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    重庆时时彩买一个号技术详解: 一株好氧除磷菌恶臭假单胞菌WSH1002及其应用.pdf

    关 键 词:
    一株好氧 恶臭 假单胞菌 WSH1002 及其 应用
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    摘要
    申请专利号:

    CN201010580543.7

    申请日:

    2010.12.09

    公开号:

    CN102181375A

    公开日:

    2011.09.14

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 专利权人的姓名或者名称、地址的变更IPC(主分类):C12N 1/20变更事项:专利权人变更前:江苏商达水务有限公司变更后:江苏启德水务有限公司变更事项:地址变更前:214100 江苏省无锡市锡山区锡山经济开发区芙蓉中三路99号变更后:214100 江苏省无锡市锡山经济技术开发区凤威路2号塞维拉1号楼107&108|||授权|||实质审查的生效IPC(主分类):C12N 1/20申请日:20101209|||公开
    IPC分类号: C12N1/20; C12N15/31; C02F3/34; C12R1/40(2006.01)N 主分类号: C12N1/20
    申请人: 江苏商达水务有限公司
    发明人: 郑展望; 陈坚; 堵国成; 仲小敏; 王天文; 徐甦; 刘斌; 丁青松
    地址: 214100 江苏省无锡市锡山区锡山经济开发区芙蓉中三路99号
    优先权:
    专利代理机构: 杭州天正专利事务所有限公司 33201 代理人: 黄美娟;冷红梅
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201010580543.7

    授权公告号:

    |||102181375B||||||

    法律状态公告日:

    2018.04.10|||2012.09.05|||2011.11.02|||2011.09.14

    法律状态类型:

    专利权人的姓名或者名称、地址的变更|||授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明提供了新的好氧除磷菌——恶臭假单胞菌(Pseudomonas?putida)及其应用。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心,地址:中国,武汉,武汉大学,430072,保藏编号:CCTCC?No:M?2010276,保藏日期:2010年10月24日。该菌株去除磷的能力可达0.02g?P/h/g菌体干重以上,当初始磷浓度为15mg/L时,7h去除率达到80%以上。本发明的有益效果主要体现在:提供了一株性能较好氧除磷菌,该菌株可以有效的去除污水中的磷,在一定程度上为污水处理和治理方面提供基础。

    权利要求书

    1: 一株好氧除磷菌——恶臭假单胞菌 (Pseudomonas putida)WSH1002, 保藏于中国典 型培养物保藏中心, 地址 : 中国, 武汉, 武汉大学, 430072, 保藏编号 : CCTCC N0 : M 2010276, 保藏日期 : 2010 年 10 月 24 日。
    2: 如权利要求 1 所述的恶臭假单胞菌 WSH1002, 其特征在于所述恶臭假 单胞菌 WSH1002 的 16S rDNA 序列如下 : gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg ccttgacatg cagagaactt tccagagatg gattggtgcc ttcgggaact ctgacacagg tgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gtaacgagcg caacccttgt ccttagttac cagcacgtta tggtgggcac tctaaggaga ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa gtcatcatgg cccttacggc ctgggctaca cacgtgctac aatggtcggt acagagggtt gccaagccgc gaggtggagc taatctcaca aaaccgatcg tagtccggat cgcagtctgc aactcgactg cgtgaagtcg gaatcgctag taatcgcgaa tcagaatgtc gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc acaccatggg agtgggttgc acacagaagt agctagtcta accttcggga ggacggtacc acggttggat tccg。
    3: 如权利要求 1 所述的恶臭假单胞菌 WSH1002 在微生物降解处理含磷废水中的应用。
    4: 如权利要求 3 所述的应用, 其特征在于所述微生物降解在 28 ~ 32℃下进行。

    说明书


    一株好氧除磷菌——恶臭假单胞菌 WSH1002 及其应用

        ( 一 ) 技术领域
         本发明涉及一株新的好氧除磷菌——恶臭假单胞菌 WSH1002 及其应用。 ( 二 ) 背景技术
         目前污水处理厂除磷技术主要有生物除磷、 化学沉淀除磷, 但成本高且很难达到 排放标准。也有传统人工湿地除磷工艺填料吸附, 但其填料吸附能力有限, 且易饱和。
         目前, 国内生产的洗衣粉仍广泛使用三聚磷酸钠为主要助剂, 这就是我们通常所 说的含磷洗衣粉。三聚磷酸钠作为洗衣粉的助剂已为人类服务了半个世纪, 对提高洗衣粉 的去污效果起到了很大的作用 ; 它通过络合 Ca2+、 Mg2+ 等金属离子起到软化水的作用 ; 它 对蛋白质有膨润、 增溶作用, 对脂肪起促进乳化的作用, 对尘土等固体污垢有分散作用 ; 它 还有碱缓冲作用, 即使有酸性污垢存在也能使洗涤液保持一定的碱度, 有利于酸性污垢的 去除 ; 它还具有吸收水分防止洗衣粉块的作用。但是, 含磷洗衣粉也有严重的缺点, 就是在 使用后随着污水被排放在水体中造成水体的富营养化, 引起浮游生物大量繁殖疯长, 形成 “赤潮” 。赤潮的危害是使水中溶氧量减少, 水质恶化, 水中生物不能正常生存, 严重破坏水 产资源。
         在生物除磷工艺中, 目前的相关技术处理成本过高, 且处理的效果相对要差。
         Phostrip 法先使污泥微生物处于厌氧或兼氧状态下, 使积磷细菌体内的磷充分 排出, 在进入好氧条件下吸磷并贮藏于体内, 然后使这种含磷污泥立即在二沉池内沉降, 澄 清的出水可获得良好的脱磷效果, 池底的含磷污泥一部分剩余污泥的形式排出作为肥料使 用, 另一部分回流至厌氧池或兼氧池。Phostrip 法实际上是生物脱磷与化学除磷相相结合 的工艺, 是对 A/O 工艺的改进。该工艺是使部分回流的含磷污泥进入一个专门设置的厌氧 或兼氧放磷池, 是含磷微生物在厌氧条件下释放可溶性的磷酸与水体中, 然后将含有高浓 度磷的少量上清液导出放磷池, 进行化学除磷, 将已经释放磷的污泥重新进入到好氧池中 进行吸磷和积磷。该工艺可以进一步提高除磷的效率。但该法的处理过程中, 菌种的筛选 就是一个很重要的问题, 需要有一种优秀的菌种予以配合生物处理。 ( 三 ) 发明内容
         本发明目的是提供一株能够有效降解无机磷的好氧除磷新菌株及其应用。
         本发明采用的技术方案是 :
         一 株 好 氧 除 磷 菌 —— 恶 臭 假 单 胞 菌 (Pseudomonas putida)WSH1002, 保藏于 中国典型培养物保藏中心, 地址 : 中国, 武汉, 武汉大学, 430072, 保藏编号 : CCTCC No : M 2010276, 保藏日期 : 2010 年 10 月 24 日。
         所 述 恶 臭 假 单 胞 菌 WSH1002 的 16S rDNA 序 列 如 下 ( 已 提 交 NCBI, 编号为 HM218829) :
         gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg
         ccttgacatg cagagaactt tccagagatg gattggtgcc ttcgggaact ctgacacaggtgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gtaacgagcg
         caacccttgt ccttagttac cagcacgtta tggtgggcac tctaaggaga ctgccggtga
         caaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa gtcatcatgg cccttacggc ctgggctaca
         cacgtgctac aatggtcggt acagagggtt gccaagccgc gaggtggagc taatctcaca
         aaaccgatcg tagtccggat cgcagtctgc aactcgactg cgtgaagtcg gaatcgctag
         taatcgcgaa tcagaatgtc gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc
         acaccatggg agtgggttgc acacagaagt agctagtcta accttcggga ggacggtacc
         acggttggat tccg。
         本发明的菌株采用多种筛选方法相结合方式筛选获得, 首先通过添加磷源, 富集 好氧除磷菌, 然后再通过在培养基中添加 x-Pi 来快速有效地筛选好氧除磷菌。具体如下 : 从驯化好的活性污泥中筛选出单菌落, 然后根据不同的菌种在富磷和限磷的葡萄糖 -MOPS 培养基中生长时表达碱性磷酸激酶对 x-Pi(5-bromo-4-chloro-3-indoly-phosphate) 分 解情况不同而产生不同色斑, 除磷菌在富磷和限磷的培养基中都产生蓝斑的性能, 通过在 培养基中添加 x-Pi 的方法, 来有效地筛选好氧除磷菌。其步骤依次是取样, 富集培养, 初 筛, 复筛, 最后得到一株在好氧条件下, 能降解模拟污水中的磷能力较高的菌株。 本发明还涉及所述的恶臭假单胞菌在微生物降解处理含磷废水中的应用。 处理对 象主要包括人们日常生产生活中排放的含磷废水以及工业生产中排放的含磷废水, 相对而 言, 后者的含磷量更高, 涉及范围小, 治理更为重要。 其中的磷主要以化合物的形态存在, 例 如磷酸及磷酸盐类。
         优选的, 所述微生物降解在 28 ~ 32℃下进行。
         本发明的有益效果主要体现在 : 提供了一株性能较好氧除磷菌, 该菌株可以有效 的去除污水中的磷, 在一定程度上为污水处理和治理方面提供基础。
         ( 四 ) 具体实施方式
         下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述, 但本发明的?;し段Р⒉唤鱿抻?此:
         实施例 1 : 菌株的筛选
         (1) 菌株来源
         a、 江南大学环境工程实验室性能稳定的实验室规模 A/O 反应器沉淀池中剩余污 泥;
         b、 江南大学环境工程实验室性能稳定的实验室规模 MBR 反应器曝气池中活性污 泥;
         c、 梅村污水处理厂训话好的活性污泥 ;
         (2) 培养基 :
         富集培养基 : 牛肉膏 3g, 蛋白胨 10g, NaCl 5g, KH2PO4 0.02g, 水 1000mL, pH 7.2 ~ 7.4。
         初筛培养基 : 100ml 的 10×MOPS 混合物 (5.372g MOPS+0.717gTricine+30ml 离 子水, 10mol/L 的 KOH 调节 pH 至 7.4, 总体积到 44ml, 加入 0.01% l mL 新制的 FeSO4 溶液, 按下列顺序加溶液 : 5ml 1.9mol/LNH4Cl, l mL 0.276mol/L K2SO4, 0.025mol 0.02mol/L,CaCl2·2H2O, 0.21mL 2.5mol/L MgCl2·6H2O, 10mL 5mol/L NaCl, 0.02mL 微量元素混合液, 38.7mL 去离子水 ), 葡萄糖 0.1g, 0.0087g/0.1732g K2HPO4, x-Pi(50μg/mL)。
         菌体扩大培养基 : 牛 肉 膏 3g, 蛋 白 胨 10g, NaCl 5g, KH2PO4 0.02g, 水 1000mL, pH7.2 ~ 7.4。
         检测培养基 : 乙 酸 钠 925mg, 蛋 白 胨 0.1g, 酵 母 膏 0.01g, NaCl 0.05g, KH2PO4 65.5mg, MgCl2·7H2O 153.7mg, CaCl2 25mg。
         (3) 富集培养 : 将从污水处理厂取得的活性污泥接入富集培养基, 每天更换新鲜 培养基。装液量 100/250ml, 摇床培养 24h, 30℃, 150rpm, 转接 10 次。
         (4) 初筛 : 将富集好的菌液进行稀释, 在固体扩大培养基上进行涂布, 然后置于 30℃培养箱中培养, 培养 2 ~ 3 天。挑选形态不同的菌同时在富磷和限磷的初筛培养基上 划线分离, 将在两种培养基上都出现的蓝色单菌落的菌再次在扩大培养基上划线分离, 对 划线分离得到的单菌落保存到斜面上, 供复筛用。
         (5) 复筛 : 将初筛保存的菌株接入菌体扩大培养基, 30℃, 150rpm, 培养 24h, 然后 按 5%的比例分别接入 100mL 检测培养基, 培养 12h, 30℃, 150rpm, 测定接种前后磷的变化。 磷的测定采用钼锑抗分光光度法。
         经筛选获得一株性能较好的菌株, 经 16S rDNA 分子鉴定为 Pseudomonas putida, 保藏于中国典型培养物保藏中心, 保藏编号 CCTCC No : M 2010276。
         实施例 2 : 好氧除磷菌的应用
         (1) 培养基 :
         扩大培养基 : 牛肉膏 3g, 蛋白胨 10g, NaCl 5g, KH2PO4 0.02g, 水 1000mL, pH7.2 ~ 7.4。
         检测培养基 : 乙 酸 钠 925mg, 蛋 白 胨 0.1g, 酵 母 膏 0.01g, NaCl 0.05g, KH2PO4 65.5mg, MgCl2·7H2O 153.7mg, CaCl2 25mg。
         (2) 工艺条件 :
         温度 : 30℃ ; 摇床转速 : 150rpm ; 装液量 : 100/250mL 无流加 ;
         菌体干重的测定 : 菌体在 10000rpm 条件下离心 5min, 弃去上清夜在 105℃条件下 烘至恒重, 称重。
         (3) 好氧除磷菌的应用
         将斜面上的除磷菌 (CCTCC No : M 2010276) 挑取一环接入扩大培养基, 在 30℃, 150rpm 的条件下培养 24h, 然后按 1%体积比分别接入富含磷元素的牛肉膏蛋白胨培养基 ( 牛肉膏 3g, 蛋白胨 10g, NaCl 5g, KH2PO4 0.02g, 水 1000mL, pH7.2 ~ 7.4) 中, 30℃, 150rpm, 培养 7h 后, 取一定量的发酵液在 8000rpm 的条件下离心 5min, 检测上清液中的磷含量, 结果 见表 1。
         表1: 菌株的除磷能力测试
         结论 : 本发明菌株去除磷的能力可达 0.02g P/h/g 菌体干重以上, 当初始磷浓度 为 15mg/L 时, 7h 去除率达到 80%以上。6102181375 A CN 102181377序列表1/1 页SEQUENCE LISTING <110> <120> <130> <160> <170> <210> <211> <212> <213> 1 PatentIn version 3.4 1 554 DNA Pseudomonas putida 江苏商达水务有限公司 一株好氧除磷菌 -- 恶臭假单胞菌 WSH1002 及其应用<400> 1 gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg ccttgacatg cagagaactt tccagagatg gattggtgcc ttcgggaact ctgacacagg tgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gtaacgagcg caacccttgt ccttagttac cagcacgtta tggtgggcac tctaaggaga ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa gtcatcatgg cccttacggc ctgggctaca cacgtgctac aatggtcggt acagagggtt gccaagccgc gaggtggagc taatctcaca aaaccgatcg tagtccggat cgcagtctgc aactcgactg cgtgaagtcg gaatcgctag taatcgcgaa tcagaatgtc gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc acaccatggg agtgggttgc acacagaagt agctagtcta accttcggga ggacggtacc acggttggat tccg60 120 180 240 300 360 420 480 540 5547

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