重庆时时彩怎么刷返点: 小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方法.pdf

(10)申请公布号 CN 102253196 A (43)申请公布日 2011.11.23 CN 102253196 A *CN102253196A* (21)申请号 201110100019.X (22)申请日 2011.04.21 G01N 33/531(2006.01) (71)申请人 江苏昶迅生物科技有限公司 地址 226013 江苏省南通市港闸区长泰路 128 号 (72)发明人 王智联 范宝臣 徐德鸣 (74)专利代理机构 苏州创元专利商标事务所有 限公司 32103 代理人 马明渡 王华 (54) 发明名称 小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方法 (57) 摘要 一种小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方 法， 向血清或血浆加入活性炭， 其中， 每毫升血清 或血浆中加入0.8～0.13克的活性炭 ； 在2～8℃ 条件下， 搅拌使所述活性炭充分吸附所述血清或 血浆中的小分子物质 ； 然后离心分离去除吸附有 小分子物质的活性炭。本发明在血清或血浆没有 进行前处理的前提下， 用中性制药级脱色活性炭 对血清或血浆中的小分子物质进行吸附， 去除血 清或血浆内的小分子物质， 同时保留其他的血清 物理化学特征， 从而得到一个高质量的为雌二醇 免疫检测服务的标准品基质。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 1 页 CN 102253202 A1/1 页 2 1. 一种小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方法， 其特征在于 ： 向血清或血浆加入活 性炭， 其中， 每毫升血清或血浆中加入 0.8 ～ 0.13 克的活性炭 ； 在 2 ～ 8℃条件下， 搅拌使 所述活性炭充分吸附所述血清或血浆中的小分子物质 ； 然后离心分离去除吸附有小分子物 质的活性炭。 2. 根据权利要求 1 所述的小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方法， 其特征在于 ： 所 述活性炭为中性制药级脱色活性炭。 权 利 要 求 书 CN 102253196 A CN 102253202 A1/4 页 3 小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方法 技术领域 [0001] 本发明涉及一种小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方法， 属于生物技术领域。 背景技术 [0002] 在抗体抗原反应测定未知待测物的过程中， 通常必须要有一个系列的已知浓度的 标准品 ( 又可称为质控品 ) 一起进行反应测定。当反应结束之后， 由已知的标准品浓度对 照反应强度 ( 相对光子单位或波长吸收值 ) 可以得到一个相关标准曲线。而其他待测物含 量可以通过各自的反应强度对比标准曲线得到相应的浓度含量。 所以标准品是一个完整反 应体系中不可缺少的一部分。 [0003] 通常标准品是由基质和已知浓度的测定物组成， 一个良好的基质必须尽可能从生 物特性上近似待测物的生物特性， 这样才能避免由于基质不一致造成的误差， 原理上基质 可以是天然的血清 / 浆， 也可以是人工勾兑的缓冲液加蛋白。但是它必须是不含或尽可能 少含有测定物的物质。 对于大分子测定物来讲， 得到一个不含测定物的基质相对容易， 因为 无论是天然的或者是人工勾兑的基质， 都是比较容易将测定物从基质中清除?？墒嵌杂谝?些小分子测定物， 比如分子量才 300 多的小分子激素类， 得到一个干净的 “纯” 基质却并不 容易。由于小分子免疫反应易被干扰， 虽然人工勾兑的基质可以做到完全不含小分子待测 物， 可是由于物理化学特征与待测样本， 通常是血清 / 浆基质的不同， 造成很大偏差而不能 被采用。目前业界常用的还是天然的血清 / 浆基质， 几乎所有的哺乳动物血清 / 浆基质内 都含有小分子激素， 并且具有相似性， 所以必须将它们去除后才能使用。 可是事实上它们极 难被完全清除。这也是困惑业界多年的难题， 也直接造就了一个共识 ： 小分子激素免疫测 定存在一个系统误差， 特别是在低含量端， 不能完全反应它们在体内的真实含量。 而物化测 定， 如气相色谱 - 质谱 (GC-MS)， 由于避免这些问题而成为测定小分子激素含量公认的 ‘金 标准’ 。但是在具体的临床应用中， 由于成本及检测速度上的问题， GC-MS 还是非常不实用 的一种手段， 而免疫测定却有着它特有的优势。 发明内容 [0004] 本发明提供一种小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方法， 目的是去除血清内的 小分子物质， 同时保留其它的血清物理化学特征， 从而得到一个高质量的为雌二醇免疫检 测服务的标准品基质。 [0005] 为达到上述目的， 本发明采用的技术方案是 ： 一种小分子雌二醇免疫测定标准品 的制备方法， 向血清或血浆加入活性炭， 其中， 每毫升血清或血浆中加入0.8～0.13克的活 性炭 ； 在 2 ～ 8℃条件下， 搅拌使所述活性炭充分吸附所述血清或血浆中的小分子物质 ； 然 后离心分离去除吸附有小分子物质的活性炭。 [0006] 上述技术方案中的有关内容解释如下 ： [0007] 1、 上述方案中， 所述活性炭为中性制药级脱色活性炭， 可以购自 Amend Drug and chemical Co.?；钚蕴渴且恢趾芟感〉奶苛?， 有很大的表面积， 而且炭粒中还有更细小的 说 明 书 CN 102253196 A CN 102253202 A2/4 页 4 孔 - 毛细管， 这种毛细管具有很强的吸附能力， 因此可以与血清或血浆中的小分子物质充 分接触并吸附小分子物质。 [0008] 2、 上述方案中， 所述小分子物质是指分子量大于或等于 150， 且小于或等于 500 的 物质。 [0009] 由于上述技术方案运用， 本发明与现有技术相比具有下列优点和效果 ： [0010] 本发明在血清或血浆没有进行前处理的前提下， 用中性制药级脱色活性炭对血清 或血浆中的小分子物质进行吸附， 去除血清或血浆内的小分子物质， 同时保留其他的血清 物理化学特征， 从而得到一个高质量的为雌二醇免疫检测服务的标准品基质。 附图说明 [0011] 附图 1 为活性炭处理血清或血浆后， 离心的时间与活性炭去除的关系示意图。 具体实施方式 [0012] 下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述 ： [0013] 实施例 ： 一种小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方法 [0014] 一种小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方法， 取正常雄性马血清， 以 1 ∶ 10 重 量 / 体积比例 ( 每毫升马血清中加入 0.1 克的活性炭 ) 加入活性炭， 摄氏 4 度环境下搅拌 12小时。 搅拌使所述活性炭充分吸附所述血清或血浆中的小分子物质。 然后将血清分成三 组进行实验。 [0015] 第一组、 分别用 180ml 容量转头离心机在 25000 转 / 分钟 (RPM， revolutions per minute)、 50000 转 / 分钟和 0.1 微米过滤器加 50000 转 / 分钟过滤条件下离心 0.5 ～ 2 小 时， 保留上清， 去除吸附有小分子物质的活性炭沉淀。测定活性炭的质量， 结果如附图 1 所 示 ： 附图 1 中共有由上至下共有三条线， 上面的线是 25000 转 / 分钟离心分离吸附有小分 子物质的活性炭沉淀的重量 ； 中间的线是 50000 转 / 分钟离心分离吸附有小分子物质的活 性炭沉淀的重量 ； 下面的线是先用 0.1 微米过滤器过滤， 再用 50000 转 / 分钟离心分离吸 附有小分子物质的活性炭沉淀的重量。结果表明经过离心， 活性炭可以被有效地与血清分 离。而且离心速率和时间与活性炭去除的有效性没有正比关系， 即使经过预先过滤也是如 此。25000 转 / 分钟应该能有效地去除活性炭。 [0016] 第二组、 以活性炭处理血清重复 0 ～ 4 次， 然后用 180ml 容量转头离心机在 25000 转/分钟离心1小时， 各留上清样本再进行GC-MS(气质联用)测定每个样本的雌二醇含量。 结果如下表所示 ： 说 明 书 CN 102253196 A CN 102253202 A3/4 页 5 [0017] [0018] 从第二组结果可得 ： [0019] 在经过一次活性炭处理后， 残留的雌二醇 GC-MS 含量进入了一个平台期， 这表明 残存的雌二醇含量与血清活性炭处理的次数没有关联。一次活性炭 (1 ∶ 10 重量 / 体积比 例 ) 及 1 小时 25000 转 / 分钟离心处理应该足够了。 [0020] 第三组、 血清先进行酸化处理， 然后进行活性炭处理， 再进行 A、 仅 4000 转 / 分钟， 离心半小时 ； B、 4000 转 / 分钟， 离心半小时， 然后再 25000 转 / 分钟， 离心一小时。结果如 下表所示 ： [0021] [0022] 从第三组结果可得 ： [0023] 经过酸化、 活性炭、 酸碱度中性化、 再离心等处理， 血清残留的雌二醇含量与只是 活性炭及离心的处理 ( 没有酸化处理 ) 没有显著差别。而且与多少次离心没有太大关系。 [0024] 以仅活性炭处理一次， 不过滤直接离心 25000 转 / 分钟 1 小时， 产生的血清作为基 质， 小样加入理想 30、 60pg/mL 水平的雌二醇。加与没加雌二醇的样本作 GC-MS 测定， 以观 察它们的真实浓度。通过比较理论、 真实浓度差别， 以判断血清基质能否用于实际。结果如 下表所述 ： [0025] [0026] 回收试验表明， 经过一次活性炭及一次一小时 25000 转 / 分钟处理得到的血清基 说 明 书 CN 102253196 A CN 102253202 A4/4 页 6 质具有很好的回收结果， 所以这种血清基质可被实际应用。 [0027] 上述试验中使用的活性炭为中性制药级脱色活性炭。购自 Amend Drug and chemical Co.。 [0028] 上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点， 其目的在于让熟悉此项技术的人 士能够了解本发明的内容并据以实施， 并不能以此限制本发明的?；し段?。凡根据本发明 精神实质所作的等效变化或修饰， 都应涵盖在本发明的?；し段е?。 说 明 书 CN 102253196 A CN 102253202 A1/1 页 7 附图 1 说 明 书 附 图 CN 102253196 A