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    重庆时时彩圆角分模式: 一种果蔬农药残留净化菌剂的制备方法.pdf

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    一种 农药 残留 净化 制备 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201610814765.8

    申请日:

    2016.08.31

    公开号:

    CN106244498A

    公开日:

    2016.12.21

    当前法律状态:

    实审

    有效性:

    审中

    法律详情: 实质审查的生效IPC(主分类):C12N 1/20申请日:20160831|||公开
    IPC分类号: C12N1/20; C11D3/38 主分类号: C12N1/20
    申请人: 孙军
    发明人: 丁葵英; 郭礼强; 王振刚; 孙军; 许文娟; 刘永强
    地址: 261041 山东省潍坊市奎文区四平路39号中华人民共和国潍坊出入境检验检疫局
    优先权:
    专利代理机构: 代理人:
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201610814765.8

    授权公告号:

    |||

    法律状态公告日:

    2017.01.18|||2016.12.21

    法律状态类型:

    实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种果蔬农药残留净化菌剂的制备方法,乳酸菌菌种经培养后离心清洗,添加氯化钠水溶液,乳酸菌菌种保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,简称CGMCC,保藏编号:CGMCC?No.10574,在乳酸菌菌体中添加氯化钠溶液,一方面能够减少低温对菌体的伤害;另一方面能够抑制乳酸菌的生长;菌种容易控制,方便易得;生产成本低,安全无危害,净化农药残留效果好。

    权利要求书

    1.一种果蔬农药残留净化菌剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:乳酸菌菌种经
    培养后离心清洗,添加氯化钠水溶液。
    2.如权利要求1所述的一种果蔬农药残留净化菌剂的制备方法,其特征在于:乳酸菌菌
    种保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,简称CGMCC,保藏编号:CGMCC
    No.10574。
    3.如权利要求1所述的一种果蔬农药残留净化菌剂的制备方法,其特征在于,乳酸菌菌
    种的培养包括:
    无菌接种:取冰箱4℃保藏的乳酸菌菌种在超净台接种到细菌培养基,培养温度37℃,
    转速120转/分钟摇床培养3天,得种子。
    4.如权利要求1所述的一种果蔬农药残留净化菌剂的制备方法,其特征在于,乳酸菌菌
    种的培养还包括:
    发酵培养:将培养好的种子超净台全部接种到发酵培养基,无菌搅拌均匀,温箱中培
    养,温度为37℃培养2天,降低温度到30℃培养1天,得菌液。
    5.如权利要求1所述的一种果蔬农药残留净化菌剂的制备方法,其特征在于,细菌培养
    基包括:
    酵母膏7.5g、蛋白胨7.5g、葡萄糖10g、磷酸二氢钾2g、0.5mL吐温80,121℃高压灭菌
    35min。
    6.如权利要求1所述的一种果蔬农药残留净化菌剂的制备方法,其特征在于,发酵培养
    基包括:
    酵母膏10g、蛋白胨10g、玉米浆40g、蔗糖10g、碳酸钙粉5g,调pH到6.5,121℃高压灭菌
    35min后冰箱4℃保藏。
    7.如权利要求1所述的一种果蔬农药残留净化菌剂的制备方法,其特征在于,乳酸菌菌
    种的离心清洗包括:
    将培养好的菌液装入离心管,4℃,3000转/分离心10分钟,弃去上层溶液,留用下层菌
    液。
    8.如权利要求7所述的一种果蔬农药残留净化菌剂的制备方法,其特征在于,乳酸菌菌
    种的离心清洗还包括:
    将下层菌液中加入等体积纯水,涡混均匀,4℃,3000转/分离心10分钟,弃去上层溶液,
    留用下层菌液。
    9.如权利要求1所述的一种果蔬农药残留净化菌剂的制备方法,其特征在于,离心清洗
    后的乳酸菌菌体中添加相同重量的1mol/L的氯化钠水溶液,并冰箱-10℃保藏。

    说明书

    一种果蔬农药残留净化菌剂的制备方法

    发明领域

    本发明涉及一种果蔬农药的净化菌剂,具体地说,涉及一种果蔬农药净化菌剂的
    制备方法,属于生物技术领域。

    背景技术

    食品安全是消费者最为关注的焦点之一,我国从2015年开始实施新食品法,对食
    品安全问题格外严厉。然而,为保证果蔬产量,种植中使用农药不能避免,如2014年洋葱中
    农药残留噻虫嗪事件,引起了质检总局的高度重视,至今仍是输日洋葱的监控项目。果蔬类
    产品,属于消费者日常生活中必备的食品,有些甚至清洗后直接食用,若果蔬表面有农药残
    留或残留过量,很容易对食用者造成伤害。大多数农药属于脂溶性化合物,仅仅靠水清洗并
    不能很好的清除。随着检测技术的发展和各国在食品安全研究方面的突破,各国都加大了
    对农药残留降解的研究。氨基甲酸酯类农药是果蔬种植中常用的杀虫剂,虽然多数属低毒
    农药,但对人体和环境仍然有害。为?;す叩纳?,需要喷洒氨基甲酸酯类药物,因此果
    蔬表面很容易残留农药,若清除不干净被误食,可以引起头痛、头晕、恶心、呕吐、腹痛、流口
    水、视物不清,重度中毒还出现肌肉震颤、昏迷、大小便失禁等。目前对氨基甲酸酯类农药残
    留的降解研究已有报道,多偏重于芽孢杆菌,虽也能达到降解的目的,但芽孢杆菌研究不透
    明,一些对人有毒,若用于清除果蔬表面农药,可能带来新的危害。目前,在市场上已有一些
    果蔬类农残净化菌剂的商品,但生产和市场主要掌握在国外大型生物公司,价格高,且多未
    被国内权威机构认可。国内净化菌剂起步较晚,受生产成本、培养条件、检测手段和消费者
    认知的制约,还未推广普及。

    发明内容

    本发明要解决的技术问题是提供一种果蔬农药净化菌剂的制备方法,生产本菌剂
    成本低、工艺简单、无毒和不破坏果蔬表面、并具有稳定安全的优点。

    为解决以上问题,本发明采用以下技术方案:一种果蔬农药残留净化菌剂的制备
    方法,其特征在于,包括以下步骤:

    乳酸菌菌种经培养后离心清洗,添加氯化钠水溶液。

    一种优化方案,乳酸菌菌种保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中
    心,简称CGMCC,保藏编号:CGMCC No.10574。

    进一步地,乳酸菌菌种的培养包括:

    无菌接种:取冰箱4℃保藏的乳酸菌菌种在超净台接种到细菌培养基,培养温度37
    ℃,转速120转/分钟摇床培养3天,得种子。

    进一步地,乳酸菌菌种的培养还包括:

    发酵培养:将培养好的种子超净台全部接种到发酵培养基,无菌搅拌均匀,温箱中
    培养,温度为37℃培养2天,降低温度到30℃培养1天,得菌液。

    进一步地,细菌培养基包括:

    酵母膏7.5g、蛋白胨7.5g、葡萄糖10g、磷酸二氢钾2g、0.5mL吐温80,121℃高压灭
    菌35min。

    进一步地,发酵培养基包括:

    酵母膏10g、蛋白胨10g、玉米浆40g、蔗糖10g、碳酸钙粉5g,调pH到6.5,121℃高压
    灭菌35min后冰箱4℃保藏。

    进一步地,乳酸菌菌种的离心清洗包括:

    将培养好的菌液装入离心管,4℃,3000转/分离心10分钟,弃去上层溶液,留用下
    层菌液。

    进一步地,乳酸菌菌种的离心清洗还包括:

    将下层菌液中加入等体积纯水,涡混均匀,4℃,3000转/分离心10分钟,弃去上层
    溶液,留用下层菌液。

    进一步地,离心清洗后的乳酸菌菌体中添加相同重量的1mol/L的氯化钠水溶液,
    并冰箱-10℃保藏。

    乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。
    凡能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。这是一群相当庞杂的细
    菌,目前至少可分为18个属,共有200多种。除极少数外,其中绝大部分都是人体内必不可少
    的且具有重要生理功能的菌群,其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家所
    证实,肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的直接关系。

    本发明采用以上技术方案,具有以下优点:

    采用以上培养基,成分简单,可溶于水,有利于后处理提取,减少提取成本;其中,
    酵母膏、蛋白胨和玉米浆均可为菌种10574提供碳氮源;蔗糖提供速效碳源;玉米浆提供微
    量元素和宽松的培养环境;碳酸钙粉能够中和发酵产生的酸度,发酵菌种10574的后期培养
    更有利;pH 6.5为给菌种提供一个微酸的环境,利于消毒杀菌和乳酸菌10574的生长。

    经试验后发现:37℃的培养温度在发酵初期可以加速菌种10574菌体繁殖生长;培
    养2天后将温度降低到30℃,可以有效控制发酵的节奏,提高菌体的产量。

    加水可以将残留的发酵液除去,清洗菌体,过多的发酵培养基残留会减弱菌剂对
    果蔬表面农药的清除效果;

    经试验后发现:在乳酸菌菌体中添加氯化钠溶液,一方面能够减少低温对菌体的
    伤害;另一方面能够抑制乳酸菌的生长。

    菌种容易控制,方便易得;生产成本低,安全无危害,净化农药残留效果好。

    下面结合附图和实施例对本发明进行详细说明。

    附图说明

    附图1为灭多威和速灭威的对照TIC色谱图(100μg/kg);

    附图2为本发明中灭多威和速灭威经菌剂清除后的基质色谱图。

    具体实施方式

    实施例1,一种果蔬农药残留净化菌剂的制备方法,包括以下步骤:

    a、选取乳酸菌菌种:取冰箱4℃保存的菌种10574,放入超净台上,静置2小时,乳酸
    菌菌种保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,简称CGMCC,保藏编号:
    CGMCC No.10574;

    b、细菌培养基(种子培养基):酵母膏7.5g,蛋白胨7.5g,葡萄糖10g,磷酸二氢钾
    2g,0.5mL吐温80,定容到1000mL,以100mL分装入500mL三角瓶,121℃高压灭菌35min;

    c、发酵培养基:酵母膏10g,蛋白胨10g,玉米浆40g,蔗糖10g,碳酸钙粉5g,用水定
    容到1000mL,搅拌均匀,调pH到6.5,装入3000mL三角瓶,121℃高压灭菌35min后冰箱4℃保
    藏;

    经试验后发现:采用以上培养基,成分简单,可溶于水,有利于后处理提取,减少提
    取成本;其中,酵母膏、蛋白胨和玉米浆均可为菌种10574提供碳氮源;蔗糖提供速效碳源;
    玉米浆提供微量元素和宽松的培养环境;碳酸钙粉能够中和发酵产生的酸度,发酵菌种
    10574的后期培养更有利;pH 6.5为给菌种提供一个微酸的环境,利于消毒杀菌和乳酸菌
    10574的生长。

    d、无菌接种:取冰箱4℃保藏的菌种10574在超净台接种到细菌培养基,培养温度
    37℃,转速120转/分钟摇床培养3天得种子;

    e、发酵培养:将步骤d培养好的种子超净台全部接种到发酵培养基(3000mL三角瓶
    中),无菌搅拌均匀,温箱中培养,温度依次为37℃培养2天,降低温度到30℃培养1天得菌
    液;

    经试验后发现:37℃的培养温度在发酵初期可以加速菌种10574菌体繁殖生长;培
    养2天后将温度降低到30℃,可以有效控制发酵的节奏,提高菌体的产量。

    f、将步骤e培养好菌液装入100mL离心管,4℃,3000转/分离心10分钟,弃去上层溶
    液,留用下层菌液;

    g、在步骤f所得下层菌液中加入等体积纯水(菌液∶纯水=1∶1),涡混均匀,4℃,
    3000转/分离心10分钟,弃去上层溶液,留用下层菌液;

    加水可以将残留的发酵液除去,清洗菌体,过多的发酵培养基残留会减弱菌剂对
    果蔬表面农药的清除效果;

    h、收集步骤g乳酸菌菌体,称取重量,添加相同重量的1mol/L的氯化钠水溶液,冰
    箱-10℃保藏;

    经试验后发现:在乳酸菌菌体中添加氯化钠溶液,一方面能够减少低温对菌体的
    伤害;另一方面能够抑制乳酸菌的生长。

    检验:将步骤h所得菌液放置室温1小时,以1%的投料比(质量比)添加菌液到灭多
    威和速灭威混合溶液中(100μg/kg),同时做空白对照。两小时后将反应液离心,上清液过滤
    膜后经液相色谱质谱检测含量,结果经乳酸菌处理后,灭多威和速灭威在质谱上未出现提
    取离子峰,色谱图如附图2,说明已经被菌剂完全处理??瞻锥哉丈淄技酵?。

    除非另有说明,本发明中所采用的百分数均为体积百分数。

    以上所述为本发明最佳实施方式的举例,其中未详细述及的部分均为本领域普通
    技术人员的公知常识。本发明的?;し段б匀ɡ蟮哪谌菸?,任何基于本发明的技术
    启示而进行的等效变换,也在本发明的?;し段е?。

    关于本文
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