样本,于37℃5min后
    加入50μl试剂R2即开始读点,5min后再次读点,然后计算吸光度算差值。试
    剂盒测定使用迈瑞BS300全自动生化仪,检测主波长为546nm,副波长为670nm。

    制作本发明的标准曲线:采用本发明的标准品(选择6点校准,校准品NGAL
    含量分别为0.0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8mg/ml),按照上述测定步骤测得
    本发明NGAL标准品的标准曲线(如图1所示)。图1中曲线上的每个点代表一
    个含量的标准品。其中x轴表示NGAL的含量,y轴表示吸光度。

    实施例3准确性测定

    相关性实验:使用本发明的试剂和对照试剂(某国际知名公司NGAL试剂盒)。
    采用迈瑞BS300全自动生化分析仪对30份人血清进行测定,对测定值进行相关
    性分析。测定结果见图2,图中的X、Y轴均为测定值(NGAL含量mg/L)。结果
    显示本发明和对照试剂的相关性很高。

    实施例4灵敏度测定

    检测20次生理盐水和0.1mg/L的样本,记录吸光度数值,计算平均值和标
    准偏差,算出最低检出限分析灵敏度=样本浓度×最低检出
    限/吸光度变化均值。

    测定的灵敏度实验数据如表1所示,ΔA表示吸光度的差值。结果显示使用
    200nm粒径胶乳为材料的试剂盒分析灵敏度达到0.00363mg/L。

    表1


    本发明试剂盒的最低检测限(LLD)=26.3+3*6.180615=44.84

    本发明试剂盒的灵敏度=0.1*44.84/1235.2=0.00363

    实施例5抗干扰分析

    干扰物选择配方如表2所示,结果显示使用200nm胶乳为材料的试剂盒抗
    干扰能力良好。

    表2

    ??干扰物
    ??测定值(mg/L)
    ??偏差CV(%)
    ??样本+生理盐水
    ??0.124
    ??-
    ??样本+VC(1000mg/L)
    ??0.119
    ??3.7
    ??样本+TBiL(740mg/L)

    ??0.123

    ??5

    ??样本+Hb(5.0g/L)
    ??0.129
    ??4.0
    ??样本+甘油三酯(33g/L)
    ??0.117
    ??5.6
    ??样本+肝素钠(200U/ml)

    ??0.121

    ??2.2

    关于本文
    本文标题:一种胶乳颗粒增强型中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒.pdf
    链接地址://www.4mum.com.cn/p-5878626.html
    关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服 - 联系我们

    [email protected] 2017-2018 www.4mum.com.cn网站版权所有
    经营许可证编号:粤ICP备17046363号-1 
     


    收起
    展开
  • 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03
  • 网上兼职彩票投注是真的吗 内蒙古时时最快开奖 重庆后三组六稳赚方法 稳赚四肖三期心开一期 新版手机上市 体彩11选5每期稳赚一元 聚富网下载软件 为什么黑客不去网赌 欢乐生肖开奖平台 幸运飞艇单双必中计划 河内5分彩手机全天计划软件 北京pk10冷热号走势图 包赢pk10精准计划群 大发快三走势图规律 pk10计划软件免费版app 大乐透最新规则