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    重庆时时彩大中小走势: HCVNS-3丝氨酸蛋白酶抑制剂.pdf

    关 键 词:
    HCVNS 丝氨酸 蛋白酶 抑制剂
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    摘要
    申请专利号:

    CN200580003423.8

    申请日:

    2005.01.28

    公开号:

    CN1914225A

    公开日:

    2007.02.14

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效|||公开
    IPC分类号: C07K5/02(2006.01); A61K31/47(2006.01); A61P31/12(2006.01); C07D487/04(2006.01); C07D401/12(2006.01); C07D245/04(2006.01); C07D417/14(2006.01) 主分类号: C07K5/02
    申请人: 美迪维尔公司;
    发明人: A·罗森奎斯特; F·托尔斯滕松; P·-O·约翰松; I·克瓦恩斯特伦; B·萨米尔松; H·瓦尔贝里
    地址: 瑞典胡丁厄
    优先权: 2004.01.30 SE 0400199-6; 2004.05.19 SE 0401288-6; 2004.10.22 SE 0402562-3
    专利代理机构: 中国专利代理(香港)有限公司 代理人: 邹锋;黄可峻
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN200580003423.8

    授权公告号:

    1914225B||||||

    法律状态公告日:

    2012.09.26|||2007.04.11|||2007.02.14

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    对抑制丙型肝炎病毒(HCV)的NS3蛋白酶的拟肽化合物进行了描述。所述化合物具有下式:其中各变量定义如说明书中所提供。所述化合物包括带有连接至抑制剂更为远离原基质名义切割位点的那些部分的新连接的碳环P2单元,相对于那些接近于切割位点的肽键该连接翻转了末端面上的肽键方向。

    权利要求书

    1: 式VI化合物,或者其药学上可接受的盐或者前药。 其中 A为C(=O)OR 1 、C(=O)NHSO 2 R 2 、C(=O)NHR 3 或者CR 4 R 4’ ,其 中: R 1 为H、C 1 -C 6 烷基、C 0 -C 3 烷基碳环基,C 0 -C 3 烷基杂环基; R 2 为C 1 -C 6 烷基、C 0 -C 3 烷基碳环基、C 0 -C 3 烷基杂环基; R 3 为C 1 -C 6 烷基、C 0 -C 3 烷基碳环基、C 0 -C 3 烷基杂环基、- OC 1 -C 6 烷基、-OC 0 -C 3 烷基碳环基、-OC 0 -C 3 烷基杂环基; R 4 为卤素、氨基或者OH;或者R 4 和R 4’ 一起为=O; R 4’ 为C 1 -C 6 烷基、C 0 -C 3 烷基碳环基、C 0 -C 3 烷基杂环基; 其中R 2 、R 3 和R 4’ 各自任选被独立地选自以下的1~3个取代基所 取代:卤素、氧代、腈、叠氮基、硝基、C 1 -C 6 烷基、C 0 -C 3 烷基碳 环基、C 0 -C 3 烷基杂环基、NH 2 C(=O)-、Y-NRaRb、Y-O-Rb、 Y-C(=O)Rb、Y-(C=O)NRaRb、Y-NRaC(=O)Rb、Y-NHSO p Rb、 Y-S(=O) p Rb、Y-S(=O) p NRaRb、Y-C(=O)ORb和 Y-NRaC(=O)ORb; Y独立地为一个键或者C 1 -C 3 亚烷基; Ra独立地为H或者C 1 -C 3 烷基; Rb独立地为H、C 1 -C 6 烷基、C 0 -C 3 烷基碳环基或者C 0 -C 3 烷 基杂环基; p独立地为1或者2; M为CR 7 R 7′ 或者NRu; Ru为H或者C 1 -C 3 烷基; R 7 为C 1 -C 6 烷基、C 0 -C 3 烷基C 3 -C 7 环烷基、或者C 2 -C 6 链烯 基,它们各自任选被1~3个卤原子或者被氨基、-SH或者C 0 -C 3 烷 基环烷基所取代;或者R 7 为J; R 7′ 为H或者与R 7 一起形成任选被R 7′a 取代的C 3 -C 6 环烷基环, 其中; R 7′a 为C 1 -C 6 烷基、C 3 -C 5 环烷基、C 2 -C 6 链烯基,它们各自可 以任选被卤素取代;或者R 7′a 为J; q′为0或者1并且k为0~3; Rz为H,或者与星号标记的碳一起形成烯键; Rq为H或者C 1 -C 6 烷基; W为-CH 2 -、-O-、-OC(=O)H-、-OC(=O)-、-S-、 -NH-、-NRa、-NHSO 2 -、-NHC(=O)NH-或者-NHC(=O)-、 -NHC(=S)NH-或者一个键; R 8 是包含1个或者2个各自具有4~7个环原子并且各自具有0~4 个选自S、O和N的杂原子的饱和、部分饱和或者不饱和环的环系, 所述环系任选通过C 1 -C 3 烷基与W间隔;或者R 8 为C 1 -C 6 烷基;任 何上述R 8 基团都可以任选被R 9 单取代、二取代或者三取代,其中: R 9 独立地选自:卤素、氧代、腈、叠氮基、硝基、C 1 -C 6 烷基、 C 0 -C 3 烷基碳环基、C 0 -C 3 烷基杂环基、NH 2 C(=O)-、Y-NRaRb、 Y-O-Rb、Y-C(=O)Rb、Y-(C=O)NRaRb、Y-NRaC(=O)Rb、 Y-NHSO p Rb、Y-S(=O) p Rb、Y-S(=O) p NRaRb、Y-C(=O)ORb和 Y-NRaC(=O)ORb;其中所述碳环基或者杂环基部分任选被R 10 所取 代;其中 R 10 为C 1 -C 6 烷基、C 3 -C 7 环烷基、C 1 -C 6 烷氧基、氨基、磺酰 基、(C 1 -C 3 烷基)磺?;?、NO 2 、OH、SH、卤素、卤代烷基、羧基、 酰氨基; Rx为H或者C 1 -C 5 烷基;或者Rx为J; T为-CHR 11 -或者-NRd-,其中Rd为H、C 1 -C 3 烷基或者Rd 为J; R 11 为H,或者R 11 为C 1 -C 6 烷基、C 0 -C 3 烷基碳环基、C 0 -C 3 烷基杂环基,它们各自可以被独立地选自以下的1~3个取代基所取 代:卤素、氧代、腈、叠氮基、硝基、C 1 -C 6 烷基、C 0 -C 3 烷基碳环 基、C 0 -C 3 烷基杂环基、NH 2 CO-、Y-NRaRb、Y-O-Rb、 Y-C(=O)Rb、Y-(C=O)NRaRb、Y-NRaC(=O)Rb、Y-NHSO p Rb、 Y-S(=O) p Rb、Y-S(=O) p NRaRb、Y-C(=O)ORb、Y-NRaC(=O)ORb; 或者R 11 为J; J,如果存在,为单个3~10元饱和或者部分不饱和的亚烷基链, 它从R 7 /R 7′ 环烷基或者从R 7 连接的碳原子延伸至Rd、Rj、Rx、Ry或 者R 11 中的一个从而形成一个大环,所述链任选被一至三个独立地选自 -O-、-S-或者-NR 12 -的杂原子所中断,并且其中链中的0~3 个碳原子任选被R 14 取代;其中: R 12 为H、C 1 -C 6 烷基、C 3 -C 6 环烷基或者COR 13 ; R 13 为C 1 -C 6 烷基、C 0 -C 3 烷基碳环基、C 0 -C 3 烷基杂环基; R 14 独立地选自:H、C 1 -C 6 烷基、C 1 -C 6 卤代烷基、C 1 -C 6 烷 氧基、羟基、卤素、氨基、氧代、硫代或者C 1 -C 6 硫代烷基; m为0或者1;n为0或者1; U为O或者不存在; R 15 为H、C 1 -C 6 烷基、C 0 -C 3 烷基碳环基、C 0 -C 3 烷基杂环基, 它们各自可以被独立地选自以下的1~3个取代基所取代:卤素、氧代、 腈、叠氮基、硝基、C 1 -C 6 烷基、C 0 -C 3 烷基杂环基、C 0 -C 3 烷基碳 环基、NH 2 C(=O)-、Y-NRaRb、Y-O-Rb、Y-C(=O)Rb、 Y-(C=O)NRaRb、Y-NRaC(=O)Rb、Y-NHSO p Rb、Y-S(=O) p Rb、 Y-S(=O) p NRaRb、Y-C(=O)ORb和Y-NRaC(=O)ORb; G为-O-、-NRy-、-NRjNRj-; Ry为H、C 1 -C 3 烷基;或者Ry为J; 一个Rj为H并且另一个Rj为H或者J; R 16 为H,或者R 16 为C 1 -C 6 烷基、C 0 -C 3 烷基碳环基、C 0 -C 3 烷基杂环基,它们各自可以被以下基团取代:卤素、氧代、腈、叠氮 基、硝基、C 1 -C 6 烷基、C 0 -C 3 烷基碳环基、C 0 -C 3 烷基杂环基、NH 2 CO-、 Y-NRaRb、Y-O-Rb、Y-C(=O)Rb、Y-(C=O)NRaRb、 Y-NRaC(=O)Rb、Y-NHSO p Rb、Y-S(=O) p Rb、Y-S(=O) p NRaRb、 Y-C(=O)ORb、Y-NRaC(=O)ORb。
    2: 根据权利要求1的化合物,其中M为CR 7 R 7′ 。
    3: 根据权利要求1的化合物,其具有部分结构:
    4: 根据权利要求1的化合物,其具有部分结构:
    5: 根据权利要求4的化合物,其中Rq为C 1 -C 3 烷基,优选甲基。
    6: 根据权利要求1的化合物,其中m为0和n为0。
    7: 根据权利要求6的化合物,其中G为-NRy-或者 -NRjNRj-。
    8: 根据权利要求7的化合物,其中Ry或者一个Rj基团为J,由 此限定一个大环化合物。
    9: 根据权利要求7的化合物,其中R 16 为H、C 1 -C 6 烷基或者C 3 -C 6 环烷基。
    10: 根据权利要求1的化合物,其中m为1。
    11: 根据权利要求10的化合物,其中U为O。
    12: 根据权利要求10的化合物,其中T为CR 11 。
    13: 根据权利要求12的化合物,其中R 11 为C 1 -C 6 烷基、C 0 -C 3 烷基碳环基、C 0 -C 3 烷基芳基或者C 0 -C 3 烷基杂芳基,它们各自任选 被卤素、氨基、C 1 -C 6 烷氧基、C 1 -C 6 硫代烷基、COOR 14 、羧基、(C 1 -C 6 烷氧基)羰基、芳基、杂芳基或者杂环基所取代;或者特别被羟基 或者COOR 14 所取代。
    14: 根据权利要求13的化合物,其中R 11 为叔丁基、异丁基、环 己基、苯乙基、2,2-二甲基-丙基、环己基甲基、苯甲基、2-吡啶基 甲基、4-羟基-苯甲基或者羧基丙基,特别是叔丁基、异丁基或者环 己基。
    15: 根据权利要求10的化合物,其中Rd、Rx或者R 11 中的一个 为J,从而限定一个大环化合物。
    16: 根据权利要求10的化合物,其中n为1。
    17: 根据权利要求16的化合物,其中R 15 为C 1 -C 6 烷基或者C 0 -C 3 烷基碳环基,它们各自被任选取代。
    18: 根据权利要求17的化合物,其中R 15 为环己基、环己基甲基、 叔丁基、异丙基或者异丁基。
    19: 根据权利要求10的化合物,其中G为NRy或者NRjNRj,其 中Ry或者一个Rj为H或者甲基,并且另一个Rj为H。
    20: 根据权利要求19的化合物,其中R 16 为H、C 1 -C 6 烷基或者 为5或6元杂环,特别是吗啉、哌啶或者哌嗪。
    21: 根据权利要求10的化合物,其中R 16 为C 1 -C 6 烷基、C 0 -C 3 烷基杂环基、C 0 -C 3 烷基碳环基,它们各自任选被羟基、卤素、氨基 或者C 1 -C 6 烷氧基所取代。
    22: 根据权利要求21的化合物,其中R 16 为2-茚满醇、2,3-二 氢化茚基、2-羟基-1-苯基-乙基、2-噻吩甲基、环己基甲基、2,3 -亚甲二氧基苄基、环己基、苄基、2-吡啶基甲基、环丁基、异丁基、 正丙基或者4-甲氧基苯基乙基。
    23: 根据权利要求1的化合物,其中W为-OC(=O)-、 -NRa-、-NHS(O) 2 -或者-NHC(=O)-;或者特别是-OC(=O)NH-或者 -NH。
    24: 根据权利要求1的化合物,其中W为-S-、一个键或者特 别是-O-。
    25: 根据权利要求23或者24的化合物,其中R 8 是任选被取代的 C 0 -C 3 烷基碳环基或者任选被取代的C 0 -C 3 烷基杂环基。
    26: 根据权利要求25的化合物,其中C 0 -C 3 烷基部分为亚甲基 或者优选为一个键。
    27: 根据权利要求26的化合物,其中R 8 为C 0 -C 3 烷基芳基或者 C 0 -C 3 烷基杂芳基,它们各自任选被R 9 单取代、二取代或者三取代, 其中: R 9 为C 1 -C 6 烷基、C 1 -C 6 烷氧基、NO 2 、OH、卤素、三氟甲基、 任选被C 1 -C 6 烷基单取代或者二取代的氨基或者酰氨基、C 0 -C 3 烷基 芳基、C 0 -C 3 烷基杂芳基、羧基、任选被R 10 取代的芳基或者杂芳基; 其中: R 10 为C 1 -C 6 烷基、C 3 -C 7 环烷基、C 1 -C 6 烷氧基、任选被C 1 -C 6 烷基单取代或二取代的氨基、C 1 -C 3 烷基酰胺、磺?;鵆 1 -C 3 烷基、NO 2 、OH、卤素、三氟甲基、羧基或者杂芳基。
    28: 根据权利要求27的化合物,其中R 9 为C 1 -C 6 烷基、C 1 -C 6 烷氧基、氨基、二-(C 1 -C 3 烷基)氨基、C 1 -C 3 烷基酰胺、芳基或者 杂芳基,所述芳基或者杂芳基任选被R 10 所取代;其中: R 10 为C 1 -C 6 烷基、C 3 -C 7 环烷基、C 1 -C 6 烷氧基、氨基、单- 或者二-C 1 -C 3 烷基氨基、酰氨基、C 1 -C 3 烷基酰胺、卤素、三氟甲 基或者杂芳基。
    29: 根据权利要求28的化合物,其中R 10 为C 1 -C 6 烷基、C 1 -C 6 烷氧基、任选被C 1 -C 3 烷基单取代或者二取代的氨基、酰氨基、C 1 - C 3 -烷基酰胺、卤素或者杂芳基。
    30: 根据权利要求29的化合物,其中R 10 为甲基、乙基、异丙基、 叔丁基、甲氧基、氯、任选被C 1 -C 3 烷基单取代或者二取代的氨基、 酰氨基、C 1 -C 3 烷基酰胺或者C 1 -C 3 烷基噻唑基。
    31: 根据权利要求26的化合物,其中R 8 为1-萘基甲基、2-萘 基甲基、苄基、1-萘基、2-萘基或者喹啉基,各自未被取代或者被 如上所定义的R 9 单取代或者二取代。
    32: 根据权利要求31的化合物,其中R 8 为1-萘基甲基或者喹啉 基,各自未被取代或者被如上所定义的R 9 单取代或者二取代。
    33: 根据权利要求32的化合物,其中R 8 为: 其中R 9a 为C 1 -C 6 烷基;C 1 -C 6 烷氧基;硫代C 1 -C 3 烷基;任 选被C 1 -C 6 烷基取代的氨基;C 0 -C 3 烷基芳基;或者C 0 -C 3 烷基杂 芳基、C 0 -C 3 烷基杂环基,所述芳基、杂芳基或者杂环任选被R 10 取 代;其中: R 10 为C 1 -C 6 烷基、C 0 -C 3 烷基C 3 -C 7 环烷基、C 1 -C 6 烷氧基、 任选被C 1 -C 6 烷基单取代或者二取代的氨基、酰氨基、C 1 -C 3 烷基酰 胺;和 R 9b 为C 1 -C 6 烷基、C 1 -C 6 烷氧基、氨基、二(C 1 -C 3 烷基)氨基、 (C 1 -C 3 烷基)酰胺、NO 2 、OH、卤素、三氟甲基、羧基。
    34: 根据权利要求33化合物,其中R 9a 为芳基或者杂芳基,它们 各自任选被如上所定义的R 10 所取代。
    35: 根据权利要求34的化合物,其中R 9a 选自: 其中R 10 为H、C 1 -C 6 烷基或者C 0 -C 3 烷基环烷基、任选被C 1 -C 6 烷基单取代或者二取代的氨基、酰氨基、(C 1 -C 3 烷基)酰胺。
    36: 根据权利要求34的化合物,其中R 9a 为任选取代的苯基,优 选为被C 1 -C 6 烷基取代的苯基;C 1 -C 6 烷氧基;或者卤素。
    37: 根据权利要求33的化合物,其中R 8 为: 其中R 10a 为H、C 1 -C 6 烷基或者C 0 -C 3 烷基碳环基、任选被C 1 -C 6 烷基单取代或者二取代的氨基、酰氨基、(C 1 -C 3 烷基)酰胺、杂 芳基或者杂环基;和R 9b 为C 1 -C 6 烷基、C 1 -C 6 -烷氧基、氨基、二 (C 1 -C 3 烷基)氨基、(C 1 -C 3 烷基)酰胺、NO 2 、OH、卤素、三氟甲基 或者羧基。
    38: 根据权利要求33的化合物,其中R 9b 为C 1 -C 6 -烷氧基,优 选为甲氧基。
    39: 根据权利要求1的化合物,其中A为C(=O)NHSO 2 R 2 。
    40: 根据权利要求39的化合物,其中R 2 为任选取代的C 1 -C 6 烷 基,优选为甲基。
    41: 根据权利要求39的化合物,其中R 2 为任选取代的C 3 -C 7 环 烷基,优选为环丙基。
    42: 根据权利要求39的化合物,其中R 2 为任选取代的C 0 -C 6 烷 基芳基,优选为任选取代的苯基。
    43: 根据权利要求1的化合物,其中A为C(=O)OR 1 。
    44: 根据权利要求43的化合物,其中R 1 为H或者C 1 -C 6 烷基, 优选为氢、甲基、乙基或者叔丁基。
    45: 根据权利要求2的化合物,其中R 7′ 为H,并且R 7 为乙基、环 丙基甲基、环丁基甲基或者巯基甲基,优选为正丙基或者2,2-二氟乙 基。
    46: 根据权利要求2的化合物,其中R 7 和R 7′ 一起形成螺-环丙基 或者螺-环丁基环,它们任选被R 7′a 单取代或者二取代;其中: R 7′a 为C 1 -C 6 烷基、C 3 -C 5 环烷基或者C 2 -C 6 链烯基,各自任选 被卤素所取代;或者R 7a 为J。
    47: 根据权利要求47的化合物,其中所述环为被R 7′a 取代的螺- 环丙基环,其中: R 7′a 为乙基、乙烯基、环丙基、1-或者2-溴乙基、1-或者2- 氟乙基、2-溴乙烯基或者2-fluorethyl。
    48: 根据权利要求2的化合物,其中R 7 为J并且R 7′ 为H。
    49: 根据权利要求1的化合物,其中J为任选含有1~2个独立地 选自-O-、-S-或者-NR 12 -的杂原子的3~8元饱和或者不饱和亚 烷基链,其中R 12 为H,C 1 -C 6 烷基,比如甲基,或者-C(=O)C 1 -C 6 烷基,比如乙?;?。
    50: 根据权利要求49的化合物,其中J为4~7-元饱和或者不饱 和全碳亚烷基链。
    51: 根据权利要求49的化合物,其中J是饱和或者单不饱和的。
    52: 根据权利要求49的化合物,其中J具有提供含14或15个环 原子的大环的大小。
    53: 一种药物组合物,包含如权利要求1所定义的化合物及其药 学上可接受的载体。
    54: 根据权利要求53的药物组合物,还另外包含其它选自核苷类 似物聚合酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、病毒唑和干扰素的HCV抗病毒 剂。
    55: 如权利要求1所定义的化合物在治疗学中的用途。
    56: 如权利要求1所定义的化合物在制造用于预防或者治疗黄病 毒感染的药物中的用途,所述黄病毒包括HCV。
    57: 一种治疗或者预防比如HCV的黄病毒感染的方法,包括给药 有效量的如权利要求1所定义的化合物至患有上述感染或者处于上述 感染危险中的个体。

    说明书


    HCV?NS-3丝氨酸蛋白酶抑制剂

        【技术领域】

        本发明涉及新型的黄病毒HCV?NS3丝氨酸蛋白酶抑制剂以及它们用于治疗或者预防HCV的方法。

        背景技术

        HCV?NS3丝氨酸蛋白酶是一种包含丝氨酸蛋白酶域和RNA解旋酶域的多功能蛋白质。蛋白酶辅因子NS4A,一种相对小的蛋白质,是增强丝氨酸蛋白酶活性所必需的蛋白质。所述NS3丝氨酸蛋白酶在病毒生活周期中是必不可少的。根据X射线晶体结构揭示的基质结合部位分析表明,NS3蛋白酶的结合部位显著浅薄并且溶剂被暴露,使得小分子抑制剂设计遇到困难。

        确信两种HCV蛋白酶抑制剂已经进入了临床试验,即公开于WO0059929中的Boehringer?Ingelheim′s?BILN-2061和公开于WO0387092中的Vertex′VX-950。在学术和专利文献中同样提出了许多类似的拟肽HCV蛋白酶抑制剂。上述现有技术中的大多数拟肽通常以所述抑制剂P2位L-脯氨酸衍生物的形式存在,并且与HCV蛋白酶的S2亚位点相互作用。在BILN-2061的情形中,L-脯氨酸被喹啉醚4-取代,然而在VX-950中具有一个与L-脯氨酸环稠合的碳环。大多数拟肽还包括其它在P3位键接了的L-氨基酸衍生物肽,而许多上述提出的抑制剂还包括另外扩展到P4、P5和P6的L-氨基酸衍生物。

        已经很明显,BILN-2061或者VX-950的持续给药选择抗相应药物的HCV突变体,即所谓的药物逃逸突变体。这些药物逃逸突变体在HCV蛋白酶基因组中具有特征突变,特别是D168V、D168Y和/或A165S。由此,HCV的治疗示例不得不类似于HIV治疗,其中药物逃逸突变也容易出现。据此,为了给无效患者提供治疗方案,将不断需要其它具有不同抵抗特性的药物,并且即使对于首次治疗,在将来使用多种药物的联合治疗都可能成为正常形式。

        使用HIV药物,并且特别是HIV蛋白酶抑制剂的实践进一步强调,亚最佳药物动力学和复杂的剂量方式将很快导致顺应性被无意地破坏。这又意味着在HIV状况下,相应药物的24小时谷浓度(最小的血浆浓度)往往在当天的大部分时间内降低在IC90或者ED90限度之下。普遍认为,至少IC50的24小时谷浓度,并且更现实而言,IC90或者ED90的24小时谷浓度对于延迟药物逃逸突变体的产生和获得必需的药物动力学和药物代谢是非常必要的,这就使得上述谷浓度对药物设计形成了一种有力挑战。现有技术HCV蛋白酶抑制剂的强烈拟肽性质以及自身结构的多重肽键,对有效剂量形式形成了药物动力学障碍。

        发明简述

        根据本发明的第一方面,提供了式VI化合物,或者其药学上可接受的盐或者前药。

        其中:

        A为C(=O)OR1、C(=O)NHSO2R2、C(=O)NHR3或者CR4R4’,其中:

        R1为氢、C1-C6烷基、C0-C3烷基碳环基、C0-C3烷基杂环基;

        R2为C1-C6烷基、C0-C3烷基碳环基、C0-C3烷基杂环基;

        R3为C1-C6烷基、C0-C3烷基碳环基、C0-C3烷基杂环基、-OC1-C6烷基、-OC0-C3烷基碳环基、-OC0-C3烷基杂环基;

        R4为卤素、氨基或者OH;或者R4和R4’都为=O;

        R4’为C1-C6烷基、C0-C3烷基碳环基、C0-C3烷基杂环基;

        其中R2、R3和R4’各自任选被独立地选自以下的1~3个取代基所取代:卤素、氧代、腈、叠氮基、硝基、C1-C6烷基、C0-C3烷基碳环基、C0-C3烷基杂环基、NH2C(=O)-、Y-NRaRb、Y-O-Rb、Y-C(=O)Rb、Y-(C=O)NRaRb、Y-NRaC(=O)Rb、Y-NHSOpRb、Y-S(=O)pRb、Y-S(=O)pNRaRb、Y-C(=O)ORb和Y-NRaC(=O)ORb;

        Y独立地为一个键或者C1-C3亚烷基;

        Ra独立地为H或者C1-C3烷基;

        Rb独立地为H、C1-C6烷基、C0-C3烷基碳环基或者C0-C3烷基杂环基;

        p独立地为1或者2;

        M为CR7R7′或者NRu;

        Ru为H或者C1~C3烷基;

        R7为C1-C6烷基、C0-C3烷基C3-C7环烷基或者C2-C6链烯基,它们各自任选被1~3个卤原子或者被氨基、-SH或者C0-C3烷基环烷基所取代;或者R7为J;

        R7′为H或者与R7一起形成任选被R7′a取代的C3-C6环烷基环,其中;

        R7′a为C1-C6烷基、C3-C5环烷基、C2-C6链烯基,它们各自可以任选被卤素取代;或者R7′a可以为J;

        q′为0或者1并且k为0~3;

        Rz为H,或者与星号标记的碳一起形成烯键;

        Rq为H或者C1-C6烷基;

        W为-CH2-、-O-、-OC(=O)H-、-OC(=O)-、-S-、-NH-、-NRa、-NHSO2-、-NHC(=O)NH-或者-NHC(=O)-、-NHC(=S)NH-或者一个键;

        R8是包含1个或者2个各自具有4~7个环原子并且各自具有0~4个选自S、O和N的杂原子的饱和、部分饱和或者不饱和环的环系,所述环系任选通过C1-C3烷基与W间隔;或者R8为C1-C6烷基;任何上述R8基团都可以任选被R9单取代、二取代或者三取代,其中:

        R9独立地选自:卤素、氧代、腈、叠氮基、硝基、C1-C6烷基、C0-C3烷基碳环基、C0-C3烷基杂环基、NH2CO-、Y-NRaRb、Y-O-Rb、Y-C(=O)Rb、Y-(C=O)NRaRb、Y-NRaC(=O)Rb、Y-NHSOpRb、Y-S(=O)pRb、Y-S(=O)pNRaRb、Y-C(=O)ORb和Y-NRaC(=O)ORb;其中所述碳环基或者杂环基部分任选被R10所取代;

        其中

        R10为C1-C6烷基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、氨基、磺?;?、(C1-C3烷基)磺?;?、NO2、OH、SH、卤素、卤代烷基、羧基、酰氨基;

        Rx为H或C1-C5烷基;或者Rx为J;

        T为-CHR11-或者-NRd-,其中Rd为H、C1-C3烷基;或者Rd为J;

        R11为H、C1-C6烷基、C0-C3烷基碳环基、C0-C3烷基杂环基,它们各自可以被以下的基团所取代:卤素、氧代、腈、叠氮基、硝基、C1-C6烷基、C0-C3烷基碳环基、C0-C3烷基杂环基、NH2CO-、Y-NRaRb、Y-O-Rb、Y-C(=O)Rb、Y-(C=O)NRaRb、Y-NRaC(=O)Rb、Y-NHSOpRb、Y-S(=O)pRb、Y-S(=O)pNRaRb、Y-C(=O)ORb和Y-NRaC(=O)ORb;或者R11为J;

        J,如果存在,为单个3~10元饱和或者部分不饱和的亚烷基链,它从R7/R7′环烷基或者从R7连接的碳原子延伸至Rd、Rj、Rx、Ry或者R11中一个从而形成一个大环,所述链任选被一至三个独立选自-O-、-S-或者-NR12-的杂原子所中断,并且其中链中的0~3个碳原子任选被R14取代;

        其中;

        R12为H、C1-C6烷基、C3-C6环烷基或者-C(=O)R13;

        R13为C1-C6烷基、C0-C3烷基碳环基、C0-C3烷基杂环基;

        R14独立地选自:H、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、羟基、卤素、氨基、氧代、硫代和C1-C6硫代烷基;

        m为0或者1;n为0或者1;

        U为=O或者不存在;

        R15为H、C1-C6烷基、C0-C3烷基碳环基、C0-C3烷基杂环基,它们各自可以被以下基团取代:卤素、氧代、腈、叠氮基、硝基、C1-C6烷基、C0-C3烷基碳环基、C0-C3烷基杂环基、NH2CO-、Y-NRaRb、Y-O-Rb、Y-C(=O)Rb、Y-(C=O)NRaRb、Y-NRaC(=O)Rb、Y-NHS(=O)pRb、Y-S(=O)pRb、Y-S(=O)pNRaRb、Y-C(=O)ORb、Y-NRaC(=O)ORb;

        G为-O-、-NRy-、-NRjNRj-;

        Ry为H、C1-C3烷基;或者Ry为J;

        一个Rj为H,并且另一个Rj为H或者J;

        R16为H或R16为C1-C6烷基、C0-C3烷基碳环基、C0-C3烷基杂环基,它们各自可以被以下基团取代:卤素、氧代、腈、叠氮基、硝基、C1-C6烷基、C0-C3烷基碳环基、C0-C3烷基杂环基、NH2CO-、Y-NRaRb、Y-O-Rb、Y-C(=O)Rb、Y-(C=O)NRaRb、Y-NRaC(=O)Rb、Y-NHSOpRb、Y-S(=O)pRb、Y-S(=O)pNRaRb、Y-C(=O)ORb、Y-NRaC(=O)ORb。

        并不希望以任何方式受限于理论或者具体变量的暂行约束模式,在此应用的表意概念P1、P2、P3和P4仅仅是为了便利起见进行提供,它们基本具有如Schechter?&?Berger,(1976)Biochem?Biophys?ResComm?27?157-162所述的常规含义,表示抑制剂的被确认为分别充填所述酶S1、S2、S3和S4亚位点的那些部分,其中S1邻近断裂位点以及S4远离断裂位点。不论连接方式如何,通过式VI等定义的组分都意图包括在本发明范围内。例如,预期,尤其是当m和/或n为0时,封端基团R16-G可以与S3和S4亚位点相互作用。

        本发明的多种实施方案都可以象征性地表示为R16-G-P4-P3-P2-P1,其中P3和/或P4可以不存在。其中P1、P3和P4各自表示构成天然或者非天然氨基酸衍生物的结构单元,P2为取代的碳环残基和G-R16为封端基团。上述结构单元一般通过酰胺键连接在一起。在本发明化合物中,所述酰胺键在P2结构单元的各个侧面上彼此反向。

        本发明的另一方面包括药物组合物,所述药物组合物包括如上定义的本发明化合物以及其药学上可接受的载体或者稀释剂。

        本发明的化合物和组合物可以用于医学治疗或者预防HCV在人类中传染的方法中。据此,本发明的另一方面为如上所定义的本发明化合物在治疗学上的用途,比如在制造用于预防或者治疗黄病毒在人类或者动物中传染的药物中的用途。示例性的黄病毒包括BVDV、登革热以及特别是HCV。

        在本发明化合物中,将P2和P3连接在一起的酰胺键相对于连接P1和P2的酰胺键反向,即在P2脚手架每侧上的氨基酸衍生物P1和P3都通过它们的氨基官能团偶联至P2脚手架的各个侧面上的酸基团。这意味着P3和P4侧链(包括R16封端至它与S3或者S4相互作用的程度)指向与原肽基质相反的方向。反向P3和P4氨基酸的另一结果是,这些氨基酸的侧链相对于原肽基质将一个原子向外转移。

        可以预期,P3和P4侧链这种方式的方向变化将有助于形成P3和/或P4和/或R16袋填充基团(pocket?filing?groups)(例如侧链)的非天然D型立体化学。确实地,上述化合物一般是高活性化合物并且都在本发明范围内。然而,现已惊人地发现,即使在P3和/或P4位带有L-氨基酸侧链的本发明化合物都显示出良好的活性,但是相应的侧链单元也必须相对于原来的肽基质从不同的角度接近S3或者S4袋。据此,R11和/或R15上的L-立体化学和/或与拟L-立体化学相应的R16构型都代表本发明的优选方面。

        对S3和/或S4袋的不同接近角度还暗含着本发明化合物具有避免现有技术HCV蛋白酶抑制剂所表现的抗性的能力,迄今为止,所述现有技术HCV蛋白酶抑制剂都具有天然或者非天然L-氨基酸残基的常规肽骨架。正如熟知的在抗病毒治疗选择压力下迅速产生药物逃逸突变体的HIV逆转录酶一样,与RNA有关的HCV的RNA聚合酶NS5A具有非常差的解读能力。这也意味着HCV聚合酶非常易于出错,并且当HCV抗病毒剂长期给药时可能会产生特征抗性。即使是在投入之前,也很显然,具有基本上肽骨架(即使进行了大环化)的BILN?2061和在P3和P4上具有直链肽骨架的Vertex′NS3蛋白酶抑制剂VX-950在NS3蛋白酶的155、156或者168位上会迅速产生特征抗性突变(Lin等人,J?Biol?Chem?2004?279(17):17808-17)。

        本发明优选的化合物组包括其中P1表示肼衍生物的那些化合物,即M为NRu,其中Ru一般为H或者C1-C3烷基。其中M为CR7R7′的化合物构成本发明另外优选的一方面。

        在式VI中M为CR7R7′的优选实施方案包括下式VIA:

        优选在式VI中q′和k的值包括1∶1、1∶2、1∶3、2∶2、2∶3,更优选为0∶2和0∶0;并且最优选为0∶1,在此情形下优选的化合物具有以下部分结构之一:

        特别是其中Rz为H或者Rq为H或者甲基。

        本发明化合物可以包含P3和P4两个官能团,即m和n各自都为1。包括P3和P4官能团的式VI内优选的实施方案包括以下式VIda-VIdb:

        另外的实施方案包括与VIda和VIdb相应的结构,其中M为NRu。

        本发明化合物的另一结构包含P3官能团,但不包括P4官能团,即m为1和n为0。包括P3,但是不包括P4官能团的式VI内优选的实施方案包括以下式VIea-VIeb:

        另外的实施方案包括与VIea和VIeb相应的结构,其中M为NRu。

        本发明化合物的其它结构包括其中m和n都为0并且由此基团R16-G邻接P2的构造,但是如上所述,封端基团R16-G可以有利地与S3和/或S4相互作用。

        其中m和n都为0的式VI内优选的实施方案包括下式VIfa:

        另外的实施方案包括与VIfa相应的结构,其中M为NRu。

        本发明化合物可以包括线型分子,如上所述。另外,在其中R7和R7′一起定义为螺环烷基(比如螺环丙基)的实施方案中,本发明化合物可以被构造成大环,其中连接基团J在式VI中Rj、Rx、Ry、Rd或者R11中一个基团之间延伸。另外,大环J可以从与R7邻接的碳延伸至Rj、Rx、Ry、Rd或者Ru中的一个。

        其中m为0并且n为1的式VI化合物内,优选上述大环结构的实施方案包括下式VIga-VIgc:

        同样优选其中J链连接至与R7邻接的碳原子的相应结构。

        含有P3和P4两个官能团的式VI化合物内,即其中m和n都为1的式VI化合物内,优选上述大环结构的实施方案包括下式VIha-VIhc:

        同样优选其中J链连接至与R7邻接的碳原子的相应结构。

        在P3和P4官能团都不存在的式VI化合物内,即其中m和n各自都为0的式VI化合物内,优选大环结构包括下式VIhe-VIhf:

        同样优选其中J链连接至与R7邻接的碳原子的相应结构。

        一般而言,在任选的大环结构中,例如上述图解的大环结构中,连系物J为具有3~10个链原子,优选4~7个链原子,比如5或者6个链原子的饱和亚烷基或者部分不饱和的亚烷基链,即在相邻碳原子之间带有1~3个不饱和键的亚烷基链,一般为一个不饱和现象。该链的长度自然将取决于J是否从Rd、Rj、Rx、Ry、R11或者从与R7邻接的碳延伸。适宜的链详述在WO00/59929中。一般J为提供具有13~16个环原子的大环的大小(包括P1、P2以及如果存在的P3基团中含在环内的那些原子)。适宜的J为提供具有14或者15个环原子的大环的大小。

        合意地,J链含有一个或两个选自以下的杂原子:O、S、NH、NC1-C6烷基或者N-C(=O)C1-C6烷基。更优选,J链任选包含一个下述的杂原子:NH或者N-C(=O)C1-C6烷基,最优选为N(Ac)。最优选包含氮原子的链是饱和链。在另一实施方案中,J包含一个选自O或者S的杂原子。该链可以被R14取代,比如H或者甲基。

        一般J连系物是饱和的。另外,J包含1~3个双键,优选1个双键,一般与环烷基R7官能团间隔一个碳原子,如果存在的话。上述双键可以是顺式或者反式双键。

        从而,J的代表性实例包括戊烯、己烯、庚烯,它们各自被下述基团所取代:C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、羟基、卤素、氨基、氧代、硫代或者C1-C6硫代烷基;戊烯-3-基、己烯-4-基、庚烯-5-基,其中3、4或者5是指在3位和4位碳原子、4位和5位碳原子等等之间的双键。

        适宜的R7和R7′基团包括其中R7′为H,并且R7为正乙基、正丙基、环丙基、环丙基甲基、环丁基、环丁基甲基、2,2-二氟乙基或者巯基甲基的那些。优选的实施方案包括其中R7为正丙基或者2,2-二氟乙基的那些实施方案。

        R7和R7′的另一优选结构包括其中R7′为H并且R7为C3-C7环烷基或者C1-C3烷基C3-C7环烷基的那些结构。

        对于R7和R7′,此外优选的结构包括其中R7′为H并且R7为J的那些结构。

        另外,R7和R7′一起定义为螺-环烷基官能团,比如螺-环丁基环,并且更优选为螺-环丙基环。在本发明上下文中,“螺”仅仅是指环烷基环与所述化合物的肽骨架共享一个碳原子。所述环是被取代或者未被取代的环。优选的取代基包括用R7′a单取代或者二取代,其中R7′a为C1-C6烷基、C3-C5环烷基或者C2-C6链烯基,各自任选被卤素所取代。

        另外所述取代基可以是如上所述的J连系物。对于螺-环丙基环,一般优选的立体化学定义如下。

        特别优选的取代基包括R7′a为乙基、乙烯基、环丙基(即对R7/R7′“螺”环烷基环的螺-环丙基取代基)、1-或者2-溴乙基、1-或者2-氟乙基、2-溴乙烯基或者2-fluorethyl。

        在本发明的一个实施方案中,A为如PCT/EP03/10595中详述的-CR4R4’,其内容在此引入作为参考。

        由此,适宜的R4’基团包括C1-C6烷基,比如甲基、乙基、丙基、乙烯基和-CHCHCH3。另外优选的R4’基团包括芳基或者杂芳基,比如任选取代的苯基、吡啶基、噻唑基或者苯并咪唑基或者C1-C3烷基芳基或者C1-C3烷基杂芳基,其中烷基部分为甲基、乙基、丙基、乙烯基和-CHCHCH3。优选的芳基部分包括任选取代的苯基、苯并噻唑和苯并咪唑。

        优选的R4基团包括-NH2、氟或者氯。另外优选的R4基团包括-OH并且特别是=O。

        A的另一实施方案为C(=O)NHR3,其中R3为任选取代的C0-C3烷基芳基、C0-C3烷基杂芳基、OC0-C3烷基芳基或者OC0-C3烷基杂芳基。适当的取代基出现于以下定义部分。

        对于A,另一优选的结构为C(=O)OR1,特别是其中R1为C1-C6烷基,比如甲基、乙基或者叔丁基,以及最优选为氢。

        对于A,特别优选的结构为C(=O)NHSO2R2,特别是其中R2为任选取代的C1-C6烷基(优选甲基)、或者任选取代的C3-C7环烷基(优选环丙基)或者任选取代的C0-C6烷基芳基(优选任选取代的苯基)。适当的取代基出现于以下定义部分。

        在环状P2基团上的取代基-W-R8可以应用任何脯氨酸取代基,所述脯氨酸取代基广泛描述于下述文献中:WO00/59929、WO00/09543、WO00/09558、WO99/07734、WO99/07733、WO02/60926、WO03/35060、WO03/53349、WO03/064416、WO03/66103、WO03/064455、WO03/064456、WO03/62265、WO03/062228、WO03/87092、WO03/99274、WO03/99316、WO03/99274、WO04/03670、WO04/032827、WO04/037855、WO04/43339、WO04/92161、WO04/72243、WO04/93798、WO04/93915、WO04/94452、WO04/101505、WO04/101602、WO04/103996和WO04113365等等。

        优选的W官能团包括,W为-OC(=O)NH-、-OC(=O)-、-NH-、-NR8′-、-NHS(O)2-或者-NHC(=O)-,特别是-OC(=O)NH-或者-NH-。对于上述W官能团,优选的R8基团包括任选取代的C0-C3烷基碳环基或者C0-C3烷基-杂环基,包括在WO0009543、WO0009558和WO00/174768中描述的那些基团。例如在环状P2基团上的酯类取代基,-W-R8,包括在WO01/74768中公开的那些取代基,比如C1-C6烷酰氧基、C0-C3烷基芳酰氧基,特别是(任选取代的)苯甲酰氧基或者C0-C3烷基杂环酰氧基,特别是以下基团:

        此公开文献还描述了另外可能的-W-R8,例如C1-C6烷基(比如乙基、异丙基)、C0-C3烷基碳环基(比如环己基)、2,2-二氟乙基、-C(=O)NRc,其中Rc为C1-C6烷基、C0-C3烷基环丙基、C0-C3烷基芳基或者C0-C3烷基杂环基。

        当前优选的W官能团包括-S-,并且特别是-O-。在所述实施方案中,R8的适宜含义包括C0-C3烷基芳基或者C0-C3烷基杂芳基,它们各自任选被R9单取代、二取代或者三取代,其中:

        R9为C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、NO2、OH、卤素、三氟甲基、氨基或者酰氨基(例如任选被C1-C6烷基单取代或者二取代的氨基或者酰氨基)、C0-C3烷基芳基、C0-C3烷基杂芳基或者羧基,其中芳基或者杂芳基任选被R10取代,其中:

        R10为C1-C6烷基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、氨基(比如被C1-C6烷基单取代或者双取代的氨基)、酰氨基(比如C1-C3烷基酰胺)、磺?;鵆1-C3烷基、NO2、OH、卤素、三氟甲基、羧基或者杂芳基。

        一般,R8为C0-C3烷基芳基或者C0-C3烷基杂芳基时的C0-C3烷基部分为甲基,并且特别是不存在,即C0。所述芳基或者杂芳基部分如以下定义部分的宽泛说明。

        优选的R9包括C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、氨基(比如二-(C1-C3烷基)氨基)、酰氨基(比如-NHC(O)C1-C6烷基或者C(=O)NHC1-C3烷基)、芳基或者杂芳基,其中芳基或者杂芳基部分任选被R10取代;其中:R10为C1-C6烷基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、氨基(比如单-或者二-C1-C6烷基氨基)、酰氨基(比如-NHC(O)C1-C3烷基或者C(=O)NHC1-C6烷基)、卤素、三氟甲基或者杂芳基。

        优选的R10包括C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、氨基、酰氨基(比如-NHC(O)C1-C6烷基或者C(=O)NHC1-C6烷基)、卤素或者杂芳基。

        特别优选的R10包括甲基、乙基、异丙基、叔丁基、甲氧基、氯、氨基、酰氨基(比如为-NHC(O)C1-C3烷基或者C(=O)NHC1-C6烷基)或者C1-C3烷基噻唑。

        R8优选的实施方案包括1-萘基甲基、2-萘基甲基、苄基、1-萘基、2-萘基或者喹啉基,各自未被取代或者被如上定义的R9单取代或者二取代,特别是1-萘基甲基或者未被取代、被如上定义的R9单取代或者二取代的喹啉基。

        当前优选R8为:

        其中R9a为C1-C6烷基;C1-C6烷氧基;硫代C1-C3烷基;任选被C1-C6烷基取代的氨基;C0-C3烷基芳基;或者C0-C3烷基杂芳基、C0-C3烷基杂环基,其中所述芳基、杂芳基或者杂环基任选被R10所取代,其中:R10为C1-C6烷基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、氨基、酰氨基、杂芳基和杂环基;和

        R9b为C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、氨基、酰氨基、NO2、OH、卤素、三氟甲基、羧基。

        适宜的R9a包括芳基或者杂芳基,各自任选被如上定义的R10所取代,特别是其中R9a选自:

        其中R10为H、C1-C6烷基或者C0-C3烷基-C3-C6环烷基、氨基(比如被C1-C6烷基单取代或者二取代的氨基)、酰氨基(比如为-NHC(O)C1-C6烷基或者C(=O)NHC1-C6烷基)、杂芳基或者杂环基。

        R9a合宜的为苯基,并且由此R8为:

        其中R10a为H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或者卤素;和R9b为C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、氨基(比如C1-C3烷基氨基)、酰氨基(比如为-NHC(O)C1-C6烷基或者C(=O)NHC1-C3烷基)、NO2、OH、卤素、三氟甲基或者羧基。

        另外优选的R8为:

        其中R10a为H、C1-C6烷基或者C0-C3烷基-C3-C6环烷基、氨基(比如任选被C1-C6烷基单取代或者二取代的氨基)、酰氨基(比如为-NHC(O)C1-C6烷基或者C(=O)NHC1-C3烷基或者C(=O)N(C1-C3烷基)2)、杂芳基或者杂环基;和R9b为C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、任选被C1-C6烷基单取代或者二取代的氨基、酰氨基(比如为-NRC(O)C1-C6烷基或者C(=O)NHC1-C3烷基或者C(=O)N(C1-C3烷基)2)、NO2、OH、卤素、三氟甲基或者羧基。

        在上面刚刚描述的实施方案中,R9b合宜的为C1-C6-烷氧基,优选为甲氧基。

        其它R8基团,例如当W为醚时,为下式:

        其中W′为N或者CH,r为0或者1,Ra′为H、C1-C6烷基、C0-C3烷基环烷基、C1-C6烷氧基、羟基或者胺,并且Rb′为H、卤素、C1-C6烷基、C0-C3烷基环烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6硫代烷基、环烷基C0-C3烷氧基、C1-C3烷氧基C1-C3烷基、C0-C3烷基芳基或者C0-C3烷基杂环基。特别优选的醚取代基为7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基。

        当W为一个键时,则R8优选为取代或者未被取代的杂环体系,如WO2004/072243或者WO2004/113665所述。

        当W为一个键时,R8代表性的实例包括以下任选可以被取代的芳族化合物:1H-吡咯、1H-咪唑、1H-吡唑、呋喃、噻吩、唑、噻唑、异唑、异噻唑、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、酞嗪、喹喔啉、喹唑啉、喹啉、噌啉、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶、1H-吲哚、1H-苯并咪唑、1H-吲唑、7H-嘌呤、苯并噻唑、苯并唑、1H-咪唑并[4,5-c]吡啶、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶、1,3-二氢-苯并咪唑-2-酮、1,3-二氢-苯并咪唑-2-硫酮、2,3-二氢-1H-吲哚、1,3-二氢-吲哚-2-酮、1H-吲哚-2,3-二酮、1,3-二氢-苯并咪唑-2-酮、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶、苯并呋喃、苯并[b]噻吩、苯并[d]异唑、苯并[d]异噻唑、1H-喹啉-2-酮、1H-喹啉-4-酮、1H-喹唑啉-4-酮、9H-咔唑、1H-喹唑啉-2-酮。

        当W为一个键时,R8另外的代表性实例包括以下任选可以被取代的非芳族化合物:氮丙啶、氮杂环丁烷、吡咯烷、4,5-二氢-1H-吡唑、吡唑烷、咪唑烷-2-酮、咪唑烷-2-硫酮、吡咯烷-2-酮、吡咯烷-2,5-二酮、哌啶-2,6-二酮、哌啶-2-酮、哌嗪-2,6-二酮、哌嗪-2-酮、哌嗪、吗啉、硫代吗啉-1,1-二氧化物、吡唑烷-3-酮、咪唑烷-2,4-二酮、哌啶、四氢呋喃、四氢吡喃、[1,4]二氧六环、1,2,3,6-四氢吡啶。

        当W为一个键时,优选R8的含义包括四唑及其衍生物。所述四唑部分被连接到环状P2脚手架上并且任选被取代,如下所示:

        其中Q*选自:不存在、-CH2-、-O-、-NH-、-N(R1*)-、-S-、-S(=O)2-和-(C=O)-;Q*选自:不存在、-CH2-和-NH-;Y*选自:H、C1-C6烷基、C0-C3芳基、C0-C3杂环基;和R1*选自:H、C1-C6烷基、碳环基、C0-C3芳基、C0-C3杂环基。

        取代四唑的代表性实例如WO2004/072243中表1以及随后的结构或者WO2004/113665所述。

        此外,当W为一个键时,优选R8的含义包括三唑及其衍生物。所述三唑部分被连接到环状P2脚手架上并且任选被取代,如下所示:

        其中X*和Y*独立地选自:H、卤素、C1-C6烷基、C0-C3碳环基、-CH2-氨基、-CH2-芳基氨基、-CH2-二芳基氨基、-(C=O)-氨基、-(C=O)-芳基氨基、-(C=O)-二芳基氨基、C0-C3芳基、C0-C3杂环基,或者另外,X*和Y*连同它们连接的碳原子合起来形成选自芳基和杂芳基的环状部分。

        取代三唑的代表性实例如WO2004/072243中表2以及随后的结构或者WO2004/113665所述。

        此外,当W为一个键时,优选R8的含义包括哒嗪酮及其衍生物。所述哒嗪酮部分被连接到环状P2脚手架上并且任选被取代,如下所示:

        其中X*、Y*和Z*独立地选自:H、N3、卤素、C1-C6烷基、碳环基、氨基、C0-C3芳基、-S-芳基、-O-芳基、-NH-芳基、二芳基氨基、二杂芳基氨基、C0-C3杂环基、-S-杂芳基、-O-杂芳基、-NH-杂芳基,或者另外,X和Y或者Y和Z以及它们连接的碳原子合起来形成芳基或者杂芳基环部分。

        取代哒嗪酮的代表性实例如WO2004/072243中表3以及随后的结构或者WO2004/113665所述。

        优选P3基团,即当m为1时,类似于天然或者非天然氨基酸,特别是脂族氨基酸,比如L-缬氨酰、L-亮氨酰、L-异亮氨酰、或者L-叔亮氨酰。此外优选的P3基团,如WO02/01898中所示,包括C0-C3烷基环烷基丙氨酸,特别是环己基丙氨酸,任选被CO2Rg所取代,其中Rg为H、C1-C6烷基、C0-C3烷基芳基、C0-C3烷基杂环基、C0-C3烷基环烷基或者胺;或者N-乙?;哙せ蛘咚那膺秽?。由此,优选R11基团包括C1-C6烷基、C0-C3烷基碳环基(例如C0-C3烷基C3-C7环烷基)、C0-C3烷基芳基或者C0-C3烷基杂芳基,它们各自任选被羟基、卤素、氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6硫代烷基、C(=O)OR14、羧基、(C1-C6烷氧基)羰基、芳基、杂芳基或或杂环基所取代,其中所述取代基特别是羟基或者C(=O)OR14。

        特别优选的R11包括叔丁基、异丁基、环己基、苯乙基、2,2-二甲基-丙基、环己基甲基、苯甲基、2-吡啶甲基、4-羟基-苯基甲基或者羧基丙基。最优选的R11含义为叔丁基、异丁基或者环己基。

        本发明实施方案包括其中P4不存在(即n为0)并且其中P3不带有羰基(即U不存在)的化合物。代表性的亚结构包括下式Ii的那些亚结构:

        其中

        Rx和Ry如上所定义,优选为H;

        R11′为C1-C6烷基,优选为C3-C5支链烷基,比如L-缬氨酰、L-亮氨酰、L-异亮氨酰、L-叔亮氨酰的侧链;或者C0-C2烷基C3-C7环烷基,比如环己基或者环己基甲基;

        R16a为-Rba、-S(=O)pRba、-C(=O)Rba;

        Rba为C1-C6烷基、C0-C3烷基杂环基、C0-C3烷基碳环基。

        另外,带有部分结构Ii的化合物可以在适当的R7含义和Rx、Ry或者R11′中的一个之间形成大环。

        不带有羧基官能团(即变量U不存在)的P3基团的代表性实例包括下式VIia-VIid:

        其中Ar为碳环基或者杂环基,特别是芳基或者杂芳基,它们各自任选被R9所取代。虽然式VIia-VIid部分结构已经在其中k为1并且q’为0的本发明上下文化合物内进行了阐明,但是,显然上述VIi结构还可以应用于其它q’和k值时的化合物。类似地,虽然式VIic和VIid部分结构表示与亮氨酸相应的R11基团,但是显然这些结构还可以用于其它R11基团中,特别是那些与天然或者非天然L-氨基酸侧链类似的基团,例如叔丁基丙氨酸/叔亮氨酸。

        在其中n为1的本发明化合物中,R15优选为任选取代的C1-C6烷基或者C0-C3烷基碳环基(例如C0-C3烷基C3-C7环烷基),它们可以各自任选被取代。优选P4基团为天然或者非天然氨基酸的一般类似物,特别是脂族氨基酸,比如L-缬氨酰、L-亮氨酰、L-异亮氨酰、L-叔亮氨?;蛘週-环己基丙氨酸,并且由此优选R15基团包括环己基、环己基甲基、叔丁基、异丙基或者异丁基。

        优选G含义包括-NRy-(特别是其中Ry为甲基或者优选为H)或者肼。

        另外优选G含义为O,从而与P4(如果存在)的羰基或者P3(如果存在)的羰基限定成酯,或者在其中基团U不存在的变体中限定成醚。对于R16,常规药学上可接受的醚或者酯封端基团包括C1-C6烷基(特别是甲基或者叔丁基)、C0-C3烷基杂环基(特别是吡啶基、苯并咪唑基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基)或者C0-C3烷基碳环基(特别是苯基、苄基、2,3-二氢化茚基),它们各自任选被羟基、卤素、氨基或者C1-C6烷氧基所取代。

        优选本发明化合物可以包括肼官能团,例如其中T为-NRd-和m为1;同时n为0或者1。另外,特别是其中m为0时,G可以为-NRjNRj-,比如-NHNH-。所述化合物通常不会在G和T上都包含肼。其中m和n都为0的式VI化合物内,优选的肼包括具有以下部分结构VIja-VIjb的化合物:

        在式VIja和VIjb中,R16′可以被认为是烷基(或者C1-C3烷基杂环基或者C1-C3烷基碳环基),其中第一个烷基碳被氧基取代从而产生酮官能团并且R16′为剩余的烷基、烷基杂环基或者烷基碳环基部分。式VIjb表明了一种变体,其中R16为其碳被氧代取代基和-ORb取代的亚甲基基团,其中Rb定义如上,一般为C1-C6烷基(比如叔丁基)、C0-C3烷基杂环基(比如吡啶基)或者C0-C3烷基碳环基(比如苄基或者苯基),它们各自任选被取代,如上所定义的。具有部分结构VIja和VIjb的化合物可以是如上所述的线型分子(两个Rj都为H),或者优选所示Rj基团中的一个可以通过J与适当的R7基团大环化。

        其中m为1的另一式VI的肼包括含有以下部分结构VIjc和VIjd的那些肼:

        其中G、R15、R16、RX、Rd、Rq、Rz和Ru如上式VI所定义。具有部分结构VIjc和VIjd的化合物可以是如上所述的线型分子(Rx和Rd两者都为H),或者优选所示Rx或者Rd基团中的一个可以通过J与适当的R7基团大环化。

        虽然式VIja-VIjd用五元碳环作为P2脚手架进行说明,但是显然本发明的这方面同样适用于其它q’和k的结构。式VIja-VIjd内优选的实施方案包括其中Rq和Rz都为H的那些实施方案,或者其中Rz为烯键并且Rq为C1-C3烷基的那些实施方案。

        当G为氨基,和m与n都为0,并且R16为如下所定义的N-连接不饱和杂环(例如吡啶基或者嘧啶基)或者如下所定义的N-连接饱和杂环(比如哌嗪基、哌啶基并且特别是吗啉基)时,得到另一肼类似结构。上述实施方案的实例包括带有式VIjc和VIjd的那些实施方案:

        带有部分结构VIjc和VIjd的化合物可以是如上所示的线型分子,或者优选Rx可以经J与适当的R7基团进行大环化。虽然这些部分结构使用五元环作为P2脚手架进行说明,但是很显然这种结构可以延伸于其它的q’和k值。类似地,这些结构可以应用于其它作为R16的N-连接杂环。

        现在返回式VI,一般而言,对于本发明化合物优选的R16基团包括2-茚满醇、2,3-二氢化茚基、2-羟基-1-苯基-乙基、2-噻吩甲基、环己基甲基、2,3-亚甲二氧基苄基、环己基、苯基、苄基、2-吡啶基甲基、环丁基、异丁基、正丙基、甲基或者4-甲氧基苯基乙基。

        当前优选的R16基团包括2-茚满醇、茚满、2-羟基-1-苯基-乙基、2-噻吩甲基、2,3-亚甲二氧基苄基或者环己基甲基。

        非天然氨基酸包括L-氨基酸,其中侧链不是20种天然存在氨基酸中的一种。非天然氨基酸的实例包括L-β-甲磺?;谆彼?、L-环己基丙氨酸、L-叔亮氨酸(L-tertiary-leucine)、L-正亮氨酸、L-正缬氨酸、L-鸟氨酸、L-肌氨酸、L-瓜氨酸、L-高苯丙氨酸、L-高丝氨酸、L-β-(1-萘基)丙氨酸、L-β-(2-萘基)丙氨酸等等。非天然氨基酸还包括与20种天然氨基酸相应的D-氨基酸和带有其它侧链(比如上述所列的那些侧链)的D-氨基酸。

        在此使用的“C1-C6烷基”(还缩写为C1-C6alk,或者用于化合物表达式比如C1-C6烷氧基等等之中)意指包括直链或者支链脂族碳链,比如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基、庚基以及其简单异构体。所述烷基可以具有不饱和键。另外,C1-C6烷基中任意C原子可以任选被一个、两个或者价键允许时被三个卤素原子取代和/或所述亚烷基链被杂原子S、O、NH中断。如果所述杂原子位于链的末端,那么它可以适当地被一个或者两个氢原子取代。C1-C4烷基和C1-C5烷基具有根据碳数需要调整的C1-C6烷基的相应含义。

        在此使用的“C1-C3烷基”包括甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基,它们可以各自任选被取代或者如上段所述被杂原子所中断,或者在C2或者C3的情形中带有不饱和键,比如CH2=CH。

        在此使用的“C1-C3亚烷基”描述了二价C1-C3烷二基部分,包括亚丙基、亚乙基并且特别时亚甲基。对于J,一般较长的亚烷基链可以包括1~3个不饱和现象和/或用如上所述的杂原子中断。

        “氨基”包括NH2、NHC1-C6烷基或者N(C1-C6-烷基)2,特别是C1-C3烷基变体。

        “酰氨基”包括C(=O)NH2和烷基酰胺基,比如C(=O)NHC1-C6烷基、C(=O)N(C1-C6烷基)2,特别是C(=O)NHC1-C3烷基、C(=O)N(C1-C3烷基)2或者-NH(C=O)C1-C6烷基,例如-NHC(=O)CHC(CH3)3,包括-NH(C=O)C1-C3烷基。

        在此使用的“卤素”意指包括F、Cl、Br、I,特别是氯并且优选氟。

        在此使用的“C0-C3烷基芳基”意指包括芳基部分,比如苯基、萘基或者稠合至C3-C7环烷基的苯基(例如2,3-二氢化茚基),其中所述芳基被直接键接(即C0)或者通过如上C1-C3亚烷基所定义的中间甲基、乙基或者丙基或异丙基连接。除非另有说明,芳基和/或它的稠合环烷基部分任选被1~3个选自以下的取代基所取代:卤素、羟基、硝基、氰基、羧基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、C1-C6烷?;?、氨基、叠氮基、氧代、巯基、硝基、C0-C3烷基碳环基、C0-C3烷基杂环基?!胺蓟本哂邢嘤Φ暮?,即其中C0-C3烷基连系物不存在。

        在此使用的“C0-C3烷基C3-C7环烷基”意指包括C3-C7环烷基基团,比如环丙基、环丁基、环戊基、环己基或者环庚基,其中所述环烷基被直接键接(即C0烷基)或者通过如上C1-C3亚烷基所定义的中间甲基、乙基、丙基(proyl)连接。所述环烷基可以包括不饱和键。除非另有说明,所述环烷基部分任选被1~3个选自以下的取代基所取代:卤素、羟基、硝基、氰基、羧基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、C1-C6烷?;?、氨基、叠氮基、氧代、巯基、硝基、C0-C3烷基碳环基、C0-C3烷基杂环基。

        在此使用的“C0-C3烷基碳环基”意指包括C0-C3烷基芳基和C0-C3烷基C3-C7环烷基。除非另有说明,所述芳基或者环烷基任选被1~3个选自以下的取代基所取代:卤素、羟基、硝基、氰基、羧基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、C1-C6烷?;?、氨基、叠氮基、氧代、巯基、硝基、C0-C3烷基碳环基和/或C0-C3烷基杂环基?!疤蓟坊本哂杏氪讼嘤Φ暮?,即其中C0-C3烷基连系物不存在。

        在此使用的“C0-C3烷基杂环基”意指包括单环的、饱和或者不饱和的、含有杂原子的环,比如哌啶基、吗啉基、哌嗪基、吡唑基、咪唑基、唑基、异唑基、噻嗪基(thiaziholyl)、异噻嗪基、噻唑基、二唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、四唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡唑基,或者任何稠合至苯基环的上述基团,比如喹啉基、苯并咪唑基、苯并唑基、苯并异唑基、苯并噻嗪基、苯并异噻嗪基、苯并噻唑基、苯并二唑基、苯并-1,2,3-三唑基、苯并-1,2,4-三唑基、苯并四唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并吡啶基、苯并嘧啶基、苯并哒嗪基、苯并吡唑基等等,所述环可以直接键接(即C0),或者通过如上C1-C3亚烷基所定义的中间甲基、乙基、丙基或者异丙基连接。上述任何具有芳香特性的不饱和环在本文中都可以称为杂芳基。除非另有说明,所述杂环和/或它的稠合苯基部分任选被1~3个选自以下的取代基所取代:卤素、羟基、硝基、氰基、羧基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、C1-C6烷?;?、氨基、叠氮基、氧代、巯基、硝基、C0-C3烷基碳环基、C0-C3烷基杂环基?!霸踊坊焙汀霸臃蓟本哂邢嘤Φ暮?,即其中C0-C3烷基连系物不存在。

        由此,在上述定义范围内的一般杂环基和碳环基部分是具有5个或者特别是6个环原子的单环,或者包括稠合至4元、5元或者6元环的6元环的双环结构。

        一般上述基团包括C3-C8环烷基、苯基、苄基、四氢萘基、茚基、2,3-二氢化茚基、杂环基,比如氮杂环庚烷基、azocanyl、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、哌嗪基、二氢吲哚基、吡喃基、四氢吡喃基、四氢硫代吡喃基、硫代吡喃基、呋喃基、四氢呋喃基、噻吩基、吡咯基、唑基、异唑基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、四唑基、吡唑基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并唑基、苯并异唑基、喹啉基、四氢喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、喹唑啉基、四氢喹唑啉基和喹喔啉基,它们可以各自任选被取代,如在此所定义的。

        由此,所述饱和杂环部分包括比如以下的基团:吡咯啉基、吡咯烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、吡喃基、硫代吡喃基、哌嗪基、二氢吲哚基、azetidinyl、四氢吡喃基、四氢硫代吡喃基、四氢呋喃基、六氢嘧啶基、六氢哒嗪基、1,4,5,6-四氢嘧啶胺、二氢-唑基、1,2-thiazinanyl-1,1-二氧化物、1,2,6-thiadiazinanyl-1,1-二氧化物、异噻唑烷基-1,1-二氧化物和咪唑烷基-2,4-二酮,然而,所述不饱和杂环包括具有芳香特性的基团,比如呋喃基、噻吩基、吡咯基、唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异唑基、异噻唑基、二唑基、三唑基、四唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、中氮茚基、吲哚基、异氮茚基。在各种情形中,所述杂环可以与苯基环稠合,从而形成双环体系。

        合成

        本发明化合物可以通过不同的化学策略在溶液或者固相或者二者的结合中进行合成??梢允紫榷允实北;さ牡ジ鼋峁沟ピ兄票?,随后将它们偶联在一起,即,P2+P1→P2-P1。另外,可以将所述结构单元的前体偶联在一起,然后在抑制剂连续合成的后面步骤中对其进行改变。然后,可以将期望结构的另外结构单元、结构单元前体或者预合成的更大片断偶联在增长链上,例如,R16-G-P3+C(=O)-P2-P1→R16-G-P3-C(=O)-P2-P1或者R16-G-P4-P3+C(=O)-P2-P1→R16-G-P4-P3-C(=O)-P2-P1.

        两种氨基酸之间的偶联、氨基酸与肽之间的偶联或者两种肽片断之间的偶联都可以利用标准偶联方法进行,比如叠氮化物法、混合碳-羧酸酐(氯甲酸异丁酯)法、碳二亚胺(二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或者水溶性的碳二亚胺)法、活性酯(对硝基苯酯、N-羟基丁二酰亚胺基酯)法、Woodward试剂K-方法、羰二咪唑法、磷试剂或者氧化还原法。其中一些方法(特别是碳二亚胺法)可以通过加入1-羟基苯并三唑或者4-DMAP而得到改进。这些偶联反应可以在溶液(液相)或者固相中进行。

        更明确而言,所述偶联步骤包括一种反应物的游离羧基与另一种反应物的游离氨基在偶联剂存在下发生脱水偶联,从而形成酰胺连接键。上述偶联剂的描述公开于一般的肽化学教科书中,例如M.Bodanszky,“Peptide?Chemistry”,第二修订版,Springer-Verlag,Berlin,Germany,(1993),在下文简称为Bodanszky,其内容在此引入作为参考。适宜偶联剂的实例为N,N′-二环己基碳二亚胺、在N,N′-二环己基碳二亚胺或者N-乙基-N′-[(3二甲基氨基)丙基]碳二亚胺存在下的1-羟基苯并三唑。实用和有效的偶联剂为市售(苯并三唑-1-基氧基)三-(二甲基氨基)六氟磷酸盐,独立使用或者在1-羟基苯并三唑或者4-DMAP存在下使用。另一实用和有效的偶联剂为市售2-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸盐。另一实用和有效的偶联剂为市售O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐。

        所述偶联反应在惰性溶剂中进行,例如二氯甲烷、乙腈或者二甲基甲酰胺。将过量的叔胺(例如二异丙基乙胺、N-甲基吗啉、N-甲基吡咯烷或者4-DMAP)加入其中以保持反应混合物的pH值为约8。反应温度通常为0℃~50℃,并且反应时间通常为15min~24h。

        在偶联反应期间,通常必须对氨基酸组分的官能团进行?;?,以避免形成不期望的键??梢杂τ玫谋;せ性贕reene,“ProtectiveGroups?in?Organic?Chemistry”,John?Wiley?&?Sons,New?York(1981)和“The?Peptides:Analysis,Synthesis,Biology”,Vol.3,AcademicPress,New?York(1981)中,在下文中简称为Greene,其公开内容在此引入作为参考。

        通常将C-末端残基的α-羧基?;こ甚?,该酯可以进行裂解,从而形成羧酸??梢杂τ玫谋;せ?)烷基酯,比如甲基、三甲基甲硅烷基和叔丁酯,2)芳烷基酯,比如苄基和取代苄基酯,或者3)可以通过弱碱或者温和还原方法分解的酯,比如三氯乙酯和苯乙酮(ethanone)酯。

        一般对要进行偶联的各氨基酸的α-氨基进行?;???梢允褂帽玖煊蛞阎娜魏伪;せ?。上述基团的实例包括:1)?;?,比如甲?;?、三氟乙?;?、邻苯二甲?;投?甲苯磺?;?;2)芳香氨基甲酸酯基团,比如苄氧羰基(Cbz或者Z)和取代苄氧羰基和9-芴甲氧羰基(Fmoc);3)脂族氨基甲酸酯基团,比如叔丁氧羰基(Boc)、乙氧羰基、二异丙基甲氧羰基和烯丙氧羰基;4)环状烷基氨基甲酸酯基团,比如环戊基氧基羰基和金刚烷氧基羰基;5)烷基,比如三苯甲基和苄基;6)三烷基甲硅烷基,比如三甲基甲硅烷基;和7)含硫醇的基团,比如苯硫羰基和二硫代琥珀?;?。优选α-氨基?;せ狟oc或者Fmoc。许多适当?;び糜陔暮铣傻陌被嵫苌锒伎梢允谐」郝虻?。

        在下一偶联步骤之前,所述α-氨基?;せ涣呀?。当使用Boc基团时,选择的方法为单独使用或者在二氯甲烷中的三氟乙酸,或者为在二氧六环或者乙酸乙酯中的HCl。然后在偶联之前或者原位用碱性溶液(比如缓冲水溶液,或者在二氯甲烷或者乙腈或者二甲基甲酰胺中的叔胺)对所得铵盐进行中和。当使用Fmoc基团时,选择的反应物为在二甲基甲酰胺中的哌啶或者取代哌啶,但是任何仲胺都可以使用。所述去?;ぴ?℃~室温之间进行,通常为20~22℃。

        在使用任何上述基团制备所述肽期间,一般要对任何具有侧链官能团的天然或者非天然氨基酸进行?;?。本领域熟练的技术人员应当理解,对于这些侧链官能团,适当?;せ难≡窈陀τ萌【鲇诎被嵋约半纳掀渌;せ拇嬖?。在对上述?;せ醒≡袷?,期望在去?;ず团剂?氨基期间,所述基团没有被除去。

        例如,当Boc用作α-氨基?;せ?,以下侧链?;せ鞘室说模憾?甲苯磺?;糠挚梢杂糜诒;け热缋蛋彼岷途彼岬陌被岚被嗔?;乙酰氨基甲基、苄基(Bn)或者叔丁基磺?;糠挚梢杂糜诒;ぐ腚装彼岬暮辛蚧锏牟嗔?;苄基(Bn)醚可以用于?;に堪彼?、苏氨酸或者羟脯氨酸的含有羟基的侧链;和苄基酯可以用于?;ぬ於彼岷凸劝彼岬暮恤然牟嗔?。

        当选择Fmoc用于α-胺?;な?,通?;谑宥』谋;せ强梢越邮艿?。例如,Boc可以用于?;だ蛋彼岷途彼?,叔丁基醚可以用于?;に堪彼?、苏氨酸和羟脯氨酸以及叔丁酯可以用于?;ぬ於彼岷凸劝彼?。三苯甲基(Trityl)部分可以用于?;ぐ腚装彼岬暮辛蚧锏牟嗔?。

        一旦抑制剂顺序合成得到完成,所述任何?;せ捅灰匀魏瓮ü≡癖;せ范ǖ姆绞匠?。这些方法为本领域熟练的技术人员所熟知的方法。

        P2取代基的引入

        R8基团可以在根据本发明化合物合成的任何适宜步骤中与P2脚手架进行偶联。一种方法是首先将R8基团偶联到P2脚手架上,随后添加其它期望的结构单元,即P1以及任选P3和P4。另一种方法是利用未被取代的P2脚手架偶联P1、P2以及如果存在的P3和P4部分,然后添加R8基团。

        其中W为O以及R8为烷基、C0-C3烷基碳环基、C0-C3烷基杂环基的本发明化合物可以根据E.M.Smith等人(J.Med.Chem.(1988),31,875-885)所述的方法进行制备,如方案1所示,该方案图解了其中q′为0并且k为1的带有饱和P2脚手架的工艺。

        方案1

        在比如二甲基甲酰胺的溶剂中,用比如氢化钠或者叔丁氧钾的碱对含有未被取代的P2结构的化合物(1a)进行处理(所述化合物可以按下文所述得到制备),随后使所得的醇盐与烷基化试剂R8-X反应,从而得到期望的取代衍生物(1b),其中X为适宜的离去基团,比如卤素、甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐或者甲苯磺酸盐。

        另外地,如果X为OH或者SH,那么P2取代基可以经Mitsunobu反应,在三苯基膦和活化剂(比如偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)或者偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)等等)存在下,通过使化合物1a的羟基与期望的醇或者硫醇反应被引入。(Mitsunobu,1981,Synthesis,1月,1-28;Rano等人,Tetrahedron?Lett.,1995,36,22,3779-3792;Krchnak等人,Tetrahedron?Lett.,1995,36,5,6193-6196;Richter等人,Tetrahedron?Lett.,1994,35,27,4705-4706)。

        另外,可以通过用光气处理醇(1a),由此产生相应的氯甲酸酯,在比如碳酸氢钠或者三乙胺的碱存在下,所述氯甲酸酯与胺R8NH2反应,形成氨基甲酸酯,即W为-OC(=O)NH-,而醇(1a)与?;罵8-CO-X(比如酸酐或者?;?例如酰氯))反应,可以形成酯,即W为-OC(=O)-。

        多种醇R8-OH和烷基化剂R8-X都描述于WO00/09543和WO00/59929中。其中R8为取代喹啉衍生物的合成实例示于方案2中。

        方案2

        在三氯化硼和三氯化铝存在下,在比如二氯甲烷的溶剂中,使用?;?比如乙酰氯等等)对市售或者文献中可得到的适宜的取代苯胺(2a)进行Friedel-Craft?;?,从而产生(2b)。在碱性条件下(比如在吡啶中),在羧酸酯基团活化剂(例如POCl3)存在下,将(2b)偶联至杂环羧酸(2c),随后在碱性条件(比如叔丁醇钾)下,在叔丁醇中进行闭环和脱水,从而产生喹啉衍生物(2e)。在Mitsunobu反应中,喹啉衍生物(2e)可以偶联到如上所述的醇上,或者其中羟基可以通过用适当的卤化剂(例如磷酰氯等等)处理喹啉(2e)而被适宜的离去基团(比如卤素,如氯、溴或者碘)置换。

        多种具有通式结构(2c)的羧酸都可以用于方案2中。这些酸可以商业购买到或者在文献中可得到。按照Berdikhina等人Chem.Heterocycl.Compd.(Engl.Transl.)(1991),427-433的方法的2-(取代)-氨基-羧基-氨基噻唑衍生物的制备实例,如下方案3所示。

        方案3

        具有不同烷基取代基R′的硫脲(3c)可以通过以下方法得到形成:在比如二异丙基乙胺的碱存在下,在比如二氯甲烷的溶剂中,使适当的胺(3a)与叔丁基异硫氰酸酯反应,随后在酸性条件下除去叔丁基。随后使硫脲衍生物(3c)与3-溴丙酮酸缩合,从而形成酸(3d)。

        其中R8取代基经胺、酰胺、脲或者磺酰胺连接的P2结构单元,可以由氨基取代碳环进行制备,所述氨基取代碳环例如通过将相应羟基衍生物的羟基转化为叠氮基而得到,例如,通过将羟基转化为适宜的离去基团(比如甲磺酸盐或者卤素(如氯)),然后用叠氮化物取代离去基团或者通过利用叠氮化物转移剂(如二苯基磷?;?DPPA)而得到。通过催化氢化或者任何其它适宜的还原方法还原上述叠氮化物,从而形成胺。所述氨基衍生物可以与通式R8-X的烷基化剂进行取代反应,其中R8和X如方案1所述,从而形成用于制备通式VI化合物的P2结构单元,其中W为-NH-。使氨基取代碳环与通式R8-COOH的酸在标准酰胺偶联条件下进行反应,从而形成其中R8取代基经酰胺键连接的化合物,而使氨基取代碳环与适当的磺酸衍生物R8-S(O)2-X,其中X为离去基团(例如氯),在碱存在下进行反应,从而形成磺酰胺。其中环状脚手架与R8取代基之间的连系物由脲基团构成的化合物可以通过例如以下方法得到:用光气处理氨基取代碳环,从而提供相应的氯代氨基甲酸酯,随后使其与期望的胺反应。另外,所述氨基取代碳环可以与氨基甲酰氯或者具有期望R8取代基的异氰酸酯反应以形成所述脲连接。显然,相应的反应适用于具有其它环大小和特征的P2基团。

        其中杂环R8基团直接连接至环状P2脚手架即通式VI中W为一个键的本发明化合物,可以通过例如置换反应得到制备,该反应中在P2脚手架上的适宜离去基团(比如卤素或者甲磺酸盐等等)被期望的R8基团(比如杂环基团)所取代。另外,所述R8基团可以通过Mitsunobu反应的方式引入,

        其中P2前体中的羟基与杂环R8基团中的氮原子进行反应。

        Rq,Rz和*如上所述??????????????????????????????????????????????????W是键

        其中四唑衍生物被连接至它的一个环碳原子上的化合物通过将四唑部分直接连接在P2前体上,可以合意地得到制备。这可以通过例如将P2前体的羟基转化为氰基,随后使其与叠氮化物试剂(比如叠氮化钠)反应而得到实现。三唑衍生物也可以直接构建在P2前体上,例如通过将P2前体的羟基转化为叠氮基,随后进行所提供的叠氮化物与适宜的炔衍生物的3+2环化加成反应。

        用于上述取代反应和Mitsunobu反应的结构上不同的四唑可以通过使市售腈化合物与叠氮化钠反应而得到制备。三唑衍生物可以通过使炔化合物与三甲基甲硅烷叠氮化物进行反应而得到制备。所用炔化合物或者可以市场购买到,或者它们可以根据例如Sonogashira反应而得到制备,即在PdCl2(PPh)3和CuI存在下,使伯炔、芳基卤化物和三乙胺的反应,如A.Elangovan,Y.-H.Wang,T.-I.Ho,Org.Lett.,2003,5,1841-1844中所述。在将P2结构单元偶联至其它结构单元之前或之后,当将杂环取代基连接至P2结构单元时,还可以对所述杂环取代基进行改变。

        制备其中W为一个键并且R8为任选被取代的杂环的化合物的这些方法以及其它方法宽泛地描述于WO2004/072243中。

        方案1中具有碳环衍生物的W-R8取代基的另外环大小和/或其位于其它位置的化合物也可以制备根据本发明的化合物。

        P1结构单元的合成和引入

        用于制备P1片断的氨基酸或者可以市场购买到或者可以通过文献得到,参见例如Boehringer-Ingelheim的WO00/09543和WO00/59929或者BMS的US2004/0048802。

        方案4表示制备用作P1结构单元并且随后偶联到P2结构单元上的磺酰胺衍生物的实例。

        方案4

        在比如THF的溶剂中,通过用偶联试剂(例如N,N′-羰二咪唑(CDI)等等)处理所述氨基酸,随后在强碱(比如1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU))存在下,使其与期望的磺酰胺(4b)反应,可以将磺酰胺基团引入到适当?;さ陌被?4a)上。另外,在比如二异丙基乙胺的碱存在下,用期望的磺酰胺(4b)对所述氨基酸进行处理,随后用比如PyBOP的偶联试剂对其进行处理,从而实现磺酰胺基团的引入。通过标准方法除去氨基?;せ?,并且随后采用,在比如二甲基甲酰胺的溶剂中,在比如二异丙胺的碱存在下,酰胺键形成的标准方法,比如通过偶联试剂O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU),将其偶联至如上所制备的P2结构单元上,从而得到(4e)。另外,磺酰胺基团可以在合成的后面步骤引入,例如作为最后一步。在这种情形中,具有反向?;ば问降陌被?,即具有未?;さ陌被倌芡藕捅;さ乃峁倌芡诺陌被嵬ü褂美缛缟纤龅谋曜茧呐剂跫?,被偶联到P2结构单元的酸官能团上。通过利用适于现有?;せ诺氖实碧跫ニ岜;せ?,随后偶联如上所述的磺酰胺,得到化合物4e。

        通过使氨基酸(4a)分别与适当的胺或者醇在酰胺或者酯形成的标准条件下反应,用于制备根据其中A为酯或者酰胺的通式VI化合物的P1结构单元可以得到制备。其中A为CR4R4’的根据通式VI的化合物可以通过将适当的P1结构单元偶联至P2结构单元而得到制备,如Oscarsson等人Bioorg?Med?Chem?2003?11(13)2955-2963和申请于2003年09月23日的PCT/EP03/10595所述,其内容在此引入作为参考。

        包括氮杂肽P1残基,即通式VI中M为NRu的化合物可以通过在偶联至P2片断中使用适宜的P1氮杂-氨基?;糠侄玫街票?。氮杂-氨基?;糠值闹票赣蒑.D.Bailey等人描述于J.Med.Chem.,47,(2004),3788-3799中,并且将实例示于方案5中。

        方案5

        例如通过与如以下方案19所述的适当的醛或者酮进行还原氨基化反应,可以将适当的N-连接侧链Ru引入到市售叔丁基肼上,由此产生N-烷基化肼基甲酸酯(5a)。在比如三乙胺或者二异丙基乙胺的碱存在下,在比如THF的溶剂中,使5a与期望的氯甲酸酯进行缩合,从而产生5b。然后,利用取决于具体R1′的适当条件,比如R1′为苄基时采用催化氢化条件,任选将其中R1′部分除去,由此给出相应的酸。随后,使上述所得的酸与如方案4所述的期望磺酰胺衍生物反应,得到磺酰胺封端的结构单元。另外,使肼基甲酸酯5a与异氰酸酯R3-N=C=O反应,形成用于制备根据通式VI的化合物的结构单元,其中M为NRu并且A为CONHR3。

        封端P3和P3-P4结构单元的合成

        结构单元R16-G-P3和R16-G-P4-P3可以如方案6所示一般方法进行制备。

        方案6

        在比如DIEA或者DMAP的碱存在下,在比如二氯甲烷、氯仿或者二甲基甲酰胺或者其混合物的溶剂中,通过应用标准肽偶联条件(如使用比如HATU、DCC或者HOBt等等偶联试剂)和酯形成条件等,适宜N-?;さ陌被?6a)可以与氨基封端基团(R16-NHRy)偶联,形成酰胺,即G为NHRy(6b)。另外,在比如碳酸铯或者氧化银(I)的碱存在下,使氨基酸(6a)与通式R16-X化合物反应,其中R16如上所定义并且X为比如卤素的离去基团,形成酯,即G为O(6b)。另一方面,利用如上所述的标准肽偶联条件,氨基酸(6a)可以偶联至适当O-?;さ闹侔被?6d),形成(6e)。用适宜的封端基团(6b)取代酯基形成可用于制备根据本发明的化合物的片断(6f),其中m和n均为1。

        当G为N-Ry时,封端P3或者P2结构单元还可以在固体载体上进行制备,如方案7所例示。

        方案7

        在比如二氯甲烷和二甲基甲酰胺的溶剂中,在比如N,N′-二异丙基碳二亚胺的偶联试剂和比如DMAP的碱存在下,通过使氨基酸与期望的固体载体反应,适当N-?;?比如Boc?;?的氨基酸(7a)可以被固定在固体载体上,在此后者由Agronaut树脂PS-TFP进行例示。然后,通过使用适宜的封端基团(7c),上述被固定的氨基酸(7b)可以从载体上分离,由此给出可用于制备根据本发明的化合物的片断(7d),其中m或者n为1。任选可以将所述氨基?;せ?,随后利用标准方法使其偶联适当的氨基酸,由此形成可用于制备根据本发明的化合物的片断,其中m和n为1。

        P2结构单元的制备和引入

        合成含有5元饱和P2脚手架的化合物的一般路线示于方案8中。

        Rx′和T′具有分别与Rx和T相同的定义,但不是大环一部分。

        A′是?;さ聂人?、取代的酰胺或磺酰胺或CR4R4′。

        方案8

        环状脚手架(8b)可以由例如3,4-二(甲氧基羰基)环戊酮(8a)进行制备,如Rosenquist等人在Acta?Chem.Scand.46(1992)1127-1129中所述,在比如甲醇的溶剂中用比如硼氢化钠的还原剂还原酮基,随后水解该酯,最后在吡啶存在下在乙酸酐中进行环闭合。然后,利用常规的肽偶联条件,在比如二甲基甲酰胺的溶剂中使用HATU和二异丙基胺,可以将上述得到的二环酸(8b)偶联到期望的P3片段(8c)、P3-P4片段或者封端基团R16-NHRy的胺官能团上,给出(8d)。使用例如氢氧化锂,使内酯(8d)开环,形成酸,随后利用常规肽偶联条件,将该酸偶联到P1结构单元或者期望的P1片段的前体(8e)的氨基上。碳环R8-取代基可以例如通过与如上所述适当的醇进行Mitsunobu反应或者通过先前所述任何其它适宜的方法而得到引入。当R7、R7′和A′包含官能团时,这些官能团任选通过本领域熟练的技术人员认可的方法进行适当地?;?,参阅,例如上面引用的Bodanzky或者Greene。

        方案9表示合成含有饱和P2脚手架的式VI化合物的另一种方法,其中各结构单元按照相反的次序引入,即P1片断在封端基团、P3或者P3-P4结构单元被引入之前引入。

        Rx′和T′具有分别与Rx和T相同的定义,但不是大环一部分。

        A′是?;さ聂人?、取代的酰胺或磺酰胺或CR4R4′。

        方案9

        在比如二氯甲烷的溶剂中,在比如二甲基氨基吡啶和三乙胺的碱存在下,(9a)的酸基团通过用例如二碳酸二叔丁酯处理,被?;の宥□?,从而提供酯(9b)。使内酯开环,并且如方案13所述或者直接通过P1片段的胺基使其与P1结构单元(9c)偶联,从而形成(9d)。如上所述引入R8-取代基,随后通过在比如二氯甲烷的溶剂中,使上述酯经受比如三氟乙酸和三乙基硅烷的酸性条件处理,将酸?;せ懦?,并且最后如上所述使其与P3结构单元(9e)、P3-P4结构单元或者封端基团R16-NHRy偶联,从而形成(9f)。当R7、R7′和A′包含官能团时,这些官能团任选通过本领域熟练的技术人员认可的方法进行适当地?;?,参阅,例如上面引用的Bodanzky或者Greene。

        将用于制备式VI化合物的不饱和P2脚手架可以如下所示进行制备,用环戊烯进行说明。

        所述环戊烯脚手架一般如方案10所述进行制备。

        方案10

        如Dolby等人在J.Org.Chem.36(1971)1277-1285中所述对3,4-二(甲氧羰基)环戊酮(10a)进行溴化-消去反应,随后用比如硼氢化钠的还原剂对酮官能团进行还原,形成不饱和羟基化合物(10b)。在比如二氧六环和水的混合溶剂中,利用例如氢氧化锂进行选择性酯水解,形成羟基取代的单酯衍生物(10c)。

        其中Rq不是氢,比如为甲基化环戊烯脚手架的不饱和P2结构脚手架可以如方案11所示进行制备。

        方案11

        通过使用比如氯铬酸吡啶的氧化剂对市售3-甲基-3-丁-1-醇(11a)进行氧化,随后用乙酰氯、溴和甲醇处理,从而形成α-溴酯(11c)。然后,可以使所得的酯(11c)与烯醇化物(11e)反应,通过例如用比如二异丙基酰胺锂的碱在比如四氢呋喃的溶剂中处理相应的叔丁酯而实现,从而给出烷基化化合物(11f)。所述叔丁酯(11e)可以通过在比如二甲基氨基吡啶的碱存在下,用二碳酸二叔丁酯处理相应的市售酸(11d)而得到制备,其中k′为1~3。通过如上所述进行烯烃易位反应使(11f)环化,形成环戊烯衍生物(11g)。利用Jacobsen不对称环氧化作用方法可以对(11g)进行立体选择性环氧化作用,从而得到环氧化物(11h)。最后,加入比如DBN(1,5-二氮杂双环-[4.3.0]壬-5-烯)的碱,得到醇(11i)。任选可以对化合物(11i)的双键进行还原,例如使用比如钯碳的催化剂进行催化氢化,从而形成相应的饱和化合物。

        然后,如上所述,所得的环状脚手架可以用于完成抑制剂合成。其实例示于方案12中。

        Rx′和T′具有分别与Rx和T相同的定义,但不是大环一部分。

        A′是?;さ聂人?、取代的酰胺或磺酰胺或CR4R4′。

        方案12

        利用标准酰胺偶联条件,比如在比如二异丙基苯胺等等的碱存在下,使用HATU可以将P1-结构单元或者其适宜前体(12b)的氨基偶联到环戊烯衍生物酸(12a)上,随后通过例如如上所述的Mitsunobu条件引入R8-取代基,由此形成(12d)。对剩余的酯进行水解,并且其次将酰胺偶联至期望的P3或者P3-P4结构单元(12e)上,任选随后处理P1部分,从而得到根据式VI的含环戊烯化合物(12f)。当R7、R7′和A′包含官能团时,这些官能团任选通过本领域熟练的技术人员认可的方法进行适当地?;?,参阅,例如上面引用的Bodanzky或者Greene。

        具有包含直接连接在P2部分的封端基团的肼的化合物,即P3和P4不存在并且G为NRjNRj,可以如方案13所示进行制备。

        A′是?;さ聂人?、取代的酰胺或磺酰胺或CR4R4′。

        方案13

        在肽偶联条件下,例如在比如DMF的溶剂中使用HATU和DIEA,使任选一个或者两个氮原子上都有烷基取代的肼基甲酸叔丁酯(13a)与酸(13b)反应,提供9Ac。任选通过标准方法除去boc基,如在比如二氯甲烷的适宜溶剂中使用例如TFA进行酸处理,提供含肼衍生物(13d)。另外,任何不是肼基甲酸叔丁酯衍生物的适当的肼衍生物,比如吗啉-1-基胺或者哌啶-1-基胺等等都可以连接到酸(13b)上。

        然后,通过将P3或者P4-P3结构单元偶联至伯胺化合物13d上,所得化合物可以被进一步扩大,如方案14所示。

        R11′具有与R11相同的定义,但不是大环一部分.

        A′是?;人?、取代的酰胺或磺酰胺或CR4R4′。

        方案14

        用亚硝酸钠、溴化钾和硫酸处理α-氨基化合物(14a)(Yang等人,J.Org.Chem.(2001),66,7303-7312),形成相应的α-溴化合物(14b),该化合物通过与上述衍生物(13d)反应提供含肼衍生物(14c)。

        在P3单元中没有羧基的化合物可以如方案15所示进行制备,该方案用环戊烷衍生物作为P2脚手架进行例证。

        R11′具有与R11相同的定义,但不是大环一部分。

        A′是?;人?、取代的酰胺或磺酰胺或CR4R4′。

        方案15

        酸(15a)可以利用标准肽偶联条件被偶联至通过文献已知的方法制备的氨基叠氮化物衍生物(15b)上,从而给出酰胺衍生物(15c)。例如通过在比如甲醇的溶剂中,使用聚合物结合三苯基膦还原或者通过任何其它适宜的还原法还原叠氮官能团,形成中间体(15d),随后可以在肽偶联条件下使其与酸反应或者在还原氨基化条件下使其与胺反应,从而分别形成酰胺和仲胺。

        方案16表示另一种合成P3结构单元中不存在羧基的化合物的路线。

        R11′具有与R11相同的定义,但不是大环一部分。

        A′是?;人?、取代的酰胺或磺酰胺或CR4R4′。

        方案16

        不使用方案15中的叠氮衍生物(15b),而是使用相应任选被?;さ聂腔苌?16b)与酸(16a)进行偶联,由此引入伯醇。随后,醇(16c)在任选去?;ぶ?,用适宜的氧化剂(比如Dess-Martin过碘烷(periodinane))进行氧化,从而形成相应的醛。在比如THF的溶剂中,通过利用如例如聚苯乙烯粘结氰基硼氢化物的试剂,使所述醛与期望的胺进行还原氨基化反应,从而形成胺衍生物(16e)。

        另外,在适当的条件下,醇(16c)可以与适宜的?;约粱蛘咄榛约练从?,分别形成酯和醚化合物,即通式(I)中G为O的化合物。

        随后,通过利用适当的条件,使形成的醇与适宜的?;约粱蛘咄榛约练从?,分别形成酯和醚化合物,即通式VI中G为O的化合物。

        虽然方案15和16已经根据环戊烷衍生物进行了描述,即式VI化合物中q′为0并且k为1,但是很显然,相应的方法可以用于其它式VI化合物的制备。

        当R7、R7′和A′包含官能团时,这些官能团可以通过本领域熟练的技术人员认可的方法进行适当地?;?,参阅,例如上面引用的Bodanzky或者Greene。

        大环化合物的形成

        其中亚烷基链从R7/R7′环烷基延伸至Rx、Rd或者R11,由此形成大环的根据本发明的化合物可以如下所述进行制备。适宜的P1、P2和P3结构单元或者其前体利用如上所述的策略偶联在一起,随后进行闭环反应(大环化反应)。在大环形成之前或之后,所述P2结构单元的取代基W-R8可以经如上所述的Mitsunobu反应并入其中,或者所述基团可以用需要的取代脯氨酸类似物或者碳环处理。对于从R7/R7′环烷基延伸至R11的大环结构,含适当侧链的P3氨基酸可以如WO00/59929中所述进行制备。

        合成大环化合物的一般路线示于方案17中,该方案图解了应用于具有螺-环丙基P1的化合物方法,其中大环含有P3侧链。

        方案17

        利用如上所述的标准肽偶联条件,使酸衍生物(17a)与适当酸?;さ陌被?17b)偶联,从而形成(17c)。然后,利用比如下述文献报道的一种基于Ru的催化剂,经烯烃易位反应进行大环形成,Miller,S.J.,Blackwell,H.E.;Grubbs,R.H.J.Am.Chem.Soc.118,(1996),9606-9614;Kingsbury,J.S.,Harrity,J.P.A.Bonitatebus,P.J.,Hoveyda,A.H.,J.Am.Chem.Soc.121,(1999),791-799和Huang等人,J.Am.Chem.Soc.121,(1999),2674-2678?;褂Φ比峡珊衅渌山鹗?比如Mo)的催化剂也可以用于该反应。任选分别通过本领域熟知的标准氢化方法和/或标准水解方法将双键还原和/或将乙酯水解。另外,可以对甲酯进行选择性水解,然后通过标准肽偶联条件使其与R16-G-P4结构单元偶联。描述于方案17中的大环化步骤还可以应用于如上所述的相应碳环类似物。当所述连系物含有氮原子时,环闭合可以通过如WO00/59929所述的还原氨基化反应进行。

        在P1部分不存在环丙基部分的大环化合物,即大环直接由肽骨架在与R7相邻的碳原子延伸的化合物,可以利用在此所述的方法进行制备。其中5元环烷基衍生物用作P2脚手架的实例示于方案18中。

        A′是?;人?、取代的酰胺或磺酰胺。????????????????????????????????????????n是1,2,3,4或5

        方案18

        利用标准肽偶联条件将适宜的烯丙基甘氨酸衍生物(18a)偶联至P2脚手架(18b)的酸官能团上,从而得到酰胺衍生物(18c)。对酯基进行水解,随后使其与烯烃取代的氨基酸(18Ad)进行肽偶联反应,从而提供酰胺化合物(18e)。然后通过利用例如Hoveyda-Grubbs催化剂进行环闭合易位反应,从而给出大环化合物(18f)。

        尽管方案18表示使用带有未被取代的羟基的P2脚手架的合成顺序,但是显然,R8取代基可以在合成的任何适宜步骤引入,例如如方案9和10所述,或者它可以在易位反应之后引入,即引入在化合物18f上,利用本文所述的任何方法。

        用于制备其中大环从P3片断上酰胺氮原子上伸出的化合物(即通式VI中Rx为J)或者用于制备其中P3和P4片断不存在(即通式VI中m和n为0并且G为NRj)的化合物的结构单元,一般可以如方案18B概述进行制备。

        方案18B

        氨基甲酸酯18Ba,该化合物可以市场购买到或者例如通过使期望的烷基胺与二碳酸二叔丁酯反应而可以轻易制备得到,可以在Mitsunobu条件下与适当的ω-不饱和醇反应,从而形成烷基化的氨基甲酸酯(18Bb)。使18Bb经受酸性条件,例如在比如二氯甲烷的溶剂中用三氟乙酸对其进行处理,从而给出游离胺(18Bc),该胺可以利用任何先前所述的策略连接至P2片断上。

        含有肼基团的大环结构,即通式VI中T为NRd或者m和n为0并且G为NRjNRj,可以通过将适当N-烷基化的肼基甲酸酯衍生物连接至P2片断上而得到制备。烷基化的肼基甲酸酯衍生物可以通过例如如方案19所述进行制备。

        方案19

        通过适宜的氧化方法,例如在比如二氯甲烷的溶剂中,使用N-甲基吗啉氧化物和过镣酸四丙基铵,对适当的醇(19a)进行氧化作用,从而形成醛(19b)。用所得醛对肼基甲酸叔丁酯进行还原烷基化作用,从而得到期望的N-烷基化的结构单元(19c)。另外,在与醛19b反应中,可以使用非肼基甲酸叔丁酯的任何期望的肼衍生物,比如吗啉-1-基胺或者哌啶-1-基胺等等。

        方案20图解了适用于制备其中肼基团“外部”氮原子被适合于随后大环形成的ω-不饱和烷基链或者任何其它适宜的烷基烷基化的化合物的结构单元的合成顺序。

        方案20

        在Mitsunobu条件下,使适当?;さ碾卵苌?例如本领域熟练的技术人员可以很容易地制备的(1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-氨基甲酸叔丁酯(20a))与期望的醇R-OH反应,从而形成N-烷基化的肼化合物(20b)。通过用肼或者其衍生物(比如水合肼或者肼乙酸酯)处理,邻苯二甲酰亚氨基的除去可以得到实现,从而形成肼基甲酸酯(20c)。然后,可以利用先前所述的任何方法将所得伯胺连接至期望的P2片断上,从而得到20d,或者可以利用例如方案19中所述的还原氨基化方法将其进一步烷基化,随后使其与先前所述的P2片断偶联,从而得到20e。

        方案21例证说明了将含P3结构单元的肼偶联到环戊烷脚手架上,随后对其进行大环化。

        方案21

        使用标准肽偶联条件将肼基甲酸酯衍生物(21b)偶联至P2-P1结构单元(21a)上,从而形成中间体(21c)。通过如方案18所述的烯烃易位反应对(21c)进行环闭合,从而得到大环化合物(21d)。

        在此使用的术语“N-?;せ被蛘摺癗-?;さ摹笔侵改切┮庠诒;ぐ被峄蛘唠牡腘-末端或者?;ぐ被?,使其在合成工艺期间不发生不期望的反应的基团。通常应用的N-?;せ贕reene,“Protective?Groups?in?Organic?Synthesis”(John?Wiley?&?Sons,NewYork,1981)中,其在此引入作为参考。N-?;せ;?,比如甲?;?、乙?;?、丙?;?、新戊酰、叔丁基乙?;?、2-氯乙?;?、2-溴乙?;?、三氟乙?;?、三氯乙?;?、邻苯二甲?;?、邻-硝基苯氧基乙?;?、α-氯丁?;?、苯甲?;?、4-氯苯甲?;?、4-溴苯甲?;?-硝基苯甲?;鹊?;磺?;?,比如苯磺?;投?甲苯磺?;鹊?;氨基甲酸酯形式基团,比如苄氧羰基、对-氯苄氧羰基、对-甲氧基苄氧羰基、对-硝基苄氧羰基、2-硝基苄氧羰基、对-溴苄氧羰基、3,4-二甲氧基苄氧羰基、4-甲氧基苄氧羰基、2-硝基-4,5-二甲氧基苄氧羰基、3,4,5-三甲氧基苄氧羰基、1-(对-联苯基)-1-甲基乙氧羰基、α,α-二甲基-3,5-二甲氧基苄氧羰基、二苯甲氧羰基、叔丁氧羰基、二异丙基甲氧羰基、异丙氧羰基、乙氧羰基、甲氧羰基、烯丙氧羰基、2,2,2-三氯乙氧羰基、苯氧羰基、4-硝基苯氧羰基、芴基-9-甲氧羰基、环戊基氧基羰基、金刚烷基氧基羰基、环己基氧基羰基和苯硫基羰基等等;烷基,比如苄基、三苯甲基和苄氧基甲基等等;和甲硅烷基,比如三甲基甲硅烷基等等。优选的N-?;せ‵moc、甲?;?、乙?;?、苯甲?;?、新戊酰、叔丁基乙?;?、苯磺?;?、苄基、叔丁氧羰基(BOC)和苄氧羰基(Cbz)。

        在此使用的“羟基?;せ笔侵副;腔?,使其在合成工艺期间不发生不期望的反应的取代基,比如Greene,“Protective?Groups?InOrganic?Synthesis”(John?Wiley?&?Sons,New?York(1981))中所公开的那些O-?;せ?。羟基?;せㄈ〈酌?,例如,甲氧基甲基、苄氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、叔丁基以及其它低级烷基醚,低级烷基比如并丙基、乙基以及并且特别是甲基、苄基和三苯甲基;四氢吡喃基醚;取代乙醚,例如2,2,2-三氯乙醚;甲硅烷基醚,例如三甲基甲硅烷基醚、叔丁基二甲基甲硅烷基醚和叔丁基二苯基甲硅烷基醚;和通过羟基与羧酸反应而制备的酯,例如乙酸酯、丙酸酯和苯甲酸酯等等。

        在治疗由黄病毒(比如HCV)引起的症状中,式I化合物典型地通过以获得血浆浓度为约100~5000nM,比如300~2000nM的量给药。取决于所述制剂的生物利用度,这相当于给药0.01~10mg/kg/天,优选0.1~2mg/kg/天的剂量率。对于正常成年人,一般剂量率为每天约0.05~5g,优选0.1~2g,比如500~750mg,分为每天一个至四个剂量单位。同所有药剂一样,剂量率将随着患者的体重和新陈代谢条件以及感染的严重程度而变化,并且需要根据伴随药物进行调节。

        基于抗病毒治疗的良好处方实践,式I化合物一般与其它HCV治疗剂共同给药以避免药物逃逸突变体的产生。上述另外的HCV抗病毒治疗剂的实例包括病毒唑、干扰素(包括聚乙二醇化干扰素)。另外,许多核苷类似物和蛋白酶抑制剂处在临床或者临床前研究阶段,它们适合于与本发明化合物共同给药。

        据此,本发明的另一方面提供一种在通用剂量单元中包括通式I化合物和至少一种其它HCV抗病毒剂的组合物,所述通用剂量单元比如为如下所述的任何剂型,但是特别是口服给药的片剂或者胶囊或者液体悬浮剂或者用于口服或者注射应用的溶液。本发明的另一方面提供治疗或者预防黄病毒(比如HCV)传染的方法,包括:顺序或者同时给药式I化合物和至少一种其它HCV抗病毒剂。本发明的相关方面提供了一种患者包,包括:式I化合物的第一药物组合物,优选为单位剂型,和第二HCV抗病毒剂的第二药物组合物,一般也为单位剂型并且通常在患者包中的单独容器内?;颊甙故室说靥峁┯杏∷⒃诎盎蛘咂渲腥萜魃匣蛘甙安逡成系乃得?,用于说明相应药物组合物的同时或者顺序给药。

        许多HCV病人都是与其它传染病的共感染或者倾向于与其它传染病一起的超感染。据此,本发明的另一方面提供组合治疗法,包括将本发明化合物与至少一种其它抗感染药物共同配制在相同剂量单元中或者进行共包装。本发明化合物与至少一种其它抗感染剂同时或者顺序给药,一般说各剂量与单一疗法所涉及试剂的剂量相当。然而,某些抗感染剂可以诱发协同效应,这就使得将要给药的一种或者两种活性成分的剂量低于相应单一疗法的剂量。例如,在倾向于通过Cyp3A4迅速代谢的药物中,与HIV蛋白酶抑制剂利托那韦共同剂量给药可以以较低的剂量方式给药。

        一般与HCV共感染或者超感染包括乙型肝炎病毒或者HIV。据此,本发明化合物有利地与至少一种HIV抗病毒剂和/或至少一种HBV抗病毒剂共同给药(或者在同一剂量单元中、或者在共包装的或者独立处方的剂量单元中)。

        代表性的HIV抗病毒剂包括NRTI,比如阿洛夫定(FLT)、齐多夫定(AZT,ZDV)、司他夫定(d4T,Zerit)、扎西他滨(ddC)、地丹诺辛(ddI,Videx)、阿巴卡韦(ABC,Ziagen)、拉米夫定(3TC,Epivir)、恩曲他滨(FTC,Emtriva)、racevir(外消旋FTC)、阿德福韦(ADV)、entacavir(BMS?200475)、阿洛夫定(FLT)、替诺福韦酯(TNF,Viread)、amdoxavir(DAPD)、D-d4FC(DPC-817)、-dOTC(Shire?SPD754)、elvucitabine(Achillion?ACH-126443)、BCH?10681(Shire)SPD-756、racivir、D-FDOC、GS7340、INK-20(硫醚磷脂AZT,Kucera)、2′,3′-双脱氧-3′-氟鸟嘌呤核苷(FLG)及其前药,比如MIV-210、reverset(RVT,D-D4FC,Pharmasset?DPC-817)。

        代表性的NNRTI包括地拉韦定(Rescriptor)、依发韦伦(DMP-266,Sustiva)、奈韦拉平(BIRG-587,Viramune)、(+)西卡拉脑立德A和B(Advanced?Life?Sciences)、卡泊韦林(AG1549f?S-1153;Pfizer)、GW-695634(GW-8248;GSK)、MIV-150(Medivir)、MV026048(R-1495;Medivir?AB/Roche)、NV-05?2?2(IdenixPharm.)、R-278474(Johnson?&?Johnson)、RS-1588(IdenixPharm.)、TMC-120/125(Johnson?&?Johnson)、TMC-125(R-165335;Johnson?&?Johnson)、UC-781(Biosyn?Inc.)和YM215389(Yamanoushi)。

        代表性的HIV蛋白酶抑制剂包括PA-457(Panacos)、KPC-2(Kucera?Pharm.),、5HGTV-43(Enzo?Biochem)、安泼那韦(VX-478,Agenerase)、阿扎那韦(Reyataz)、印地那韦硫酸盐(MK-639,Crixivan)、Lexiva(福沙那韦钙,GW-433908或者908,VX-175)、利托那韦(Norvir)、罗品那韦+利托那韦(ABT-378,Kaletra)、替普拉那维、那非那韦甲磺酸酯(Viracept)、沙奎那韦(Invirase,Fortovase)、AG1776(JE-2147,KNI-764;Nippon?MiningHoldings)、AG-1859(Pfizer)、DPC-681/684(BMS,GS224338;Gilead?Sciences)、KNI-272(Nippon?Mining?Holdings)、Nar-DG-35(Narhex)、P(PL)-100(P-1946;Procyon?Biopharma)、P-1946(Procyon?Biopharma)、R-944(Hoffmann-LaRoche)、RO-0334649(Hoffmann-LaRoche)、TMC-114(Johnson?&?Johnson)、VX-385(GW640385;GSK/Vertex)、VX-478(Vertex/GSK)。

        其它的HIV抗病毒剂包括入口抑制剂,所述入口抑制剂包括融合抑制剂、CD4受体抑制剂、CCR5共同受体抑制剂和CXCR4共同受体抑制剂,或者其药学上可接受的盐或者前药。入口抑制剂的实例为AMD-070(AMD11070;AnorMed)、BlockAide/CR(ADVENTRXPharm.)、BMS?806(BMS-378806;BMS)、Enfurvirtide(T-20,R698,Fuzeon)、KRH1636(Kureha?Pharmaceuticals)、ONO-4128(GW-873140,AK-602,E-913;ONO?Pharmaceuticals)、Pro-140(Progenics?Pharm)、PRO542(Progenics?Pharm.)、SCH-D(SCH-417690;Schering-Plough)、T-1249(R724;Roche/Trimeris)、TAK-220(Takeda?Chem.Ind.)、TNX-355(Tanox)和UK-427,857(Pfizer)。整合酶抑制剂的实例为L-870810(Merck&?Co.)、c-2507(Merck?&?Co.)和S(RSC)-1838(shionogi/GSK)。

        HBV抗病毒剂的实例包括阿德福韦dipivoxil(Hepsera),并且特别是拉米夫定和2′,3′-双脱氧-3′-氟鸟嘌呤核苷(FLG)及其前药,比如MIV-210,FLG的5′-O-缬氨?;?L-乳?;耙?。这些后面的HBV抗病毒剂是特别适宜的,因为它们还具有抗HIV的活性。

        虽然所述活性剂可以单独给药,但是优选它作为药物制剂的组成部分存在。这种制剂将包含上述定义的活性剂以及一种或多种可接受的载体或者赋形剂以及任选包含其它治疗成分。所述载体必须是可接受的,含义是它与制剂的其它成分相容并且不会对接受者造成损害。

        所述制剂包括那些适合于直肠、经鼻、局部(包括经颊和舌下)、阴道或者胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内和真皮内)给药,但是优选该制剂为口服给药制剂。该制剂可以适宜地以单位剂型形式存在,例如片剂和缓释胶囊,并且其可以通过药剂学领域熟知的任何方法进行制备。

        上述方法包括使上述定义的活性剂与载体结合的步骤。一般而言,该制剂通过以下方法进行制备:使该活性剂与液体载体或者细碎的固体载体或者两者均化和紧密地结合,并且然后,如果需要将产品加工成形。本发明提供了制备药物组合物的方法,包括使式VI化合物或者其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体或者赋形剂结合或者联合。如果药物制剂的生产涉及均匀混合药物赋形剂和盐形式的所述活性成分,那么通常优选使用本质上非碱性的赋形剂,即酸性或者中性的赋形剂。本发明中用于口服给药的制剂可以作为独立的单位存在,比如各自含有预定量活性剂的胶囊、药包或者片剂;作为粉剂或者粒剂存在;作为活性剂在含水液体或者非水液体中的溶液或者悬浮液存在;或者作为水包油液体乳剂或者油包水液体乳剂存在,以及作为丸剂等等存在。

        对于口服给药的组合物(例如片剂和胶囊),术语“适当的载体”包括赋形剂,比如一般的赋形剂,如粘合剂,例如糖浆剂、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、西黄蓍胶、聚乙烯吡咯烷酮(Povidone)、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、蔗糖和淀粉;填料和载体,例如玉米淀粉、明胶、乳糖、蔗糖、微晶纤维素、高岭土、甘露醇、磷酸二钙、氯化钠和藻酸;和润滑剂,比如硬脂酸镁、硬脂酸钠以及其它金属硬脂酸盐、硬脂酸、硬脂酸甘油酯、硅酮油、滑石蜡、油和氧化硅胶体。也可以使用比如胡椒薄荷、水杨酸甲酯、或者樱桃香精等等的调味剂??梢院弦獾丶尤胱派潦辜列腿菀妆皇侗?。片剂还可以通过本领域熟知的方法进行包衣。

        片剂可以通过压制或者模压进行制备,任选含有一种或者多种辅助成分。压制片可以通过在适宜的设备中压制自由流动形式(比如粉剂或者粒剂)的活性剂而得到制备,任选其中混有粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或者分散剂。模制片可以通过在适宜的设备中模制用惰性液体稀释剂湿润的粉末化合物的混合物而得到制成。所述片剂任选可以进行包衣或者刻痕并且可以进行配制,以便提供活性剂的缓释或者控释。

        其它适于口服给药的制剂包括,将活性剂含入调味剂基质(通常为蔗糖和阿拉伯胶或者西黄蓍胶)中的锭剂;将活性剂含入惰性基质(比如明胶和甘油,或者蔗糖和阿拉伯胶)中的软锭剂;和将活性剂含入适当液体载体中的漱口剂。

        式VI化合物可以形成盐,这构成了本发明的另一方面。式I化合物适宜的药学上可接受的盐包括有机酸的盐,特别是羧酸盐,包括但不限于乙酸盐、三氟醋酸盐、乳酸盐、葡糖酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、泛酸盐、羟乙基磺酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、丁酸盐、双葡萄酸盐、环戊糖酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、乙二酸盐、庚酸盐己酸盐、延胡索酸盐、烟酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、酒石酸盐、乳糖酸盐、pivolate、樟脑酸盐、十一酸盐和琥珀酸盐,有机磺酸盐,比如甲磺酸盐、乙磺酸盐、2-羟乙磺酸盐、樟脑磺酸盐、2-萘磺酸盐、苯磺酸盐、对-氯苯磺酸盐和对-甲苯磺酸盐;和无机酸盐,比如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、半硫酸盐、硫氰酸盐、过硫酸盐、磷酸和磺酸盐。此外,本发明提供式I化合物的盐,该盐可能是或者可能不是药学上可接受的盐,但是其可以用作合成中间体,根据需要所述盐部分被置换或者替换。

        本发明包括式I化合物的前药。式VI化合物的前药为在给药至患者后,通常在消化道、肝脏或者血浆中水解后在体内释放出式VI化合物的那些化合物。一般的前药为羟基官能团的药学上可接受的醚并且特别是酯(包括磷酸酯)、胺官能团药学上可接受的酰胺或氨基甲酸酯或者羧基官能团药学上可接受的酯。优选药学上可接受的酯包括烷基酯(包括乙酸酯、丁酸酯、叔丁酸酯、十八烷基酯和新戊酸酯)、磷酸酯和磺酸酯(即那些衍生于RSO2OH的酯,其中R为低级烷基或者芳基)。药学上可接受的酯包括低级烷基醚以及公开于WO00/47561中的醚,特别是甲氧基氨基?;鸵已趸被;?。

        本发明化合物具有多种立体中心,并且本发明提供在这些立体中心的每一个上的外消旋物和对映异构体。

        一般地,对应于P3和P4侧链(即R15和/或R11)的基团的立体化学将对应于L-氨基酸构型,不过本发明也提供在这些中心的一个或者两个上的D-异构体。应当注意,尽管E部分的本质是P3和P4一般相对于常规多肽被转移了一个原子和事实上翻转肽残基,但是L构型仍是活性的,设想,同常规的肽基质相比,使P3和P4随后将胺酸侧链倾斜至另一侧。

        环状P2基团(即跨接P1酰胺键的羰基和从P3伸出的羰基)骨架组分的立体化学一般将相应于L-脯氨酸。键接W的P2环原子的立体化学一般如下所示:

        在其中R7和R7′被一起定义为螺烷基的本发明化合物中,上述螺-环烷基将一般在与A顺向的螺-环丙基环上包含R7′a取代基:

        或者与A反向:

        合意地,上述螺-环丙基环的螺碳原子具有R构型:

        合意地,在以下绝对构型中,与A相邻的螺-环丙基环上的R7′a取代基为顺式方向:

        特别优选变量R7′a包括乙基,由此在1位和2位上的不对称碳原子具有R,R构型。另外优选R7′a包括乙烯基,由此在1位和2位上的不对称碳原子具有R,S构型。

        在本发明化合物为包含J基团的大环中,J优选为(i)或者(ii)部分结构表示的非对映异构体:

        J与酰胺顺向(i)?????????????????J与A顺向(ii)

        特别是其中J与A顺向。

        实施方案详述

        现在,本发明的多种实施方案将仅仅参考以下非限制性实施例通过例证的方式进行描述。

        实施例1

        7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-醇(1)。

        向装有甲苯(100mL)的搅拌的圆底烧瓶中加入苯甲?;宜嵋阴?18.7g,97mmol)和间-甲氧基苯胺(12g,97mmol)。然后将在二氧六环中的4M?HCl(0.5mL)加入其中,并且使反应混合物回流6小时(140℃)。将所得混合物与甲苯共蒸发。向所得粗混合物中加入二苯醚(50mL),并且将所得混合物加热至280℃,保持2h。当理论量的乙醇(6mL)被收集在Dean?Stark阱中时,停止加热并且将混合物冷却至室温。将所得粗混合物溶于CH2Cl2(100mL)中并且搅拌30分钟。将形成的沉淀滤出并且对其进行干燥,由此给出1(4.12g,16.4mmol,17%):浅黄色粉末。

        1H(300MHz,DMSO-D6):δ3.8(s,3H),6.24(s,1H),6.88-6.96(dd,1H,J=9.07Hz,J=2.47Hz),7.19(d,1H,J=2.19Hz),7.56(t,3H,J=2.19Hz),7.8(dd,2H,J=7.14Hz,J=2.19Hz),8.0(d,1H,J=9.06Hz);13C(75.5MHz,DMSO-D6):δ55.3,99.6,106.9,113.1,119.1,126.4,127.5,128.8,130.2,134.1,142.2,149.4,161.8,176.4。

        实施例2

        (消旋)-4-氧代环戊-2-烯-1,2-二羧酸二甲酯(2)

        将(1R,2S)-4-氧代-环戊烷-1,2-二羧酸二甲酯(4.8g,23.8mmol)和CuBr2(11.9g,53.2mmol)溶于无水THF(70mL)中,并且在90C下将该混合物回流2小时。将形成的CuBr滤出并且对所得有机相进行浓缩。将CaCO3(2.7g,27.2mmol)和DMF(70mL)加入其中,并且使该混合物在100℃下保持1小时。将暗褐色混合物倾倒在冰(35g)上并且将形成的沉淀滤出。所得水层用乙酸乙酯(1×300mL+3×150mL)进行提取。对所得有机相进行干燥、过滤和浓缩。通过快速层析法(甲苯/EtOAc?9∶1)进行纯化,给出为黄色晶体的化合物2(2.1g,45%)。

        实施例3

        ((1S,4R)&(1R,4S))-4-羟基-环戊-2-烯-1,2-二羧酸二甲酯(3)

        向溶于甲醇(23mL)的化合物2(3.18g,16.1mmol)的冷溶液(-30℃)中加入NaBH4(0.66g,17.5mmol)。九分钟之后,通过加入盐水(80mL)将过量的NaBH4破坏。对所得混合物进行浓缩并且用乙酸乙酯(4×80mL)对其进行提取。对所得有机相进行干燥、过滤和浓缩,从而给出为黄色油的化合物3(3.0g,92%)。

        实施例4

        ((1S,4R)&(1R,4S))-4-羟基-环戊-2-烯-1,2-二羧酸2-甲酯(4)

        向溶于二氧六环和水(1∶1,110mL)中的化合物3(3.4g,22mmol)的冰冷溶液中加入LiOH(0.52g,22mmol)。两个半小时之后,将混合物与甲苯和甲醇共蒸发。通过快速层析法(甲苯/乙酸乙酯3∶1+1%HOAc)进行纯化,给出为黄白色晶体的标题化合物(1.0g,27%)。

        1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ1.78-1.89(m,1H),2.70-2.84(m,1H),3.56-3.71(m,1H),3.76(s,3H),4.81-4.90(m,1H),6.76-6.81(m,1H);13C-NMR(75.5MHz,CDCl3):δ38.0,48.0,52.4,75.7,137.0,146.2,165.0?178.4。

        实施例5

        ((3S,5R)&(3R,5S))-5-((S)-1-叔丁氧羰基-丁基氨基甲?;?-3-羟基-环戊-1-烯羧酸甲酯(5)

        向化合物4(0.20g,1.1mmol)和2-氨基-戊酸叔丁酯(0.24g,1.4mmol)的DMF(7mL)冰冷溶液中加入DIPEA(0.18g,1.4mmol)和HATU(0.53g,1.4mmol)。两小时之后将上述溶液浓缩,并且利用柱层析(甲苯/乙酸乙酯?3∶1)对其进行纯化。由此给出为黄色油的标题化合物(0.22g,63%)。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ0.84-0.96(m,3H),1.14-1.39(m,2H),[(1.44?&?1.49)s,9H],1.50-1.60(m,1H),1.61-1.85(m,1H),1.97-2.10(m,1H),2.11-2.28(m,1H),3.57-3.68(m,1H),[(3.73?&?3.76)s,3H],4.30-4.50(m,1H),4.63-4.73(m,1H),6.80-6.95(m,1H),6.95-7.00(m,1H)。

        实施例6

        ((3S,5R)&(3R,5S))-5-((S)-1-叔丁氧羰基-丙基氨基甲?;?-3-羟基-环戊-1-烯羧酸甲酯(6)

        根据制备化合物5所述的方法,使化合物4(141mg,76mmol)反应,使用L-2-氨基-正丁酸叔丁酯而非2-氨基-戊酸叔丁酯,由此给出为淡黄色油的标题化合物(171mg,69%)。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ0.89-0.98(m,3H),[(1.42?&?1.44)s,9H],1.60-1.78(m,1H),1.79-1.95(m,1H),1.99-2.11(m,1H),2.18-2.30(m,1H),3.58-3.65(m,1H),[3.75?&?3.78)s,3H],4.22-4.39(m,1H),4.61-4.66(m,1H),6.77-6.90(m,1H),6.91-6.92(m,1H).

        实施例7

        ((3S,5R)&(3R,5S))-5-((1R,2S)-1-叔丁氧羰基-2-乙烯基-环丙基氨基甲?;?-3-羟基-环戊-1-烯羧酸甲酯(7)

        使化合物4(50mg,37mmol)根据制备化合物5所述的方法进行反应,使用(1R,2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙羧酸叔丁酯而非2-氨基-戊酸叔丁酯,由此提供为淡黄色油的标题化合物(50mg,38%)。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ[(1.38?&?1.42)s,9H],1.75-1.83(m,1H),2.00-2.21(m,3H),3.55-3.63(m,1H),[(3.77?&?3.82)s,3H],4.20-4.38(m,1H),4.65-4.80(m,1H),5.13-5.20(m,1H),5.22-5.38(m,1H),5.60-5.82(m,1H),6.95-6.96(m,2H)。

        实施例8

        ((3R,5R)&(3S,5S))-5-((S)-1-叔丁氧羰基-丁基氨基甲?;?-3-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-1-烯羧酸甲酯(8)

        向化合物5(0.23g,0.67mmol)的无水THF冰冷溶液中加入7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-醇(0.22g,0.88mmol)和三苯基膦(0.23g,0.88mmol)。然后将DIAD(0.19g,0.92mmol)溶于THF(2mL)中,并且将该溶液滴加加入至上述溶液中。一小时之后将上述混合物浓缩,并且利用快速层析法(甲苯/乙酸乙酯?3∶1)对其进行纯化。由此给出为白色粉末的标题化合物(0.30g,77%)。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ0,88-1.00(m,3H),1.18-1.43(m,2H),[(1.45?&?1.50)s,9H],1.53-1.65(m,1H),1.66-1.85(m,1H),2.29-2.43(m,1H),3.10-3.25(m,1H),[(3.79?&?3.83)s,3H],3.97(s,3H),4.05-4.20(m,1H),4.38-4.50(m,1H),6.03-6.13(m,1H),6.65-6.90(m,1H),7.04-7.18(m,3H),7.40-7.56(m,4H),8.00-8.12(m,3H)。

        实施例9

        ((3R,5R)&(3S,5S))-5-((S)-1-叔丁氧羰基-丙基氨基甲?;?-3-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-1-烯羧酸甲酯(9)

        根据制备化合物8所述的方法,使化合物6(132mg,40mmol)反应,由此给出为黄色油的标题化合物(137mg,61%)。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ0.83-0.98(m,3H),[(1.42?&?1.44)s,9H],1.65-1.78(m,1H),1.80-1.97(m,1H),2.30-2.40(m,1H),3.05-3.20(m,1H),[(3.78?&?3.80)s,3H],3.94(s,3H),3.95-4.01(m,1H),4.38-4.44(s,1H),6.05-6.15(m,1H),6.80-6.94(m,1H),7.02-7.15(m,3H),7.38-7.55(m,4H),7.97-8.18(m,3H)。

        实施例10

        ((3R,5R)&(3S,5S))-5-((1R,2S)-1-叔丁氧羰基-2-乙烯基-环丙基氨基甲?;?-3-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-1-烯羧酸甲酯(10)

        根据制备化合物8所述的方法,使化合物7(41mg,116mmol)反应,形成为黄色油的标题化合物。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ1.52-1.57(m,1H),1.58(m,9H),1.80-1.83(m,1H),2.00-2.17(m,1H),2.20-2.38(m,1H),3.20-3.37(m,1H),3.80(s,3H),3.81-3-3.98(m,1H),3.99(s,3H),5.12-5.20(m,1H),5.22-5.40(m,1H),5.63-5.80(m,1H),6.05-6-20(m,1H),7.00-7.21(m,4H),7.40-7.58(m,4H),8.02-8.18(m,3H)。

        实施例11

        ((3R,5R)&(3S,5S))-5-((S)-1-叔丁氧羰基-丁基氨基甲?;?-3-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-1-烯羧酸(11)

        将甲酯8(0.35g,0.61mmol)溶于二氧六环/水(1∶1,7mL)中,并且将LiOH(0.031g,1.3mmol)加入其中。将该反应搅拌过夜,然后对其进行共浓缩。由此给出为褐色粉末的化合物11锂盐(0.32g,90%)。

        实施例12

        ((3R,5R)&(3S,5S))-5-((S)-1-叔丁氧羰基-丙基氨基甲?;?-3-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-1-烯羧酸(12)

        根据制备化合物11所述的方法,使化合物9(225mg,40mmol)反应,形成为黄色盐的标题化合物(157mg,72%)。

        实施例13

        ((3R,5R)&(3S,5S))-5-((1R,2S)-1-叔丁氧羰基-2-乙烯基-环丙基氨基甲?;?-3-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-1-烯羧酸(13)

        根据制备化合物11所述的方法,使化合物10(35mg,59mmol)反应,形成为黄色盐的标题化合物(33mg,97%)。

        实施例14

        (S)-2-{[((1S,4S)&(1R,4R))-2-{(S)-1-[((S)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2-甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-丁酸叔丁酯(14)

        将酸12(38.4mg,0.070mmol)和(2-氨基-3-甲基-丁酰氨基)-环己基乙酸甲酯(26.6mg,0.098mmol)溶于DMF(1.5mL)中,并且在冰浴中对其进行冷却。将DIPEA(17.1μL,0.098mmol)和HATU(37.4mg,0.098mmol)加入其中。九十分钟后使上述混合物与甲苯和甲醇共浓缩,然后通过快速柱层析(甲苯/乙酸乙酯?6∶1)对其进行纯化。进一步在HPLC(90%甲醇+0.2%TEA)上进行纯化。对非对映异构体混合物14进行浓缩,从而给出淡黄色油(20.6mg,37%)。对其进行冷冻干燥之后,收集为白色粉末的化合物14。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ0.93-1.02(m,9H),1.03-1.25(m,4H),1.44(s,9H),1.65-1.86(m,9H),2.05-2.10(m,1H),2.22-2.40(m,1H),3.05-3.20(m,1H),3.77(s,3H),3.98(s,3H),4.18-4.22(m,1H),4.38-4.60(m,3H),6.01-6.10(m,1H),6.61-6.70(m,2H),6.80-6.85(m,1H),7.05-7.18(m,2H),7.40-7.58(m,5H),8.00-8.13(m,3H).13C-NMR(75.5MHz,CDCl3):δ9.7,18.4,19.2,[25.9?&?26.1],[28.2?&?28.5],29.6,32.0,37.3,41.0,46.2,50.7,52.4,54.4,55.8,57.2,58.5,82.0,82.8,98.4,110.2,118.4,120.1,123.2,127.9,128.2,128.9,129.5,131.2,135.1,135.2,142.7,144.2,161.6,164.3,164.7,170.9,171.4,172.4.MALDI-TOF?m/z?821.56[(M+Na)+C45H58N4NaO9+的计算值821.41]。

        实施例15

        (S)-2-{[((1R,4R)&(1S,4S))-2-{(R)-1-[((R)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2-甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-丁酸叔丁酯(15)

        根据制备化合物14所述的方法使化合物12(20mg,37mmol)反应,使用(2-氨基-3-甲基-丁酰氨基)-(R)-环己基乙酸甲酯而不使用(2-氨基-3-甲基-丁酰氨基)-(S)-环己基乙酸甲酯,由此给出为白色粉末的标题化合物(19mg,66%)。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ0.91-0.98(m,3H),0.99-1.10(m,6H),1.11-1.38(m,4H),[(1.43?&?1.45)s,9H],1-45-1.94(m,9H),2.05-2.18(m,1H),2.22-2.40(m,1H),3.16-3.24(m,1H),3.77(s,3H),3.98(s,3H),4.04-4.18(m,1H),4.36-4.57(m,3H),6.00-6.08(m,1H),6.13-6.21(m,1H),6.62-6.70(m,1H),6.81-6.85(m,1H),7.05-7.18(m,3H),7.41-7.57(m,4H),8.02-8.13(m,3H).13C-NMR(75.5MHz,CDCl3):δ9.3,18.2,19.0,[25.5?&?25.9],[28.0?&?28.3],29.4,31.4,32.1,35.7,40.7,50.4,52.2,54.2,55.5,57.0,58.2,81.8,82.4,98.2,107.5,115.0,118.1,122.9,127.6,128.7,128.8,128.9,129.2,135.1,140.4,142.2,151.4,161.3,163.9,170.4,170.9,171.2,172.0.MALDI-TOF?m/z?821.60[(M+Na)+C45H58N4NaO9+的计算值821.41]。

        实施例16

        (S)-2-{[((3R,5R)&(3S,5S))-5-((S)-1-叔丁氧羰基-丙基氨基甲?;?-3-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-3-甲基丁酸甲酯(16)

        根据制备化合物14所述的方法使化合物12(24mg,44mmol)反应,使用D-缬氨酸甲酯而不使用(2-氨基-3-甲基-丁酰氨基)环己基乙酸甲酯,从而给出为白色粉末的标题化合物(27mg,97%)。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ0.82-0.99(m,9H),[(1.42?&?1.44)s,9H]1.65-1.95(m,2H),2.18-2.25(m,1H),2.26-2.40(m,1H),3.20-3.25(m,1H),3.75(s,3H),3.97(s,3H),4.15-4.19(m,1H),4.36-4.43(m,1H),4.64-4.75(m,1H),6.03-6.15(m,1H),6.80-6.85(m,2H),7.10-7.20(m,3H),7.42-7.58(m,4H),8.0-8.10(m,3H).13C-NMR(75.5MHz,CDCl3):δ9.7,[18.2?&?19.1],25.7,[28.1?&?28.2],32.0,35.6,50.4,52.4,54.5,55.7,57.6,81.7,82.7,98.4,107.7,115.2,118.4,123.2,127.8,129.0,129.2,129.5,134.8,135.0,140.4,142.5,151.6,159.6,[161.1&?161.5],164.6,171.1,172.2.MALDI-TOF?m/z?682.51[(M+Na)+C37H45N3NaO8+的计算值682.31]。

        实施例17

        (S)-2-{[((1R,4R)&(1S,4S))-2-{(S)-1-[(2,5-二甲氧基-苯基)-乙基-氨基甲?;鵠-2-甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-丁酸叔丁酯(17)

        化合物17(28.6mg,59%)由化合物12(33mg,60mmol)根据制备化合物14所述的方法进行制备,使用2-氨基-N-(2,5-二甲氧基-苯基)-N-乙基-3-甲基丁酰胺而不使用(2-氨基-3-甲基-丁酰氨基)-环己基乙酸甲酯。由此给出为白色粉末的标题化合物。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ0.75-0.95(m,9H)1.05-1.18(m,3H),[(1.42?&?1.44)s,9H],1.60-1.95(m,3H),2.20-2.40(m,1H),3.20-3.34(m,1H),3.60-3.80(m,2H),[3.62-3.65(m,3H)],[3.79-3.82(m,3H)],3.98(s,3H),4.02-4-18(m,1H),4.30-4.44(m,2H),6.05-6.18(m,1H),6.60-6.63(m,1H),6.77-6.80(m,2H),6.85-6.93(m,2H),7.12-7.20(m,2H),7.35-7.60(m,5H),8.02-8.20(m,3H).13C-NMR(75.5MHz,CDCl3):δ[9.6?&?9.7],[12.5?&?12.8],[17.1?&?17.5],[19.4?&19.5],25.6,[28.0?&?28.1],32.4,35.8,43.0,44.3,[50.2?&?50.3],54.3,[54.8&?55.0?&?55.2?&?55.5],[55.6?&?55.7?&?55.9?&?56.0],81.7,82.8,98.4,106.9,[112.4?&?112.5],113.7,115.0,115.2,115.9,116.3,118.4,[123.0?&123.1],[127.7?&?127.8],128.8,128.9,129.5,130.1,[134.1?&?134.2],142.6,149.1,149.4,153.4,158.9,[161.4?&?161.6],[163.2?&?163.5],170.9,[171.3&?171.5],172.3.MALDI-TOF?m/z?831.62[(M+Na)+C46H56N4NaO9+的计算值831.39]。

        实施例18

        (S)-2-{[((1R,4R)&(1S,4S))-2-{(S)-1-[((S)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2,2-二甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-丁酸叔丁酯(18)

        化合物18(16.1mg,26%)由化合物12(43.2mg,0.077mmol)根据制备化合物14所述的方法进行制备,使用(2-氨基-3,3-二甲基-丁酰氨基)-环己基-乙酸甲酯而不使用(2-氨基-3-甲基-丁酰氨基)-环己基乙酸甲酯。在甲苯/乙酸乙酯3∶1而非6∶1中对其进行快速柱层析,由此给出为白色粉末的标题化合物。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ0.77-0.83(m,3H),[(0.92?&?0.93)s,9H]0.94-1.20(m,4H),[(1.36?&?1.38)s,9H],1.42-1.76(m,8H),2.20-2.38(m,1H),2.81-2.96(m,1H),3.20-3.22(m,1H),2.78(s,3H),[(3.83?&?3.85)s,3H],3.97-4.02(m,1H),4.17-4.21(m,1H),4.22-4.37(m,2H),5.85-5.97(m,1H),[6.76-6.78(m,0.5H)],[6.80-6.82(m,0.5H)],6.98-7.05(m,3H),7.23-7.41(m,6H),7.82-7.99(m,3H).13C-NMR(75.5MHz,CDCl3):δ[9.4?&?9.5],[25.4?&?25.5],25.8,[26.5?&26.6],[27.9?&?28.0],[28.4?&?28.5],29.3,[35.4?&?35.7],[36.0?&?36.4],[40.5?&?40.7],[50.2?&?50.5],[52.1?&?52.2],[54.1?&?54.3],55.5,[57.0?&57.3],[60.4?&?60.7],[81.8?&?82.0],[82.4?&?82.5]98.1,107.5,115.0,118.1,123.0,127.5,128.7,128.8,129.2,134.9,135.8,141.9,142.5,151.3,159.4,[160.9?&?161.3],[163.7?&?163.9],[169.9?&?170.0][170.0?&?171.3],[172.5&?172.4].MALDI-TOF?m/z?835.68[(M+Na)+C46H60N4NaO9+的计算值835.43]。

        实施例19

        (S)-2-{[(1R,4R)-2-{(S)-1-[((S)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2-甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-戊酸叔丁酯(19a)和

        (S)-2-{[(1S,4S)-2-{(S)-1-[((S)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2-甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-戊酸叔丁酯(19b)

        将酸11(0.051g,0.087mmo1)和(2-氨基-3-甲基-丁酰氨基)-环己基乙酸甲酯(0.054g,0.21mmo1)溶于DMF(1.5mL)中,并且在冰浴中对其进行冷却。将DIPEA(16mg,0.12mmo1)和HATU(47mg,0.13mmo1)加入其中。两个半小时之后使上述混合物与甲苯和甲醇共浓缩,然后通过快速柱层析(甲苯/乙酸乙酯?3∶1)对其进行纯化。进一步在HPLC(90%甲醇+0.2%TEA)上进行纯化。由此,在共浓缩之后,给出为淡黄色稠浆液的两种非对映异构体19a(9.4mg,13%)和19b(5.3mg,7%)。冷冻干燥之后收集为白色粉末的19a和19b。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ0.86-0.93(m,3H),0.94-1.00(m,6H),1.00-1.41(m,7H),1.46(s,9H),1.50-1.88(m,8H),2.05-2.20(m,1H),2.20-2.37(m,1H),3.12-3.25(m,1H),3.73(s,3H),3.97(s,3H),4.05-4.20(m,1H),4.40-4.55(m,3H),6.02-6.18(m,1H),6.30(d,J=8.52Hz,1H),6.63(s,1H),6.76(d,J=8.51Hz,1H),7.06-7.16(m,2H),7.42-7.56(m,5H),8.00-8.12(m,3H);13C-NMR(75.5MHz,CD3OD):δ14.0,18.4,19.3,26.1,28.3,28.5,29.7,31.9,34.9,36.0,41.0,50.7,52.4,53.3,55.7,57.2,58.6,82.0,82.7,98.4,105.7,107.7,115.2,118.4,123.2,125.3,127.9,129.0,129.1,135.1,138.0,142.4,151.6,159.4,161.6,164.3,170.7,171.2,172.3.19b:1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ0.90-1.04(m,9H),1.04-1.43(m,7H),1.47(s,9H),1.50-1.87(m,8H),2.10-2.27(m,1H),2.33-2.45(m,1H),3.10-3.20(m,1H),3.73(s,3H),3.96(s,3H),4.02-4.10(m,1H),4.36-4.53(m,3H),6.00-6.16(m,1H),6.30(d,J=8.52Hz,1H),6.73(s,1H),6.86(d,J=7.96Hz,1H),7.08-7.16(m,2H),7.36-7.56(m,5H),8.03-8.11(m,3H).13C-NMR(75.5MHz,CD3OD):δ14.0,18.6,19.2,26.1,28.2,28.7,29.7,34.5,36.1,36.6,40.8,50.5,52.4,53.4,55.7,57.3,59.1,64.8,82.3,98.4,105.8,107.8,115.3,118.4,123.2,127.8,129.0,129.4,135.2,142.2,144.9,151.0,151.6,159.2,164.3,164.3,170.2,171.6,171.9。

        实施例20

        (S)-2-{[(1R,4R)-2-{(R)-1-[((S)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2,2-二甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-戊酸叔丁酯(20a)和(S)-2-{[(1S,4S)-2-{(R)-1-[((S)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2,2-二甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-戊酸叔丁酯(20b)

        方法A:将羧酸11(57mg,0.10mmol)溶于热(50℃)的无水THF(2mL)中。将(2-氨基-3,3-二甲基-丁酰氨基)-环己基-乙酸甲酯(50mg,0.12mmol)、DIPEA(30mg,0.23mmol)、DCC(25mg,0.12mmol)和HOBt(17mg,13mmol)加入其中。两小时之后对上述混合物进行浓缩并且将其加入到短柱(甲苯/乙酸乙酯?1∶3+3%乙酸)中。然后,在HPLC上对其进行进一步纯化,使用90%甲醇+0.2%TEA。未对非对映异构体产品进行分离。经过HPLC之后,使所得溶液与甲苯和甲醇进行共浓缩,从而给出化合物20(28mg,34%)。

        方法B:向化合物11(60mg,0.10mmol)和(2-氨基-3,3-二甲基-丁酰氨基)-环己基-乙酸甲酯(42mg,0.15mmol)的冰冷溶液中加入DIPEA(19mg,0.15mmol)和HATU(62mg,0.16mmol)。两个半小时之后,对上述混合物进行浓缩并且利用柱层析(甲苯/乙酸乙酯?3∶1)对其进行纯化。所得非对映异构体混合物利用HPLC(90%甲醇+0.2%TEA)进行分离。由此给出20a(6mg,6%)和20b(9mg,10%)。

        20a:1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ0.82-0.90(m,3H),1.01(s,9H),1.05-1.40(m,7H),1.46(s,9H),1.50-1.80(m,8H),2.20-2.35(m,1H),3.07-3.25(m,1H),3.73(s,3H),3.97(s,3H),4.11(d,J=7.96Hz,1H),4.38-4.52(m,3H),6.03-6.12(m,1H),6.24(d,J=8.79Hz,1H),6.63(s,1H),6.82(d,J=9.06Hz,1H),7.07-7.27(m,2H),7.36(d,J=7.96Hz,1H),7.41-7.55(m,4H),8.01-8.10(m,3H);13C-NMR(75.5MHz,CD3OD):δ14.0,18.8,26.1,26.8,28.2,28.6,29.6,34.9,35.6,36.2,40.9,50.7,52.4,53.3,55.7,57.3,60.8,82.0,82.7,98.4,105.2,107.7,115.2,118.4,123.2,127.9,129.0,129.4,131.1,135.1,138.4,142.4,153.3,159.6,161.6,164.2,170.1,171.3,172.2.20b:1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ0.90-0.98(m,3H),1.04(s,9H),1.08-1.40(m,7H),1.44(s,9H),1.55-1.90(m,8H),2.20-2.38(m,1H),3.10-3.22(m,1H),3.73(s,3H),3.97(s,3H),4.02-4.15(m,1H),4.35-4.48(m,3H),6.00-6.08(m,1H),6.72(s,1H),6.90(d,J=9.06Hz,1H),7.09-7.20(m,3H),7.44-7.55(m,5H),8.03-8.11(m,3H)。

        实施例21

        (1R,2S)-1-{[((1R,4R)&(1S,4S))-2-{(S)-1-[((S)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2,2-二甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-2-乙烯基-环丙烷羧酸叔丁酯(21)

        将酸13(35mg,0.060mmol)和(2-氨基-3,3-二甲基-丁酰氨基)-环己基乙酸甲酯(22mg,0.080mmol)溶于无水THF(1.5mL)中,并且将其升温至50℃。将HOBt(11mg,0.080mmol)和DCC(31mg,0.15mmol)加入其中。一小时后使上述混合物与甲苯和甲醇共浓缩,然后通过快速柱层析(甲苯/乙酸乙酯?1∶1)对其进行纯化。在HPLC(80%甲醇+0.2%TEA)上对其进行进一步纯化。对非对映体混合物21进行浓缩,从而给出淡黄色油(26.4mg,53%)。对其进行冷冻干燥之后,收集为白色粉末的化合物21。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ[(0.98?&?1.00),s,9H],1.01-1.38(m,5H),[(1.39?&?1.40)s,9H],1.52-1.63(m,4H),1.65-1.80(m,4H),1.90-2.05(m,1H),2.20-2.40(m,1H),3.02-3.20(m,1H),[(3.66?&3.67)s,3H),3.98(s,3H),3.99-4.02(m,1H),4.30-4.45(m,2H),5.05-5.11(m,1H),5.20-5.30(m,1H),5.60-5.81(m,1H),6.03-6.17(m,1H),6.77-6.82(m,1H),6.95-7.22(m,5H),7.40-7.50(m,4H),8.01-8.10(m,3H).13C-NMR(75.5MHz,CDCl3):δ22.3,[25.7?&?25.8],[26.4?&26.5],[28.0?&?28.4]29.2,32.7,33.3,[35.3?&?35.4],36.0,[40.2?&?40.3],40.7,52.0,55.4,[57.2?&?57.4][60.4?&?60.5],[87.6?&?87.7],[82.3?&?82.5],98.4,107.0,114.9,[117.4?&?117.5],118.1,122.9,127.6,128.6,128.9,129.2,[133.6?&?133.8],135.9,136.9,140.1,[141.4?&?141.6],151.1,159.6,[160.9&?161.3],[164.2?&?164.6],168.9,170.3,[172.1?&?172.6].MALDI-TOFm/z?859.77[(M+Na)+C48H60N4NaO9+的计算值859.43]。

        实施例22

        (S)-2-{[(1R,4R)-2-{(R)-1-[((S)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2,2-二甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-戊酸(22a)和(S)-2-{[(1S,4S)-2-{(R)-1-[((S)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2,2-二甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-戊酸(22b)

        在圆底烧瓶中对叔丁酯20(28mg,0.034mmol)、TES(8.7mg,0.075mmol)、DCM(1mL)和TFA(1mL)进行混合。两小时之后将上述混合物浓缩,并且在利用65%甲醇+0.2%TEA作为流动相的HPLC上对所得非对映异构体进行分离。由此给出为淡黄色稠浆液的22a(15mg,55%)和22b(12mg,45%)。对其进行冷冻干燥之后,收集为白色粉末的标题化合物。

        22a:[α]22D+155.8;1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ0.90-0.97(m,3H),1.03(s,9H),1.05-1.50(m,7H),1.50-1.80(m,8H),2.43-2.55(m,1H),2.77-2.90(m,1H),3.68(s,3H),3.96(s,3H),4.20-4.30(m,2H),4.31-4.40(m,1H),4.45-4.50(m,1H),6.03-6.11(m,1H),6.98(s,1H),7.12-7.19(m,1H),7.36(s,1H),7.41(d,J=2.2Hz,1H),7.50-7.60(m,3H),8.03-8.10(m,3H):13C-NMR(75.5MHz,CD3OD):δ13.1,19.1,26.1,28.7,28.9,29.5,34.3,34.8,35.9,40.1,50.8,51.2,54.8,55.0,57.9,60.7,83.5,99.1,106.0,115.2,118.2,123.3,127.8,128.0,128.7,128.8,129.7,135.2,139.8,143.7,150.6,160.1,162.2,165.2,171.7,172.2,173.4.22b:[α]22D-72,3;1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ0.90-0.97(m,3H),1.02(s,9H),1.07-1.35(m,7H),1.53-1.90(m,8H),2.46-2.61(m,1H),2.76-2.88(m,1H),3.69(s,3H),3.96(s,3H),4.15-4.35(m,2H),4.37-4.41(m,1H),4.42-4.47(m,1H),6.02-6.12(m,1H),7.02(s,1H),7.16(dd,J=2.47,9.34Hz,1H),7.32(s,1H),7.40(d,J=2.47Hz,1H),7.48-7.58(m,3H),8.03-8.12(m,3H);13C-NMR(75.5MHz,CD3OD):δ13.0,18.8,25.9,26.0,28.8,29.4,34.2,34.8,36.3,39.9,48.8,50.5,51.1,54.8,57.9,60.5,82.8,99.0,106.0,115.1,118.2,123.1,127.8,127.9,128.7,129.0,129.5,136.7,139.8,142.8,150.6,160.1,162.0,162.2,164.7,172.1,173.5。

        实施例23

        (S)-2-{[(1R,4R)-2-{(R)-1-[((R)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2-甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-丁酸(23a)和(S)-2-{[(1S,4S)-2-{(R)-1-[((R)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2-甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-丁酸(23b)

        化合物23a(6.6mg,50%)和化合物23b(1.3mg,10%)由化合物15(14mg,0.018mmol)根据制备化合物22a和22b的方法进行制备。由此给出为白色粉末的标题化合物。

        23a:1H-NMR(300MHz,CD3OD):0.88-1.02(m,9H),1.02-1.40(m,7H),1.55-1.97(m,6H),2.01-2.10(m,1H),2.38-2.52(m,1H),2.88-3.00(m,1H),3.77(s,3H),3.98(s,3H),4.08-4.20(m,1H),4.22-4.40(m,3H).6.03-6.18(m,1H),6.86-6.99(m,1H),7.08-7.20(m,1H),7.23(s,1H),7.40-7.43(m,1H),7.45-7.70(m,3H),8.02-8.20(m,3H).13C-NMR(75.5MHz,CD3OD):δ9.0,17.6,18.2,24.5,25.3,28.1,28.8,30.9,35.4,39.4,49.6,51.1,54.7,57.2,58.0,82.4,98.5,105.5,114.5,117.7,122.7,127.2,127.3,128.2,129.0,135.6,136.4,141.7,149.9,159.5,161.2,161.4,164.0,171.0,171.7,172.4.23b:1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ0.9-1.20(m,9H),1.21-1.53(m,7H),1.55-1.93(m,6H),2.05-2.20(m,1H),2.41-2.50(m,1H),2.96-3-05(m,1H),3.77(s,3H),4.00(s,3H),4.05-4.40(m,4H),6.05-6.18(m,1H),6.90-6.95(m,1H),7.05-7.22(m,2H),7.50-7.65(m,4H),8.01-8.16(m,3H)。

        实施例24

        (S)-2-{[((1R,4R)&(1S,4S))-2-{(S)-1-[((S)-羧基-环己基-甲基)-氨基甲?;鵠-2-甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-丁酸(24)

        在圆底烧瓶中对叔丁酯14(13.4mg,0.017mmol)、TES(4.83mg,0.042mmol)、DCM(2mL)和TFA(2mL)进行混合。一小时之后将上述混合物浓缩,并且通过利用65%甲醇+0.2%TEA作为流动相的HPLC对其进行纯化。由此给出为淡黄色稠浆液的24(4.3mg,34%)。对其进行冷冻干燥之后,收集为白色粉末的化合物24。

        1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ0.91-0.99(m,9H),1.00-1.28(m,4H),1.55-1.78(m,9H),1.92-1.95(m,1H),2.00-2.05(m,1H),2.93-3.01(m,1H),3.75(s,3H),3.97(s,3H),4.10-4.40(m,4H),6.05-6.15(m,1H),6.88-6.94(m,1H),7.05-7.10(m,2H),7.41-7.43(m,1H),7.44-7.55(m,2H),8.62-8.68(m,1H),8.69-8.79(m,1H),7.97-8.05(m,2H).13C-NMR(75.5MHz,CD3OD):δ9.2,18.5,25.5,[29.0?&?29.2],[30.0?&30.5],35.3,37.7,39.7,46.2,50.0,[51.4?&?51.5],53.6,55.1,57.1,58.4,83.1,98.9,104.9,114.6,118.3,123.0,123.4,127.5,128.4,128.5,129.7,135.0,142.1,145.7,146.2,159.2,161.9,164.3,171.5,171.9,172.2.MALDI-TOF?m/z?791.27[(M+K)+C42H48KN4O9+的计算值791.31]。

        实施例25

        (S)-2-{[((3R,5R)&(3S,5S))-5-((S)-1-羧基-丙基氨基甲?;?-3-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-3-甲基丁酸甲酯(25)

        化合物25(8.0mg,60%)由化合物16(13.8mg,0.022mmol)根据制备化合物24的方法进行制备,由此给出为白色粉末的标题化合物。

        1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ0.83-1.02(m,9H),1.68-1.80(m,1H),1.82-2.02(m,1H),2.10-2.22(m,1H),2.40-2.60(m,1H),2.81-2.95(m,1H),3.75(s,3H),4.00(s,3H),4.18-4.22(m,1H),4.27-4.40(m,2H),6.05-6.12(m,1H),6.99-7.02(m,1H),7.16-7.21(m,1H),7.38(s,1H),7.40-7.43(m,1H),7.48-7.61(m,3H),7.98-8.12(m,3H)。

        实施例26

        (S)-2-{[((1R,4R)&(1S,4S))-2-{(S)-1-[(2,5-二甲氧基-苯基)-乙基-氨基甲?;鵠-2-甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-丁酸(26)

        化合物26(5.7mg,36%)由化合物17(16.7mg,0.021mmol)根据制备化合物24的方法进行制备,由此给出为白色粉末的标题化合物。

        1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ0.75-0.81(m,6H),0.82-0.98(m,3H),1.00-1.10(m,3H),1.60-2.00(m,3H),2.40-2.56(m,1H),2.80-2.88(m,1H),3.18-3.24(m,1H),3.40-3.46(m,1H),[3.67-3.80(m,6H)],3.97(s,3H),4.10-4.20(m,1H),4.21-4.40(m,2H),6.02-6.17(m,1H),6.75-6.82(m,1H),6.84-7.01(m,3H),7.10-7.20(m,1H),7.30-7.37(m,1H),7.40-7.43(m,1H),7.50-7.60(m,3H),8.00-8.17(m,3H).13C-NMR(75.5MHz,CD3OD):δ9.6,[11.8?&?12.0],[17.2?&?17.4],18.9,25.0,32.3,35.7,43.3,44.2,[50.3?&?50.5],[54.5?&?54.8?&?54.9?&?55.0],[55.1?&?55.2?&?55.3?&?56.0],58.7,83.6,99.3,105.5,[112.5?&?112.7],114.3,[15.1?&?115.2],115.7,116.1,118.4,[123.3?&?123.4],125.2,[128.0&?128.1,128.8,129.1,129.8,[135.1?&?135.3],139.2,[143.3?&?144.4],149.2,[149.6?&?149.9],153.8,159.9,162.4,[163.9?&?164.5],172.1,172.8,[173.6?&?173.7].MALDI-TOF?m/z?775.30[(M+Na)+C42H48N4NaO9+的计算值775.33]。

        实施例27

        (S)-2-{[((1R,4R)&(1S,4S))-2-{(S)-1-[((S)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2,2-二甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-丁酸(27)

        化合物27(6.0mg,72%)由化合物18(8.6mg,0.011mmol)根据制备化合物24的方法进行制备。通过HPLC(60%甲醇+0.2%TEA)进行纯化,从而给出为白色粉末的标题化合物。

        1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ0.88-0.95(m,3H),0.96(s,9H),0.97-1.24(m,4H),1.57-1.62(m,3H),1.58-1.78(m,4H),1.79-1.99(m,1H),2.35-2.44(m,2H),2.85-2.98(m,1H),[(3.67?&?3.69)s,3H],3.94(s,3H),4.10-4.20(m,1H),4.30-4.40(m,3H),6.00-6.09(m,1H),[6.80-6.82(m,0.5H)][6.85-6.87(m,0.5H)],7.05-7.19(m,2H),7.38-7.55(m,4H),7.95-8.07(m,3H).13C-NMR(75.5MHz,CD3OD):δ[9.1?&?9.2],[24.7?&?24.9],[25.4?&?25.5],[25.9?&?26.0],[28.3?&?28.4],28.9,[34.8?&?34.9],[35.6?&?35.9],[39.6?&?39.7],[49.9?&?50.1],[51.4?&51.2],[53.9?&?54.0]55.0,[57.2?&?57.4],60.0,[82.1?&?82.5],98.6,106.2,114.7,117.8,122.7,127.5,127.7,[128.4?&?128.5],129.1,135.3,136.3,141.6,142.0,150.5,159.8,[161.0?&?161.3][164.0?&?164.1],[171.6?&171.9],[172.2?&?172.3],[173,0?&?173.2].MALDI-TOF?m/z?779.43[(M+Na)+C42H52N4NaO9+的计算值779.36]。

        实施例28

        (S)-2-{[(1R,4R)-2-{(S)-1-[((S)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2-甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-戊酸叔丁酯(28)

        将叔丁酯19a(7.6mg,0.0094mmol)和TES(2.4mg,0.021mmol)溶于DCM(1mL)中,并且在冰浴中对该混合物进行冷却。将TFA(1mL)加入其中。两小时之后将上述混合物浓缩,并且在利用60%甲醇+0.2%TEA作为流动相的HPLC上对其进行纯化。由此给出为淡黄色稠浆液的28(6.1mg,86%)。对其进行冷冻干燥之后,收集为白色粉末的标题化合物。

        1H-NMR(300MHz,CD3OD+CDCl3(1∶1)):δ0.90-1.00(m,9H),1.00-1.30(m,7H),1.50-1.90(m,8H),2.00-2.10(m,1H),2.40-2.50(m,1H),2.85-2.98(m,1H),3.65-3.72(s,3H),3.99(s,3H),4.15-4.22(m,1H),4.24-4.35(m,2H),4.38-4.44(m,1H),6.10-6.20(m,1H),6.95-6.96(m,1H),7.16-7.23(m,1H),7.31(s,1H),7.42(d,J=2.47Hz,1H),7.53-7.72(m,3H),7.97-8.16(m,3H);13C-NMR(75.5MHz,CD3OD+CDCl3?1∶1):δ13.5,18.3,19.0,26.0,29.0,29.7,31.0,34.1,35.8,40.2,51.9,55.9,57.7,58.9,63.5,68.4,84.0,99.6,104.8,105.7,115.1,119.0,123.7,128.1,128.9,129.1,130.4,131.3,135.3,138.0,142.9,159.5,162.8,164.8,172.2,172.2,172.4

        实施例29

        (S)-2-{[(1S,4S)-2-{(S)-1-[((S)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2-甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-戊酸叔丁酯(29)

        化合物29(1.3mg,26%)由化合物19b(5.3mg,0.065mmol)根据制备化合物28的方法进行制备。由此给出为白色粉末的标题化合物。

        1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ0.85-1.00(m,9H),1.00-1.23(m,7H),1.50-1.78(m,8H),2.05-2.23(m,1H),2.50-2.66(m,1H),2.70-2.85(m,1H),3.69(s,3H),3.92(s,3H),4.02-4.16(m,1H),4.20-4.25(m,1H),4.35-4.40(m,2H),6.09(m,1H),7.00(s,1H),7.12-7.18(dd,J=2.47,2.19Hz,1H),7.30(s,1H),7.40(d,J=2.42Hz,1H),7.48-7.74(m,3H),8.03-8.10(m,3H);13C-NMR(75.5MHz,CDCl3):δ11.7,16.5,17.0,24.4,27.2,27.9,29.0,29.137.5,41.8,49.7,50.5,53.3,56.3,63.5,66.5,81.0,100.3,101.0,105.7,113.6,121.6,126.3,127.1,127.9,130.1,131.4,135.6,138.7,141.1,150.4,160.2,160.5,165.3,173.0,173.6,173.7

        实施例30

        (1R,2S)-1-{[(1R,4R)-2-{(S)-1-[((S)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2,2-二甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-2-乙烯基-环丙烷羧酸(30a)和

        (1R,2S)-1-{[(1S,4S)-2-{(S)-1-[((S)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2,2-二甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊-2-烯羰基]-氨基}-2-乙烯基-环丙烷羧酸(30b)

        化合物30a(6.3mg,49%)和化合物30b(5.6mg,43%)由化合物21(13.8mg,0.0016mmol)根据制备化合物22a和22b的方法进行合成。30a和30b:白色粉末。

        30a:1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ1.02(s,9H),1.03-1.43(m,5H),1.61-1.95(m,8H),2.11-2.21(m,1H),2.43-2.58(m,1H),2.97-3.04(m,1H),3,78(s,3H),4.01(s,3H),4.02-4.17(m,1H),4.25-4.40(m,2H),5.10-5-20(m,1H),5.27-5.40(m,1H),6.77-6.94(m,1H),6.10-6.20(m,1H),6.97(s,1H),7.18(dd,J=2.5,9.2Hz,1H),7.22(s,1H),7.46(d,J=2.5Hz,1H),7.52-7.65(m,3H),8.00-8.18(m,3H).13C-NMR(75.5MHz,CD3OD):δ13.5,25.3,25.7,28.3,28.7,29.0,32.8,34.6,35.3,39.3,49.7,51.1,54.6,57.2,59.8,82.1,98.4,105.8,114.5,116.3,117.6,122.6,127.2,128.1,128.2,128.8,130.2,133.7,136.0,139.5,141.5,150.3,159.7,161.0,161.2,163,4,171.6,172.5.MALDI-TOF?m/z?803.56[(M+Na)+C44H52N4NaO9+的计算值803.36].30b:1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ1.03(s,9H),1.04-1.42(m,5H),2.60-2.90(m,8H),2.17-2.22(m,1H),2.40-2.55(m,1H),2.96-3.10(m,1H),3.77(s,3H),4.01(s,3H),4.05-4.16(m,1H),4.30-4.40(m,2H),5.15-5.20(m,1H),5.25-5.40(m,1H),5.78-5.95(m,1H),6.10-6.20(m,1H),6.98(s,1H),7.17(dd,J=2.5,9.1Hz,1H),7.26(s,1H),7.46(d,J=2.5Hz,1H),7.50-7.65(m,3H),8.03-8.28(m,3H).13C-NMR(75.5MHz,CD3OD):δ13.7,26.0,26.3,28.8,29.4,29.6,34.0,35.2,35.8,40.1,50.6,51.7,55.3,57.8,60.6,83.0,99.1,106.3,115.2,117.0,118.3,123.2,127.9,128.0,128.8,129.6,130.6,134.4,136.1,140.0,142.5,150.8,160.3,161.8,162.0,165.7,172.3,173.0

        实施例31

        反式-(3R,4R)-二(甲氧羰基)环戊醇(31)

        在0℃下,将硼氢化钠(1.11g,0.029mol)加入到搅拌的(1R,2S)-4-氧代-环戊烷1,2-二羧酸二甲酯(4.88g,0.0244mol)的甲醇(300mL)溶液中。1小时之后用90mL盐水将反应猝灭,浓缩并且用乙酸乙酯对其进行提取。将有机相收集、干燥、过滤和浓缩。所得粗产品通过快速柱层析(甲苯/乙酸乙酯?1∶1)进行纯化,从而给出为黄色油的化合物31(3.73g,76%)。

        实施例32

        3-氧代-2-氧杂-二环[2.2.1]庚烷-5-羧酸(32)

        在室温下,将氢氧化钠(1M,74mL,0.074mol)加入到搅拌的化合物31(3.73g,0.018mol)的甲醇(105mL)溶液中。4小时之后,反应混合物用3M?HCl进行中和,蒸发,以及与甲苯共蒸发若干次。将吡啶(75mL)和Ac2O(53mL)加入其中,并且在室温下将反应混合物振摇过夜。然后将所得混合物与甲苯共蒸发并且通过快速柱层析(乙酸乙酯+1%乙酸)进行纯化,从而给出为黄色油的化合物32(2.51g,88%)。

        实施例33

        3-氧代-2-氧杂-二环[2.2.1]庚烷-5-羧酸叔丁酯(33)

        在惰性氩气氛中,在0℃下,将DMAP(14mg,0.115mmol)和Boc2O(252mg,1.44mmol)加入到搅拌的化合物32(180mg,1.15mmol)的2mL?CH2Cl2溶液中。将反应升温至室温并且搅拌过夜。对反应混合物进行浓缩,并且所得粗产品通过快速柱层析(甲苯/乙酸乙酯梯度15∶1,9∶1,6∶1,4∶1,2∶1)进行纯化,从而给出为白色晶体的化合物33(124mg,51%)。

        1H-NMR(300MHz,CD3OD)δ1.45(s,9H),1.90(d,J=11.0Hz,1H),2.10-2.19(m,3H),2.76-2.83(m,1H),3.10(s,1H),4.99(s,1H);13C-NMR(75.5MHz,CD3OD)δ27.1,33.0,37.7,40.8,46.1,81.1,81.6,172.0,177.7。

        实施例34

        (1R,2R,4S)-2-((1R,2S)-1-乙氧羰基-2-乙烯基-环丙基氨基甲?;?-4-羟基-环戊烷羧酸叔丁酯(34)

        将化合物33(56mg,0.264mmol)溶于二氧六环/水1∶1(5mL)中,并且将该混合物冷却至0℃。将1M氢氧化锂(0.52mL,0.520mmol)加入其中并且在0℃下对该混合物搅拌45分钟,在此之后上述混合物用1M盐酸进行中和、蒸发以及与甲苯共蒸发。将所得残余物溶于DMF(5mL)中,并且将(1R,2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯盐酸盐(60mg,0.313mmol)和二异丙基乙胺(DIEA)(138□L,0.792mmol)加入其中和将该溶液冷却至0℃。将HATU(120mg,0.316mmol)加入其中,在0℃下对该混合物搅拌0.5小时并且在室温下再另外搅拌2小时。然后对上述混合物进行蒸发并且用EtOAc进行提取、用盐水洗涤、干燥、过滤和浓缩。通过快速柱层析(甲苯/EtOAc?1∶1)进行纯化,从而提供为无色油的化合物34(86mg,89%)。

        实施例35

        (1R,2R,4R)-2-((1R,2S)-1-乙氧羰基-2-乙烯基-环丙基氨基甲?;?-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊烷羧酸叔丁酯(35)

        将化合物34(73mg,0.199mmol)溶于无水THF(4mL)中,并且将2-苯基-7-甲氧基-4-喹啉醇(86mg,0.342mmol)和三苯基膦(141mg,0.538mmol)加入其中。将上述混合物冷却至0℃,并且将溶于1mL?THF的DIAD(0.567mmol)滴加加入其中。在室温下将上述混合物搅拌48h。将溶剂蒸发以及所得粗产品通过快速柱层析梯度洗脱(甲苯/EtOAc?9∶1,6∶1,4∶1)进行纯化,从而给出化合物35(81mg,68%)。

        实施例36

        Boc-L-叔亮氨酸-OH(36)

        将三乙胺(890μL,6.40mmol)滴加加入至搅拌的L-叔亮氨酸(300mg,2.29mmol)和二碳酸二叔丁酯(599mg,2.74mmol)的二氧六环/水1∶1(8mL)溶液中,并且将该溶液搅拌过夜。用石油醚(2×)对上述混合进行提取,将水相冷却至0℃并且通过缓慢加入4MNaHSO4·H2O小心地将其酸化至pH值为3。用EtOAc(3×)对酸化的水相进行提取,合并的有机相用盐水(2×)进行洗涤,然后将其干燥、过滤和浓缩,从而给出为无色粉末的化合物36(522mg,99%)。不需要进行进一步纯化。

        1H-NMR(300MHz,CD3OD)δ0.99(s,9H),1.44(s,9H),3.96(s,1H);13C-NMR(75.5MHz,CD3OD)δ27.1,28.7,34.9,68.0,80.5,157.8,174.7。

        实施例37

        ((S)-环己基-甲基氨基甲?;?甲基)-氨基甲酸叔丁酯(37)

        利用与化合物34合成中相同的HATU偶联条件,将Boc-Chg-OH(387mg,1.50mmol)偶联至盐酸甲胺(111mg,1.65mmol)上。所得粗产品用EtOAc提取、用盐水洗涤并且进行浓缩。通过快速柱层析(EtOAc)进行纯化,从而提供为无色固体的化合物37(307mg,76%)。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ0.91-1.13(m,2H),1.14-1.31(m,3H),1.44(s,9H),1.61-1.80(m,6H),2.80(d,J=4.7Hz,3H),3.91(dd,J=7.1,9.1Hz,1H),5.23(b,1H),6.52(bs,1H);13C-NMR(75.5MHz,CDCl3)δ25.9,26.0,26.1,28.3,28.5,29.6,40.5,59.5,79.7,155.9,172.4。

        实施例38

        {(S)-1-[((S)-环己基-甲基氨基甲?;?甲基)-氨基甲?;鵠-2,2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(38)

        向化合物37(98mg,0.362mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入三乙基硅烷(115mL,0.742mmol)和TFA(3mL)。在室温下将上述混合物搅拌2h,然后将其蒸发以及与甲苯共蒸发。将去?;さ陌啡苡贒MF(5mL)中,并且利用与化合物34合成中相同的HATU偶联条件将其偶联至化合物36(84mg,0.363mmol)上。所得粗产品用EtOAc提取、用盐水洗涤、干燥、过滤和浓缩。通过快速柱层析(甲苯/EtOAc?1∶1)进行纯化,从而提供为无色固体的化合物38(128mg,92%)。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ0.99(s,9H),1.02-1.30(m,5H),1.44(s,9H),1.58-1.77(m,4H),1.78-1.89(m,2H),2.79(d,J=4.7Hz,3H),4.11(d,J=9.3Hz,1H),4.33(app.t,J=8.5Hz,1H),5.65(b,1H),7.25(b,1H),7.39(b,1H);13C-NMR(75.5MHz,CDCl3)δ25.9,25.9,26.0,26.2,26.8,28.4,29.0,29.7,34.5,39.7,58.4,62.4,79.4,156.0,171.4,171.8。

        实施例39

        (1R,2S)-1-{[(1R,2R,4S)-2-{(S)-1-[((S)-环己基-甲基氨基甲?;?甲基)-氨基甲?;鵠-2,2-二甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊烷羰基]-氨基}-2-乙烯基-环丙烷羧酸乙酯(39)

        向化合物35(30mg,0.050mmol)的二氯甲烷(1.5mL)溶液中加入三乙基硅烷(21□L,0.132mmol)和TFA(1.5mL)。在室温下将上述混合物搅拌2h,然后将其蒸发以及与甲苯共蒸发。利用与化合物相同的方式对胺38(1.3当量)进行去?;?,然后利用与化合物34合成中相同的HATU偶联条件将其偶联至去?;さ幕衔?5上。所得粗产品用EtOAc提取、用盐水洗涤、干燥、过滤和浓缩。利用HPLC(MeOH/水?9∶1+0.2%三乙胺)进行纯化,从而得到为无色固体的化合物39(30mg,74%)。

        1H-NMR(300MHz,CD3OD)δ0.81-1.14(m,4H),0.99(s,重叠峰,9H),1.21(t,J=7.1Hz,3H),1.35-1.51(m,4H),1.52-1.65(m,3H),1.66-1.72(m,2H),2.03-2.20(m,2H),2.24-2.39(m,1H),2.46-2.56(m,1H),2.66(s,3H),2.72-2.85(m,1H),3.39-3.48(m,2H),3.90(s,3H),4.03-4.15(m,3H),4.44(s,1H),5.09(dd,J=1.9,10.3Hz,1H),5.19-5.27(m,1H),5.25(dd,重叠峰,1H),5.79(ddd,J=8.8,10.3,17.2Hz,1H),6.99(s,1H),7.07(dd,J=2.5,9.1,Hz,1H),7.29(d,J=2.5Hz,1H),7.43-7.52(m,3H),7.86-7.98(m,2H),8.05(d,J=9.3Hz,1H);13C-NMR(75.5MHz,CD3OD)δ14.7,23.4,26.0,26.9,27.1,27.3,30.1,30.7,35.0,35.4,38.3,38.8,40.9,41.0,47.9,55.9,59.6,62.0,62.4,79.8,99.9,107.3,116.4,118.0,119.1,124.4,128.9,129.8,130.5,135.3,141.3,152.1,161.1,162.4,163.0,171.6,172.5,173.7,175.2,176.8.Maldi-TOF-谱:(M+H)+计算值:810.4,测定值:810.5;(M+Na)+计算值:832.4,测定值:832.4;(M+K)+计算值:848.5,测定值:848.4。

        实施例40

        (1R,2S)-1-{[(1R,2R,4S)-2-{(S)-1-[((S)-环己基-甲基氨基甲?;?甲基)-氨基甲?;鵠-2,2-二甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊烷羰基]-氨基}-2-乙烯基-环丙烷羧酸(40)

        向0℃的化合物39(20mg,0.025mmol)的THF/MeOH/水2∶1∶1(2mL)溶液中加入1M?LiOH(175μL,0.175mmol),使该溶液升温至室温并且将其搅拌48h。用1M?HCl将上述溶液酸化至pH值为3,然后将其蒸发以及与甲苯共蒸发。所得粗产品通过HPLC(MeOH/水6∶4+0.5%TFA,随后MeOH/水4∶1+0.2%TFA)进行纯化,从而给出为无色固体的化合物40(13mg,67%)。

        1H-NMR(300MHz,CD3OD)δ0.82-0.98(m,1H),1.01(s,9H),1.05-1.26(m,3H),1.34-1.43(m,1H),1.49-1.77(m,8H),2.10-2.21(m,1H),2.28-2.42(m,2H),2.50-2.61(m,1H),2.64(s,3H),2.68-2.81(m,1H),3.36-3.45(m,2H),4.04-4.11(m,1H),4.06(s,重叠峰,3H),4.27(d,J=8.8Hz,1H),5.10(dd,J=1.8,10.3Hz,1H),5.28(dd,J=1.8,17.2Hz,1H),5.59-5.68(m,1H),5.82(ddd,J=9.1,10.3,17.2Hz,1H),7.44(dd,J=2.5,11.8Hz,1H),7.50(s,1H),7.53(d,J=2.5Hz,1H),7.69-7.78(m,3H),8.02-8.07(m,2H),8.39(d,J=9.3Hz,1H);13C-NMR(75.5MHz,CD3OD)δ23.5,26.0,26.9,27.2,27.3,30.0,30.7,34.7,35.3,37.0,38.7,41.0,41.3,47.4,56.9,59.4,62.7,83.9,100.4,102.2,116.2,117.7,121.7,126.7,129.8,130.8,133.4,133.9,135.6,143.5,158.0,166.6,168.6,172.5,173.4,173.6,175.4,176.4.Maldi-TOF-谱:(M+H)+计算值:782.4,测定值:782.2;(M+Na)+计算值:804.4,测定值:804.2;(M+K)+计算值:820.5,测定值:820.2。

        实施例41

        3-氧代-2-氧杂-二环[2.2.1]庚烷-5-羧酸甲酯(41)

        将化合物32(1.014g,6.50mmol)溶于丙酮(35mL)中,然后将碘甲烷(13.68g,96.4mmol)和氧化银(I)(1.61g,6.95mmol)加入其中。搅拌3小时之后,将所得混合物经硅藻土过滤并且对滤液进行蒸发,随后通过快速柱层析(甲苯/乙酸乙酯4∶1)对其进行纯化,从而得到为白色晶体的甲酯41(702mg,64%)。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ1.96(d,J=10.7Hz,1H),2.21-2.25(m,3H),2.91-2.95(m,1H),3.16(s,1H),3.75(s,3H),4.98(app.s,1H)。

        实施例42

        (1R,2R,4S)-2-((S)-1-叔丁氧羰基-丁基氨基甲?;?-4-羟基-环戊烷羧酸甲酯(42)

        将化合物41(263mg,1.55mmol)和H-Nva-OtBu(420mg,2.42mmol)溶于无水THF(20mL)中。将DIEA(530μL,3.04mmol)和2-羟基吡啶(260mg,2.73mmol)加入其中,将该混合物回流五天。将溶剂蒸发以及所得粗产品通过快速柱层析(甲苯/EtOAc?1∶2)进行纯化,从而给出42(510mg,96%)。

        实施例43

        (1R,2R,4R)-2-((S)-1-叔丁氧羰基-丁基氨基甲?;?-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊烷羧酸甲酯(43)

        将化合物42(249mg,0.725mmol)、2-苯基-7-甲氧基-4-喹啉醇(310mg,1.23mmol)和PPh3(580mg,2.21mmol)溶于无水THF中,并且将其温度降低至0℃。将溶于2mL无水THF中的DIAD(435μL,2.21mmol)在5分钟时间内加入到上述混合物中。两小时之后将温度升高至室温并且将该溶液搅拌过夜。随后对其进行蒸发并且通过快速柱层析(甲苯/EtOAc梯度6∶1~4∶1)对其进行纯化,给出化合物43(324mg,78%)。

        实施例44

        (S)-2-{[(1R,2R,4S)-2-{(S)-1-[((S)-环己基-甲基氨基甲?;?甲基)-氨基甲?;鵠-2,2-二甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊烷羰基]-氨基}-戊酸叔丁酯(44)

        将化合物43(38mg,0.066mmol)溶于二氧六环/水1∶1(4mL)中并且将该溶液冷却至0℃,将1M?LiOH(132μl,0.132mmol)加入其中。将温度升高至室温,将此溶液搅拌2小时,在此之后通过加入1M?HCl对其进行中和,随后将其蒸发以及与甲苯共蒸发。将所得残余物和去?;さ陌?8(1.1当量)溶于DMF中,并且利用如化合物34合成中所用的标准HATU偶联条件使它们偶联。所得粗产品用EtOAc提取、用盐水洗涤、干燥、过滤和浓缩。用HPLC(MeOH/水9∶1+0.2%TEA)进行纯化,从而得到为无色固体的化合物44(44mg,81%)。

        1H-NMR(CDCl3,300MHz)旋转异构体(5∶1)δ0.79(t,J=7.3Hz,3H),0.85-1.19(m,3H),0.93(s,重叠峰,9H),1.20-1.35(m,2H),1.39(s,1.5H),1.43(s,7.5H),1.54-1.79(m,6H),2.06-2.28(m,3H),2.39-2.51(m,2H),2.66-2.78(m,1H),2.74(d,重叠峰,J=4.7Hz,3H),3.42-3.68(m,2H),3.84(s,2.5H),3.88(s,0.5H),4.19(t,J=8.9Hz,1H),4.39-4.59(m,1H),4.68(d,J=9.6Hz,1H),5.04-5.14(m,1H),6.77(s,1H),6.88-7.06(m,2H),7.26-7.47(m,6H),7.53(b,1H),7.85-7.97(m,3H);13C-NMR(75.5MHz,CDCl3)δ13.7,18.7,25.6,25.7,26.0,26.7,28.0,28.9,29,7,34.5,34.7,37.7,38.0,39.2,46.6,47.7,52.7,55.3,58.5,60.3,77.9,81.7,98.0,107.4,115.0,117.9,122.8,127.4,128.6,129.0,140.2,151.2,158.9,160.6,161.1,170.9,171.6,171.8,172.7,173.3.Maldi-TOF-谱:(M+H)+计算值:828.5,测定值:828.6;(M+Na)+计算值:850.5,测定值:850.6;(M+K)+计算值:866.6,测定值:866.6。

        实施例45

        (S)-2-{[(1R,2R,4S)-2-{(S)-1-[((S)-环己基-甲基氨基甲?;?甲基)-氨基甲?;鵠-2,2-二甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊烷羰基]-氨基}-戊酸(45)

        将化合物44(21mg,0.025mmol)溶于CH2Cl2(1.5mL)中,并且将三乙基硅烷(10μL,0.063mmol)和TFA(1.5mL)加入其中。在室温下将此溶液搅拌2小时,在此之后将溶剂蒸发以及与甲苯共蒸发,从而产生为无色固体的化合物45(20mg,100%)。

        1H-NMR(300MHz,CD3OD)δ0.93(t,重叠峰,3H),0.98(s,9H),0.99-1.25(m,4H),1.30-1.49(m,3H),1.50-1.90(m,8H),2.25-2.39(m,2H),2.54-2.62(m,1H),2.64(s,3H),2.72-2.87(m,1H),3.34-3.57(m,3H),4.02-4.13(m,1H),4.06(s,重叠峰,3H),4.27-4.36(m,1H),4.37-4.47(m,1H),5.57-5.66(m,1H),7.45(dd,J=2.3,9.2Hz,1H),7.48(s,1H),7.54(d,J=2.2Hz,1H),7.69-7.79(m,3H),8.01-8.07(m,2H),8.42(d,J=9.3Hz,1H);13C-NMR(75.5MHz,CD3OD)δ14.0,20.2,26.0,26.9,27.2,30.1,30.7,34.6,35.3,37.2,39.1,41.2,47.7,53.7,56.9,59.4,59.5,62.5,83.7,100.4,101.3,102.2,116.2,121.7,126.7,129.8,130.8,133.3,133.9,143.5,157.9,166.6,168.5,172.5,173.6,175.3,175.4,175.5。

        Maldi-TOF-谱:(M+H)+计算值:772.4,测定值:772.6;(M+Na)+计算值:794.4,测定值:794.6;(M+K)+计算值:810.5,测定值:810.6。

        实施例46

        庚-6-烯醛(46)

        向庚-6-烯-1-醇(1mL,7.44mmol)和N-甲基吗啉N-氧化物(1.308g,11.17mmol)DCM(17mL)溶液中加入研磨分子筛(3.5g,4)。在氮气气氛中,在室温下将此混合物搅拌10分钟,随后将过镣酸四丙基铵(TPAP)(131mg,0.37mmol)加入其中。再继续搅拌2.5小时后将此溶液经硅藻土过滤。然后将溶剂小心地蒸发并且使剩余液体通过快色柱层析(DCM)进行纯化,从而给出为油的挥发性醛46(620mg,74%)。

        实施例47

        N′-庚-6-烯-(E)-亚基-肼羧酸叔丁酯(47)

        向化合物46(68mg,0.610mmol)和肼基甲酸叔丁酯(81mg,0.613mmol)的甲醇(5mL)溶液中加入研磨分子筛(115mg,3)。将此混合物搅拌3小时,在此之后将其经硅藻土过滤并且进行蒸发。将所得残余物溶于无水THF(3mL)和AcOH(3mL)中。将NaBH3CN(95mg,1.51mmol)加入其中并且将该溶液搅拌过夜。用饱和NaHCO3溶液(6mL)和EtOAc(6mL)对反应混合物进行稀释。所得有机相用盐水、饱和NaHCO3、盐水洗涤,用MgSO4干燥并进行蒸发。通过用甲醇(3mL)和2M?NaOH(1.9mL)处理使氰基硼烷加合物水解。将此混合物搅拌2小时以及将甲醇蒸发。将H2O(5mL)和DCM(5mL)加入其中,并且水相用DCM提取三次。对合并的有机相进行干燥和蒸发。通过快速柱层析(含有1%三乙胺的甲苯/乙酸乙酯9∶1和含有1%三乙胺的甲苯/乙酸乙酯6∶1)进行纯化,从而产生为油的化合物47(85mg,61%)。

        实施例48

        (1R,2S)-1-{[(1R,2R,4R)-2-(N′-叔丁氧羰基-N-庚-6-烯基-肼基羰基)-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊烷羰基]-氨基}-2-乙烯基-环丙烷羧酸乙酯(48)

        将脚手架分子35(135mg,0.225mmol)和三乙基硅烷(71μL,0.447mmol)溶于DCM(2mL)中,在此之后将三氟乙酸(TFA)(2mL)加入其中。将上述混合物搅拌2h,然后将其与甲苯共蒸发以除去TFA。将所得残余物溶于DMF(3mL)中,并且将化合物47(60mg,0.263mmol)和DIEA(118μL,0.677mmol)加入其中。将其温度降低至0℃,并且将偶联试剂O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(94mg,0.247mmol)加入其中。将此冷溶液搅拌半小时,然后在室温下再将其另外搅拌16小时。在减压下,通过在水浴中加热反应烧瓶将溶剂除去。此后,将所得残余物溶于乙酸乙酯中,并且有机层用盐水洗涤三次、干燥、过滤并进行蒸发。通过HPLC(含0.2%三乙胺的甲醇/H2O?90∶10)进行纯化,给出为油的化合物48(140mg,82%)。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3,40℃):δ1.22(t,J=7.1Hz,3H),1.28-1.42(m,6H),1.46(s,9H),1.52-1.62(m,2H),1.82-1.91(m,1H),1.96-2.16(m,3H),2.18-2.34(m,2H),2.42-2.56(m,1H),2.58-2.72(m,1H),3.42(app.bs,3H),3.66-3.84(m,1H),3.92(s,3H),4.15(q,J=7.1Hz,2H),4.88-5.02(m,2H),5.07-5.18(m,2H),5.20-5.32(m,1H),5.63-5.84(m,2H),6.62(bs,1H),6.94(s,1H),7.09(dd,J=2.6,9.2Hz,1H),7.36-7.51(m,4H),7.99-8.10(m,3H);13C-NMR(75.5MHz,CDCl3):δ14.3,23.0,26.4,26.6,28.3,28.6,33.2,33.5,35.6,37.6,40.6,44.7,47.1,48.6,55.5,61.5,81.9,98.4,107.9,114.5,115.6,118.1,123.2,127.6,128.3,128.7,129.1,133.5,138.7,140.7,151.5,154.5,159.2,160.9,161.5,170.5,174.2,176.3.

        实施例49

        (Z)-(1R,4R,6S,16R,18R)-14-叔丁氧羰基氨基-18-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-2,15-二氧代-3,14-二氮杂-三环[14.3.0.04,6]十九碳-7-烯-4-羧酸乙酯(49)

        向化合物48(158mg,0.209mmol)的无水DCM(25mL)溶液鼓泡氩气5分钟。然后,在氩气气氛中,向此搅拌溶液中加入Hoveyda-Grubbs催化剂第二代(11mg,0.018mmol)的无水DCM(5mL)溶液。在氩气氛下将此混合物在回流下搅拌16小时。将溶剂蒸发并且通过HPLC(含有0.2%三乙胺的甲醇/H2O?90∶10)对其进行纯化,得到为无色固体的化合物49(107mg,70%)。

        1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ1.03-1.22(m,1H),1.28(t,J=7.1Hz,3H),1.32-1.44(m,4H),1.49(s,9H),1.55-1.73(m,2H),1.81-1.91(m,1H),2.04-2.28(m,3H),2.30-2.52(m,3H),2.53-2.70(m,1H),2.86-3.00(m,1H),3.34-3.44(m,1H),3.46-3.62(m,1H),3.95(s,3H),4.19(q,J=7.1Hz,2H),4.32-4.48(m,1H),5.20-5.33(m,1H),5.34(bs,1H),5.58-5.70(m,1H),7.10(s,1H),7.14(dd,J=2.5,9.1Hz,1H),7.39(d,J=2.5Hz,1H),7.45-7.55(m,3H),8.00(d,J=8.0Hz,2H),8.17(d,J=9.3Hz,1H);13C-NMR(75.5MHz,CD3OD):δ14.6,23.4,27.5,27.7,28.0,28.5,30.7,36.1,38.1,42.5,45.6,56.0,62.7,79.9,82.8,100.2,107.4,116.6,119.1,124.5,126.5,128.9,129.8,130.5,135.8,141.5,152.2,156.4,161.3,162.5,163.1,171.9,175.8,179.0.MALDI-TOF-谱:(M+H)+计算值:727.4,测定值:727.5.

        实施例50

        (Z)-(1R,4R,6S,16R,18R)-14-叔丁氧羰基氨基-18-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-2,15-二氧代-3,14-二氮杂-三环[14.3.0.04,6]十九碳-7-烯-4-羧酸(50)

        向化合物49(27mg,0.037mmol)的THF/MeOH/H2O?2∶1∶1(5mL)溶液中加入1M?LiOH(300μL,0.300mmol)。将此溶液在室温下搅拌24小时,最后在回流下搅拌1小时。用1M?HCl将其酸化至pH?3~4并且进行蒸发后,所得残余物通过HPLC(MeOH/H2O?80∶20和MeOH/H2O?90∶10)进行纯化,产生为无色固体的化合物50(12mg,46%)。

        1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ1.06-1.24(m,1H),1.26-1.42(m,3H),1.48(s,9H),1.52-1.73(m,3H),1.80-1.90(m,1H),2.02-2.15(m,1H),2.15-2.40(m,4H),2.43-2.54(m,1H),2.54-2.68(m,1H),2.88-3.00(m,1H),3.35-3.48(m,1H),3.49-3.66(m,1H),3.96(s,3H),4.32-4.48(m,1H),5.25-5.42(m,2H),5.56-5.68(m,1H),7.14(s,1H),7.17(dd,J=2.5,9.1Hz,1H),7.40(d,J=2.2Hz,1H),7.46-7.58(m,3H),8.00(d,J=8.0Hz,2H),8.19(d,J=9.1Hz,1H);13C-NMR(75.5MHz,CD3OD):δ23.6,26.8,27.8,28.3,28.5,30.5,35.8,38.1,43.0,45.5,56.0,80.2,82.7,100.4,106.9,116.6,119.2,124.7,127.4,129.0,129.8,130.7,134.8,140.9,151.6,156.5,161.1,163.0,163.4,173.8,175.7,179.3.

        实施例51

        ((S)-1-环戊基氨基甲?;?2,2-二甲基-丙基)-氨基甲酸叔丁酯(51)

        向化合物36(133mg,0.575mmol)、环戊基胺(64μL,0.648mmol)和DIEA(301μL,1.73mmol)的DMF(3mL)冷溶液中加入偶联试剂HATU(240mg,0.631mmol)。将此混合物搅拌半小时,然后在室温下再继续搅拌两小时。在减压下,通过在水浴中加热反应烧瓶将溶剂除去,将残余物溶于乙酸乙酯中,在此之后有机相用盐水洗涤三次、干燥、过滤和蒸发。通过快速柱层析(甲苯/乙酸乙酯4∶1)进行纯化,从而产生为无色晶体的51(140mg,82%)。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ0.95(s,9H),1.28-1.48(m,重叠峰,2H),1.40(s,9H),1.49-1.71(m,4H),1.86-2.01(m,2H),3.76(b,1H),4.09-4.23(m,1H),5.32(b,1H),5.91(b,1H);13C-NMR(75.5MHz,CDCl3):δ23.6,23.7,26.5,28.3,32.6,33.1,34.5,51.0,62.2,79.4,155.9,170.3.

        实施例52

        (1R,2S)-1-{[(1R,2R,4S)-2-((S)-1-环戊基氨基甲?;?2,2-二甲基-丙基氨基甲?;?-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊烷羰基]-氨基}-2-乙烯基-环丙烷羧酸乙酯(52)

        根据制备化合物39的方法对化合物51(298mg,0.048mmol)和35(16mg,0.054mmol)进行去?;ず团剂?。通过HPLC(含0.2%三乙胺的甲醇/H2O?90∶10)进行纯化,给出为无色固体的化合物52(22mg,63%)。

        1H-NMR(CDCl3,300MHz):δ0.97(s,9H),1.21(t,J=7.1Hz,3H),1.26-1.37(m,1H),1.38-1.46(m,2H),1.48-1.58(m,4H),1.78-1.85(m,1H),1.86-2.02(m,3H),2.03-2.19(m,1H),2.28-2.40(m,2H),2.41-2.54(m,1H),2.64-2.78(m,1H),3.10-3.24(m,1H),3.30-3.44(m,1H),3.95(s,3H),4.04-4.21(m,3H),5.12(dd,J=1.7,10.3Hz,1H),5.14-5.22(m,1H),5.28(dd,J=1.7,17.0Hz,1H),5.59(b,1H),5.75(ddd,J=8.8,10.3,17.0Hz,1H),6.66-6.82(m,2H),6.99(s,1H),7.09(dd,J=2.5,9.1Hz,1H),7.41-7.55(m,4H),7.99-8.09(m,3H);13C-NMR(75.5MHz,CDCl3):δ14.3,22.9,23.6,23.6,26.7,32.7,33.2,33.7,34.8,35.9,36.6,40.2,46.4,47.5,51.3,55.5,61.1,61.4,78.0,98.4,107.1,115.2,117.9,118.2,123.1,127.6,128.8,129.3,133.5,159.1,161.4,169.4,169.9,173.1,174.0.MALDI-TOF-谱:(M+H)+计算值:725.4,测定值:725.6;(M+Na)+计算值:747.4,测定值:747.6;(M+K)+计算值:763.3,测定值:763.5。

        实施例53

        (1R,2S)-1-{[(1R,2R,4S)-2-((S)-1-环戊基氨基甲?;?2,2-二甲基-丙基氨基甲?;?-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊烷羰基]-氨基}-2-乙烯基-环丙烷羧酸(53)

        向化合物52(14mg,0.019mmol)的二氧六环/H2O?1∶1(4mL)溶液中加入1M?LiOH(115μL,0.115mmol)。在室温下将上述溶液搅拌24h。此后,将另外-份LiOH(75μL,0.075mmol)加入其中并且将该溶液再搅拌24h。用1M?HCl将其酸化至pH值大约为3并且与甲苯进行共蒸发后,所得残余物通过HPLC(MeOH/H2O70∶30,含有0.2%TFA)进行纯化,得到为无色固体的化合物53(8mg,60%)。

        1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ0.98(s,9H),1.28-1.48(m,3H),1.49-1.76(m,5H),1.78-1.94(m,2H),2.10-2.24(m,1H),2.26-2.45(m,2H),2.50-2.62(m,1H),2.66-2.79(m,1H),3.35-3.48(m,2H),3.94-4.03(m,1H),4.06(s,3H),4.16-4.24(m,1H),5.10(dd,J=1.8,10.3Hz,1H),5.29(dd,J=1.8,17.2Hz,1H),5.62(b,1H),5.82(ddd,J=9.1,10.3,17.2Hz,1H),7.43(dd,J=2.5,9.3Hz,1H),7.50(s,1H),7.50-7.69(dd,重叠峰,1H),7.67-7.80(m,3H),8.01-8.11(m,2H),8.39(d,J=9.3Hz,1H);13C-NMR(75.5MHz,CD3OD):δ24.7,24.7,27.3,33.1,33.6,34.7,35.4,36.9,38.7,41.0,47.4,52.3,56.9,62.3,83.9,100.4,102.3,116.2,117.7,121.6,126.7,129.8,130.8,133.4,133.8,135.6,143.5,158.0,166.5,168.6,171.9,173.4,175.2,176.4.MALDI-TOF-谱:(M+H)+计算值:697.4,测定值:697.3;(M+Na)+计算值:718.7,测定值:719.3;(M+K)+计算值:735.3,测定值:735.3。

        实施例54

        (S)-叔丁氧羰基氨基-环己基-乙酸甲酯(54)

        向Boc-Chg-OH(53mg,0.206mmol)的丙酮(3mL)溶液中加入碘甲烷(195μL,3.1mmol)和氧化银(I)(53mg,0.229mmol)。在覆盖有铝箔的反应烧瓶中将此混合物搅拌过夜。此后将该溶液经硅藻土过滤并进行蒸发。通过快速柱层析(甲苯/乙酸乙酯15∶1)进行纯化,从而产生为无色油的甲酯54(56mg,100%)。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ1.00-1.34(m,5H),1.44(s,9H),1.54-1.82(m,6H),3.73(s,3H),4.20(dd,J=2.8,5.0Hz,1H),5.05(bs,1H);13C-NMR(75.5MHz,CDCl3):δ26.0,28.2,28.3,29.5,41.1,52.0,58.3,79.7,155.6,172.9.

        实施例55

        (S)-((S)-2-苄氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰氨基)-环己基-乙酸甲酯(55)

        对化合物54(93mg,0.343mmol)进行去?;げ⒏葜票富衔?9的方法将其偶联至Z-Val-OH(95mg,0.378mmol)上。通过快速柱层析(甲苯/乙酸乙酯4∶1),给出为无色固体的化合物55(131mg,94%)。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ0.92-1.30(m,11H),1.54-1.88(m,6H),2.02-2.18(m,1H),3.72(s,3H),4.05-4.18(m,1H),4.52(dd,J=3.0,5.5Hz,1H),5.12(s,2H),5.49(bs,1H),6.52(bs,1H),7.34(s,5H);13C-NMR(75.5MHz,CDCl3):δ17.8,19.0,25.8,28.2,29.3,31.2,40.5,51.9,56.8,60.0,66.8,127.7,127.9,128.1,128.3,136.2,156.3,171.3,172.2.

        实施例56

        (S)-2-{[(1R,2R,4S)-2-{(S)-1-[((S)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2-甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊烷羰基]-氨基}-戊酸叔丁酯(56)

        向化合物55(40mg,0.099mmol)的乙醇(95%)(7.5mL)溶液中加入在活性炭上的钯(10%,40mg),并且在室温下在压力下对该混合物氢化2h。将该混合物经硅藻土过滤并进行蒸发。将化合物43(38mg,0.083mmol)溶于二氧六环/H2O?1∶1(3mL)中,并且将该混合物冷却至0℃,此后将1M?LiOH(140μL,0.140mmol)加入到搅拌的上述溶液中。1小时之后混合物用1M盐酸进行中和,将溶剂蒸发以及与甲苯共蒸发。所得残余物利用与合成化合物48中相同的HATU偶联条件偶联到去?;さ?5上。通过HPLC(含0.2%三乙胺的甲醇/H2O?90∶10)进行纯化,给出为无色固体的化合物56(56mg,88%)。

        1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ0.82-0.96(m,9H),0.82-1.22(m,重叠峰,6H),1.23-1.40(m,2H),1.44(s,9H),1.50-1.69(m,4H),1.71-1.87(m,2H),1.95-2.06(m,1H),2.07-2.22(m,1H),2.28-2.54(m,3H),2.60-2.75(m,1H),3.08-3.28(m,1H),3.30-3.49(m,1H),3.70(s,3H),3.94(s,3H),4.28-4.38(m,1H),4.41-4.57(m,2H),5.17(b,1H),6.54-6.70(m,2H),6.74(b,1H),6.95(s,1H),7.09(dd,J=2.5,9.1Hz,1H),7.39-7.55(m,5H),7.98-8.10(m,3H);13C-NMR(75.5MHz,CDCl3):δ13.7,18.1,18.6,19.2,25.9,28.0,28.2,29.6,30.7,34.6,36.5,37.6,40.8,47.4,47.5,52.1,52.8,55.5,56.8,58.9,77.8,82.0,98.3,107.5,115.3,118.1,123.1,127.5,128.7,129.1,140.5,151.4,159.2,160.7,161.3,171.0,171.5,172.3,172.8,173.0.MALDI-TOF-谱:(M+H)+计算值:815.5,测定值:815.7;(M+Na)+计算值:837.4,测定值:837.6;(M+K)+计算值:853.4,测定值:853.6。

        实施例57

        (S)-2-{[(1R,2R,4S)-2-{(S)-1-[((S)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2-甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊烷羰基]-氨基}-戊酸(57)

        将叔丁酯56(28mg,0.034mmol)和三乙基硅烷(14μL,0.088mmol)溶于DCM(2mL)中,在此之后将三氟乙酸(2mL)加入其中并且将该混合物搅拌2h。与甲苯共蒸发,从而给出为无色固体的57(26mg,100%)。

        1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ0.86-1.00(m,9H),1.01-1.24(m,4H),1.36-1.46(m,2H),1.48-1.75(m,8H),1.70-1.89(m,重叠峰,1H),1.96-2.12(m,1H),2.22-2.40(m,重叠峰,2H),2.49-2.64(m,1H),2.72-2.91(m,1H),3.26-3.40(m,重叠峰,1H),3.50-3.68(m,重叠峰,1H),3.62(s,3H),4.05(s,3H),4.09-4.17(m,1H),4.17-4.25(m,1H),4.35-4.45(m,1H),5.62(b,1H),7.44(dd,J=2.2,9.3Hz,1H),7.49(s,1H),7.53(d,J=2.2Hz,1H),7.65-7.78(m,3H),7.98-8.06(m,2H),8.41(dd,J=2.8,9.3Hz,1H);13C-NMR(CD3OD,75.5MHz):δ13.9,18.8,19.7,20.2,27.0,29.7,30.5,31.8,34.6,37.7,38.9,41.1,47.8,52.3,53.6,56.9,58.8,58.9,60.3,83.8,100.4,102.2,116.2,121.6,126.7,129.8,130.8,133.3,133.8,143.5,157.9,166.5,168.5,173.3,173.9,175.5,175.5,175.6.MALDI-TOF-谱:(M+H)+计算值:759.4,测定值:759.7;(M+Na)+计算值:781.4,测定值:781.7;(M+K)+计算值:797.4,测定值:797.7。

        实施例58

        (S)-2-{[(1R,2R,4S)-2-{(S)-1-[((S)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2-甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊烷羰基]-氨基}-丁酸(58)

        按照实施例42中所述的方法进行制备,但是使用L-2-氨基-N-丁酸叔丁酯而不是H-Nva-OtBu。然后如实施例43中所述,使所得化合物反应,从而给出(1R,2R,4R)-2-((S)-1-叔丁氧羰基-丙基氨基甲?;?-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊烷羧酸甲酯。如实施例56中所述使该化合物与55进行偶联,随后如实施例57所述进行酯解,从而给出为无色固体的化合物58。

        1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ0.82-0.99(m,9H),0.82-1.40(m,重叠峰,6H),1.48-1.78(m,6H),1.80-1.95(m,1H),1.97-2.12(m,1H),2.22-2.40(m,重叠峰,2H),2.51-2.64(m,1H),2.71-2.90(m,1H),3.16-3.39(m,重叠峰,1H),3.49-3.59(m,1H),3.63(s,3H),3.95(s,3H),4.12-4.23(m,2H),4.28-4.38(m,1H),5.31(b,1H),7.43(dd,J=2.2,9.3Hz,1H),7.47(s,1H),7.51(s,1H),7.66-7.89(m,3H),7.99-8.07(m,2H),8.42(d,J=9.1Hz,1H);13C-NMR(75.5MHz,CD3OD):δ10.7,18.8,19.7,25.8,27.0,27.0,29.7,30.5,31.8,37.7,38.9,41.2,47.9,52.3,55.3,56.9,58.8,60.6,83.6,100.7,102.2,116.3,121.5,126.7,129.8,130.8,133.7,133.8,143.9,158.2,166.4,168.3,173.3,173.8,175.2,175.5,175.6.MALDl-TOF-谱:(M+H)+计算值:745.4,测定值:744.9;(M+Na)+计算值:767.4,测定值:766.9;(M+K)+计算值:783.5,测定值:782.9。

        实施例59

        (S)-2-{[(1R,2R,4S)-2-{(R)-1-[((R)-环己基-甲氧羰基-甲基)-氨基甲?;鵠-2-甲基-丙基氨基甲?;鶀-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊烷羰基]-氨基}-丁酸(59)

        按照实施例54中所述的方法进行制备,但是使用Boc-D-环己基甘氨酸而不是Boc-L-环己基甘氨酸。然后如实施例55中所述使所得化合物反应,随后如实施例56所述使其与(1R,2R,4R)-2-((S)-1-叔丁氧羰基-戊基氨基甲?;?-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊烷羧酸甲酯进行偶联。如实施例57所述除去酯基,从而给出为无色固体的化合物59。

        1H-NMR(CD3OD,300MHz):δ0.82-1.02(m,9H),1.04-1.42(m,6H),1.52-1.80(m,6H),1.80-1.96(m,重叠峰,1H),2.00-2.14(m,1H),2.29-2.46(m,2H),2.51-2.65(m,1H),2.68-2.84(m,1H),3.24-3.39(m,重叠峰,1H),3.47-3.60(m,1H),3.67(s,3H),4.07(s,3H),4.18-4.27(m,2H),4.28-4.38(m,1H),5.64(app.bs,1H),7.44(d,J=2.3,6.9Hz,1H),7.42(s,2H),7.67-7.81(m,3H),8.04(d,J=7.8Hz,2H),8.41(d,J=9.1Hz,1H);13C-NMR(CD3OD,75.5MHz):δ10.8,18.5,19.6,25.7,27.1,27.1,30.1,30.6,31.9,37.3,38.2,41.1,47.8,52.3,55.4,56.9,59.0,59.1,60.2,83.8,100.5,102.2,116.3,121.6,126.8,129.8,130.8,133.6,133.8,143.7,158.1,166.5,168.5,173.4,173.8,175.4,175.7,175.7.MALDI-TOF-谱:(M+H)+计算值:745.4,测定值:745.4;(M+Na)+计算值:767.4,测定值:767.4;(M+K)+计算值:783.5,测定值:783.3。

        实施例60

        树脂结合的2-叔丁氧羰基氨基-3,3-二甲基丁酸(60)

        向Argonaut树脂PS-TFP(1.38mmol/g,10g)和2-叔丁氧羰基氨基-3,3-二甲基-丁酸(4.5g,20.7mmol)中加入二氯甲烷(40mL)和DMF(10mL)。向此混合物中加入DMAP(1g,8.28mmol),并且随后加入DIC(9.5mL,60.7mmol)。在室温下搅拌3小时后,对树脂进行过滤并且用DMF、THF、DCM、THF、DCM和乙醚顺序对其进行洗涤,随后在真空中对其进行干燥。

        实施例61

        [1-(2-羟基-茚满-1-基氨基甲?;?-2,2-二甲基-丙基]-氨基甲酸叔丁酯(61)。

        向在DCM中的部分60(200mg)中加入氨基茚满醇(0.14mmol)。将该混合物搅拌2小时。将液体过滤并且所述树脂用2×DCM进行洗涤。将合并的液体混合并且进行浓缩至干燥,从而得到标题化合物(20.5mg,0.055mmol)。经HPLC测定纯度>95%。M+H+363.15.

        13C?NMRδC(100MHz;CDCl3;Me4Si)27.0,28.5,34.2,39.8,50.8,57.9,68.2,73.7,124.8,125.6,127.4,128.5,140.4,171.6.1H?NMRδH(400MHz;CDCl3;Me4Si)1.07(9H,s,CCH3),1.44(9H,s,OCCH3),2.93(1H,dd,Jgem16.4Hz,J3,2?2.3Hz,CH2),3.15(1H,dd,Jgem16.4Hz,J3,2?5.2Hz,CH2),

        实施例62

        2-氨基-N-(2-羟基-茚满-1-基)-3,3-二甲基丁酰胺(62)

        在室温下,将化合物61保持在DCM-TFA?2∶1(2mL)中60分钟。将该溶液与甲苯共蒸发至干燥。

        实施例63

        (2-叔丁氧羰基氨基-3,3-二甲基-丁酰氨基)-环己基-乙酸甲酯(63)

        向2-叔丁氧羰基氨基-3,3-二甲基丁酸(500mg,2.16mmol)、氨基-环己基-乙酸甲酯(444mg,2.59mmol)和HATU(2g,5.40mmol)的DMF(20mL)溶液中加入二异丙基乙胺(1.88mL,10.8mmol)。在室温下,将该溶液搅拌1小时。并用二氯甲烷(40mL)稀释。上述溶液用NaHCO3水溶液(饱和)和水(×2)洗涤、干燥并进行浓缩。所得产品纯度>95%。M+H+385.4。

        实施例64

        {1-[(环己基-甲基氨基甲?;?甲基)-氨基甲?;鵠-2,2-二甲基-丙基}-氨基甲酸叔丁酯(64)

        向在EtOH-THF?1∶2中的化合物63加入大量过量的甲胺(在水中为30%),并且将其在室温下放置2周。将上述溶液浓缩至干燥,并且使所得残余物通过短硅胶柱,用2%甲醇的二氯甲烷进行洗脱,从而给出纯产品(>95%)。M+H+384.5

        实施例65

        2-氨基-N-(环己基-甲基氨基甲?;?甲基)-3,3-二甲基-丁酰胺(65)

        在室温下,将化合物64保持在二氯甲烷-三氟乙酸2∶1中1小时,并且将其浓缩至干燥。所得残余物在真空中干燥16小时。反相C18HPLC表明其纯度>95%。M+H+283.1。

        实施例66

        1-(2-氨基-4-甲氧基苯基)乙酮(66)

        将间-甲氧基苯胺(10.0g,82mmol)溶于CH2Cl2(50mL)中,并且将该溶液冷却至-50℃。在20分钟时间内,将BCl3(在CH2Cl2中,1M,82mL,82mmol)缓缓加入其中,在此之后,在-50℃下将该混合物搅拌30分钟,随后向其中顺序加入AcCl(6.0mL,84mmol)和AlCl3(11g,82mmol)。在-50℃下将该混合物搅拌1小时,随后使其升温至室温。在室温下将其搅拌过夜后,将上述溶液在40℃下加热4h,在此之后将所得混合物倒在冰上。所得含水混合物用10%NaOH(w/v)进行碱化并且用EtOAc(4×200mL)对其进行提取。合并的有机相用盐水洗涤、干燥(MgSO4)并进行蒸发,从而给出黑色固体,该固体经快速柱层析(乙醚/CH2Cl2?20∶80)得到纯化。所得固体在乙醚/己烷中进行重结晶,从而给出为光亮棕褐色叶状物的化合物93(5.6g,42%)。

        实施例67

        N-(叔丁基)-N′-异丙硫脲(67)

        向异硫氰酸叔丁酯(5.0mL,39mmol)的CH2Cl2(200mL)溶液中加入异丙胺(4.0mL,47mmol)和二异丙基乙胺(DIEA)(6.8mL,39mmol),并且在室温下将所得混合物搅拌2h。所得反应混合物用EtOAc进行稀释,用10%柠檬酸(2×)、饱和NaHCO3(2×)、H2O(2×)和盐水(1×)进行洗涤。对所得有机层进行干燥(MgSO4)和蒸发,从而得到为白色固体的标题化合物(3.3g,52%),不需要进一步纯化即可使用。

        实施例68

        N-异丙硫脲(68)

        将化合物67(3.3g,20mmol)溶于浓HCl(45mL)中,并且将该溶液回流40分钟。使上述混合物冷却至室温,然后在冰浴中进行冷却,并且用固体NaHCO3和饱和NaHCO3将其碱化至pH值9.5,在此之后将产品提取入EtOAc(3×)中。合并的有机相用H2O(2x)和盐水(1x)进行洗涤、干燥(MgSO4)并进行蒸发,从而得到粗标题化合物(2.1g,90%),不需进一步纯化即可使用。

        实施例69

        2-(异丙氨基)-1,3-噻唑-4-羧酸氢溴酸盐(69)

        将化合物68(2.1g,18mmol)和3-溴丙酮酸(3.0g,18mmol)的二氧六环(180mL)悬浮液加热至80℃。达到80℃时混合物成为澄清,不久以后产品开始沉淀,为白色固体。加热2h之后,将反应混合物冷却至室温并且将沉淀滤出和收集。由此得到纯标题产品(4.4g,94%)。

        实施例70

        N-(2-乙?;?5-甲氧基苯基)-2-(异丙氨基)-1,3-噻唑-4-羧酰胺(70)

        将化合物69(4.4g,16.5mmol)和苯胺衍生物66(2.75g,16.5mmol)的在吡啶(140mL)中的混合物冷却至-30℃(通过冷却,透明溶液部分地变成悬浮液)。在5分钟时间内,将POCl3(3.3mL,35mmol)缓缓加入其中。在-30℃下将上述混合物搅拌1小时,随后使其达到室温。在室温下搅拌1.5h之后,将所得反应混合物倾倒在冰上,并且用固体NaHCO3和饱和NaHCO3将其pH值调节至约9~10。将所得粗产品提取入CH2Cl2(3×)中,并且将合并的有机相干燥(MgSO4)和蒸发。所得粗深米黄色固体经快速柱层析(己烷/EtOAc?55∶45)进行纯化,从而给出为浅黄色固体的化合物70(5.6g,76%)。

        实施例71

        2-[2-(异丙氨基)-1,3-噻唑-4-基]-7-甲氧基喹啉-4-醇(71)

        将t.BuOK(2.42g,21mmol)的无水t.BuOH(40mL)溶液加热至回流。在5分钟时间内,将化合物70(1.8g,5.4mmol)分份加入其中,并且将形成的暗红色溶液在回流下搅拌另外20分钟。将上述混合物冷却至室温,并且将HCl(在二氧六环中为4M,8.0mL,32mmol)加入其中,在此之后,所得反应混合物在真空下进行浓缩。为了确保所有的HCl和二氧六环都被除去,将粗产品再溶于CH2Cl2中两次并且将其彻底蒸发,从而得到为褐色固体的轻微不纯的化合物71盐酸盐(1.62g)。将上述产品溶于CH2Cl2中并且用饱和NaHCO3进行洗涤,在此之后,水相用CH2Cl2提取几次。对合并的有机相进行干燥(MgSO4)和蒸发,从而给出为浅褐色固体的化合物71(1.38g,81%)(根据HPLC测试,纯度>95%)。1H-NMR(MeOH-d4,400MHz):δ1.30(d,J=6.0Hz,6H),3.93(s,3H),3.95-4.07(m,1H),6.73(s,1H),6.99(dd,J=2.4,9.2Hz,1H),7.26(d,J=2.4Hz,1H),7.37(s,1H),8.10(d,J=9.2Hz,1H).

        实施例72

        (1R,4R,5R)-N-[(1S)-1-[[[(1S)-1-环己基-2-(甲基氨基)-2-氧代乙基]氨基]羰基]-2,2-二甲基丙基]-3-氧代-2-氧杂二环[2.2.1]庚烷-5-羧酰胺(72)

        向化合物32(53mg,0.34mmol)的DMF(9mL)溶液中加入化合物65(80mg,0.28mmol)和DIEA(290L,1.66mmol)。将此溶液冷却至0℃,并且将HATU(127mg,0.33mmol)加入其中。在0℃下搅拌1h并且在室温下搅拌1h后,将溶剂蒸发,所得粗产品通过快速柱层析(EtOAc/甲苯2∶1)进行纯化,从而给出为白色固体的化合物72(110mg,92%)。

        实施例73

        (1R)-1-[[[(1R,2R,4R)-2-[[[(1S)-1-[[[(1S)-1-环己基-2-(甲基氨基)-2-氧代乙基]氨基]羰基]-2,2-二甲基丙基]氨基]羰基]-4-羟基环戊基]羰基]氨基]-2-乙烯基-环丙烷羧酸乙酯(73)

        将化合物72(60mg,0.14mmol)溶于二氧六环(3.5mL)和H2O(2.5mL)中,并且将该溶液冷却至0℃。在5分钟时间内,将LiOH(1M,280L,0.28mmol)滴加加入其中,在此之后在0℃下将该反应混合物搅拌40分钟。用1M?HCl将其pH值调节至7,并且将溶剂蒸发。将所得残余物悬浮在DMF(5mL)中,并且将1-氨基-2-乙烯基-环丙烷羧酸乙酯(32mg,0.17mmol)和DIEA(146L,0.84mmol)加入其中。冷却至0℃后,将HATU(64mg,0.17mmol)加入其中,并且在0℃下对该混合物搅拌1小时和在室温下搅拌1小时。将溶剂蒸发以及所得产品利用快速柱层析(EtOAc/甲醇9∶1)进行纯化,从而给出为白色固体的化合物73(67mg,82%)。

        实施例74

        叔丁基(1R,2R,4R)-2-[[[(1R)-1-(乙氧羰基)-2-乙烯基环丙基]氨基]羰基]-4-[[2-[2-(异丙氨基)-1,3-噻唑-4-基]-7-甲氧基喹啉-4-基]氧基]环戊烷羧酸酯(74)

        标题化合物根据实施例76方法A中所述的方法进行制备,但是使用化合物34而非化合物73。(注释:使用4当量的Ph3P和DIAD。层析洗脱液:甲苯/EtOAc?1∶1)

        实施例75

        (1R,2R,4R)-2-[[[(1R)-1-(乙氧羰基)-2-乙烯基环丙基]氨基]羰基]-4-[[2-[2-(异丙氨基)-1,3-噻唑-4-基]-7-甲氧基喹啉-4-基]氧基]环戊烷羧酸(75)

        向化合物74(20mg,30μmol)的CH2Cl2(2mL)溶液中加入TFA(2mL)和Et3SiH(10μL,63μmol)。2小时之后将挥发物蒸发,粗制品不需经任何纯化步骤即可使用?;衔?5:18mg,定量,为白色固体。

        实施例76

        (1R)-1-[[[(1R,2R,4S)-2-[[[(1S)-1-[[[(1S)-1-环己基-2-(甲基氨基)-2-氧代乙基]氨基]羰基]-2,2-二甲基丙基]氨基]羰基]-4-[[7-甲氧基-2-[2-[(1-甲基乙基)氨基]-4-噻唑基]-4-喹啉基]氧基]环戊基]羰基]氨基]-2-乙烯基-环丙烷羧酸乙酯(76)

        方法A:向化合物73(59mg,0.10mmol)的无水THF(4mL)溶液中加入喹啉71(49mg,0.16mmol)和Ph3P(65mg,0.25mmol)。冷却至0℃后,在5分钟时间内将DIAD(50μL,0.25mmol)滴加加入其中。所得溶液在0℃下搅拌1h和在室温下搅拌48h。将溶剂蒸发以及所得剩余物利用快速柱层析(CHCl3/2M?NH3在甲醇中,95∶5)进行纯化,从而给出为白色固体的化合物76(9mg,10%)。

        方法B:根据实施例72中所述方法将化合物75偶联至化合物65上,从而给出标题化合物(82%)。

        实施例77

        (1R)-1-[[[(1R,2R,4S)-2-[[[(1S)-1-[[[(1S)-1-环己基-2-(甲基氨基)-2-氧代乙基]氨基]羰基]-2,2-二甲基丙基]氨基]羰基]-4-[[7-甲氧基-2-[2-[(1-甲基乙基)氨基]-4-噻唑基]-4-喹啉基]氧基]环戊基]羰基]氨基]-2-乙烯基-环丙烷羧酸(77)

        将化合物76(8mg,9μmol)溶于甲醇(150μL)和THF(100μL)的混合物中。将LiOH(1mg,42μmol)的H2O(25L)溶液加入其中,并且在50℃下将该混合物搅拌过夜。该溶液用HOAc进行中和并且进行蒸发。将所得残余物悬浮在CH2Cl2中并且用H2O对其进行洗涤。对有机相进行蒸发,从而给出为白色固体的标题化合物(8mg,定量)。

        1H-NMR(MeOH-d4,400MHz)(旋转异构体混合物):δ0.60-1.33(m,21H),1.35-1.73(m,12H),1.90-2.42(m,2H),2.51-2.75(m,6H),3.20-3.38(m,1H),3.85(s,3H),3.95-4.28(m,1H),4.91-5.02(m,1H),5.12-5.23(m,1H),5.64-5.83(m,1H),7.01-7.11(m,1H),7.25-7.40(m,1H),7.42-7.57(m,1H),7.85-8.08(m,1H).

        实施例78

        2-氨基-3,3-二甲基-N-噻吩-2-基-甲基-丁酰胺(78)

        如实施例61所述进行制备,但是使用噻吩-2-甲胺而非氨基茚满醇,随后如实施例62所述将Boc基团除去,由此标题化合物得到制备。

        实施例79

        2-氨基-N-(6-羟基-4,5,6,7-四氢-苯并[b]噻吩-5-基)-3,3-二甲基丁酰胺(79)

        标题化合物按照如下所述进行制备:如实施例61所述,但是使用2-氨基-4,5,6,7-四氢-苯并[b]噻吩-5醇而非氨基茚满醇,随后如实施例62所述将Boc基团除去。

        实施例80

        2-氨基-N-(2-二乙基氨基-乙基)-3,3-二甲基-丁酰胺(80)

        标题化合物按照如下所述进行制备:如实施例61所述,但是使用N,N-二乙基亚乙基二胺而非氨基茚满醇,随后如实施例62所述将Boc基团除去。

        实施例81

        2-氨基-N-[2-(2-甲氧基-苯氧基)-乙基]-3,3-二甲基-丁酰胺(81)

        标题化合物按照如下所述进行制备:如实施例61所述,但是使用2-甲氧基苯氧基乙胺而非氨基茚满醇,随后如实施例62所述将Boc基团除去。

        实施例82

        2-氨基-1-(3-羟基-吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-丁-1-酮(82)

        标题化合物按照如下所述进行制备:如实施例61所述,但是使用(R)-3-吡咯烷酮而非氨基茚满醇,随后如实施例62所述将Boc基团除去。

        实施例83

        2-氨基-N-(1,1-二氧代-四氢-1-噻吩-3-基)-3,3-二甲基-丁酰胺(83)

        标题化合物按照如下所述进行制备:如实施例61所述,但是使用2-甲氧基苯氧基乙胺而非氨基茚满醇,随后如实施例62所述将Boc基团除去。

        实施例84

        氨基甲酸,[(1S)-1-[[(苯磺?;?氨基]羰基]丁基]-,苯甲基酯(84)

        向搅拌的Z-Nva-OH(150mg,0.59mmol)的THF(6mL)溶液中加入CDI(400mg,2.4mmol)。将此浆液在室温下搅拌30分钟,随后将DBU(200μL,1.3mmol)和苯磺酰胺(250mg,1.59mmol)的THF(2mL)溶液加入其中。将上述混合物在60℃下搅拌48小时,随后将其浓缩至干燥。将所得残余物溶于甲醇中并且使其经过HPLC进行纯化,从而给出标题化合物(118.5mg,0.304mmol)。经HPLC测定其纯度>95%。M-H+389.0,+Na?412.96.

        实施例85

        (2S)-2-氨基-N-(苯磺?;?戊酰胺(85)

        将化合物84溶于甲醇(5mL)中,随后加入Pd/C并且对其进行氢化2小时。将浆液经硅藻土过滤、用甲醇洗涤并将其浓缩至干燥,从而给出标题化合物。产率100%。M+H+257.3。

        实施例86

        4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊烷-1,2-二羧酸1-{[1-(环己基甲基-氨基甲?;?-2-甲基-丙基]-酰胺}2-[(1-苯甲磺酰氨基羰基-2-乙烯基-环丙基)-酰胺](86)

        如实施例60所述将N-(叔丁氧羰基)-L-缬氨酸连接到Argonaut树脂PS-TFP上,随后如实施例61所述使其与环己烷甲胺反应,并且如实施例62所述将Boc基团除去。如实施例39所述使所得的胺与化合物35进行偶联反应,随后如实施例40所述进行乙酯的水解,给出1-{[2-[1-(环己基甲基-氨基甲?;?-2-甲基-丙基氨基甲?;鵠-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊烷羰基]-氨基}-2-乙烯基-环丙烷羧酸。然后如实施例94所述对所得的酸进行处理,但是使用甲苯磺酰胺而不是环丙基磺酰胺,由此给出标题化合物。产率6%。经HPLC测定其纯度>95%。M+H+864.32。

        实施例87

        乙酸(1S,2R)-1-((2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰氨基)-茚满-2-基酯(87)

        将化合物61(4g)的溶液保持在吡啶-乙酸酐2∶1中30分钟。将DCM加入其中,并且所得溶液用柠檬酸(水溶液)和NaHCO3(水溶液)进行洗涤。将所得有机层浓缩至干燥,给出经HPLC测定纯度>90%的乙?;?。然后,将所得化合物置于30%TFA的DCM溶液中1.5小时,随后将其浓缩至干燥。在甲苯中共蒸发两次,给出经HPLC纯度>90%的标题产品。

        实施例88

        (2S)-甲磺酸2-叔丁氧羰基氨基-4-甲基-戊基酯(88)

        向通过冰水浴冷却的((1S)-1-羟甲基-3-甲基-丁基)-氨基甲酸叔丁酯(25g,115mmol)的二氯甲烷(500ml)溶液中顺序加入二异丙基乙胺(35.7g,276mmol)和甲磺酰氯(15.81g,138mmol)。将所得溶液搅拌过夜,在此期间,使上述混合物逐渐升温至环境温度。所得混合物顺序用水、10%柠檬酸(水溶液)、水和饱和NaHCO3(水溶液)洗涤,然后用Na2SO4干燥并进行浓缩,从而得到褐色固体(32.6g,96%),不需进一步纯化即可用于下一反应。

        实施例89

        ii)((1S)-1-叠氮甲基-3-甲基-丁基)氨基甲酸叔丁酯(89)

        在DMF中,在80℃下,得自实施例88的甲磺酸酯(32.6g,110mmol)用叠氮化钠(21.45g,330mmol)处理24小时。将溶剂蒸发,将所得残余物吸收在DCM中、过滤并且用饱和NaHCO3(水溶液)洗涤。所得溶液用Na2SO4进行干燥并且进行浓缩,从而得到褐色油,经使用梯度乙酸乙酯和己烷的快速层析法进行纯化,从而得到为白色固体的标题化合物(19.55g,73%)。

        实施例90

        (1S)-1-叠氮甲基-3-甲基-丁胺(90)

        在DCM(150ml)中,用TFA(30ml)处理((1S)-1-叠氮甲基-3-甲基-丁基)-氨基甲酸叔丁酯(9.64g,39.78mmol)3小时,在减压下将上述混合物蒸发,将所得残余物溶于乙酸乙酯中并且用1MK2CO3水溶液洗涤、用Na2SO4干燥和浓缩,从而得到黄色液体(4.55g,80%)。

        实施例91

        1-{[2-己-5-烯基氨基甲?;?4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-环戊烷羰基]-氨基}-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯(91)

        如实施例39所述,通过用三乙基硅烷处理将化合物35的叔丁酯除去。将所得的酸(724mg,1.33mmol)、己-5-烯基胺盐酸盐(271mg,2mmol)和二异丙基乙胺(1.85ml,10.65mmol)溶于DMF(20ml)中,并且将其冷却至0℃。30分钟之后,将HATU(608mg,1.6mmol)加入其中,并且将烧瓶从冰浴中移出。反应之后接有LC-MS。3小时之后,将反应混合物提取到EtOAc(100ml)和碳酸氢钠水溶液(15ml)中。EtOAc相用硫酸镁进行干燥、蒸发并且在硅胶上通过层析法(在己烷中25%EtOAc→在己烷中50%EtOAc)进行纯化,从而给出纯标题产品(726mg,87%)。MS(M+H+):525.8

        实施例92

        17-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-2,14-二氧代-3,13-二氮杂-三环[13.3.0.0*4,6*]十八碳-7-烯-4-羧酸乙酯(92)

        将化合物91(363mg,0.58mmol)溶于脱气二氯甲烷(100ml)中。然后将Hoveyda-Grubbs催化剂第二代(26mg,0.041mmol)加入其中,并且使该混合物在氩气气氛下回流过夜。反应混合物在二氧化硅上进行蒸发并且通过硅胶层析(在己烷中50%EtOAc→在己烷中70%EtOAc)进行纯化,从而给出纯标题产品(111mg,32%)。MS(M+H+):597.7

        实施例93

        17-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-2,14-二氧代-3,13-二氮杂-三环[13.3.0.0*4,6*]十八碳-7-烯-4-羧酸(93)

        将化合物92(95mg,0.159mmol)溶于四氢呋喃(10ml)、甲醇(5ml)和水(4ml)中。将氢氧化锂(40mg,1.67mmol)溶于水(1ml)中并且将其加入上述溶液中。将反应混合物加热至65℃。3小时之后对反应混合物进行冷却、用HCl水溶液(pH=5)进行酸化、在二氧化硅上进行蒸发并且通过硅胶层析(在二氯甲烷中10%甲醇→在二氯甲烷中15%甲醇)进行纯化,从而给出纯标题产品(65mg,72%)。MS(M+H+):569.8

        实施例94

        环丙烷磺酸[17-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-2,14-二氧代-3,13-二氮杂-三环[13.3.0.0*4,6*]十八碳-7-烯-4-羰基]-酰胺(94)

        将化合物93(65mg,0.12mmol)、DMAP(21mg,0.17mmol)和EDAC(44mg,0.23mmol)溶于DMF(0.2ml)中。在室温下将该反应混合物搅拌5h。随后将环丙基磺酰胺(69mg,0.57mmol)和DBU(80μl,0.57mmol)加入其中。在室温下对其搅拌过夜后,将反应混合物提取在EtOAc(80ml)和柠檬酸水溶液(10%,2×15ml)中。有机相用MgSO4进行干燥、在二氧化硅上进行蒸发并且在硅胶上通过层析法(在二氯甲烷中5%甲醇→在二氯甲烷中15%甲醇)纯化两次,给出一种稠浆液。将上述稠浆液溶于少量乙腈中并且用乙醚使其沉淀,从而给出纯标题产品(19mg,23%)。MS(M+H+):673.2

        实施例95

        1-{[2-己-5-烯基-甲基-氨基甲?;?-4-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)]-环戊烷羰基]-氨基-2-乙烯基-环丙烷羧酸乙酯(95)

        根据实施例39中所述方法将化合物35的叔丁酯除去。将所得的酸(850mg,1.56mmol)、N-甲基己-5-烯基胺盐酸盐(380mg,2.5mmol)和二异丙基乙胺(2.3ml,13.4mmol)溶于DMF(60mL)中,并且将其冷却至0℃。30分钟之后,将HATU(0.76mg,2.0mmol)加入其中,并且将烧瓶从冰浴中移出。反应之后接有TLC。2小时之后,将反应混合物加入5%柠檬酸中,并且用乙酸乙酯对其提取三次。所得的有机相用硫酸钠干燥并且在减压下对其进行蒸发。所得粗产品通过硅胶层析法进行纯化,从而给出标题产品(820mg,82%)。

        实施例96

        17-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-13-甲基-2,14-二氧代-3,13-二氮杂-三环[13.3.0.0*4,6*]十八碳-7-烯-4-羧酸乙酯(96)

        将化合物95(648mg,1.01mmol)溶于脱气二氯乙烷(500ml)中。然后将Hoveyda-Grubbs催化剂第二代(35mg,0.055mmol)加入其中,并且使该混合物在氩气气氛下回流过夜。反应混合物在二氧化硅上进行蒸发并且在硅胶上通过层析法(在甲苯中30%EtOAc→在甲苯中50%EtOAc)进行纯化,从而给出纯标题产品(230mg,37%)。MS(M+H+):612.8

        实施例97

        17-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-13-甲基-2,14-二氧代-3,13-二氮杂-三环[13.3.0.0*4,6*]十八碳-7-烯-4-羧酸乙酯(97)

        将化合物96(260mg,0.42mmol)溶于1,4-二烷(20mL)中,将1.0M氢氧化锂(6.0ml)加入其中,并且在室温下将该混合物搅拌过夜,然后在60℃下搅拌六小时。将反应混合物加入5%柠檬酸中,并且用乙酸乙酯对其提取3次。所得的有机相用硫酸钠干燥并且在减压下对其进行蒸发。所得粗产品通过用DCM和5%MeOH的硅胶层析法进行纯化,从而给出标题产品(130mg,53%)。MS(M+H):584,7

        实施例98

        环丙烷磺酸[17-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-13-甲基-2,14-二氧代-3,13-二氮杂-三环[13.3.0.0*4,6*]十八碳-7-烯-4-羰基]-酰胺(98)

        将化合物97(58.3mg,0.1mmol)、DMAP(18.3mg,0.15mmol)和EDAC(38.7mg,0.2mmol)溶于DMF(1.0ml)中。在室温下将该反应混合物搅拌过夜。随后将环丙基磺酰胺(60.5mg,0.5mmol)和DBU(76μg,0.5mmol)加入其中。在室温下搅拌过夜后,将反应混合物加入到5%柠檬酸中,并且用乙酸乙酯对其提取三次。所得有机相用硫酸钠进行干燥和进行蒸发。所得残余物通过硅胶层析法纯化两次,给出标题产品(20mg)。MS(M+H)687,8。

        实施例99

        [[4-环丙烷磺酰氨基羰基-17-(7-甲氧基-苯基-喹啉-4-基氧基)-2,14-二氧代-3,13-二氮杂-三环[13.3.0.0*4,6*]十八碳-7-烯-13-基]-氨基甲酸叔丁酯(99)

        N′-己-5-烯-(E)-亚基-肼羧酸叔丁酯根据实施例46和47所述方法进行制备,但是从己-5-烯-醇而非庚-6-烯-醇开始。如实施例48所述对化合物35进行处理,但是使用上述N′-己-5-烯-(E)-亚基-肼羧酸叔丁酯而非相应的庚-6-烯衍生物,随后如实施例49所述进行大环化并且如实施例50所述进行乙酯的水解,给出酸。将所得的酸(58mg,0.0846mmol)溶于无水DMF(7mL)中并且将DIEA在1分钟时间内滴加加入其中。将所得溶液在室温下搅拌1小时,随后将含有环丙基磺酰胺(41mg,0.338mmol)、DMAP(41.3mg,0.338mmol)和DBU(50μL,0.338mmol)的无水DMF(1.5mL)溶液加入其中。将上述溶液在室温下搅拌5天。所得溶液用EtOAc(50mL)进行稀释并且用饱和NaHCO3进行洗涤。所得水相用DCM进行提取。对所得合并的有机层进行干燥、浓缩和使其通过HPLC进行纯化,从而产生为白色固体的标题化合物(14.3mg,0.018mmol),经HPLC测定其纯度>95%。M+H+788.3。

        实施例100

        环丙烷磺酸[13-氨基-17-(7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-基氧基)-2,14-二氧代-3,13-二氮杂-三环[13.3.0.0*4,6*]十八碳-7-烯-4-羰基]-酰胺三氟乙酸盐(100)

        在室温下,将化合物99(2.4mg,0.00304mmol)保持在TFA-DCM?1∶2(3mL)中60分钟。将甲苯(3mL)加入其中。将上述样品共蒸发至干燥,从而形成标题化合物(2.1mg,0.0026mmol)。经HPLC测定,纯度>95%。M+H+688.3.

        实施例101

        3-氧代-2-氧杂-二环[2.2.1]庚烷-5-羧酸己-5-烯基-甲基酰胺(101)

        在氩气下,向冰浴中的在5mL?DMF中的HATU(2.17g,5.7mmol)和N-甲基己-5-烯基胺盐酸盐(6.47mmol)中加入在11mlDMF中的1R,4R,5R-3-氧代-2-氧杂-二环[2.2.1]庚烷-5-羧酸(835.6mg,5.35mmol),随后加入DIEA(2.80mL,16mmol)。搅拌40分钟后,将上述混合物在室温下搅拌5h。将溶剂蒸发,将残余物溶于EtOAc(70mL)中并且用饱和NaHCO3(10mL)对其进行洗涤。水相用EtOAc(2×25mL)进行提取。将有机相合并、用饱和NaCl(20mL)洗涤、用Na2SO4干燥并进行蒸发。经快速柱层析(150g硅胶,2/1?EtOAc-石油醚(PE),通过KMnO4水溶液进行TLC检测,在4/1?EtOAc-PE中Rf为0.55)给出为黄色油的化合物(1.01g,75%)。

        实施例102

        4-羟基环戊烷-1,2-二羧酸1-[(1-环丙烷磺酰氨基羰基-2-乙烯基环丙基)-酰胺]2-(己-5-烯基-甲基酰胺(102)

        将LiOH溶液(0.15M,53mL,8mmol)加入到冰浴中的内酯酰胺101(996mg,3.96mmol)中并且搅拌1h。用1N?HCl将上述混合物酸化至pH值为2~3并且对其进行蒸发、与甲苯共蒸发若干次,以及在真空下干燥过夜。将(1R,2S)-环丙烷磺酸(1-氨基-2-乙烯基环丙烷羰基)酰胺盐酸盐(4.21mmol)和HATU(1.78g,4.68mmol)加入其中。在氩气下,在冰浴中对上述混合物进行冷却,将DMF(25mL)加入其中,然后将DIEA(2.0mL,11.5mmol)加入其中。搅拌30分钟后,将上述混合物在室温下搅拌3h。将溶剂蒸发后,将残余物溶于EtOAc(120mL)中,顺序用0.5N?HCl(20mL)和饱和NaCl(2×20mL)对其进行洗涤,并且用Na2SO4对其进行干燥。经快速柱层析(200gYMC硅胶,在CH2Cl2中2~4%甲醇)给出白色固体(1.25g,66%)。

        实施例103

        环丙烷磺酸(17-羟基-13-甲基-2,14-二氧代-3,13-二氮杂三环[13.3.0.0*4,6*]十八碳-7-烯-4-羰基)-酰胺(103)

        将环戊醇102(52.0mg,0.108mmol)溶于19mL?1,2-二氯乙烷(使用之前鼓泡氩气)中。将Hoveyda-Grubbs第二代催化剂(6.62mg,10mole%)溶于DCE(2×0.5mL)中并且将其加入上述溶液中。用氩气对该新鲜溶液鼓泡1分钟。将其等分(每份4mL)转移到五个2~5mL微波管中。向最后的管中加入0.8mL冲洗用溶剂(rinsing?withsolvent)。通过微波对各管进行加热(5分钟内由室温升至160℃)。将所有的等分合并并且将溶剂蒸发。经快速层析法(硅胶,3~7%甲醇,在CH2Cl2中)给出24.39mg固体(在10%MeOH-CH2Cl2中Rf为0.28,有两个斑点)。将所得固体与9.66mg样品合并,并且使其通过第二层析(2~8%甲醇,在EtOAc中),从而给出含80%期望化合物的膏状固体(23mg)(26%产率)。

        实施例104

        环丙烷磺酸{17-[2-(4-异丙基噻唑-2-基)-7-甲氧基喹啉-4-基氧基]-13-甲基-2,14-二氧代-3,13-二氮杂三环[13.3.0.0*4,6*]十八碳-7-烯-4-羰基)-酰胺(104)

        在冰浴中,将DIAD(22μL,0.11mmol)加入到由易位产品103(23mg)、2-(4-异丙基-1,3-噻唑-2-基)-7-甲氧基喹啉-4-醇(24mg,0.08mmol)和PPh3(30mg,0.11mmol)的在1mL无水THF中的混合物中。将所得混合物在室温下搅拌过夜,然后将其蒸发。所得残余物(1.5mL?MeCN溶液的1.2mL)通过制备HPLC(Hypercarb?7uL100×21.2mm,在10分钟内MeCN水溶液由40%至99%)进行纯化,从而给出3.18mg为膏状固体的MV062308(13%产率)。

        1H?NMR(DMSO-d6)δppm:主旋转异构体0.99(m,2H),1.11(m,2H),1.20-1.30(m,2H),1.37和1.38(2d,J=7.0Hz,6H),1.46-1.58(m,2H),1.70(m,1H),1.85(m,1H),1.90(dd,J=8.5,6.0Hz,1H),2.06(br,1H),2.26(m,1H),2.38(m,1H),2.52-2.62(m,3H),2.90-2.97(m,2H),3.06(s,3H),3.21(m,1H),3.40-3.56(m,2H)3.97(s,3H),4.60(m,1H),5.04(m,1H),5.41(br,1H),5.66(m,1H),7.16(m),7.58(br),8.02(m),10.92(s,1H)

        实施例105

        N-{4-[4-(4-环丙烷磺酰氨基羰基-13-甲基-2,14-二氧代-3,13-二氮杂-三环[13.3.0.0*4,6*]十八碳-7-烯-17-基氧基)-7-甲氧基-喹啉-2-基]-噻唑-2-基}-3,3-二甲基丁酰胺(105)

        如实施例104所述用4-羟基-7-甲氧基-2-[2-(2,2-二甲基丁?;?氨基噻唑-4-基]喹啉处理化合物103,从而给出标题化合物。

        LCMS:保留时间2.30min,梯度3分钟内30%-80%B(流速:0.8mL/min,UV?220nm,ACE?C8?3×50mm;流动相A在90%H2O中10mM?NH4Ac,B在90%ACN中10mM?NH4Ac),(M+1)+=807。

        实施例106

        1-{[2-(己-5-烯基-甲基-氨基甲?;?-4-羟基-环戊烷羰基]-氨基}-2-乙烯基-环丙烷羧酸乙酯(106)

        如实施例102所述使化合物101反应,但是使用1-氨基-2-乙烯基环丙烷羧酸乙酯而非(1R,2S)-环丙烷磺酸(1-氨基-2-乙烯基-环丙烷羰基)酰胺盐酸盐,由此给出标题化合物。

        实施例107

        1-{[4-(4-溴-苯磺酰氧基-2-(己-5-烯基-甲基-氨基甲?;?-环戊烷羰基]-氨基}-2-乙烯基-环丙烷羧酸乙酯(107)

        将化合物106(115mg,0.286mmol)溶于甲苯5ml和二氯甲烷1ml中。将DABCO(2.2.2-二偶氮二环辛烷)(96mg,0.857mmol,3当量)加入到上述溶液中,随后加入BsCl(109mg,0.428mmol,1.5当量)。使该反应在室温下搅拌过夜,用甲苯(+10%乙酸乙酯)稀释,用饱和碳酸氢钠、盐水洗涤,用硫酸钠干燥并进行蒸发。通过柱层析(洗脱液EtOAc,Rf?0.25)得到期望的产品。转化率80%。产量106mg。

        实施例108

        17-(4-溴-苯磺酰氧基)-13-甲基-2,14-二氧代-3,13-二氮杂-三环[13.3.0.0*4,6*]十八碳-7-烯-4-羧酸乙酯(108)

        将化合物107(106mg,0.169mmol)溶于二氯甲烷(40ml)中,并且通过将氮气鼓入溶液中20分钟对其进行脱气。然后将Hoveyda-Grubbs催化剂第一代(10mg,0.017mmol,10mol%)加入其中,并且使该混合物在氮气气氛下回流过夜。然后将反应混合物冷却至室温,将MP-TMT钯清除剂(大约100mg)加入其中并且搅拌2.5小时。将清除剂通过过滤除去并且用50mL二氯甲烷对其进行洗涤。所得溶液通过旋转蒸发进行浓缩。所得粗产品通过柱层析(EtOAc)进行纯化,从而给出61mg产品。产率60%。

        实施例109

        17-[2-(2-异丙氨基-噻唑-4-基)-7-甲氧基-喹啉-4-基氧基]-13-甲基-2,14-二氧代-3,13-二氮杂-三环[13.3.0.0*4,6*]十八碳-7-烯-4-羧酸乙酯(109)

        将2-(异丙氨基-噻唑-4-基)-7-甲氧基-喹啉-4-醇(220mg,0.7mmol)(如WO?00/59929所述进行制备)溶于7ml?NMP(N-甲基吡咯烷酮)中,将一匙Cs2CO3加入其中,在60℃下将其搅拌1.5小时。然后将化合物108(150mg,0.24mmol)加入其中。将反应混合物在80℃下搅拌过夜。上述混合物用氯仿稀释并且用碳酸氢钠、盐水进行洗涤。所得水相用氯仿进行反提取。合并的有机层用硫酸钠干燥并进行蒸发。所得粗产品通过制备HPLC(Gilson)(MeOH-H2O,65%)进行纯化,从而给出21mg产品(产率13%)以及12mg异构体。

        实施例110

        17-[2-(2-异丙氨基-噻唑-4-基)-7-甲氧基-喹啉-4-基氧基]-13-甲基-2,14-二氧代-3,13-二氮杂-三环[13.3.0.0*4,6*]十八碳-7-烯-4-羧酸(110)

        向在THF(0.2ml)和甲醇(0.3ml)混合物中的酯109(21mg,0.031mmol)溶液中加入在0.15ml水中LiOH(4mg,0.17mmol)的溶液。所得混合物在60℃下搅拌3.5小时。冷却至室温后,将乙酸加入其中(30当量)。将该混合物与甲苯共蒸发。所得残余物在氯仿和水之间进行分配,水相用氯仿提取三次,将有机相合并、用硫酸钠干燥和蒸发,从而给出20mg纯产品(产率99%)。

        实施例111

        环丙烷磺酸{17-[2-(2-异丙氨基-噻唑-4-基)-7-甲氧基-喹啉-4-基氧基]-13-甲基-2,14-二氧代-3,13-二氮杂-三环[13.3.0.0*4,6*]十八碳-7-烯-4-羰基}酰胺(111)

        将酸110(20mg,0.15mmol)、DMAP(28mg,0.225mmol)和EDAC(58mg,0.3mmol)溶于DMF(1.5ml)中。在室温下将该反应混合物搅拌过夜。随后将环丙基磺酰胺(91mg,1.125mmol)和DBU(114μl,0.75mmol)加入其中。在室温下搅拌过夜后,将反应混合物加入到5%柠檬酸中,并且用氯仿对其提取三次。所得的有机相用硫酸钠干燥并进行蒸发。所得残余物通过制备HPLC进行纯化,从而给出标题产品(5.6mg)(产率24%)。

        测定

        利用常规的体外(酶)测定法或者细胞培养测定法,对本发明化合物对黄病毒(比如HCV)NS3蛋白酶的活性进行了方便的测定。

        一种有效的测定法是公开于EP?1043399中的Bartenshlager复制子测定法。另一种复制子测定法描述于WO?03064416中。

        涉及抑制全长肝炎C?NS3的适宜酶测定法基本上如Poliakov,2002Prot?Expression?&?Purification?25?363?371中所述。简要而言,酯肽基质Ac-DED(Edans)EEAbuΨ[COO]ASK(Dabcyl)-NH2(AnaSpec,SanJosé,USA)的水解在肽辅因子KKGSVVIVGRIVLSGK存在下以分光荧光进行测定,如Landro,1997?Biochem?36?9340-9348所述。在约30℃下,将所述酶(1nM)与25μM辅因子和所述抑制剂培养在缓冲液(比如50mM?HEPES,pH值7.5,10mM?DTT,40%甘油,0.1%正辛基-β-D-葡糖苷)10分钟,其中反应通过加入基质被启动,一般为0.5μM基质。一般将抑制剂溶于DMSO中,声处理30s并且使其进行旋转。在测定之间通常将上述溶液贮存在-20℃下。

        另一种酶活性测定法描述于WO?0399316中,其利用HCV?NS3/4A蛋白酶配合物FRET肽测定法。这种体外测定法的目的是测定本发明化合物对源于BMS、H77C或者J416S株的HCV?NS3蛋白酶配合物的抑制作用,如下所述。这种测定法提供了本发明化合物在抑制HCV蛋白水解活性中效果如何的指征。

        血清取自被HCV感染的患者。HCV基因组(BMS株)的设计全长cDNA模板由通过血清RNA的逆转录-PCR(RT-PCR)获得的DNA片段,并且利用根据其它基因型la株之间的同源性而选择的引物进行构建。根据对整个基因组顺序的确定,根据Simmonds等人的分类(参见P?Simmonds,KA?Rose,S?Graham,SW?Chan,F?McOmish,BC?Dow,EA?Follett,PL?Yap和H?Marsden,J.Clin.Microbiol.,31(6),1493-1503(1993))将基因型Ia确定给HCV分离物。非结构区域NS2-5B的氨基酸序列被证明其中>97%等同于HCV基因型Ia(H77C)以及87%等同于基因型Ib(J4L6S)。传染性克隆H77C(Ia基因型)和J4L6S(Ib基因型)可以得自于R.Purcell(NIH)并且其顺序公开于Genbank(AAB67036,参见Yanagi,M.,Purcell,R.H.,Emerson,S.U.和Bukh.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94(16)8738-8743(1997);AF054247,参见Yanagi,M.,St?Claire,M.,Shapiro,M.,Emerson,S.U.,Purcell,R.H.和Bukhj,Virology?244(1),161(1998))中。

        BMS、H77C和J4L6S株是产生重组体NS3/4A蛋白酶配合物的常规株。为这些株编码重组体HCV?NS3/4A蛋白酶配合物(氨基酸1027~1711)的DNA如P.Gallinari等人所述进行操纵(参阅Gallinari?P,Paolini?C,Brennan?D,Nardi?C,Steinkuhler?C,De?Francesco?R.Biochemistry.38(17):562032,(1999))。简要而言,将溶解尾部的三-赖氨酸添加到30NS4A编码区的3′-末端。NS4A-NS4B切割位点的P1位置上的半胱氨酸(氨基酸1711)被转换为甘氨酸以避免赖氨酸标记物的蛋白酶剪切。此外,在氨基酸1454位,半胱氨酸向丝氨酸的突变可以通过PCR被引入,从而预防NS3解旋酶域的自溶裂解。按照P.Gallinari等人所述记录(参阅Gallinari?P,Brennan?D,Nardi?C,BrunettiM,Tomei?L,Steinkuhler?C,De?Francesco?R.,J?Virol.72(8):6758-69(1998))及其改良法,变体DNA片段可以被克隆在pET21b细菌表达载体(Novagen)中和NS3/4A配合物可以表达于大肠埃希氏杆菌株BL21(DE3)(Invitrogen)中。简要而言,通过在20℃下用0.5mM异丙基-β-D-硫代吡喃型半乳糖苷(IPTG)处理22小时,NS3/4A表达可以得到诱发。一般发酵(101)产生大约80g湿式细胞浆料。将上述细胞再悬浮于由25mM?N-2-(羟乙基)哌嗪-N′-2-(乙烷磺酸)(HEPES),pH7.5,20%甘油,500mM氯化钠(NaCl),0.5%Triton-X100,1μg/mL溶菌酶,5mM氯化镁(MgCl2),1μg/mL?DnaseI,5mM?β-巯基乙醇(BME),蛋白酶抑制剂-乙二胺四乙酸(EDTA)游离(Roche)组成的裂解缓冲液(10mL/g)中,使其均匀并且在VC中培养20分钟。对上述匀浆进行声处理,并且通过在4℃下在235000g下对其超离心1小时而使其澄清。

        将咪唑加入上清液中至其最终浓度为15mM,并且将其pH值调节至8。将粗蛋白质提取物加载到用缓冲液B(25n-tM?20?HEPES,pH820%甘油,500mM?NaCl,0.5%Triton-XIOO,15mM咪唑,5mMBME)预平衡过的次氮基三乙酸镍(Ni-NTA)柱上。以1mL/min的流速对样品进行加载。上述柱用15柱体积的缓冲液C(与缓冲液B一样,只是其中含有0.2%Triton-X100)进行洗涤。所述蛋白质用5柱体积的缓冲液D(与缓冲液C一样,只是其中含有200mM咪唑)进行洗脱。

        对含NS3/4A蛋白酶配合物的级份进行收集并且将其加载到用缓冲液D(25MM?HEPES,pH7.5,20%甘油,300mM?NaCl,0.2%Triton-X100,10mM?BME)预平衡过的脱盐柱Superdex-S200上。以1mL/min的流速对样品进行加载。对含有NS3/4A蛋白酶配合物30的级份进行收集并且将其浓缩至大约0.5mg/mL。由BMS、H77C和J4L6S株获得的NS3/4A蛋白酶配合物的纯度,通过SDS-PAGE和质谱分析,一般断定大于90%。

        所述酶通常贮存在-80℃下,在用于测定缓冲液中之前将其融化在冰上并且进行稀释。用于NS3/4A蛋白酶测定法中的基质适宜的为RET?S1(共振能量传递酯肽基质;AhaSpec,Inc.cat#_22991)(FRET肽),Taliani等人描述在Anal.Biochem.240(2):6067(1996)中。这种肽的序列大概地以NS4A/NS4B天然切割位点为基础,只是在该切割位点上存在的是酯键而不是酰胺键。在本发明化合物不存在或者存在下,将肽基质与三种重组体NS3/4A配合物中的一种一起进行培养,并且利用Cytofluor?Series?4000对荧光反应产物的形成进行实时跟踪。所用试剂如下所列:HEPES和甘油(超纯)可以得自于GIBCO-BRL。二甲亚砜(DMSO)得自于Sigma。β-巯基乙醇得自于Bio?Rad。

        测定缓冲液:50mM?HEPES,pH7.5;0.15M?NaCl;0.1%Triton;15%甘油;10mM?BME?;剩?μM最终浓度(自在DMSO中的2mM备用溶液20,贮存在-20℃)。HCV?NS3/4A型1a(1b)2~3nM最终浓度(自在25mM?HEPES中的5μM备用溶液,pH7.5,20%甘油,300m.M?NaCl,0.2%Triton-X100,10mM?BME溶液)。对于效力接近测定极限的化合物,所述测定法可以通过将50μg/mL?BSA加入到测定缓冲液中和/或将末端蛋白酶浓度降低至300pM而变得更为灵敏。

        所述测定合意地在得自Falcon的96孔聚苯乙烯黑板(plate)中进行。每个孔中都含有25μl在测定缓冲液中的NS3/4A蛋白酶配合物、50μl在10%DMSO/测定缓冲液中的本发明化合物和25μl在测定缓冲液中的基质?;乖谙嗤牟舛ò迳隙远哉瘴?没有化合物)进行制备。将酶配合物与化合物或者对照物溶液混合,一般在通过加入基质启动酶促反应前混合1分钟。所述测定板通常利用分光光度计(比如Cytofluor?Series?4000(Perspective?Biosysterns))即时读数。对该仪器进行合意地设置,以在25℃下读出340nm的发射和490nm的激发。反应通常持续大约15分钟。

        抑制百分比可以利用以下方程进行计算。

        100-[(dFinh/dFcon)×100]

        其中dF是荧光在曲线线性范围上的变化。对抑制-浓度数据应用非线性曲线拟合,并且通过利用比如Excel?XI-拟合软件的软件利用以下方程对50%有效浓度(IC50)进行计算:

        y=A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))。

        酶测定合意地应用荧光共振能量传递(FRET)原理,从而对HCVNS3丝氨酸蛋白酶催化的NS4A/4B裂解结果产生光谱响应。所述活性一般在使用355nm激发波长和500nm发射波长的连续荧光测定中进行测定。其起始速度可以根据10分钟连续的由于NS3蛋白酶催化裂解事件而产生的增强荧光强度读数进行确定。

        另一种酶测定法可以进行如下:

        材料

        重组体HCV?NS3全长酶可以如Poliakov等人Protein?Expression?&purification?25(2002)363-371中所示进行制备。

        NS4A辅因子合意地具有氨基酸序列KKGSVVIVGRIVLSGK(可以市场购买到),通常被制备成为10mM原料的DMSO溶液。

        FRET-基质(Ac-Asp-Glu-Asp(EDANS)-Glu-Glu-Abu-ψ-[COO)Ala-Ser-Lys(DABCYL)-NH2,MW1548.60,可以购自AnaSpec?RET?S1,CA.USA),并且一般被制备成1.61mM原料的DMSO溶液。等分样(50μl/管)应当覆盖有铝箔以防止直射光并且贮存在-20℃下。

        参比化合物-1,序列为AcAsp-D-Gla-Leu-Ile-Cha-Cys的N-1725,MW?830.95,可以购自于BACHEM,Switzerland,并且通常被制备成2mM原料DMSO溶液以及在-20℃下贮存为等分试样。

        1M?HEPES缓冲液可以购自Invitrogen?Corporation,贮存在20℃。

        甘油可以购自Sigma,99%纯度。

        CHAPS,3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲铵]-1-丙磺酸盐:可以购自Research?Organics,Cleveland,OH44125,USA。MW614.90DTT,DL-二硫苏糖醇(Cleland?Reagent:DL-DTT)99%纯度,MW.154.2。贮存:+4℃。

        DMSO可以购自SDS,13124?Peypin,France。99.5%纯度。

        TRIS,超纯(三羟甲基氨基甲烷),可以购自于ICN?BiomedicalsInc。

        氯化钠,可以得自KEBOlab?AB。

        N-十二烷基-β-D-麦芽糖苷,最低98%,可以购自于Sigma,贮存:20℃。

        设备

        微量滴定板(白色临检用酶标板(cliniplate),ThermoLab?Systemscat?no.9502890)

        Eppendorf移液管

        Biohit移液管,多次剂量

        Ascent荧光计,滤色片对ex?355nm,em?500nm

        方法

        试验方法

        在DMSO中制造本发明化合物的10mM备用液。在试验时将上述备用液贮存在室温下,然而长期贮存时放置在-20℃。

        测定缓冲液A:

        50mM?HEPES缓冲液,pH=7.5,40%甘油,0.1%CHAPS

        贮存:室温

        10mM?DTT(在-20℃下等分贮存和在每次试验中加入新鲜的)

        测定缓冲液B:

        25mM?TRIS?pH7.5,0.15M?NaCl,10%甘油,0.05%正十二烷基-β-D-麦芽糖苷

        5mM?DTT(在-20℃下等分贮存和在每次试验中加入新鲜的)

        试验顺序:

        反应缓冲液(用于一个板,100个反应)的制备(缓冲液A)

        1、在去离子水中制备9500μl测定缓冲液(HEPES,pH=7.5,40%甘油和0.1%CHAPS)。加入DTT给出10mM的最终浓度(每次试验均新近制备)。

        2、迅速融化NS3蛋白酶

        3、加入13.6μl?NS3蛋白酶和13.6μl?NS4A肽并且进行适当混合。在室温下将混合物放置15分钟。

        4、尽快将酶备用液放回液氮或者-80℃。

        反应缓冲液(用于一个板,100个反应)的制备(缓冲液B)

        5、在去离子水中制备9500μl测定缓冲液(TRIS,pH=7.5,0.15M?NaCl,0.5mM?EDTA,10%甘油和0.05%正十二烷基β-D-麦芽糖苷)。加入DTT给出5mM的最终浓度(每次试验均新近制备)。

        6、迅速融化NS3蛋白酶

        7、加入27.2μl?NS3蛋白酶和13.6μl?NS4A肽并且进行适当混合。在室温下将混合物放置15分钟。

        8、尽快将酶备用液放回液氮或者-80℃中。

        抑制剂/参比化合物的制备

        制备系列抑制剂稀释物,在DMSO中的抑制剂被稀释为100×最终浓度10、1、0.1、0.01和0.001μM。在100μl全部反应体积中最终的DMSO浓度为1%。

        制备系列参比化合物稀释物,在DMSO中的N-1725被稀释为100×最终浓度120、60、30、15、7.5和3.75nM。

        每次试验需要八个酶对照孔。

        空白孔含有95μL缓冲液(不存在NS3PR)、1μL?DMSO和5μL基质。

        FRET基质的制备

        用测定缓冲液将基质备用液(1.61mM)稀释成40μM工作液。防止暴露于光线。

        测定顺序

        使用96孔临检用酶标板,每孔的总测定体积为100μl。

        1、向每个孔中加入95μL测定缓冲液

        2、加入1μl抑制剂/参比化合物

        3、在室温下预培养30分钟

        4、通过加入5μL?40μM基质溶液(最终浓度为2μM)起动反应

        5、在ex=355nm和em=500nm下连续读数20分钟,监控每分钟增强的荧光。

        6、绘制连续曲线(在线性范围内,8~10个时间点)并且确定斜率,为起始速度,相对于每个单个抑制剂浓度。

        7、根据酶对照数据计算%抑制作用。

        结果处理

        将结果表示为某浓度(滤光器)下的%抑制作用或者表示为nM或者μM的Ki值。

        %抑制作用的计算

        起始速度根据10分钟连续的由于NS3蛋白酶催化裂解事件而增强的荧光强度读数进行确定。与酶对照数据相比抑制剂斜率的变化给出了在某浓度下的%抑制作用。

        Ki的计算

        对所有的抑制剂进行处理,假设它们都服从竞争性抑制规则。

        根据一系列抑制剂浓度下的抑制值对IC50值进行计算。所述计算值用于以下方程中:

        Ki=IC50/(1+S/Km)

        在以下两个计算程序的辅助下绘图:Grafit和Graphpad

        按上述测定法本发明上述例证的多种化合物都显示了1nM至6.9微摩尔的IC50值和次微摩尔至微摩尔的ED50值。

        药物逃逸抗性形式和速率

        培养在微量滴定板上的复制子可以用于确定抗性发展速率和可以用于选出药物逃逸突变体。进行试验的化合物以约它们ED50浓度加入,每个浓度8个备份。在适当的复制子培养期之后,对上清液或者溶解细胞中的蛋白酶活性进行测定。

        在随后传代培养中进行以下操作。使在试验化合物对未处理受感染细胞(SIC,Starting?Inhibitory?Conentration)显示>50%蛋白酶活性的浓度下产生的病毒传代至新鲜复制子培养物。将取自八个备份中每种内的等分,比方说,15μl上清液转入到没有试验化合物的复制子细胞中(对照)和转入到具有相同浓度试验化合物的细胞中,并且另外,两种浓度分别高五倍。(参见下表)

        当允许复制子的病毒成分在最高无毒浓度(5~40μM)下繁殖(例如,如通过HCV蛋白酶活性而测定的)时,对2~4个平行孔进行收集并展开,以得到用于序列分析和交叉抗性的物料。

        关键:

        允许病毒生长

        抑制病毒产生

        ?????????????????????????????????????????125xSIC

        ??????????????????????????????125xSIC????25xSIC??→

        ??????????????????????????????25xSIC?????5xSIC

        ???????????????????25xSIC?????5xSIC??→??无化合物

        ??????????25xSIC???5xSIC??→??无化合物

        ??????????5xSIC????SIC

        ??????????SIC→????无化合物

        SIC???????无化合物

        →

        Pass?1????Pass?2???Pass?3?????Pass?4?????Pass?5

        评价对药物逃逸突变体活性的另一种方法包括制备产生特异突变的突变体酶,所述特异突变用于如上所示标准Ki确定中。例如WO04/039970描述了能够通向产生155、156和/或168药物逃逸突变体的HCV蛋白酶的结构,所述药物逃逸突变体由BILN-2061和VX-950的选择压力引起。因此,可以将上述结构设计成代替自然型蛋白酶的复制子载体,从而使得在细胞测定法中便于评价给定的化合物是否对给定的药物逃逸突变体具有活性。

        P450代谢作用

        本发明化合物经人类细胞色素系统P450主要同工型的代谢作用合意地在由人类细胞色素P450cDNA(supersomes)Gentest?Corp.WoburnUSA转染的杆状病毒感染的昆虫细胞中进行确定。

        浓度为0.5、5和50μM的试验化合物在过量表达多种细胞色素P450同工型的supersomes存在下双份培养,所述细胞色素P450同工型包括CYP1A2+P450还原酶、CYP2A6+P450还原酶、CYP2C9-Arg144+P450还原酶、CYP2C19+P450还原酶、CYP2D6-Val?374+P450还原酶和CYP3A4+P450还原酶。所述培养包括固定浓度的细胞色素P450(例如,50pmol)并且实施1小时以上。在试验化合物代谢作用中给定同工型的参与通过UV?HPLC层析分析测定母体化合物的消失而进行确定。

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    本文标题:HCVNS-3丝氨酸蛋白酶抑制剂.pdf
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