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    重庆时时彩中奖公布: HCV的杂二环抑制剂.pdf

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    HCV 杂二环 抑制剂
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    摘要
    申请专利号:

    CN200680009159.3

    申请日:

    2006.03.27

    公开号:

    CN101189234A

    公开日:

    2008.05.28

    当前法律状态:

    终止

    有效性:

    无权

    法律详情: 未缴年费专利权终止IPC(主分类):C07D 471/04申请日:20060327授权公告日:20110817终止日期:20160327|||授权|||实质审查的生效|||公开
    IPC分类号: C07D471/04(2006.01); A61K31/495(2006.01); A61P31/00(2006.01) 主分类号: C07D471/04
    申请人: 泰博特克药品有限公司;
    发明人: K·A·西门; S·查克拉瓦蒂; B·哈特; D·L·N·G·苏勒劳克斯; T·-I林; O·兰茨; P·J·-M·B·拉波伊森
    地址: 爱尔兰科克郡
    优先权: 2005.03.25 US 60/665,151; 2005.05.12 US 60/680,405
    专利代理机构: 中国专利代理(香港)有限公司 代理人: 邹锋;李连涛
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN200680009159.3

    授权公告号:

    |||101189234B||||||

    法律状态公告日:

    2017.05.10|||2011.08.17|||2008.07.23|||2008.05.28

    法律状态类型:

    专利权的终止|||授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    在式(I)嘧啶环C-4位上具有酰胺取代的吡啶基胺基的稠合二环嘧啶化合物可用于治疗与HCV有关的病况。

    权利要求书

    1: 化合物在制备用于治疗与丙型肝炎病毒有关的病况的药物中的 用途,其中所述化合物具有式(I): 或者其可药用盐或前药,其中: R 1 表示H或OH、或者任选被取代的烷基、烷氧基、杂烷基、氨 基、?;?、杂?;?、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基; R 2 表示H或者任选被取代的烷基、杂烷基、?;?、杂?;?、芳基、 杂芳基、芳烷基或杂芳烷基; B表示H或者可以被取代或未被取代的C1-C8?;?; 每个W、X、Y和Z独立地是C-H、C-J或N,条件是W、X、Y 和Z中不超过两个表示N; Ar表示任选被取代的苯基环; 每个J独立地表示卤素、OH、SH、或者任选被取代的烷基、烯 基、炔基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、芳基、?;?、杂?;蛟臃蓟?、 或者NR 1 R 2 、NO 2 、CN、CF 3 、COOR、CONR 2 或SO 2 R,其中每个R 独立地是H或者任选被取代的烷基、烯基、炔基、?;?、芳基、杂烷 基、杂烯基、杂炔基、杂?;蛟臃蓟?, 任意NR 1 R 2 中的R 1 和R 2 可以环化形成含有1-3个选自N、O和S 中的杂原子作为环成员且任选被取代的、可以是饱和、不饱和或芳香 性的3-8元环;以及 n是0-3; 条件是该化合物不是4-[2-(5-氯-2-氟苯基)-蝶啶-4-基氨基]-烟酰 胺。
    2: 权利要求1的用途,其中B是H。
    3: 权利要求1的用途,其中R 2 是H。
    4: 权利要求1-3中任意一项的用途,其中R 1 含有选自C=O、S=O、 P=O和C=N中的极性基团。
    5: 权利要求4的用途,其中R 1 是任选被取代的C1-C8烷基。
    6: 权利要求4的用途,其中R 1 含有任选被取代的C3-C6环烷基或 杂环基环。
    7: 权利要求5的用途,其中R 1 和R 2 环化形成含有1-3个选自N、 O和S中的杂原子的3-8元环。
    8: 权利要求5的用途,其中n是1或2,以及式(I)中吡啶基环上 的每个J选自:卤素、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、COOR、CONR 2 、 和NR 2 ,其中每个R独立地是H或者任选被取代的C1-C8?;?、C2- C8杂?;?、C1-C8烷基或C2-C8杂烷基。
    9: 权利要求8的用途,其中每个J独立地选自:卤素、甲基、CF 3 和OMe。
    10: 权利要求1或权利要求9的用途,其中所述含有W、X、Y 和Z的环未被取代。
    11: 权利要求1或权利要求9的用途,其中所述含有W、X和Z 的环被取代。
    12: 权利要求11的用途,其中所述含有W、X、Y和Z的环是碳 环。
    13: 权利要求11任何一项的用途,其中W、X、Y和Z中至少一 个表示N。
    14: 权利要求12或权利要求13的用途,其中所述含有W、X、Y 和Z的环被至少一个基团J取代,其中J含有被取代或未被取代的氨 基。
    15: 权利要求14的用途,其中W和Z中至少一个表示N。
    16: 权利要求13的用途,其中Y表示C-J。
    17: 权利要求16的用途,其中Y表示C-J,且其中所述C-J中的 J含有任选被取代的氨基。
    18: 权利要求1-17中任意一项的用途,其中Ar是被取代的苯基。
    19: 权利要求1-17中任意一项的用途,其中Ar是被至少一个卤 素取代的苯基。
    20: 权利要求19任何一项的用途,其中Ar是被两个或多个卤素 取代基取代的苯基。
    21: 权利要求20的用途,其中Ar是具有位于2-位上的取代基的 苯基。
    22: 权利要求21的用途,其中Ar是2,5-二卤代苯基。
    23: 权利要求1的用途,其中所述化合物具有式(II) 或者其可药用盐或前药,其中 R 1 、R 2 、B、Ar、J和n如权利要求1中定义;以及 Y是C-H或C-J。
    24: 一种治疗温血动物中与丙型肝炎病毒有关的病况的方法,所 述方法包括施用有效量的如权利要求1-23中任意一项定义的式(I)或(II) 化合物。

    说明书


    HCV的杂二环抑制剂

        【发明领域】

        本发明涉及治疗与丙型肝炎感染有关的病症的方法。更具体地说,本发明涉及某些可用于上述方法中的在嘧啶环上具有酰胺取代的4-吡啶基胺基的稠合二环嘧啶化合物。

        背景技术

        转化生长因子-β(TGFβ)是指包括例如TGFβ1、TGFβ2和TGFβ3的蛋白质超家族,它是细胞生长和分化、胚胎和骨发育、胞外基质形成、血细胞生成以及免疫和炎症应答的多效调节剂(Roberts和Sporn,Handbook?of?Exrperimental?Pharmacology(1990)95:419-58;Massague等人,Ann.Rev.Cell.Biol.(1990)6:597-646)。该超家族的其它成员包括活化素、抑制素、骨形成蛋白和米勒氏抑制物质。TGFβ家族的成员启动细胞内信号传导途径,最终导致调节细胞周期、控制增殖响应或者与介导内外细胞信号传导、细胞粘着、迁移和胞间联系的胞外基质相关的基因表达。

        因此,TGFβ细胞内信号传导的抑制剂可用于治疗纤维增殖性疾病。具体地说,纤维增殖性疾病包括与TGFβ活性失调和纤维样变性过度相关的肾脏病症包括肾小球肾炎(GN),例如肾小球系膜增殖性GN、免疫性GN和新月形GN。其它肾脏病况包括糖尿病性肾病变、肾间质性纤维变性、服用环孢素的移植患者的肾纤维化以及与HIV有关的肾病。胶原质血管障碍包括进行性系统性硬化症、多发性肌炎、硬皮病、皮肌炎、嗜酸性筋膜炎、硬斑病或者与出现Raynaud’s综合征有关的障碍。由TGFβ活性过度导致的肺纤维化包括成人呼吸窘迫综合征、慢性阻塞性肺病(COPD)、特发性肺纤维化以及通常与自身免疫性病症有关的间质性肺纤维化,例如系统性红斑狼疮和硬皮病、化学接触或变态反应。与纤维增殖性特征有关的另一种自身免疫性障碍是类风湿性关节炎。

        纤维增殖性病况可能与外科眼手术有关。这类手术包括伴发增殖性玻璃体视网膜病变的视网膜复置术、眼内晶状体植入的白内障摘出术和青光眼后导液手术。

        此外,TGFβ家族成员与各种癌症进展有关。M.P.de?Caestecker,E.Piek,和A.B.Roberts,J.National?Cancer?Inst.,92(17),1388-1402(2000)。例如,已经发现TGFβ1抑制肿瘤的形成,其可能是通过抑制非转化细胞增殖实现的。然而,一旦肿瘤形成,TGFβ1就促进肿瘤的生长。N.Dumont和C.L.Arteaga,Breast?Cancer?Res.,Vol.2,125-132(2000)。因此,TGFβ途径的抑制剂还可以用于治疗多种形式的癌症,例如肺癌、皮肤癌和结肠直肠癌。特别地,它们可用于治疗乳腺癌、胰腺癌和脑瘤包括神经胶质瘤。

        本文中的本发明化合物是具有与嘧啶稠合的其它环的嘧啶衍生物。PCT出版物WO01/47921描述了嘧啶和三嗪化合物,它们是与各种炎症有关的激酶活性的抑制剂,而不是治疗本文所述的纤维增殖性障碍。上述PCT出版物描述了所公开化合物仅仅用于治疗某些自身免疫性疾病的炎症方面的用途。另外,所述化合物区别于本文所述化合物之处在于嘧啶核心上所需的取代;其它方面的区别在于该PCT出版物中公开的化合物不包括与嘧啶环直接相连的苯基。

        其中一些在嘧啶C-4上具有4-吡啶基胺基的相关化合物公开于两篇已公开的公开号为US2004-013159-A1和US2005/0004143-A1的美国专利申请中。然而,这两篇申请指出优选在4-吡啶基胺基的吡啶环上具有某些供电子取代基,包括烷基、胺基和烷氧基,而没有公开取代基的优选位置。本发明提供了具体包括含有连接在吡啶环3位上的主要羧酰胺基团的4-吡啶基胺的化合物。

        美国专利号6,476,031还公开了含有喹唑啉环的化合物,其可以是嘧啶的稠合二环衍生物;其中包括喹唑啉环在该喹唑啉C-4上与芳基相连的化合物。据报道这些化合物作用于TGFβ位置,因此这些化合物可以包括作为芳基连接于喹唑啉C-4上的4-吡啶基胺基。然而,该专利仅仅公开了与未被取代的吡啶基相连的喹唑啉化合物:其中并没有公开任何具有包括酰胺取代基的4-吡啶基的化合物,例如位于本发明化合物中4-吡啶基3-位上的酰胺取代基。

        【发明内容】

        本发明涉及可用于治疗其特征在于TGFβ活性过度的病况的方法、组合物和新化合物。这类病况最主要是纤维增殖性疾病,例如与丙型肝炎病毒感染有关的病况,以及某些癌症。然而,可以使用本发明化合物和方法的病况包括任何其特征在于TGFβ活性水平不希望地高的病况。据发现本发明化合物可以抑制TGFβ,因而可用于治疗由上述因子家族活性介导的疾病。本发明化合物为式(I)化合物:

        或者其可药用盐或前药,其中:

        R1表示H或OH、或者任选被取代的烷基、烷氧基、杂烷基、氨基、?;?、杂?;?、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基;

        R2表示H或者任选被取代的烷基、杂烷基、?;?、杂?;?、芳基、杂芳基、芳烷基或杂芳烷基;

        B表示H或者可以被取代或未被取代的C1-C8?;?;

        每个W、X、Y和Z独立地是C-H、C-J或N,条件是W、X、Y和Z中不超过两个表示N;

        Ar表示任选被取代的苯基环;

        每个J独立地表示卤素、OH、SH、或者任选被取代的烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、芳基、?;?、杂?;蛟臃蓟?、或者NR1R2、NO2、CN、CF3、COOR、CONR2或SO2R,其中每个R独立地是H或者任选被取代的烷基、烯基、炔基、?;?、芳基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂?;蛟臃蓟?,

        任意NR1R2中的R1和R2可以环化形成含有1-3个选自N、O和S中的杂原子作为环成员、且任选被取代的、可以是饱和、不饱和或芳香性的3-8元环;以及

        n是0-3;

        条件是该化合物不是4-[2-(5-氯-2-氟苯基)-蝶啶-4-基氨基]-烟酰胺:

        本发明还涉及含有一种或多种式(I)化合物或者其可药用盐或前药形式作为活性成分的药物组合物,以及使用式(I)化合物或含有这类化合物的组合物治疗其特征在于TGFβ活性水平过度的病况,特别是纤维增殖性病况的方法。

        完成本发明的方式

        式(I)化合物可用于治疗其特征在于TGFβ活性水平过度的病况。本文使用的“TGFβ”是指下述超家族,其中包括TGFβ1、TGFβ2和TGFβ3以及该家族的已知的或出名的其它成员,例如抑制素、骨形成蛋白等。该家族中的一种或多种成员在使用本发明化合物缓解或预防的病况中可以比所希望的更具活性。

        “其特征在于TGFβ活性水平过度”的病况包括其中刺激TGFβ合成使得TGFβ以更高的含量存在的病况、其中TGFβ潜在性蛋白被不适当地活化或转化为活性TGFβ蛋白的病况、其中TGFβ受体受到正调节的病况、以及其中TGFβ蛋白在疾病部位显示出结合细胞或胞外基质的病况。因此,在每种情形中,“TGFβ活性水平过度”是指其中TGFβ活性不适当地高的任何病况,不管出于何种原因以及TGFβ实际含量或活性是否处于‘正?!段?。

        此外,本发明化合物显示出对抗丙型肝炎病毒的抗病毒活性。

        本发明化合物

        用于本发明中的化合物是嘧啶在相应于嘧啶环2-和4-位的位置上含有必需取代基的稠合二环衍生物。该二环嘧啶进一步在嘧啶环5和6位上具有与嘧啶稠合的其它芳香性环。它们进一步包括位于嘧啶环4位上的4-吡啶基胺基和位于嘧啶环2位上的苯基。任选地,该4-吡啶基可以是吡啶-N-氧化物。该化合物进一步包括通过其羰基碳连接于吡啶基环3位上的酰胺基。嘧啶、吡啶和苯基环以及与嘧啶稠合的芳香环上还可以包括其它取代基。

        本文使用的术语“烷基”、“烯基”和“炔基”包括直链、支链和环状一价烃基及其组合,当它们未被取代时,其中仅仅含有C和H。实例包括甲基、乙基、异丁基、环己基、环戊基乙基、2-丙烯基、3-丁炔基等。每个这类基团中的碳原子总数往往如本文所述,例如1-10C或C1-C10是指该基团可以含有至多10个碳原子。当允许杂原子(通常是N、O和S)替代碳原子时,例如在杂烷基情况下,描述该基团的数目表示基团中的碳原子数目加上所包括的用于替代碳原子的上述杂原子数目之和。

        通常,本发明中的烷基、烯基和炔基取代基含有1-10C(烷基)或2-10C(烯基或炔基)。优选它们含有1-8C(烷基)或2-8C(烯基或炔基)。往往它们含有1-4C(烷基)或2-4C(烯基或炔基)。单一基团可以包括不止一种类型的重键或者不止一个重键;这类基团当含有至少一个碳碳双键时,包括在术语“烯基”定义内,以及当含有至少一个碳碳叁键时,包括在术语“炔基”定义内。

        烷基、烯基和炔基通常被取代至在化学上认为合理的取代程度。典型的取代基包括但不限于卤素、=O、=N-CN、=N-OR、=NR、OR、NR2、SR、SO2R、SO2NR2、NRSO2R、NRCONR2、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、CONR2、OOCR、COR和NO2,其中每个R独立地是H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C1-C8?;?、C2-C8杂?;?、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C6-C10芳基或C5-C10杂芳基,且每个R任选被卤素、=O、=N-CN、=N-OR’、=NR’、OR’、NR’2、SR’、SO2R’、SO2NR’2、NR’SO2R’、NR’CONR’2、NR’COOR’、NR’COR’、CN、COOR’、CONR’2、OOCR’、COR’、和NO2取代,其中每个R’独立地是H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C1-C8?;?、C2-C8杂?;?、C6-C10芳基或C5-C10杂芳基。

        “杂烷基”、“杂烯基”和“杂炔基”被类似地定义为相应的烃基(烷基、烯基和炔基),但是‘杂’术语是指在骨架残基中含有1-3个O、S或N杂原子或其组合的基团;因此相应烷基、烯基或炔基中的至少一个碳原子被一个指定杂原子替代形成杂烷基、杂烯基或杂炔基。烷基、烯基和炔基杂型(heteroform)的一般和优选大小与相应的烃基相同,可以存在于杂型上的取代基与前面对烃基描述的相同?;褂Φ崩斫獬橇硗庵赋?,为了具有化学稳定性,这类基团不合有超过两个的相邻的杂原子,除非其中氧代基存在于N或S上形成硝基或磺?;?。

        在本文使用的“烷基”包括环烷基和环烷基烷基时,术语“环烷基”在本文中可用于描述通常通过环碳原子相连的碳环非芳香性基团,以及“环烷基烷基”可用于描述通过烷基连接基团与分子相连的碳环非芳香性基团。类似地,“杂环基”可用于描述含有至少一个通常通过环原子与分子相连的杂原子作为环成员的非芳香性环状基团,其中环原子可以是C或N;以及“杂环烷基”可用于描述通过连接基团与另一分子相连的基团。适合于环烷基、环烷基烷基、杂环基和杂环基烷基的大小和取代基与前面对烷基描述的相同。本文使用的这些术语还包括含有一个或两个双键的环,只要该环不具有芳香性。

        本文使用的“?;卑ê辛佑隰驶荚由狭礁隹赡芗畚恢簧系耐榛?、烯基、炔基、芳基或芳烷基的基团,杂?;侵钙渲兄辽僖桓龇囚驶嫉奶急谎∽訬、O和S中的杂原子替代的相应基团。因此,杂?;ɡ?C(=O)OR和-C(=O)NR2以及-C(=O)-杂芳基。

        ?;驮吁;牒退窍嗔娜我饣呕蚍肿油ü驶荚拥目呕霞?open?valence)结合。其通常为C1-C8?;柞;?、乙?;?、新戊?;捅郊柞;?,C2-C8杂?;籽跻阴;?、乙氧羰基和4-吡啶?;?。含有?;蛟吁;奶?、芳基以及这类基团的杂型可以被本文所述的通常适合?;蛟吁;扛鱿嘤Τ煞值娜〈娜〈〈?。

        “芳香性”部分或“芳基”部分是指具有众所周知的芳香特性的单环或稠合二环部分;实例包括苯基和萘基。类似地,“杂芳香性”部分和“杂芳基”部分是指所述的含有一个或多个选自O、S和N中的杂原子作为环成员的单环或稠合二环环系。杂原子的引入可以使得5-元环和6-元环具有芳香性。典型的杂芳香性体系包括单环C5-C6芳香性基团,例如吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡唑基、噻唑基、唑基和咪唑基,以及通过稠合上述单环基团之一与苯基环或者与任意一种杂芳香性单环基团形成C8-C10二环基团形成的稠合二环部分,例如吲哚基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并三唑基、异喹啉基、喹啉基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、吡唑并吡啶基、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基等。从整个环系的电子分布来看,具有芳香特性的任意单环或稠合二环环系均包括在该定义内。它还包括其中至少与分子剩余部分直接相连的环具有芳香特性的二环基团。通常,该环系含有5-12个环成员原子。优选单环杂芳基含有5-6个环成员,二环杂芳基含有8-10个环成员。

        芳基和杂芳基部分可以被各种取代基取代,包括卤素、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、OR、NR2、SR、SO2R、SO2NR2、NRSO2R、NRCONR2、NRCOOR、NRCOR、CN、COOR、CONR2、OOCR、COR和NO2,其中每个R独立地是H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C2-C8烯基、C2-C8杂烯基、C2-C8炔基、C2-C8杂炔基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12芳烷基或C6-C12杂芳烷基,以及每个R如上述对烷基所述的那样任选被取代。

        类似地,“芳烷基”和“杂芳烷基”是指与其连接点通过连接基团例如亚烷基相结合的芳香性或杂芳香性环系,包括被取代或未被取代的、饱和或不饱和的环状或非环状连接基团。该连接基团通常为C1-C8烷基或其杂型。这些连接基团还可以包括羰基,因此使得其能够形成例如?;蛟吁;糠值娜〈?。芳烷基或杂芳烷基中的芳基或杂芳基环可以被与前面针对芳基所述相同的取代基取代。优选芳烷基包括任选被前面针对芳基所述基团取代的苯基环和未被取代或者被一个或二个C1-C4烷基或杂烷基取代的C1-C4亚烷基,其中烷基或杂烷基可以任选环化形成例如环丙烷、二氧杂环戊烷或氧杂环戊烷的环。类似地,杂芳烷基优选包括任选被上述作为芳基上的典型取代基的基团取代的C5-C6单环杂芳基和未被取代或者被一个或多个C1-C4烷基或杂烷基取代的C1-C4亚烷基,或者包括任选被取代的苯基环或C5-C6单环杂芳基和未被取代或者被一个或二个C1-C4烷基或杂烷基取代的C1-C4杂亚烷基,其中烷基或杂烷基可以任选环化形成例如环丙烷、二氧杂环戊烷或氧杂环戊烷的环。

        当芳烷基或杂芳烷基被描述为任选被取代时,则取代基可以位于基团的烷基或杂烷基部分或者芳基或杂芳基部分上。任选位于烷基或杂烷基部分上的取代基通常与前面针对烷基概述的相同;任选位于芳基或杂芳基部分的取代基通常与前面针对芳基概述的相同。

        本文使用的“芳烷基”如果未被取代的话,则是烃基,其通过环和亚烷基或类似连接基团中的碳原子总数来描述。因此,苄基为C7-芳烷基,苯乙基为C8-芳烷基。

        上述“杂芳基烷基”是指含有通过连接基团相连的芳基的部分,其区别于“芳烷基”之处在于芳基部分中的至少一个环原子或连接基团中的至少一个原子是选自N、O和S中的杂原子。杂芳烷基在本文中通过环以及所包括的连接基团中的原子总数来描述,它们包括通过杂烷基连接基团连接的芳基;通过烃基连接基团例如亚烷基连接的杂芳基;以及通过杂烷基连接基团连接的杂芳基。因此,例如C7-杂芳烷基应该包括吡啶基甲基、苯氧基和N-吡咯基甲氧基。

        本文使用的“亚烷基”是指二价烃基;因为是二价,因此可以同时连接两个其它基团。其通常是指一(CH2)n-,其中n是1-8,优选n是1-4,尽管已经具体指明,但是亚烷基还可以被其它基团取代,因而可能具有其它长度,并且开放化合价不一定位于链的相对侧。因此,-CH(Me)-和-C(Me)2-也可以称作亚烷基,可以是环状基团例如环丙烷-1,1-二基。当亚烷基被取代时,取代基包括那些通常出现在本文所述烷基上的取代基。

        一般来说,包含在取代基中的任何烷基、烯基、炔基、?;?、芳基或芳烷基或者上述基团之一的任意杂型自身可以任选被另外的取代基取代。如果这些取代基未被另外描述的话,其性质类似于主要取代基本身。因此,在例如R7是烷基的实施方案中,该烷基可以任选被实施方案针对R7所列举的其它取代基取代(只要在化学上是可行的),这并未脱离烷基自身的大小限制;例如被烷基或烯基取代的烷基仅仅简单地是扩大了这些实施方案中的碳原子的上限,因而未被包括在内。然而,被芳基、氨基、烷氧基、=O等取代的烷基应当包括在本发明范围内,这些取代基中的原子未被计算在用于描述正在描述的烷基、烯基等基团的数目之内。在未具体指明取代基数目时,每个所述烷基、烯基、炔基、?;?、或芳基可以根据其可能化合价被多个取代基取代;具体地说,例如,任何一个上述基团可以被氟原子以任意的或者全部可能的化合价取代。

        本文使用的“杂型”是指基团例如烷基、芳基或?;难苌?,其中指定碳环基团中的至少一个碳原子被选自N、O和S中的杂原子替代。因此,烷基、烯基、炔基、?;?、芳基和芳烷基的杂型分别是杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂?;?、杂芳基和杂芳烷基。应该理解的是,通常没有超过两个的N、O或S原子依次相连,除非氧代基团与N或S相连形成硝基或磺?;?。

        本文使用的“任选被取代”是指所描述的一个或多个特定基团可以具有非氢取代基,或者该一个基团或多个基团可以具有一个或多个非氢取代基。如果未另外指明,可存在的这些取代基总数等于所述基团未被取代的形式存在的H原子数目。当任选的取代基通过双键例如羰基氧(=O)相连时,该基团接纳两个可能的化合价,从而使得减少了可被包括的取代基总数。

        本文使用的“卤素”包括氟、氯、溴和碘。通常优选氟和氯。

        本文使用的“氨基”是指NH2,但是氨基被描述为“被取代的”或“任选被取代的”,该术语包括NR’R”,其中每个R’和R”独立地是H,或者是烷基、烯基、炔基、?;?、芳基、芳烷基或者这些基团之一的杂型,且每个烷基、烯基、炔基、?;?、芳基、芳烷基或者这些基团之一的杂型任选被本文所述的适合相应基团的取代基取代。该术语还包括其中R’和R”连接形成可以是含有1-3个独立选自N、O和S中的杂原子作为环成员的饱和、不饱和或芳香性3-8元环的形式,且其任选被所述的适合烷基的取代基取代,或者如果NR’R”是芳香基团的话,其任选被针对杂芳基所述的典型取代基取代。

        本发明化合物包括嘧啶环以及稠合在嘧啶C5和C6位上的另一6元芳香环。嘧啶的C2位被在式(I)中称作Ar的任选被取代的苯基占据。嘧啶的C4位通过氮连接基团与吡啶环的C-4碳相连。吡啶在吡啶基环的3位上被酰胺基团取代,并且还可以氧化成为其N-氧化物。其任选被至多3个取代基J取代。在优选实施方案中,吡啶未被氧化(m=0)。

        取代基J可以出现在式(I)中吡啶环的任意或者所有未被特意另外占据的位置上。因此,式(I)中的n可以是0-3。在很多优选实施方案中,n是0;在部分实施方案中,n是1或2。

        式(I)中J的典型实施方案包括本文针对芳基概述的取代基。J的优选实施方案包括CF3和CN、以及卤素、C1-C4烷基、OR、SR和NR2,其中每个R独立地是H或C1-C4烷基或C1-C4杂烷基,其中每个烷基或杂烷基任选被上文针对烷基所述的取代基取代,且其中N上的两个R基团可以任选环化形成含有一个或两个选自N、O和S中的杂原子作为环成员的3-8元环。每次J出现时,通常优选为卤素、甲基、甲氧基和CF3。

        Ar表示可以未被取代的苯基,但是其通常被至少一个、优选两个或多个选自下述的取代基取代:卤素、C1-C4烷基、CN、CF3、OR、NO2、COOR、CONR2、SO2R、NR2和C1-C8?;?,其中每个R独立地是H、C1-C4烷基、C1-C8?;駽2-C8杂?;?。在某些实施方案中,Ar被一个或两个取代基取代。

        Ar上的取代基可以位于苯基环任何可能的位置上,但是通常一个取代基占据与Ar通过其与嘧啶环相连的原子相邻的环位置。为方便起见,将苯基环上与式(I)中嘧啶环相连的位置称作位置1,苯基环上的其它位置相对于该位置编号。优选实施方案通常包括Ar为被至少一个卤素取代基取代的苯基环,该卤素取代基可以位于苯基的2位上。优选实施方案包括苯基环被两个可以都是卤素的基团取代。有时特别优选2,5-二卤代苯基,特别是其中每个卤素是F或Cl;尤其优选2-氟-5-氯苯基。

        式(I)中吡啶环上的羧酰胺与取代基R1和R2相连,其具体在吡啶基环的3位。R1和R2的选择对于其对TGFβ抑制剂化合物的内在活性的影响具有重要作用,同时还可能强烈影响其与生物利用度相关的性质。在部分实施方案中,R1是H、OH或NH2;在其它实施方案中,R1是任选被取代的烷基、杂烷基、烷氧基、氨基、?;?、杂?;?、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基基团。R1通常为C1-C8烷氧基、氨基、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C7-C12-芳烷基或C6-C12杂芳烷基,其中每个上述基团除了H之外任选被本文所述的适合这类基团的取代基取代。

        构成R1的基团的优选取代基包括卤素、OH、NH2、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、CN、单-和二-(C1-C8)-烷基胺、COOR、CONR2、-NC(O)R、-C(O)NR2、-NRC(O)OR、SO2R、SO2NR2以及如果可能的原子价允许的话,还包括=O、=N-OR、=N-CN和=N-R。这些取代基中的每个R独立地是H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、C6-C10芳基、C5-C10杂芳基、C1-C8?;駽2-C8杂?;?。R1的优选实施方案包括H、C1-C8烷氧基、NH2、C1-C8烷基和C2-C8杂烷基,其中每个烷基或杂烷基任选如前面所述那样被取代。通常,R1和R2中至多一个是H,因此在很多实施方案中,该酰胺是仲或叔酰胺。

        在式(I)化合物中,R2是H或者任选被取代的烷基、?;?、杂?;?、芳基、杂芳基、芳烷基或杂芳烷基。在部分实施方案中,R2是H或C1-C8烷基,在其它实施方案中,是C1-C8?;駽2-C8杂?;蛘逤7-C12芳烷基或C6-C12杂芳烷基;在每个其中R2不是H的上述实施方案中,R2所示的基团任选被前面针对R1所述的取代基取代。更优选的实施方案为其中R2表示H或任选被取代的C1-C8烷基者,且通常优选R2=H者。当R2不是H时,其优选的取代基包括卤素、OR、NR2、COOR和CONR2,其中每个R独立地是H、C1-C4烷基或C1-C4杂烷基。

        在部分实施方案中,-C(=O)NR1R2中的R1和R2,R1可以环化形成可以含有1-3个选自N、O和S中的杂原子作为环成员、可以是饱和、不饱和或芳香性的且可以被取代的3-8元环。在部分优选实施方案中,R1和R2环化形成含有除了连接R1和R2的N之外的0或1个杂原子的饱和或不饱和3-6元环。在其它优选实施方案中,R1和R2环化形成含有除了连接R1和R2的N之外的1个或是O或是N的杂原子的饱和6-元环。

        在每种情形中,通过连接NR1R2中的R1和R2形成的任何环,如果所形成的环是非芳香性的话,则任选被本文描述的适合烷基的取代基取代,如果通过连接R1和R2所形成的环是芳香性的话,则任选被前面描述的适合芳基的取代基取代。通过R1和R2当环化时所形成的环的优选取代基包括C1-C4烷基、OR、NR2、COOR、CONR2、=O、苯基和苯基-(CH2)1-4-,其中每个R独立地是H或者任选被前面描述的适合烷基的取代基的基团取代的C1-C4烷基,且每个苯基任选被前面描述的适合芳基的取代基取代。

        在部分实施方案中,R1或R2包括至少一个含有C=O、S=O、P=O或C=N的亚结构,在部分实施方案中,R1和R2中的至少一个含有-OH或-NH或者未被?;氖灏?,使得其可用用作氢键受体。在部分选自以降低酰胺部分代谢可能性的实施方案中,R2是H且式(I)中-C(=O)-NR1R2所示的酰胺基团不是式-C(=O)-NH-CH2-CH(OH)-R,其中R是H或者可以被取代的烃基??沙鱿衷赗1和/或R2中的亚结构的实例包括醚类、胺类、醇类、酯类、酰胺类、氨甲酸酯类、酮类、砜类、磺酰胺类、磷酸酯类、多羟基化烷基或环烷基包括单糖衍生物、脒类、肟类、胍类、氰基胍类等。在部分实施方案中,式(I)化合物中包括至少一个、优选两个上述极性基团。

        式(I)中的B可以是H或者任选被取代的C1-C8?;?。在部分实施方案中,B是H。当B是?;?,该化合物可以作为前药,在代谢或化学水解裂解除去?;笫头懦銎渲蠦是H的化合物。

        式(I)中的每个W、X、Y和Z独立地是CH、CJ或N,条件是W、X、Y和Z中不多于两个表示N。因此,W、X、Y和Z以及与W和Z相连的嘧啶环碳原子一起组合形成具有芳香性的6元环。在部分优选实施方案中,W、X、Y和Z中至少一个是N,在其中部分实施方案中,W、Z中至少一个是N。在部分实施方案中,Z是N,同时W、X和Y每个独立地表示CH或CJ,在其它实施方案中,W和Z各自是N且X和Y各自表示CH或CJ。某些实施方案中,W、X、Y和Z各自独立地表示CH或C-J,从而形成碳环,其与嘧啶环稠合形成喹唑啉核。含W、X、Y和Z的环的每种实施方案任选如本文描述的那样被取代。

        优选实施方案包括其中含有W、X和Z的稠合环是苯基或吡啶基者,且其中的每个任选如本文描述的那样被取代。该环有时更优选为吡啶基,特别是当Z或W表示吡啶基环氮时。

        含有W、X、Y和Z的稠合环的其它优选实施方案是吡嗪,其中W和Z均是N,且X和Y各自表示CH或CJ。

        在部分优选实施方案中,所提及的优选的芳香性稠合环被至少一个基团取代,例如卤素、任选被取代的C1-C8烷基、COOR、CONR2、OR或NR2,其中每个R独立地是H、C1-C8烷基或C2-C8杂烷基,且每个含有R的烷基或杂烷基任选被前面针对烷基定义的取代基取代。因此,在这些实施方案中,W、X、Y和Z中的至少一个表示C-J,同时其它表示N或CH。在这样的实施方案中,有时优选J含有NH;在部分实施方案中,J含有的NH直接与基团C-J中的碳原子相连。

        在式(I)化合物的部分实施方案中,Y表示C-J,其中J含有胺、酰胺或氨基甲酸酯基团。特别是当Z表示N时,Y通常为C-J,也就是被取代的碳。在这类实施方案中的J可以是本文所述的适合芳香环的取代基的任意基团时,在很多实施方案中,特别是当Z表示N时,Y表示C-J,其中J是胺或者被取代的胺基团。典型的实例包括NH2、C1-C4单烷基胺,其中烷基可以被例如一个或两个C1-C4烷氧基、氨基、C1-C4烷基氨基或二-(C1-C4)-烷基氨基取代。在每种情形中,当出现二烷基氨基时,其可以表示环状基团,例如可以被取代的吡咯烷、哌啶、吗啉等。在其它实施方案中,当Y表示C-J时,J可以是芳烷胺基例如苄氨基取代基;且该苄基如果位于苯基部分的话,可以被本文描述的常用来针对芳基环的基团取代,如果位于芳烷基的亚烷基部分的话,可以被适合烷基的任何基团取代。在这类实施方案中,苄基中苯基环上的优选取代基包括卤素、CF3、C1-C4烷基和C1-C4烷氧基。

        如上所述,除非另外指明,包括在取代基中的任何芳基、烷基、杂芳基、杂烷基、?;?、杂?;?、芳烷基或杂芳烷基自身可以被前面描述的适合这类芳基、烷基、?;蚍纪榛娜〈〈?。这些取代基可以占据基团的任何可能的位置,优选1-2位,更优选仅仅在一个位置上。

        当两个取代基出现在同一原子上时,例如但不限于胺或酰胺的NR2,只要在化学上合理,这两个取代基可以一起连接形成环。这类环可以是饱和或不饱和的,且如果对于连接成环的取代基而言允许取代的话可以进一步被取代。特别预期了一个N上的R1和R2或者任何两个R基团可以环化形成可以含有1-3选自N、O和S中的杂原子、且可以任选被针对取代基或连接形成环的R基团所述的取代基取代、以及可以是饱和或不饱和的3-8元环。

        在任何芳基或环状基团部分,包括式(I)中所示的任何芳基或环状基团部分,特别是苯基部分,可以任选含有至少两个取代基时,如果这些取代基占据环上的相邻位置或者它们占据在同一原子上的话,则它们还可以一起连接形成含有1-3选自N、O和S中的杂原子的5-7元碳环或杂环。这类环的实例包括与苯基环稠合的二氧戊环;与吡啶环稠合的唑;1,2-二醇或1,3-二醇的丙酮化合物;以及环状缩酮。

        本发明实施方案涉及式(II)的吡啶并[2,3-d]嘧啶化合物

        或者其可药用盐或前药,其中:

        R1表示H或OH或者任选被取代的烷基、烷氧基、杂烷基、氨基、?;?、杂?;?、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基;

        R2表示H或者任选被取代的烷基、杂烷基、?;?、杂?;?、芳基、杂芳基、芳烷基或杂芳烷基;

        B表示H或者可以被取代或未被取代的C1-C8?;?;

        Y是C-H或C-J;

        Ar表示任选被取代的苯基环;

        每个J独立地表示卤素、OH、SH、或者任选被取代的烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、芳基、?;?、杂?;蛟臃蓟?、或者NR1R2、NO2、CN、CF3、COOR、CONR2、或SO2R,其中每个R独立地是H或者任选被取代的烷基、烯基、炔基、?;?、芳基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂?;蛟臃蓟?,

        任何NR1R2中的R1和R2可以环化形成含有1-3选自N、O和S中的杂原子作为环成员且任选被取代的可以是饱和、不饱和或芳香性的3-8元环;以及

        n是0-3。

        本发明的其它实施方案涉及式(III)的吡啶并[2,3-d]嘧啶化合物

        或者其可药用盐或前药,其中:

        R1表示H或OH或者任选被取代的烷基、烷氧基、杂烷基、氨基、?;?、杂?;?、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基;

        R2表示H或者任选被取代的烷基、杂烷基、?;?、杂?;?、芳基、杂芳基、芳烷基或杂芳烷基;

        B表示H或者可以被取代或未被取代的C1-C8?;?;

        Y是C-H或C-J;

        R3表示H或卤素;

        R4表示卤素;

        每个J独立地表示卤素、OH、SH、或者任选被取代的烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、芳基、?;?、杂?;蛟臃蓟?、或者NR1R2、NO2、CN、CF3、COOR、CONR2、或SO2R,其中每个R独立地是H或者任选被取代的烷基、烯基、炔基、?;?、芳基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂?;蛟臃蓟?。

        本发明化合物可以以其可药用酸加成盐形式供应,包括无机酸例如盐酸、硫酸、氢溴酸或磷酸的盐或者有机酸例如乙酸、酒石酸、琥珀酸、苯甲酸、水杨酸、柠檬酸、烷基磺酸、芳基磺酸和葡萄糖醛酸等的盐。如果本发明化合物存在羧基部分的话,则化合物还可以以可药用阳离子的盐例如钠、钾或铵盐形式供应。

        本发明化合物还可以以“前药”形式供应,将其设计成在向受试者给药时释放出本发明的化合物。前药设计是本领域众所周知的,取决于本发明化合物中包含的取代基。例如,含有巯基的取代基可以与载体偶联,这种载体使化合物变成生物学上无活性的,直到被内源性酶或者例如靶向作用于受试者中特定受体或特定位置的酶除去。类似地,在本发明范围内,可以使用酯和酰胺连接来掩盖活性分子中的羟基、氨基或羧基,这类基团在体内可以酶促裂解释放出活性分子。在式(I)的具体范围中,B可以表示根据其以适当的速率体内水解的能力进行选择的?;?;因此B可以是乙?;蚣柞;?,或者式(I)中的B-N可以是由氨基酸或二肽的羧酸酯形成的酰胺,后者每一个可以方便地由式(I)中的两个杂芳基环侧面相连的氮水解得到。因此,其中B是?;恼饫圊0肥屎嫌米饔糜诘菟推渲蠦是H的式(1)化合物的前药。

        即使本发明化合物的任何一个取代基中含有手性中心或旋转异构体(阻转异构体),视需要本发明也包括它们的每种立体异构形式,可以为分离后的立体异构体,也可以是这些立体异构形式的混合物中的组分形式。这类立体异构体的混合物可以是外消旋的,也可以以其中存在单一手性中心的一对对映异构体中的一种对映异构体形式富集。如果存在不止一个立体异构中心的话,则本发明包括其中中心之一或每个中心以一种立体异构形式富集或者其中中心都不以一种立体异构形式富集的混合物。

        本发明化合物的合成

        可以使用多种合成路线制备本发明化合物。一般来说,它们可以由常规起始原料使用本领域已知的反应合成。适合合成大部分本发明化合物的具体路线和反应描述在美国专利No6,476,031和已公开PCT申请WO2004/024159以及已公开US申请US2005/0004143A1、已公开PCT申请US2004/032430中,在此将其关于这类方法的内容全部引入作为参考。

        通常,稠合环系由相应于式(1)中的含有W、X、Y和Z的环的芳基环的构建;具有与胺或离去基团相邻的?;诺姆蓟房捎糜谝氚?。芳香环中的?;庞糜邗;交?,后者的苯基相应于式(1)中的Ar。然后在已知条件下实现环化,生成具有4-羟基嘧啶的稠合环系。缩合反应的一种实例在下面的流程图5中示例说明。然后如流程图1所示,将羟基转化为卤素(例如Cl或I),后者用4-氨基吡啶衍生物置换。

        流程图1.连接4-氨基吡啶与二环嘧啶的一般方法

        流程图1示出了如何将4-羟基嘧啶转化为4-卤嘧啶,后者随后与4-氨基吡啶偶联。使用钯催化剂进行偶联,在某些情形中可以使用4-氯嘧啶衍生物完成,而在某些情形中也可以使用4-碘代衍生物完成。

        当将吡啶加入至嘧啶中时,必需的3-羧酰胺基团可以位于4-氨基吡啶上,或者如流程图1所示,吡啶基可以含有位于3-位上的酯。在该情形中,在建立吡啶基之后,酯可以用碱水解形成羧酸。所述羧酸可以方便地通过本领域熟知的用于形成酰胺键的方法与各种各样的胺基团偶联,如流程图2所示。由于可使用的胺很多并且该酰胺形成反应也具有通用性,因此该方法可以获得种种本发明化合物。

        流程图2.将酯转化为式(I)的羧酰胺。

        或者,可以在吡啶环上形成酰胺,然后将其与嘧啶偶联。这类3-羧酰胺-4-氨基吡啶的制备如流程图3a和3b所示。

        流程图3a.制备3-羧酰胺-4-氨基吡啶。

        流程图3a提供了制备吡啶基核及其上面进一步进行取代反应的路线。尽管R取代基在上面的流程图中例举如氢或甲基,但是其还可以包括在R1和R2定义下列举的其它取代基。

        流程图3b.3-羧酰胺-4-氨基吡啶的替代性制备。

        制备3-羧酰胺-4-氨基吡啶的替代性方法如流程图3b所示,使用氮杂衣托酸酐。

        很多方法都可以用来制备该途径所需要的起始原料。例如,流程图5示例说明了与芳香环稠合的嘧啶的制备,其可以转化为上述终产物。起始脒可以如流程图4所示制备。

        流程图4.芳基脒的制备。

        流程图5描述了整个顺序,其中式(1)的稠环化合物(其中Z表示N)可以由适宜的吡啶衍生物和苯基脒制备。进一步举例说明了在制备之后,该类型的被适当取代的化合物如何进一步修饰得到其它的式(1)化合物。

        流程图5.与芳香环稠合的嘧啶的制备。

        由流程图1-5示例的方法中的中间体出发,还可以通过选择适当的起始原料制备其它化合物。例如,为了在流程图5中添加取代基时获得更高的多样性,如本领域熟知的那样,除了胺之外还可以使用其它亲核物质替代氟化物。此外,可以使用被?;さ陌防缢?(对甲氧基苄基)胺替代氟取代基,随后该被?;さ陌房梢酝驯;げ⒔徊酵ü玖煊蚴熘姆从珲;蛲榛行奘?,从而改变添加在稠合环上的胺取代基中的R基团。因此,如果R2NH是双-(对甲氧基苄基)胺的话,则流程图5中的R2N表示双(对甲氧基苄基)胺;该对甲氧基苄基可以通过熟知方法例如还原或者使用强酸处理裂解,除去NH2,后者可以通过本领域熟知的方法衍生化。

        流程图6.吡啶并[2,3-d]嘧啶的制备。

        作为吡啶并[2,3-d]嘧啶的式(I)化合物例如上述式(II)或(III)化合物还可以按照下面流程图中概括的那样制备,其中所得到的吡啶并[2,3-d]嘧啶如式(6g)所示。

        将2-氨基-3-吡啶羧酸甲酯(6a)与芳酰氯在适宜溶剂例如氯仿或吡啶存在下反应,得到2-芳?;被拎?3-羧酸酯(6b)。后者羧酸酯(6b)例如通过将起始羧酸酯与氨反应,转化为2-酰氨基吡啶-3-酰胺(6d)?;蛘?,2-酰氨基吡啶-3-酰胺(6d)也可以直接通过芳?;?-氨基-3-吡啶酰胺(6c)获得。

        然后将2-酰氨基吡啶-3-酰胺(6d)通过加入碱环化,形成式(6e)的吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-醇衍生物。后者中的醇基团然后可以借助于卤化剂例如亚硫酰氯在适宜的溶剂如氯仿、二氯乙烷或四氢呋喃(THF)中用卤素替代,优选在催化量的二甲基甲酰胺(DMF)存在下进行。接下来,所得到的中间体(6f)通过与式的氨基吡啶酰胺发生亲核取代反应,转化为所需的终产物(6g),优选在适宜的碱例如叔胺如TEA或DIPEA存在下,在有机溶剂例如DCM、THF或DMF中进行。

        或者,2-芳?;被拎?3-酰胺(6e)可以以一锅步骤转化为式(II)的吡啶并[2,3-d]嘧啶,通过将(6e)与前段指出的氨基吡啶酰胺和适宜的碱特别是叔胺如TEA或DIPEA、在苯并三唑-1-基-氧基-三-吡咯烷基-磷六氟磷酸盐(PyBOP)存在下反应。

        流程图7.吡啶并[2,3-d]嘧啶的制备。

        作为吡啶并[2,3-d]嘧啶的式(I)化合物在后文中如式(7e)所示,其还可以由相应的吡啶并嘧啶酮(7a)通过卤化反应,例如使用亚硫酰氯在溶剂例如DMF中反应制备。在接下来的步骤中,将(7b)中的卤素基团(特别是氯)如上所述使用氨基吡啶酰胺取代。该反应中的嘧啶胺可以是4-氨基烟酸烷基酯例如甲酯,将其在取代反应之后转化为相应的酸(7d),随后与胺HNR1R2使用酰胺形成试剂例如碳二亚胺或PyBOP缩合。

        如果需要吡啶N-氧化物的话,可以将本发明的吡啶化合物使用常见的氧化剂例如间氯过氧苯甲酸或过氧乙酸氧化成N-氧化物。

        给药和用途

        本发明化合物可用于治疗与其特征在于TGFβ活性过度例如纤维增殖的病况有关的病况。因此,本发明化合物或其可药用盐或前药形式还可以用于制备用于预防性或治疗性处理哺乳动物包括人有关其特征在于TGFβ活性过度的病况的药物。

        TGFβ抑制活性可用于治疗纤维增殖性疾病,治疗胶原质血管疾病,治疗与纤维增殖性病况有关的眼科疾病,排除过量的瘢痕形成,治疗神经性病况或者其它目标在于TGFβ抑制剂的病况以及预防引起和伴发冠状血管成形术后再狭窄、梗塞后出现的心脏纤维化和进行性心力衰竭的瘢痕形成过度,以及高血压血管病变和在伤口(包括手术伤口和创伤性撕裂)愈合过程中出现的瘢痕疙瘩形成或肥厚性瘢痕。

        其特征在于生成TGFβ的神经性病况包括创伤后CNS损伤和低含氧量损伤、阿尔茨海默氏病和帕金森氏病。

        作为TGFβ抑制剂潜在治疗目标的其它病况包括骨髓纤维化、由放射治疗引起的组织肥厚、鼻息肉病、息肉手术、肝硬化和骨质疏松。

        受益于抑制TGFβ的疾病包括:心血管疾病例如充血性心力衰竭、扩张型心肌病、心肌炎、或者与动脉粥样硬化、血管成形术处理或外科切口或机械创伤有关的血管狭窄;与纤维化和/或硬化有关的肾脏疾病,包括具有各种病因的肾小球肾炎、糖尿病性肾病变以及各种原因引起的肾间质性纤维变性,包括高血压、药物例如环孢素曝露下引起的并发症、与HIV有关的肾病、移植肾病、慢性尿道梗阻;与瘢痕形成过度和进行性硬化有关的肝病,包括具有各种病因的肝硬化、胆树障碍和归因于感染例如肝炎病毒或寄生虫的肝功能失调;与肺纤维化有关的综合征,其结果是气体交换减少或者将空气有效输出和输入肺部的能力降低,包括成人呼吸窘迫综合征、特发性肺纤维化或者由感染或毒性物质例如吸烟、化学品、变应原或自身免疫疾病引起的肺纤维化;慢性或持续性的各种胶原质血管障碍,包括进行性系统性硬化症、多发性肌炎、硬皮病、皮肌炎、fascists或Raynaud’s综合征或者关节炎病况例如类风湿性关节炎;与纤维增殖性状况有关的眼科疾病,包括具有各种病因的增殖性玻璃体视网膜病变或者与眼科手术例如视网膜复置术、白内障摘出术或任何类型引流手术有关的纤维化;在由创伤或外科伤口引起的伤口愈合过程中出现的真皮瘢痕形成过度或肥大;与慢性炎症有关的胃肠道障碍,包例如克罗恩氏病或溃疡性结肠炎或由创伤或外科伤口引起的粘连形成、息肉病或者息肉手术后状态;与子宫内膜异位症、卵巢疾病、腹膜透析或外科伤口有关的腹膜慢性瘢痕形成;其特征在于TGFβ生成或对TGFβ敏感性增强的神经病况,包括创伤后状态或低含氧量损伤、阿尔茨海默氏病和帕金森氏??;涉及瘢痕形成足以妨碍运动或产生疼痛的关节疾病,包括机械或外科创伤后状态、骨关节炎和类风湿性关节炎;以及癌症。

        本发明化合物出人意料地显示出对抗丙型肝炎病毒(HCV)的活性,更具体地说,它们可以阻断HCV的复制。因此,本发明化合物可用于治疗与丙型肝炎病毒有关的病况。因此,本发明化合物或其可药用盐或前药形式还可以用于预防性或治疗性处理可能发展成为上述病况或者正在遭受上述病况痛苦的患者的方法中。在又一方面,本发明提供了用作药物的本发明化合物,特别是用作治疗与HCV感染有关的病况的药物。此外,本发明还涉及制备用于预防性或治疗性处理可能发展成为与丙型肝炎病毒有关的病况或者正在遭受与丙型肝炎病毒有关的病况痛苦的哺乳动物包括人的药物的用途。

        TGFβ调节免疫和炎症体系(Wahl等人,Immunol.Today?(1989)10:258-61)包括刺激白细胞募集、细胞因子生成和淋巴细胞效应子功能,以及抑制T-细胞亚型增殖、B-细胞增殖、抗体形成和单核细胞呼吸爆发。TGFβ是过量产生胞外基质蛋白包括纤维结合素和胶原蛋白的刺激质。它还可以抑制降解这些基质蛋白的酶的生成。其净效应在于积蓄作为纤维性增殖疾病标志的纤维组织。

        TGFβ作为同型二聚体具有活性,但它是由被称作潜伏状态有关蛋白质(LAP)的成熟同型二聚体和proregion的非活性潜伏复合体形式的细胞合成和分泌得到的。这些蛋白质通过非共价相互作用彼此结合(Lyons和Moses,Eur.J.Biochem.(1990)187:467)。LAP通常是二硫化物连接的以分离基因产物,后者被称作潜伏状态TGFβ结合蛋白质或LTBP′s。这些潜伏状态形式为成熟细胞因子提供了稳定性,同时也为靶向作用于胞外基质和细胞表面提供了手段(Lawrence,Eur.CytokineNetwork(1996)7:363-74)。由细胞分泌后发生潜伏状态复合体的活化,这被认为是由蛋白激酶例如纤溶酶(Munger等人,Kidney?Intl.(1997)51:1376-82)对LAP的作用、血小板反应蛋白-1结合作用(Crawford等人,Cell(1998)93:1159-70)以及对整联蛋白v6的结合作用(Munger等人,Cell(1999)319-28)引起的。

        除了αvβ外,存在多种转导通过将活性TGFβ配体与其受体结合启动的信号的细胞表面蛋白/受体。其中包括I、II、III、IV和V型。IV型仅仅存在于脑下垂体中,而其它型则是到处存在。三种同种型对I和II型受体的结合亲和力区别在于这两种受体结合TGFβ1和TGFβ3比TGFβ2更紧密(Massague,Cell(1992)69:1067-70)。

        IV型受体或Endoglin具有与III型受体β蛋白聚糖相反的类似同种型结合曲线,后者对所有三种同种型结合完全相同(Wang等人,Cell(1991)67:797-805;Lopez-Casillas,Cell(1991)67:785-95)。V型受体结合IGFBP-3,被认为具有类似于I和II型受体的活性激酶区域??寺和II型受体证实存在细胞质丝氨酸/苏氨酸激酶区域(Wrana等人,Cell(1992)71:1003-14;Lin等人,Cell(1992)68:775-85;同上71:1069;Massague,Cell(1992)69:1067-70)。TGFβ信号途径的启动由TGFβ配体与II型受体的胞外区域结合引起(Massague,Ann.Rev.Biochem.(1998)67:753-91)。结合受体随后使I型受体募集在多聚体(multimeric)薄膜复合体中,在这里构成上活性的II型受体激酶使I型受体激酶磷酸化和活化。I型受体激酶的功能是磷酸化与受体有关的共转录因子smad-2/3,从而将其释放在与smad-4结合的细胞质中。该smad复合体随同DNA-结合共因子例如Fast-1转移入细胞核中,与特定基因的增强子区域结合,从而激活转录。这些基因的表达导致合成了控制增殖响应的细胞周期调节子或者介导细胞内外信号传导、细胞粘着、迁移和细胞间通讯的胞外基质蛋白。

        用于本发明中的化合物及其相关化合物的给药方式和制剂取决于病况的性质、病况的严重性、待治疗的特定受试者以及医生的判断;制剂取决于给药模式。因为本发明化合物是小分子,因此它们通常通过与一种或多种适宜的药学赋型剂相混和以得到片剂、胶囊剂、糖浆剂等从而通过口服给药。用于口服给药的适宜制剂还包括次要组分例如缓冲剂、调味剂等。通常,活性成分在制剂中的含量为总制剂的5%-95%,但是根据载体可以允许较大变动。适宜的载体包括蔗糖、果胶、硬脂酸镁、乳糖、花生油、橄榄油、水等。

        用于本发明中的化合物还可以通过栓剂或者其它透粘膜载体给药。通常这类制剂应当含有促进化合物通过粘膜的赋型剂,例如可药用去垢剂。

        化合物还可以局部给药,用于局部病况例如银屑病,或者以打算渗透皮肤的制剂形式给药。这些制剂包括洗剂、乳剂、软膏剂等,它们可以通过已知方法配制。

        化合物还可以通过注射给药,包括静脉内、肌内、皮下或腹膜内注射。用于这种用途的典型制剂是在等渗溶媒中的液体制剂,例如Hank氏溶液或Ringer氏溶液。

        替代性制剂包括本领域已知的鼻腔喷雾剂、脂质体制剂、缓释制剂。

        可以使用任何适宜的制剂。已知制剂的一览表参见Remington’sPharmaceutical?Sciences,最新版本,Mack?Publishmg?Company,Easton,PA。本领域通常参考该手册。

        本发明化合物的剂量取决于各种因素,随患者不同而不同。然而,据信常规口服剂量通常为0.001-100mg/kg总体重,优选为0.01-50mg/kg,更优选为大约0.01mg/kg-10mg/kg。剂量通常以每天至少一次给药,但是给药方案可以随待治疗病况和医生的判断变化而变化。对于某些用途,化合物或组合物可以每天给药数次,对于其它用途,它们可以按照少于每天一次的频率给药。

        应当注意的是,本发明化合物可以以单独的活性成分或者该结构式几种实施方案的混合物形式给药。本发明化合物可以用作单一的治疗剂,也可以与其它治疗剂联合使用??梢杂氡痉⒚骰衔锪鲜褂玫囊┪锇ㄌ烊换蚝铣傻钠ぶ世喙檀?,特别是泼尼松及其衍生物、靶向作用于免疫体系细胞的单克隆抗体、靶向作用于免疫或非免疫细胞因子的抗体或可溶性受体或受体融合蛋白、以及细胞分裂、蛋白质合成、或mRNA转录或翻译的小分子抑制剂、或者免疫细胞分化或活化的抑制剂。

        如上所述,尽管本发明化合物可用于人类,但是它们还可以用于兽医学治疗动物受试者。

        本发明化合物特别是式(II)或(III)化合物显示出抗病毒特性,特别是可以有效对抗HCV。因此,本发明化合物可用于治疗感染HCV的个体,用于预防性治疗可能受到感染的个体。本发明化合物还可以用于治疗感染黄病毒的温血动物??梢允褂帽痉⒚骰衔镌し阑蛑瘟频牟】鍪怯際CV和其它致病性黄病毒有关的病况,例如黄热病、登革热(1-4型)、出血热、脑炎(St.Louis脑炎、日本脑炎、Murray?valley脑炎)、还有与西尼罗病毒和库京病毒有关的病况。与HCV有关的病况包括进行性肝纤维化、炎症和导致肝硬变的坏死、末期肝病和HCC。

        因此在另一方面,本发明提供了治疗温血动物、特别是人HCV感染的方法,所述方法包括施用本文所述的有效量的式(I)化合物、特别是式(II)或(III)化合物?;蛘?,本发明提供了治疗温血动物、特别是人与HCV感染有关的病况的方法,所述方法包括施用本文所述的有效量的式(I)化合物、特别是式(II)或(III)化合物。

        本发明化合物、特别是式(II)或(III)化合物或者它们的任何亚群因而可以用作对抗上述病况的药物。所述用作药物或用于治疗方法的用途包括向感染HCV的受试者系统性施用有效对抗与HCV和其它致病性黄病毒有关的病况的用量。因此,本发明化合物可用于制备用于治疗与HCV和其它致病性黄病毒有关的病况的药物。

        在一实施方案中,本发明涉及本文所述的本发明化合物、特别是式(II)或(III)化合物或者它们的任何亚群在制备用于治疗或对抗哺乳动物中与HCV有关的感染或疾病的药物中的用途。本发明还涉及治疗黄病毒科感染或与黄病毒感染有关的疾病的方法,所述方法包括向有该需要的哺乳动物施用本文所述的有效量的本发明化合物、特别是式(II)或(III)化合物或者它们的任何亚群。

        在另一实施方案中,本发明涉及本文所述的本发明化合物、特别是式(II)或(III)化合物或者它们的任何亚群在制备用于抑制感染黄病毒、特别是HCV的哺乳动物的病毒活性的药物中的用途。

        在另一实施方案中,本发明涉及本文所述的式(II)或(III)或者它们的任何亚群在制备用于抑制感染黄病毒、特别是感染HCV的哺乳动物的病毒活性的药物中的用途,其中所述黄病毒或HCV在其自身复制过程中被抑制。

        本发明此外还涉及含有本文所述的本发明化合物、特别是式(II)或(III)化合物和其它抗-HCV化合物的组合。本发明还提供了治疗上述遭受HIV感染或与HCV感染有关的病况痛苦的温血动物、特别是人的方法,所述方法包括施用含有本文所述的本发明化合物、特别是式(II)或(III)化合物和其它抗-HCV化合物的组合???HCV化合物包括例如干扰素-α(IFN-α)、聚乙二醇化(pegylated)干扰素-α和/或利巴韦林。本发明化合物、特别是式(II)或(III)化合物与其它抗-HCV化合物的组合可用作联合治疗中的药物。术语“联合治疗”涉及含有(a)本发明化合物、特别是式(II)或(III)化合物,和(b)其它抗-HCV化合物的药物,其作为复合制剂同时、单独或先后用于治疗HCV感染、特别是治疗HCV1型感染。因此,为了对抗或治疗HCV感染,本发明化合物、特别是式(II)或(III)化合物可以以与例如干扰素-α(IFN-α)、聚乙二醇化干扰素-α和/或利巴韦林、以及基于靶向对抗HCV表位、低干扰RNA(SiRNA)、核酶、DNAzyme、反义RNA的抗体的治疗药、诸如NS3蛋白酶、NS3螺旋酶和NS5B聚合酶的小分子拮抗剂联合的形式联合给药。

        因此,本发明涉及本文所述的本发明化合物、特别是式(II)或(III)化合物或它们的任何亚群在制备用于抑制感染HCV病毒的哺乳动物的HCV活性的药物中的用途,其中所述药物被用于联合治疗,所述联合治疗优选含有式(II)或(III)化合物和(聚乙二醇化)IFN-α和/或利巴韦林以及可能的抗-HIV化合物。

        本领域技术人员应该理解的是,本发明化合物可以在基于Lohmann等人.(1999)Science285:110-113的、同时按照Krieger等人.(2001)Journal?of?Virology?75:4614-4624(本文引入作为参考)进行进一步变更的细胞HCV复制子体系中测试,在实施部分将对其进行进一步示例性说明。该模型虽然不是HCV的完全感染模型,但是被公认为目前可获得的自主HCV?RNA复制的最结实和有效的模型。在该细胞模型中具有抗-HCV活性的化合物被认为是在治疗哺乳动物HCV感染中进一步开发的候选药物。应该理解,重要的是将特异性干扰HCV功能的化合物与那些在HCV复制模型中产生细胞毒性效应或抑制细胞效应,从而导致HCV?RNA或者联动报道酶浓度降低的化合物区别开来。在本领域,已知用于评价细胞毒性的,基于例如线粒体酶活性、使用荧光氧化还原染料例如刃天青的测试。此外,存在用于评价联动报道基因活性的非选择性抑制作用的细胞计数屏,例如萤火虫荧光素酶。适宜的细胞类型可以通过使用其表达依赖于组成上活性的基因启动子的萤火素酶报道基因稳定转染来准备,这种细胞可用作反筛选以排除掉非选择性抑制剂。

        下面的实施例用于示例性说明而不是限制本发明。它们代表了适合制备本发明化合物的方法和中间体。这些反应的其它组合和变型以及本领域已知的其它熟知反应都可以用来制备很多的其它本发明化合物。

        实施例1

        脒类的合成

        适合制备某些式(I)化合物的脒中间体可以使用双(三甲基甲硅烷基)氨基化锂合成:

        向搅拌后的0℃的1,1,1,3,3,3-六甲基二硅氮烷(63mL,0.3mol)的无水二乙醚溶液中逐滴加入正丁基锂(2M己烷溶液,150mL,0.3mol)。形成白色悬浮液,向其中在5分钟内加入2-氟-5-氯苄腈(21.0g,0.14mol)。所得到的橙色混合物温热至室温,同时搅拌2h?;旌衔锢淙粗?℃,反应通过加入3M?HCl(水溶液)(240mL)猝灭?;旌衔锝涟?.5h后,加入水(600mL)。弃去紫色有机层,水层使用饱和NaOH(水溶液)碱化至pH14。水层用CHCl3萃取(5×100mL),有机萃取物用Na2SO4干燥。蒸发得到所需产物,为黄色固体(16.2g,73%收率)。

        实旋例2

        合成4-[2-(5-氯-2-氟-苯基)-7-(2-二甲氨基-乙氨基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-烟酸

        2,6-二氟-烟酸。向冷却至-78℃的无水THF(50mL)和二异丙基胺(14.02mL)溶液中加入n-BuLi(2M,50mL)?;旌衔镂氯戎?℃,持续30min,然后冷却至-78℃。在-78℃下,将溶解于THF(200mL)中的2,6-二-氟吡啶(11.5g)加入至LDA混合物中?;旌衔镌?78℃下搅拌2h,除去冰浴后,混合物在0℃下搅拌10min?;旌衔锢淙粗?78℃,将CO2(g)气流通过混合物15分钟,直到混合物变为透明?;旌衔镌?78℃下搅拌1小时,加入H2O(100mL)。除去冰浴后,混合物温热至室温。减压除去THF后,加入H2O(200mL),接着使用HCl酸化至pH3.5?;旌衔镉肊tOAc萃取(3×150mL)。合并的有机层用MgSO4干燥,过滤并蒸发得到2,6-二氟烟酸(9.4g)。产物直接使用不再进一步纯化。

        2,6-二氟-烟酰氯。将2,6-二氟烟酸(6.2g)、亚硫酰氯(15mL)和??CH2Cl2(100mL)的混合物加热回流3h?;旌衔镎舴⒅粮?,加入CH2Cl2后蒸发至干得到1.1g?2,6-二氟烟酰氯。该产物直接使用不再进一步纯化。

        2-(5-氯-2-氟-苯基)-7-氟-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-醇。向2,6-二氟烟酰氯(6.4g)溶解于乙腈(200mL)的溶液中加入2-氟-5-氯苯甲脒(6.73g)和二异丙基乙基胺(24mL)?;旌衔锛尤然亓?h,然后冷却至室温?;旌衔锛跹古ㄋ?。沉淀过滤后,用乙醚洗涤并减压干燥得到2-(5-氯-2-氟-苯基)-7-氟-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-醇,其直接使用不再进一步纯化。

        2-(5-氯-2-氟-苯基)-7-(2-二甲氨基-乙氨基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-醇。向2-(5-氯-2-氟-苯基)-7-氟-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-醇(0.16g)的异丙醇(20mL)溶液中加入2-二甲氨基-乙基胺(0.051g)?;旌衔锛尤然亓?h,混合物体积浓缩后得到沉淀,过滤并干燥。分离后的固体2-(5-氯-2-氟-苯基)-7-(2-二甲氨基-乙氨基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-醇直接使用不再进一步纯化。

        N′-[4-氯-2-(5-氯-2-氟-苯基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-基]-N,N-二甲基-乙烷-1,2-二胺。将2-(5-氯-2-氟-苯基)-7-(2-二甲氨基-乙氨基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-醇(0.18g)溶解于P(O)Cl3(10mL)中,加热回流2小时?;旌衔锾寤ㄋ鹾?,加入NaHCO3(饱和水溶液)?;旌衔镉肅H2Cl2萃取(x3)。萃取液合并后,用MgSO4干燥,过滤并蒸发至干得到N′-[4-氯-2-(5-氯-2-氟-苯基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-基]-N,N-二甲基乙烷-1,2-二胺。

        4-[2-(5-氯-2-氟-苯基)-7-(2-二甲氨基-乙氨基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-烟酸甲酯。向溶解于二氧杂环己烷(80ml)中的粗亚胺卤化物N′-[4-氯-2-(5-氯-2-氟-苯基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-基]-N,N-二甲基-乙烷-1,2-二胺(0.58g)中先后加入Pd(OAc)2(0.077g)以及BINAP(0.115g)、4-氨基-吡啶基-3-羧酸酯(0.232g)和Cs2CO3(0.748g)。反应混合物加热至80℃,持续15h。反应混合物冷却至室温后,通过硅藻土(Celite)过滤,粗产物通过硅胶急骤柱色谱法纯化(3∶2/乙酸乙酯∶己烷)得到4-[2-(5-氯-2-氟-苯基)-7-(2-二甲氨基-乙氨基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-烟酸甲酯(0.300g)。

        4-[2-(5-氯-2-氟-苯基)-7-(2-二甲氨基-乙氨基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-烟酸。向酯4-[2-(5-氯-2-氟-苯基)-7-(2-二甲氨基-乙氨基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-烟酸甲酯(0.300g)的MeOH(20ml)悬浮液中加入1N?NaOH(水溶液)(1.0ml),反应混合物加热回流2h。溶液冷却至室温后真空浓缩。向粗产物中加入水(50ml),水层用HCl(1N)酸化,混合物置于冷藏箱中。固体过滤后,用水洗涤并干燥得到4-[2-(5-氯-2-氟-苯基)-7-(2-二甲氨基-乙氨基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-烟酸,为奶油色固体。该产物直接使用不再进一步纯化。

        4-[2-(5-氯-2-氟-苯基)-7-(2-二甲氨基-乙氨基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-N-甲基-烟酰胺。向取代烟酸4-[2-(5-氯-2-氟-苯基)-7-(2-二甲氨基-乙氨基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-烟酸(0.030g)的无水DMF(1ml)悬浮液中先后加入羰基二咪唑(0.020g)和甲胺(156uL,2M?THF溶液)。反应混合物在室温下搅拌16h。粗残余物通过制备性HPLC纯化(乙腈/水5%-95%梯度)得到4-[2-(5-氯-2-氟-苯基)-6,7-二氢-5H-环戊二烯并嘧啶-4-基氨基]-N-甲基-烟酰胺(280mg,68%),为白色固体。

        实施例3

        合成4-[7-氨基-2-(5-氯-2-氟-苯基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-N-甲基-烟酰胺。

        4-[7-氨基-2-(5-氯-2-氟-苯基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-N-甲基-烟酰胺。采用实施例2中描述的方法,制备得到?;さ陌坊衔?-[7-[双-(4-甲氧基-苄基)-氨基]-2-(5-氯-2-氟苯基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-N-甲基-烟酰胺。然后如下所述除去两个甲氧苄基?;せ?。将4-[7-[双-(4-甲氧基-苄基)-氨基]-2-(5-氯-2-氟-苯基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-N-甲基-烟酰胺(1.96g;3.14mmol)的纯三氟乙酸(30mL)悬浮液加热至40℃,持续30h。反应混合物蒸发至干,通过硅胶色谱法纯化(二氯甲烷/EtOAc梯度95/5-5/95),得到4-[7-氨基-2-(5-氯-2-氟-苯基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-N-甲基-烟酰胺(0.78g)。

        实施例4

        制备4-(2-(5-氯-2-甲氨基-苯基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-N-甲基-烟酰胺

        4-[2-(5-氯-2-甲氨基-苯基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-N-甲基-烟酰胺。将羰基二咪唑(180mg,1.11mmol)加入至搅拌后的酸4-[2-(5-氯-2-氟-苯基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-烟酸(240mg,0.56mmol)的无水DMF(15ml)悬浮液中。反应在氮气下加热至60℃,持续2小时。反应冷却至室温,加入MeNH2(2M?THF溶液,5当量),反应搅拌18小时。反应混合物在CHCl3(50mL)和水(50mL)之间分配。有机层进一步用水洗涤(3×50mL)。产物由CHCl3溶液沉淀析出,过滤得到化合物4-[2-(5-氯-2-甲氨基-苯基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-N-甲基-烟酰胺(47mg,19%收率)。

        实旋例5

        合成4-[2-(5-氯-2-氟-苯基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-N-甲基-烟酰胺。

        4-[2-(5-氯-2-氟-苯基)-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基]-N-甲基-烟酰胺。该化合物按照前面实施例2中描述的合成方法制备。

        实施例6

        合成4-氨基吡啶基-3-羧酰胺。

        4-叔丁氧羰基氨基-烟酸。向4-叔丁氧羰基氨基-烟酸甲酯(6.02g,23.86mmol)的二氧杂环己烷(100mL)溶液中加入氢氧化钠水溶液(0.970N溶液,28.05mL,27.20mmol)。溶液加热至60℃,持续1小时后冷却。加入盐酸水溶液(1.031M溶液,26.99mL,27.20mmol),混合物用氯仿萃取(5×100mL)。萃取液干燥(MgSO4),过滤并蒸发得到4-叔丁氧羰基氨基-烟酸,为奶油色固体(4.70g,83%收率)。

        (3-(N-甲氨基羰基)-吡啶-4-基)-氨基甲酸叔丁酯。将酸4-叔丁氧羰基氨基-烟酸(1.0g,4.20mmol)悬浮于无水DMF(50mL)中,加入羰基二咪唑(CDI,1.36g,8.40mmol)?;旌衔锛尤戎?0℃,持续1h后冷却。向溶液中加入在THF中的甲胺,混合物随后经蒸发。残余物溶解于水(20mL)/氯仿(50mL)中,振摇,分离各层。水层进一步用氯仿萃取(3×50mL),合并的有机萃取液干燥(MgSO4)并蒸发得到黄色油状固体。硅胶色谱法(CH2Cl2,0-15%MeOH梯度)得到所需产物(3-(N-甲氨基羰基)-吡啶-4-基)-氨基甲酸叔丁酯,为黄色固体。

        4-氨基-3-(N-甲氨基羰基)-吡啶。将酰胺(3-甲基羧基甲基酰氨基-吡啶-4-基)-氨基甲酸叔丁酯使用三氟乙酸(TFA,20mL)处理,并在室温下搅拌45分钟,然后蒸发得到所需胺4-氨基-N-甲基-烟酰胺,为其TFA盐(892mg,85%收率,根据4-叔丁氧羰基氨基-烟酸甲酯计算)。

        实施例7

        合成2-(4-氟苯基)-4-氯蝶啶

        其中W和Z各自表示N的式(I)化合物可以通过前面实施例中的方法制备,使用2-苯基-4-氯蝶啶中间体。所述中间体可以采用下面的方法制备。

        将吡啶(2.1mL,0.025mol)加入至在无水CHCl3(50mL)中的3-氨基-2-吡嗪羧酸甲酯Ia(3g,0.020mol)中,在氮气和室温下搅拌5分钟?;郝蚍从旌衔镏屑尤?-氟苯甲酰氯(3.5mL,0.029mol)?;旌衔镌诘陆涟?8小时。反应混合物用5%Na2CO3溶液(2×200mL)、水(2×200mL)、盐水(2×200mL)洗涤,干燥(MgSO4)并真空除去溶剂。由乙酸乙酯重结晶得到所需产物?;被拎?1.6g,30%收率)。EIMS:M+275。

        将NH4OH(28%NH3水溶液,10mL)加入至搅拌后的酰胺Ib(0.69g)的EtOH(30mL)悬浮液中,搅拌1小时。加入10M?NaOH(2mL),并回流1小时。真空除去溶剂。固体再次悬浮于水中,用4M?HCl酸化直到溶液pH为1。产物4-羟基-2-(4-氟苯基)蝶啶过滤后,用水和丙酮洗涤并在45℃下真空干燥18-24小时(0.25g,42%收率)。EIMS:M+=242。

        将亚硫酰氯(0.4mL,0.005mol)加入至搅拌后的来自前面步骤的羟基蝶啶(0.25g,0.001mol)的无水CHCl3(15mL)和无水DMF(0.5mL)悬浮液中。反应混合物在氮气下回流1小时。真空除去溶剂得到2-(4-氟苯基)-4-氯蝶啶,为固体,将其用高真空泵干燥1小时后,直接用于接下来的反应中,与被适当取代的4-氨基吡啶偶联。

        实施例8

        本发明化合物的活性

        通过TGFβR1自磷酸化方案测试了本发明化合物抑制TGFβ的能力。按照下面所述的进行:化合物稀释液和试剂每天现制。将化合物由DMSO储备溶液稀释至2倍于所需测试浓度,保持测试中的最终DMSO浓度低于或等于1%。将TGFβR1稀释至4倍于在缓冲液+DTT中所需测试浓度。将ATP稀释在4x反应缓冲液中,加入60uCi/mL的γ-33p-ATP。

        通过将10ul酶加入至20ul化合物溶液中进行测试。反应通过加入10ul?ATP混合物启动。最终的测试条件包括10uM?ATP、170nMTGFβR1和1M?DTT的20mM?MOPS溶液,pH7。反应在室温下培养20分钟。反应通过将23ul反应混合物转移至磷酸纤维素96-孔过滤板中终止,过滤板预先用15ul?0.25M?H3PO4/孔润湿。5分钟后,各孔用75mM?H3PO7洗涤4x,用95%乙醇洗涤1x。过滤板干燥后,向各孔中加入闪烁混合物,各孔在Packard?TopCount微量培养板闪烁计数器中计数。

        表1中的化合物通过本文给出的方法制备?;衔镏辽偻ü齃C-质谱测定法表征。对于表中的每个化合物,通过LC(液相色谱法)观察的产物获得了所需产物预期的分子离子;每个化合物的特征离子列在表1中,同时还有来自LC的保留时间。在本测试中这些化合物提供在0.01-12微摩尔范围内的IC50值。

        表1

        用于表1中化合物的HPLC条件:

        HPLC溶剂:A:含有0.1%三氟乙酸的水。

        B:含有0.1%三氟乙酸的乙腈。

        HPLC柱:Merck?AGA?Chromolith?Flash柱(25×4.6mm)。

        标准梯度:5%B至95%B持续2.5分钟,流速为3.0mL/Min。

        a替代梯度:5%B至95%B持续4分钟,流速为3.0mL/Min。

        实施例9

        本发明化合物在HCV复制测试中的活性

        在细胞测试中测量了本发明的吡啶并[2,3-d]嘧啶化合物抑制HCVRNA复制的活性。测试证实,所测试的化合物对于细胞培养物中的HCV复制子功能具有抑制作用。本细胞测试基于多靶筛选策略中如Lohmann等人.(1999)Science?vol.285pp.110-113所述的、如Krieger等人.(2001)Journal?of?Virology?75:4614-4624所述进一步变更的双顺反子表达构建体。大体上该方法如下。

        该测试使用了稳定转染后的细胞系Huh-7luc/neo(下文中称作Huh-Luc)。该细胞系隐匿了编码双顺反子表达构建体的RNA,其中包括翻译自来自脑炎心肌炎病毒(EMCV)的Internal?Ribosome?Entry?Site(IRES)的HCV?1b型的野生型NS3-NS5B区域,报道部分(FfL-荧光素酶)位于其之前,以及可选择的标记部分(neoR,新霉素磷酸转移酶)。该构建体邻接自HCV?1b型的5’和3’NTRs(非翻译区域)。复制子细胞在G418(neoR)存在下的连续培养依赖于HCV?RNA的复制。表达自动且高水平复制的HCV?RNA的稳定转染后的复制子细胞,尤其编码荧光素酶,用于筛选抗病毒化合物。

        将复制子细胞装板在以不同浓度加入的测试和对照化合物存在下的384-孔板中。培养三天后,通过测定荧光素酶活性测量HCV复制(使用标准荧光素酶测试底物和试剂以及Perkin?Elmer?ViewLuxTm?ultraHTS微量培养板成像仪)。对照培养物中的复制子细胞在没有任何抑制剂存在下具有高的荧光素酶表达。监测在Huh-Luc细胞上化合物对荧光素酶活性的抑制活性,从而得到针对每种测试化合物的剂量-响应曲线。然后计算EC50值,该数值表示将检测荧光素酶活性水平降低50%所需要的化合物用量,或者更具体地说,代表了遗传上联动HCV复制子RNA复制的能力。

        在表2中提供了测试化合物的HCV复制子活性。

        表2

        ????化合物编号??HCV复制子活性??(EC50,μM)????1??0.76????2??11.9

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