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    重庆时时彩怎么刷返点: 小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方法.pdf

    关 键 词:
    分子 雌二醇 免疫测定 标准 制备 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201110100019.X

    申请日:

    2011.04.21

    公开号:

    CN102253196A

    公开日:

    2011.11.23

    当前法律状态:

    驳回

    有效性:

    无权

    法律详情: 发明专利申请公布后的驳回IPC(主分类):G01N 33/531申请公布日:20111123|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/531申请日:20110421|||公开
    IPC分类号: G01N33/531 主分类号: G01N33/531
    申请人: 江苏昶迅生物科技有限公司
    发明人: 王智联; 范宝臣; 徐德鸣
    地址: 226013 江苏省南通市港闸区长泰路128号
    优先权:
    专利代理机构: 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 代理人: 马明渡;王华
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201110100019.X

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2014.11.26|||2012.01.04|||2011.11.23

    法律状态类型:

    发明专利申请公布后的驳回|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    一种小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方法,向血清或血浆加入活性炭,其中,每毫升血清或血浆中加入0.8~0.13克的活性炭;在2~8℃条件下,搅拌使所述活性炭充分吸附所述血清或血浆中的小分子物质;然后离心分离去除吸附有小分子物质的活性炭。本发明在血清或血浆没有进行前处理的前提下,用中性制药级脱色活性炭对血清或血浆中的小分子物质进行吸附,去除血清或血浆内的小分子物质,同时保留其他的血清物理化学特征,从而得到一个高质量的为雌二醇免疫检测服务的标准品基质。

    权利要求书

    1.一种小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方法,其特征在于:向血清
    或血浆加入活性炭,其中,每毫升血清或血浆中加入0.8~0.13克的活性炭;
    在2~8℃条件下,搅拌使所述活性炭充分吸附所述血清或血浆中的小分子物
    质;然后离心分离去除吸附有小分子物质的活性炭。
    2.根据权利要求1所述的小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方法,其
    特征在于:所述活性炭为中性制药级脱色活性炭。

    说明书

    小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方法

    技术领域

    本发明涉及一种小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方法,属于生物技
    术领域。

    背景技术

    在抗体抗原反应测定未知待测物的过程中,通常必须要有一个系列的已
    知浓度的标准品(又可称为质控品)一起进行反应测定。当反应结束之后,
    由已知的标准品浓度对照反应强度(相对光子单位或波长吸收值)可以得到
    一个相关标准曲线。而其他待测物含量可以通过各自的反应强度对比标准曲
    线得到相应的浓度含量。所以标准品是一个完整反应体系中不可缺少的一部
    分。

    通常标准品是由基质和已知浓度的测定物组成,一个良好的基质必须尽
    可能从生物特性上近似待测物的生物特性,这样才能避免由于基质不一致造
    成的误差,原理上基质可以是天然的血清/浆,也可以是人工勾兑的缓冲液加
    蛋白。但是它必须是不含或尽可能少含有测定物的物质。对于大分子测定物
    来讲,得到一个不含测定物的基质相对容易,因为无论是天然的或者是人工
    勾兑的基质,都是比较容易将测定物从基质中清除??墒嵌杂谝恍┬》肿硬?br />定物,比如分子量才300多的小分子激素类,得到一个干净的“纯”基质却
    并不容易。由于小分子免疫反应易被干扰,虽然人工勾兑的基质可以做到完
    全不含小分子待测物,可是由于物理化学特征与待测样本,通常是血清/浆基
    质的不同,造成很大偏差而不能被采用。目前业界常用的还是天然的血清/
    浆基质,几乎所有的哺乳动物血清/浆基质内都含有小分子激素,并且具有相
    似性,所以必须将它们去除后才能使用??墒鞘率瞪纤羌驯煌耆宄?。
    这也是困惑业界多年的难题,也直接造就了一个共识:小分子激素免疫测定
    存在一个系统误差,特别是在低含量端,不能完全反应它们在体内的真实含
    量。而物化测定,如气相色谱-质谱(GC-MS),由于避免这些问题而成为测
    定小分子激素含量公认的‘金标准’。但是在具体的临床应用中,由于成本
    及检测速度上的问题,GC-MS还是非常不实用的一种手段,而免疫测定却有
    着它特有的优势。

    发明内容

    本发明提供一种小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方法,目的是去除
    血清内的小分子物质,同时保留其它的血清物理化学特征,从而得到一个高
    质量的为雌二醇免疫检测服务的标准品基质。

    为达到上述目的,本发明采用的技术方案是:一种小分子雌二醇免疫测
    定标准品的制备方法,向血清或血浆加入活性炭,其中,每毫升血清或血浆
    中加入0.8~0.13克的活性炭;在2~8℃条件下,搅拌使所述活性炭充分吸
    附所述血清或血浆中的小分子物质;然后离心分离去除吸附有小分子物质的
    活性炭。

    上述技术方案中的有关内容解释如下:

    1、上述方案中,所述活性炭为中性制药级脱色活性炭,可以购自Amend?
    Drug?and?chemical?Co.?;钚蕴渴且恢趾芟感〉奶苛?,有很大的表面积,而且
    炭粒中还有更细小的孔-毛细管,这种毛细管具有很强的吸附能力,因此可
    以与血清或血浆中的小分子物质充分接触并吸附小分子物质。

    2、上述方案中,所述小分子物质是指分子量大于或等于150,且小于或
    等于500的物质。

    由于上述技术方案运用,本发明与现有技术相比具有下列优点和效果:

    本发明在血清或血浆没有进行前处理的前提下,用中性制药级脱色活性
    炭对血清或血浆中的小分子物质进行吸附,去除血清或血浆内的小分子物
    质,同时保留其他的血清物理化学特征,从而得到一个高质量的为雌二醇免
    疫检测服务的标准品基质。

    附图说明

    附图1为活性炭处理血清或血浆后,离心的时间与活性炭去除的关系示
    意图。

    具体实施方式

    下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述:

    实施例:一种小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方法

    一种小分子雌二醇免疫测定标准品的制备方法,取正常雄性马血清,以
    1∶10重量/体积比例(每毫升马血清中加入0.1克的活性炭)加入活性炭,
    摄氏4度环境下搅拌12小时。搅拌使所述活性炭充分吸附所述血清或血浆
    中的小分子物质。然后将血清分成三组进行实验。

    第一组、分别用180ml容量转头离心机在25000转/分钟(RPM,revolutions?
    per?minute)、50000转/分钟和0.1微米过滤器加50000转/分钟过滤条件下离
    心0.5~2小时,保留上清,去除吸附有小分子物质的活性炭沉淀。测定活性
    炭的质量,结果如附图1所示:附图1中共有由上至下共有三条线,上面的
    线是25000转/分钟离心分离吸附有小分子物质的活性炭沉淀的重量;中间的
    线是50000转/分钟离心分离吸附有小分子物质的活性炭沉淀的重量;下面的
    线是先用0.1微米过滤器过滤,再用50000转/分钟离心分离吸附有小分子物
    质的活性炭沉淀的重量。结果表明经过离心,活性炭可以被有效地与血清分
    离。而且离心速率和时间与活性炭去除的有效性没有正比关系,即使经过预
    先过滤也是如此。25000转/分钟应该能有效地去除活性炭。

    第二组、以活性炭处理血清重复0~4次,然后用180ml容量转头离心
    机在25000转/分钟离心1小时,各留上清样本再进行GC-MS(气质联用)
    测定每个样本的雌二醇含量。结果如下表所示:


    从第二组结果可得:

    在经过一次活性炭处理后,残留的雌二醇GC-MS含量进入了一个平台
    期,这表明残存的雌二醇含量与血清活性炭处理的次数没有关联。一次活性
    炭(1∶10重量/体积比例)及1小时25000转/分钟离心处理应该足够了。

    第三组、血清先进行酸化处理,然后进行活性炭处理,再进行A、仅4000
    转/分钟,离心半小时;B、4000转/分钟,离心半小时,然后再25000转/分
    钟,离心一小时。结果如下表所示:


    从第三组结果可得:

    经过酸化、活性炭、酸碱度中性化、再离心等处理,血清残留的雌二醇
    含量与只是活性炭及离心的处理(没有酸化处理)没有显著差别。而且与多
    少次离心没有太大关系。

    以仅活性炭处理一次,不过滤直接离心25000转/分钟1小时,产生的血
    清作为基质,小样加入理想30、60pg/mL水平的雌二醇。加与没加雌二醇的
    样本作GC-MS测定,以观察它们的真实浓度。通过比较理论、真实浓度差
    别,以判断血清基质能否用于实际。结果如下表所述:


    回收试验表明,经过一次活性炭及一次一小时25000转/分钟处理得到的
    血清基质具有很好的回收结果,所以这种血清基质可被实际应用。

    上述试验中使用的活性炭为中性制药级脱色活性炭。购自Amend?Drug?
    and?chemical?Co.。

    上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点,其目的在于让熟悉此项
    技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施,并不能以此限制本发明的保
    护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰,都应涵盖在本发明
    的?;し段е?。

       内容来自专利网重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn转载请标明出处

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