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    重庆时时彩万能八码: 邓老凉茶颗粒指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱.pdf

    关 键 词:
    凉茶 颗粒 指纹 图谱 构建 方法 及其 标准
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    摘要
    申请专利号:

    CN201110098429.5

    申请日:

    2011.04.19

    公开号:

    CN102253135A

    公开日:

    2011.11.23

    当前法律状态:

    撤回

    有效性:

    无权

    法律详情: 发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):G01N 30/02申请公布日:20111123|||文件的公告送达IPC(主分类):G01N 30/02收件人:邓洁薇文件名称:视为撤回通知书|||文件的公告送达IPC(主分类):G01N 30/02收件人:邓洁薇文件名称:第一次审查意见通知书|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 30/02申请日:20110419|||公开
    IPC分类号: G01N30/02; G01N30/06 主分类号: G01N30/02
    申请人: 中国广州分析测试中心
    发明人: 张中强; 杨运云; 邓洁薇; 宋化灿; 张翠仙; 李娜; 郭鹏然; 王冠华
    地址: 510070 广东省广州市先烈中路100号大院34栋
    优先权:
    专利代理机构: 代理人:
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201110098429.5

    授权公告号:

    ||||||||||||

    法律状态公告日:

    2013.10.16|||2013.05.08|||2012.09.19|||2012.01.04|||2011.11.23

    法律状态类型:

    发明专利申请公布后的视为撤回|||文件的公告送达|||文件的公告送达|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    邓老凉茶颗粒指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱,涉及中药制剂的质量控制方法,具体是建立HPLC标准指纹图谱以检测邓老凉茶颗粒质量的方法。方法包括:(1)对照品溶液的配制;(2)供试品溶液的配制;(3)色谱条件:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料;采用梯度洗脱,流动相为0.1~3%磷酸与乙腈组成的梯度洗脱液;柱温20~50℃;紫外检测波长240~262nm;流速0.3~1.0mL/min;时间20~60min;(4)测定:高效液相色谱法得指纹图谱。本发明的有益效果:有效表征邓老凉茶颗粒的质量,有利于产品质量监控;具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好;可快速准确地鉴别产品的真伪优劣。

    权利要求书

    1.一种邓老凉茶颗粒制剂指纹图谱的建立方法,其特征在于采用高效液相色谱法,具体
    包括如下步骤:
    (1)对照品溶液的制备:精密配制绿原酸、新绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B对照品溶
    液,浓度为0.2~0.5mg/mL;
    (2)供试品溶液的制备:精密称取邓老凉茶颗粒,50%~100%甲醇提取,提取液浓缩定
    容后,针孔式微孔滤膜过滤,即得供试品溶液;
    (3)色谱条件:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料,梯度洗脱,柱温:20~50℃,
    流速0.3~1.0mL/min,紫外检测;
    (4)测定:精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪,照高效液相色谱法测定,得到指
    纹图谱;
    (5)相似度评价:供试品指纹图谱采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》
    进行评价。
    2.根据权利要求1所述的邓老凉茶颗粒指纹图谱的建立方法,其特征在于:所述步骤(2)
    供试品溶液的制备,精密称取邓老凉茶颗粒0.5~20g,采用索氏提取或超声提取或微波辅助
    萃取或加速溶剂萃取方法进行提取,提取时间为10~150min,提取液浓缩定容至10~50mL。
    3.根据权利要求1所述的邓老凉茶颗粒指纹图谱的建立方法,其特征在于所述步骤(3)
    梯度洗脱的流动相为0.1~3%的磷酸溶液(A)和乙腈(B),梯度洗脱时间为20~180min,紫外
    检测波长为240~262nm。
    4.如权利要求3所述的邓老凉茶颗粒制剂指纹图谱的建立方法,其特征在于步骤(3)色
    谱条件中所述的梯度洗脱,梯度洗脱程序以如下浓度配置进行:
    0分钟时,流动相A为95%、流动相B为5%;
    3分钟时,流动相A为95%、流动相B为5%;
    9分钟时,流动相A为80%、流动相B为20%;
    13分钟时,流动相A为80%、流动相B为20%;
    20分钟时,流动相A为5%、流动相B为95%。
    5.根据权利要求1所述的邓老凉茶颗粒指纹图谱的建立方法,其特征在于所述步骤(4)
    测定:精密吸取供试品溶液0.5~20μl注入高效液相色谱仪,照高效液相色谱法测定,得到
    指纹图谱。
    6.根据权利要求1所述的邓老凉茶颗粒指纹图谱的建立方法,其特征是在于所述步骤(5)
    相似度评价:供试品指纹图谱在240~262nm检测波长下的相似度均大于0.80。
    7.根据权利要求1所述的邓老凉茶颗粒指纹图谱的建立方法,其特征在于测定所得的指
    纹图谱中有16个特征共有峰,其中3号、4号、13号、14号色谱峰分别为绿原酸、新绿原
    酸、异绿原酸A、异绿原酸B参照峰,最强峰为3号色谱峰。

    说明书

    邓老凉茶颗粒指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱

    技术领域

    本发明涉及一种广东凉茶的质量控制方法,具体涉及邓老凉茶颗粒高效液相色谱法指纹
    图谱的构建方法和标准指纹图谱。

    背景技术

    广东凉茶是岭南人民根据本地的气候和水土特性,在长期预防疾病与保健过程中以中医
    养生理论为指导,以中草药为基础,研制总结出来的具有清热解毒、生津止渴等功效的一类
    植物饮料。邓老凉茶是著名的广东凉茶之一,由金银花、菊花、白茅根、桑叶、蒲公英和甘
    草6味药材组成,具有清热解毒、祛湿生津、凉血排毒等功效,用于风热感冒、咽喉肿痛等症。
    现已有邓老凉茶含糖颗粒、无糖颗粒、罐装饮料、蜜炼膏、草本含片等剂型上市。

    目前国内还没有文献报道对邓老凉茶质量控制的研究。中药指纹图谱技术是一种表征中
    药所含成分与其质量关系的有效手段,已成为国内外广泛认可的重要质量评价模式。因此,
    建立邓老凉茶制剂的标准指纹图谱,能从整体上全面反映制剂的内在质量,为其质量控制提
    供一种提供直观、简便、有效的手段。

    发明内容

    本发明的目的在于为邓老凉茶颗粒的质量控制和真伪鉴别提供一种新的方法,通过建立
    邓老凉茶颗粒指纹图谱的方法,并由此方法得到邓老凉茶制剂的标准指纹图谱。

    为达到本发明的目的所采用的技术方案:用高效液相色谱法建立邓老凉茶颗粒指纹图谱
    的方法,具体包括如下步骤:

    (1)对照品溶液的制备:

    A.绿原酸对照品溶液的制备:精密称取绿原酸对照品适量,用甲醇配制成每1ml含绿
    原酸0.2~0.5mg的溶液;

    B.新绿原酸对照品溶液的制备:精密称取新绿原酸对照品适量,用甲醇配制成每1ml含
    新绿原酸0.2~0.5mg的溶液;

    C.异绿原酸A对照品溶液的制备:精密称取异绿原酸A对照品适量,用甲醇配制成每1ml
    含异绿原酸A?0.2~0.5mg的溶液;

    D.异绿原酸B对照品溶液的制备:精密称取异绿原酸B对照品适量,用甲醇配制成每1ml
    含异绿原酸B?0.2~0.5mg的溶液;

    E.混合对照品溶液的制备:分别吸取1.00mL绿原酸、新绿原酸、异绿原酸A和异绿原酸
    B对照品溶液,组成混合对照品溶液;

    (2)供试品溶液的制备:精密称取邓老凉茶颗粒0.5~20g,50%~100%甲醇提取,采用
    索氏提取或超声提取或微波辅助萃取或加速溶剂萃取方法进行提取,提取时间为10~150
    min,提取液浓缩定容至10~50mL,针孔式微孔滤膜过滤,即得供试品溶液;

    (3)色谱条件:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料;采用梯度洗脱,流动相A为0.1~
    3%磷酸溶液,流动相B为乙腈,梯度洗脱时间为20~180min,柱温:20~50℃,流速0.3~
    1.0mL/min,紫外检测波长240~262nm;

    (4)测定:精密吸取供试品溶液0.5~10μl注入高效液相色谱仪,照高效液相色谱法测定,
    得到指纹图谱。

    (5)相似度评价:供试品指纹图谱采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》
    进行评价,在240~262nm检测波长下的相似度均大于0.80。

    本发明最佳的检测方法可以通过下述步骤实施:(2)供试品溶液的制备:称取邓老凉茶
    颗粒5.0g,用滤纸包好,置索氏提取器中,精密加入甲醇150mL,索氏提取1.5h,提取液
    旋转蒸馏浓缩至10mL,转移至25mL的容量瓶中,甲醇加至刻度,摇匀,针孔式微孔滤膜
    过滤,即得供试品溶液。(3)色谱条件:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料;采用梯度
    洗脱,流动相A为0.5%的磷酸溶液,流动相B为乙腈,洗脱时间为20min,柱温:25℃,
    流速0.5mL/min,紫外检测波长254nm;

    在步骤(3)中,所述的梯度洗脱,优选梯度洗脱程序以如下体积浓度配置进行:流动相A
    为0.5%的磷酸溶液,流动相B为乙腈。梯度洗脱程序如下:

    0分钟时,流动相A为95%、流动相B为5%;

    3分钟时,流动相A为95%、流动相B为5%;

    9分钟时,流动相A为80%、流动相B为20%;

    13分钟时,流动相A为80%、流动相B为20%;

    20分钟时,流动相A为5%、流动相B为95%。

    按照本发明所提供指纹图谱的建立方法所得邓老凉茶颗粒的指纹图谱中有16个特征共有
    峰,其中3号色谱峰最强,为绿原酸参照峰,4号色谱峰为新绿原酸参照峰,13号峰位异绿
    原酸A参照峰,14号色谱峰为异绿原酸B参照峰,图谱总长为20min,其中单峰面积超总
    峰面积1%的峰有16个,它们是1~16号峰;单峰面积超总峰面积5%的有6个,它们是2
    号峰、3号峰、4号峰、12号峰、13号峰、14号峰;单峰面积超总峰面积10%的有4个,它
    们是3号峰、4号峰、12号峰、14号峰。具体如下:

    1号峰,平均保留时间RT为2.26min,RSD为0.41%,峰面积为34.2495mAU*s为4.00%。

    2号峰,平均保留时间RT为3.23min,RSD为0.60%,峰面积为103.8625mAU*s,RSD
    为1.12%。

    3号峰为绿原酸,平均保留时间RT为7.24min,RSD为0.19%,峰面积为183.5252mAU*s,
    RSD为20.12%。

    4号峰为新绿原酸,平均保留时间RT为7.71min,RSD为0.15%,峰面积为111.0776
    mAU*s,RSD为8.60%。

    5号峰,平均保留时间RT为8.56min,RSD为0.02%,峰面积为27.6046mAU*s,RSD
    为13.09%。

    6号峰,平均保留时间RT为9.65min,RSD为0.21%,峰面积为39.1353mAU*s,RSD
    为13.57%。

    7号峰,平均保留时间RT为10.95min,RSD为0.08%,峰面积为27.0746mAU*s,RSD
    为11.97%。

    8号峰,平均保留时间RT为11.15min,RSD为0.11%,峰面积为33.6546mAU*s,RSD
    为5.69%。

    9号峰,平均保留时间RT为11.34min,RSD为0.11%,峰面积为43.5254mAU*s,RSD
    为7.21%。

    10号峰,平均保留时间RT为11.47min,RSD为0.11%,峰面积为47.5335mAU*s,RSD
    为8.57%。

    11号峰,平均保留时间RT为11.67min,RSD为0.14%,峰面积为47.5072mAU*s,RSD
    为8.56%。

    12号峰,平均保留时间RT为12.18min,RSD为0.17%,峰面积为108.6137mAU*s,
    RSD为8.00%。

    13号峰为异绿原酸A,平均保留时间RT为12.50min,RSD为0.19%,峰面积为56.1588
    mAU*s,RSD为11.94%。

    14号峰为异绿原酸B,平均保留时间RT为13.83min,RSD为0.27%,峰面积为117.6081
    mAU*s,RSD为13.42%。

    15号峰,平均保留时间RT为16.54min,RSD为0.04%,峰面积为41.5771mAU*s,RSD
    为12.79%。

    16号峰,平均保留时间RT为17.94min,RSD为0.03%,峰面积为42.4393mAU*s,RSD
    为6.55%。

    本发明的原理是根据邓老凉茶颗粒中主要的活性成分是药材金银花、菊花、白茅根、桑
    叶、蒲公英和甘草的提取物,其指纹图谱能从色谱的整体面貌上把握邓老凉茶颗粒的质量,
    所说的邓老凉茶颗粒包括邓老凉茶含糖颗粒剂和无糖颗粒剂。

    本发明的有益效果如下:

    (1)按本发明提供的方法所建立的HPLC指纹图谱,能有效的表征邓老凉茶颗粒的质量,
    有利于全面监控产品的质量。

    (2)指纹图谱注重各个构成指纹特征峰的前后顺序和相互关系,注重整体面貌特征,既
    避免了因测定一、二个化学成分而判定邓老凉茶颗粒整体质量的片面性,又减少了为质量达
    标而人为处理的可能性。

    (3)本发明具有方法简便、稳定、精密度高、重现型好等优点。

    (4)该方法可快速、准确地鉴别产品的真伪优劣。

    下面通过实施例及其附图详细阐述本发明的技术方案,所列举的实施例及附图对本发明
    并没有限制。

    附图说明

    图1、11批次邓老凉茶颗粒的叠加图

    图2、邓老凉茶颗粒的HPLC标准指纹图谱

    下面通过实施例及其附图详细阐述本发明的技术方案,所列举的实施例及附图对本发明
    并没有限制。

    具体实施方式

    实施例1.邓老凉茶无糖颗粒指纹图谱的检测

    1?仪器与试药

    1.1?仪器Agilent?1100高效液相色谱系统,ChemStation色谱工作站。

    1.2?试剂?绿原酸、新绿原酸、异绿原酸A和异绿原酸B对照品;乙腈(色谱纯)、甲醇
    (色谱纯)、二次重蒸水、磷酸(分析纯)。

    2.高效液相色谱

    2.1?色谱条件:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料(Poroshell?120SB-C18色谱柱,100
    ×2.1mm,2.7μm);流动相为0.5%磷酸(A)与乙腈(B)组成的梯度洗脱液,柱温:25℃;紫外
    检测:波长为254nm;流速0.5ml/min;分析时间:20min。进样量:供试品溶液与对照品
    溶液各1μl。理论塔板数按绿原酸计算应不低于3000。梯度洗脱程序如下:

    0分钟时,流动相A为95%、流动相B为5%;

    3分钟时,流动相A为95%、流动相B为5%;

    9分钟时,流动相A为80%、流动相B为20%;

    13分钟时,流动相A为80%、流动相B为20%;

    20分钟时,流动相A为5%、流动相B为95%。

    2.2?对照品溶液的制备:

    A.绿原酸对照品溶液的制备:精密称取绿原酸对照品5.0mg,甲醇溶解后转移至25mL
    棕色量瓶中,甲醇加至刻度,针孔式微孔滤膜过滤,即得。

    B.新绿原酸对照品溶液的制备:精密称取新绿原酸对照品5.0mg,甲醇溶解后转移至25
    mL棕色量瓶中,甲醇加至刻度,针孔式微孔滤膜过滤,即得。

    C.异绿原酸A对照品溶液的制备:精密称取异绿原酸A对照品5.0mg,甲醇溶解后转移至
    25mL棕色量瓶中,甲醇加至刻度,针孔式微孔滤膜过滤,即得。

    D.异绿原酸B对照品溶液的制备:精密称取异绿原酸B对照品5.0mg,甲醇溶解后转移至
    25mL棕色量瓶中,甲醇加至刻度,针孔式微孔滤膜过滤,即得。

    E.混合对照品溶液的制备:分别吸取1.00mL绿原酸、新绿原酸、异绿原酸A和异绿原酸
    B对照品溶液,组成混合对照品溶液。

    2.3?供试品溶液的制备

    邓老凉茶颗粒供试品溶液的制备:精密称取邓老颗粒5.0g,用滤纸包好,置索氏提取器
    中,加入甲醇150mL,索氏提取1.5h,提取液旋转蒸馏浓缩至10mL,转移至25mL的容量瓶
    中,甲醇加至刻度,针孔式微孔滤膜过滤,即得供试品溶液。

    2.4?测定:精密吸取供试品溶液与对照品溶液各1μl注入液相色谱仪,照高效液相色谱
    法测定,所得指纹图谱与图2相似。

    实施例2.检测11批次邓老凉茶颗粒的标准指纹图谱

    取邓老凉茶颗粒11批次,按实施例1条件进行检测,得11批次样品的HPLC图谱,如图1
    所示。通过11批HPLC图谱的比较,进行相似度评价,确定其特征共有峰:

    指纹图谱中有16个特征共有峰,现将图谱的保留时间、峰面积的平均值以及占总峰面积
    汇总,具体如下:

    1号峰,平均保留时间RT为2.26min,RSD为0.41%,峰面积为34.2495mAU*s为4.00%,
    占总峰面积的3.22%。

    2号峰,平均保留时间RT为3.23min,RSD为0.60%,峰面积为103.8625mAU*s,RSD
    为1.12%,占总峰面积的9.75%。

    3号峰为绿原酸,平均保留时间RT为7.24min,RSD为0.19%,峰面积为183.5252mAU*s,
    RSD为20.12%,占总峰面积的17.23%。

    4号峰为新绿原酸,平均保留时间RT为7.71min,RSD为0.15%,峰面积为111.0776
    mAU*s,RSD为8.60%,占总峰面积的10.43%。

    5号峰,平均保留时间RT为8.56min,RSD为0.02%,峰面积为27.6046mAU*s,RSD
    为13.09%,占总峰面积的2.59%。

    6号峰,平均保留时间RT为9.65min,RSD为0.21%,峰面积为39.1353mAU*s,RSD
    为13.57%,占总峰面积的3.67%。

    7号峰,平均保留时间RT为10.95min,RSD为0.08%,峰面积为27.0746mAU*s,RSD
    为11.97%,占总峰面积的2.54%。

    8号峰,平均保留时间RT为11.15min,RSD为0.11%,峰面积为33.6546mAU*s,RSD
    为5.69%,占总峰面积的3.16%。

    9号峰,平均保留时间RT为11.34min,RSD为0.11%,峰面积为43.5254mAU*s,RSD
    为7.21%,占总峰面积的4.09%。

    10号峰,平均保留时间RT为11.47min,RSD为0.11%,峰面积为47.5335mAU*s,RSD
    为8.57%,占总峰面积的4.46%。

    11号峰,平均保留时间RT为11.67min,RSD为0.14%,峰面积为47.5072mAU*s,RSD
    为8.56%,占总峰面积的4.46%。

    12号峰,平均保留时间RT为12.18min,RSD为0.17%,峰面积为108.6137mAU*s,
    RSD为8.00%,占总峰面积的10.20%。

    13号峰为异绿原酸A,平均保留时间RT为12.50min,RSD为0.19%,峰面积为56.1588
    mAU*s,RSD为11.94%,占总峰面积的5.27%。

    14号峰为异绿原酸B,平均保留时间RT为13.83min,RSD为0.27%,峰面积为117.6081
    mAU*s,RSD为13.42%,占总峰面积的11.04%。

    15号峰,平均保留时间RT为16.54min,RSD为0.04%,峰面积为41.5771mAU*s,RSD
    为12.79%,占总峰面积的3.90%。

    16号峰,平均保留时间RT为17.94min,RSD为0.03%,峰面积为42.4393mAU*s,RSD
    为6.55%,占总峰面积的3.98%。

    所述指纹图谱中,邓老凉茶颗粒的指纹图谱中含有16个特征共有峰,其中3号色谱峰最强,
    为绿原酸参照峰,即S色谱峰,4号峰、13号峰、14号峰分别为新绿原酸、异绿原酸A、异绿
    原酸B参照峰,图谱总长为20min,其中单峰面积超总峰面积1%的峰有16个,它们是1~16号
    峰;单峰面积超总峰面积5%的有6个,它们是2号峰、3号峰、4号峰、12号峰、13号峰、14号
    峰;单峰面积超总峰面积10%的有4个,它们是3号峰、4号峰、12号峰、14号峰。

    相似度评价:采用中国药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》
    对HPLC图谱进行综合评价,相似度评价结果见表1,11批次邓老凉茶颗粒的叠加图见附图1。

    表1?HPLC指纹图谱相似度评价


    与参照图谱、对照图谱经比较,11批邓老凉茶颗粒指纹图谱经相似度评价软件计算,相
    似度均大于0.80。

    通过上述方法所建立的邓老凉茶颗粒HPLC的标准指纹图谱如图2所示。

    关于本文
    本文标题:邓老凉茶颗粒指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱.pdf
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