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    重庆时时彩三码一胆: 噻唑烷酮酰胺、噻唑烷羧酸酰胺、其制备方法及其用途.pdf

    关 键 词:
    噻唑 烷酮酰胺 羧酸 制备 方法 及其 用途
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    摘要
    申请专利号:

    CN200480040231.X

    申请日:

    2004.11.18

    公开号:

    CN1902184A

    公开日:

    2007.01.24

    当前法律状态:

    驳回

    有效性:

    无权

    法律详情: 发明专利申请公布后的驳回IPC(主分类):C07D 277/14公开日:20070124|||实质审查的生效|||公开
    IPC分类号: C07D277/14(2006.01) 主分类号: C07D277/14
    申请人: 田纳西大学研究基金会; 俄亥俄州立大学研究基金会
    发明人: D·D·米勒; V·古杜杜鲁; J·T·多尔顿; E·赫哈
    地址: 美国田纳西州
    优先权: 2003.11.18 US 60/523,079
    专利代理机构: 中国专利代理(香港)有限公司 代理人: 马崇德;梁谋
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN200480040231.X

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2010.08.11|||2007.03.21|||2007.01.24

    法律状态类型:

    发明专利申请公布后的驳回|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    公开了式(I)和(II)的取代噻唑烷酮羧酸酰胺和取代噻唑烷羧酸酰胺,其中各种取代基团如说明书中所定义?;构苏庑┗衔锏闹票阜椒?,含有所述化合物的药物组合物,以及它们的用途,特别是用于治疗或预防癌症。

    权利要求书

    1: 式(I)或式(II)的化合物 其中 X 1 和X 2 每个是任选的,并且每个可以是氧; X 3 和X 4 每个是任选的,并且每个可以是氧或硫; l是1-12的整数; R 1 选自饱和或不饱和环烃、饱和或不饱和N-杂环、饱和或不饱 和O-杂环、饱和或不饱和S-杂环、饱和或不饱和混合杂环、脂肪族 或非脂肪族的直链或支链C1-C30烃、或 或-(CH 2 ) m -Y 1 ,其中m是0-10的整数以及Y 1 是饱和或不饱和环烃、 饱和或不饱和N-杂环、饱和或不饱和O-杂环、饱和或不饱和S-杂环、 或饱和或不饱和混合杂环; R 2 是氢、脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1-C30烃、R 10 -N(Z)- 烃-或R 10 -烃-,其中所述的烃基是脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1- C30烃、饱和或不饱和环烃、饱和或不饱和N-杂环、饱和或不饱和O- 杂环、饱和或不饱和S-杂环、饱和或不饱和混合杂环,或 或-(CH 2 ) n -Y 2 ,其中n是0-10的整数和Y 2 是 饱和或不饱和环烃、饱和或不饱和N-杂环、饱和或不饱和O-杂环、 饱和或不饱和S-杂环或饱和或不饱和混合杂环; R 3 是氢或脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1-C10烃; R 4 是任选的,或者可以是氢、脂肪族或非脂肪族的直链或支链 C1-C10烃、?;?、乙?;蚣谆酋;?; R 5 、R 6 、R 7 、R 8 、R 9 、R 11 、R 12 、R 13 、R 14 和R 15 独立地选自氢、 羟基、脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1-C10烃、烷氧基、芳氧基、 硝基、氰基、氯、氟、溴、碘、卤代烷基、二卤代烷基、三卤代烷基、 氨基、烷基氨基、二烷基氨基、酰胺基、芳氨基、酰氨基、烷基酰氨 基、二烷基酰氨基、芳基酰氨基、芳基、C5-C7环烷基、芳烷基; R 10 是H(Z)N-、H(Z)N-烃-、H(Z)N-烃-N(Z)-烃-、H(Z)N-烃-O-烃 -、烃-O-烃-、烃-N(Z)-烃-、H(Z)N-烃-羰基-烃-、烃-羰基-烃-、H(Z)N- 苯基-、H(Z)N-苯基烷基-、H(Z)N-苯基烷基-N(Z)-烃-、H(Z)N-苯基烷 基-O-烃-、苯基烷基-O-烃-、苯基烷基-N(Z)-烃-、H(Z)N-苯基烷基-羰 基-烃-,或苯基烷基-羰基-烃-,其中每个烃独立地是脂肪族或非脂肪 族的直链或支链C1-C10基团,以及其中每个烷基是C1-C10烷基; 和 Z独立地是氢或叔丁氧羰基。
    2: 权利要求1的化合物,其具有式(I)的结构。
    3: 权利要求2的化合物,其中X 1 和X 2 中的一个或两个是氧。
    4: 权利要求2的化合物,其中X 1 和X 2 都不是氧。
    5: 权利要求2的化合物,其中X 3 和X 4 都不是氧。
    6: 权利要求2的化合物,其中X 3 是氧。
    7: 权利要求6的化合物,其中X 4 是氧。
    8: 权利要求7的化合物,其中R 3 是氢。
    9: 权利要求8的化合物,其中R 2 是C8-C24直链或支链、脂肪 族或非脂肪族烃。
    10: 权利要求8的化合物,其中R 2 是C10-C20直链或支链、脂 肪族或非脂肪族烃。
    11: 权利要求8的化合物,其中R 2 是C14-C18直链或支链、脂 肪族或非脂肪族烃。
    12: 权利要求8的化合物,其中R 1 是苯基、吡啶基、吲哚基、呋 喃基、环烷基、脂肪族或非脂肪族的直链或支链C10-C20烃、或 其中m是0-10的整数。
    13: 权利要求1的化合物,其中所述的化合物选自: 2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺, N-癸基-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺, N-十四烷基-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺, N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺, N-十八烷基-2-(4-氧代-2-联苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺, 2-(2-(1-(二甲氨基)萘-4-基)-4-氧代噻唑烷-3-基)-N-十八烷基乙酰胺, 2-(2-(4-甲氧基苯基)-4-氧代噻唑烷-3-基)-N-十八烷基乙酰胺, 2-(2-(2,6-二氯苯基)-4-氧代噻唑烷-3-基)-N-十八烷基乙酰胺, N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基-1-亚砜-噻唑烷-3-基)乙酰胺, N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基-1-磺?;?噻唑烷-3-基)乙酰胺, N-(3,5-二氟苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺, N-(3,5-二氟苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙烷硫代酰胺, N-(3,5-二(三氟甲基)苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺, N-(3,5-二氯苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺, N-(2,4-二甲氧基苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺, N-(萘-1-基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺, 3-(2-(十八烷基氨基)乙基)-2-苯基噻唑烷-4-酮, N-(2-(2-苯基噻唑烷-3-基)乙基)十八烷-1-胺, 及其盐。
    14: 权利要求1的化合物,其中所述的化合物选自 N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺, 2-(2-(4-甲氧基苯基)-4-氧代噻唑烷-3-基)-N-十八烷基乙酰胺, N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基-1-亚砜-噻唑烷-3-基)乙酰胺, N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基-1-磺?;?噻唑烷-3-基)乙酰胺, 及其盐。
    15: 权利要求1的化合物,其中 R 2 是R 10 -N(Z)-烃-或R 10 -烃-以及 R 10 选自H(Z)N-烃-、H(Z)N-烃-N(Z)-烃-、H(Z)N-烃-羰基-烃-、H(Z)N- 苯基-、H(Z)N-苯基烷基-和H(Z)N-苯基烷基-N(Z)-烃-。
    16: 权利要求1的化合物,其中l是1-8的整数。
    17: 权利要求1的化合物,其具有式(II)的结构。
    18: 权利要求17的化合物,其中X 1 和X 2 中的一个或两个是氧。
    19: 权利要求17的化合物,其中X 1 和X 17 都不是氧。
    20: 权利要求17的化合物,其中X 3 不是氧。
    21: 权利要求17的化合物,其中X 3 是氧。
    22: 权利要求17的化合物,其中R 3 是氢。
    23: 权利要求22的化合物,其中R 2 是C8-C24直链或支链、脂 肪族或非脂肪族烃。
    24: 权利要求22的化合物,其中R 2 是C10-C20直链或支链、脂 肪族或非脂肪族烃。
    25: 权利要求22的化合物,其中R 2 是C14-C18直链或支链、脂 肪族或非脂肪族烃。
    26: 权利要求22的化合物,其中R 1 是苯基、吡啶基、吲哚基、 呋喃基、环烷基、脂肪族或非脂肪族的直链或支链C10-C20烃、或 其中m是0-10的整数。
    27: 权利要求17的化合物,其中所述的化合物选自: (4R)-2-(4-甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-2-(4-乙氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, N-十八烷基-2-苯基噻唑-4-羧酰胺, (4R)-2-(3,5-二氟苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-2-(4-氰基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-N-十八烷基-N-甲磺?;?2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-N-十八烷基-N-乙?;?2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-N-庚基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-N-十八烷基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺, (4S)-N-十八烷基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-N-十四烷基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-N-十八烷基-2-联苯基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-2-十二烷基-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-N-十八烷基-2-(吡啶-3-基)噻唑烷-4-羧酰胺, 2-(呋喃-3-基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-N-十九烷基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-2-(4-羟基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, 2-(3-羟基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-2-(2,4,6-三甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, 2-(3,4-二甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, 2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, 2-(4-乙酰胺基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-2-(4-氟苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-2-(2,6-二氯苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-2-(4-溴苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-N-十八烷基-2-对甲苯基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-2-环己基-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, 2-(4-硝基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-2-(4-(二甲氨基)苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-2-(1H-吲哚-3-基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-2-苄基-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-2-(3-溴-4-氟苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-N,N-二辛基噻唑烷-4-羧酰胺, 及其盐。
    28: 权利要求17的化合物,其中所述的化合物选自 (4R)-N-十八烷基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-2-(4-(二甲氨基)苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, 2-(3-羟基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, 2-(3,4-二甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, 2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, 2-(4-乙酰胺基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, (4R)-2-(4-氟苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺, 及其盐。
    29: 权利要求1的化合物,其中所述的化合物以外消旋混合物的 形式存在。
    30: 权利要求1的化合物,其中所述的化合物以基本上纯的立体 异构体的形式存在。
    31: 权利要求1的化合物,其中所述的化合物以药学上可接受的 盐的形式存在。
    32: 药物组合物,包含:药学上可接受的载体和权利要求1的化 合物。
    33: 权利要求32的药物组合物,其中所述的化合物具有式(I)的结 构。
    34: 权利要求32的药物组合物,其中所述的化合物具有式(II)的 结构。
    35: 权利要求34的药物组合物,进一步包含具有式(I)的化合物。
    36: 破坏癌细胞的方法,包括:提供权利要求1的化合物,将所 述的化合物与癌细胞在有效的条件下接触以破坏所接触的癌细胞。
    37: 权利要求36的方法,其中所述的接触发生在体外。
    38: 权利要求36的方法,其中所述的接触发生在体内。
    39: 权利要求36的方法,其中所述的提供是提供式(I)的化合物。
    40: 权利要求36的方法,其中所述的提供是提供式(II)的化合物。
    41: 权利要求36的方法,其中所述的癌细胞是前列腺癌细胞、乳 腺癌细胞或卵巢癌细胞。
    42: 治疗或预防癌症的方法,包括:提供权利要求1的化合物, 并以有效方式给予患者一定量的该化合物以治疗或预防癌症。
    43: 权利要求42的方法,其中所述的提供是提供式(I)的化合物。
    44: 权利要求42的方法,其中所述的提供是提供式(II)的化合物。
    45: 权利要求42的方法,其中所述的癌症是前列腺癌、乳腺癌或 卵巢癌。
    46: 权利要求42的方法,其中所述患者的特征为存在癌症前期症 状,以及所述的给药可以有效地预防癌症前期病症发展成癌症。
    47: 权利要求42的方法,其中所述患者的特征为存在癌症,以及 所述的给药可以有效地使癌症消退或者可有效地抑制癌症的生长。
    48: 权利要求42的方法,其中所述的给药全身性地进行。
    49: 权利要求42的方法,其中所述的给药直接给予到癌细胞或癌 症前期细胞存在的部位上。
    50: 权利要求42的方法,其中所述的给药通过口服、局部、经皮、 胃肠外、皮下、静脉内、肌内、腹膜内、鼻内滴注、腔内或膀胱内滴 注、眼内、动脉内、病损内、或应用于粘膜如鼻、咽喉和支气管的粘 膜上给药。
    51: 权利要求42的方法,其中有效量包含约0.01-约100mg/kg体 重的剂量率。
    52: 权利要求42的方法,其中所述的给药周期性地重复。
    53: 权利要求42的方法,其中所述的给药与另一种癌症疗法结 合。
    54: 制备权利要求1的式(I)化合物的方法,包括:式(III)的中间 体 与(i)式(HNR 2 R 3 )的伯胺或仲胺,或与(ii)氨在含R 2 -H的化合物存在 下,在有效生成式(I)化合物的条件下进行反应。
    55: 权利要求54的方法,其中R 2 是R 10 -N(Z)-烃-或R 10 -烃-。
    56: 权利要求54的方法,进一步包括:将该化合物彻底还原以完 全还原X 3 和X 4 。
    57: 权利要求54的方法,进一步包括:将该化合物用H 2 O 2 和/或 KMnO 4 氧化,得到环亚砜,其中X 1 是氧,或砜基团,其中X 1 和X 2 都是氧。
    58: 权利要求54的方法,进一步包括: 所述的化合物与?;狒蚣谆酋B确从?,以形成选自?;?、乙?;?或甲磺?;腞 4 基团。
    59: 制备权利要求1的式(II)化合物的方法,包括:式(IV)的中间 体 与式(HNR 2 R 3 )的伯胺或仲胺在有效生成式(II)化合物的条件下反 应。
    60: 权利要求59的方法,其中R 2 是R 10 -N(Z)-烃-或R 10 -烃-。
    61: 权利要求59的方法,进一步包括:将该化合物彻底还原以完 全还原X 3 和X 4 。
    62: 权利要求59的方法,进一步包括:将该化合物用H 2 O 2 和/或 KMnO 4 氧化,得到环亚砜,其中X 1 是氧,或砜基团,其中X 1 和X 2 都是氧。
    63: 权利要求59的方法,进一步包括:所述的化合物与?;狒?或甲磺酰氯反应,以形成选自?;?、乙?;蚣谆酋;腞 4 基团。

    说明书


    噻唑烷酮酰胺、噻唑烷羧酸酰胺、 其制备方法及其用途

        本发明要求2003年11月18日提交的美国临时专利申请序列号60/523,079的优先权,其在此整个引入作为参考。
        本申请至少部分在美国国防部的基金支助下完成的,该基金为DAMD?17-01-1-0830。在本发明中美国政府可保留某些权利。

        ??????????????????????发明领域
        本发明涉及新的噻唑烷酮酰胺,新的噻唑烷羧酸酰胺,这些化合物的制备方法,以及它们的用途,特别是用于治疗各种癌症,包括,但不局限于前列腺癌、乳腺癌和卵巢癌。

        ??????????????????????发明背景
        在美国的男性当中,前列腺癌占所有新诊断恶性肿瘤的33%(American?Cancer?Society:Cancer?Facts?and?Figures(2003))。根据美国癌症学会,在2004年大概有230,110名男性被诊断为前列腺癌,并且有29,900名男性死于前列腺癌(American?Cancer?Society:CancerFacts?and?Figures(2004))。前列腺癌的发病率在世界范围内是不同的,在美国、加拿大和斯堪的纳维亚最高,在中国和亚洲的其它国家最低。(Quinn?and?Babb,″Patterns?and?Trends?in?Prostate?CancerIncidence,Survival,Prevalence?and?Mortality.Part:InternationalComparisons,″BJU?Int.90:162-173(2002);Gronberg,″ProstateCancer?Epidemiology,″Lancet?361:859-864(2003))。这些差异是由遗传敏感性、于对未知的外部危险因素的暴露、卫生保健和癌症登记差异或这些因素的综合所引起的。
        前列腺癌是由多种病灶引起的,通常注意到癌性腺体含有多处独立损伤,表明所述疾病的异质性(Foster等,″Cellular?and?MolecularPathology?of?Prostate?Cancer?Precursors,″Scand.J.Urol.Nephrol.205:19-43(2000))。造成前列腺病理性生长的决定因素目前还了解不多,虽然已经涉及甾体雄激素和肽生长因子(Agus等,″ProstateCancer?Cell?Cycle?Regulators:Response?to?Androgen?Withdrawal?andDevelopmentof?Androgen?Independence,″J.Natl.Cancer.fast.91:1869-1876(1999);Djakiew,″Dysregulated?Expression?of?GrowthFactors?and?Their?Receptors?in?the?Development?of?Prostate?Cancer,″Prostate?42:150-160(2000))。只要癌症限制于前列腺,它就可以成功地通过手术或放疗进行控制,但是在转移性疾病中,除雄激素切除外,很少有有效的选择(Frydenberg等,″Prostate?Cancer?Diagnosisand?Management,″Lancet?349:1681-1687(1997)),在淋巴结的情况中,治疗的主要依据涉及或播散性位置。一旦肿瘤细胞变成激素难治疗的情况,标准细胞毒性试剂在减缓疾病进展中不怎么有效,虽然它们确实也能够提供一定程度的减轻。目前的化学治疗方案,典型地两种或多种药剂,仅在20-30%的范围内提供应答率(Beedassy等,″Chemotherapy?in?Advanced?Prostate?Cancer,″Sem.Oncol.26:428-438(1999);Raghavan等,″Evolving?Strategies?of?CytotoxicChemotherapy?for?Advanced?Prostate?Cancer,″Eur.J.Cancer?33:566-574(1997))。
        前列腺癌的一种有前途的药物开发策略包括识别和测试药剂,该药剂阻碍干涉癌细胞信号途径中的生长因子以及其它分子。G-蛋白偶联受体(″GPCRs″)是一族膜结合的蛋白,该蛋白涉及起源于结合溶血磷脂的前列腺癌细胞的增殖和存活(″LPLs″)(Raj等,″Guanosine?Phosphate?Binding?Protein?Coupled?Receptors?in?ProstateCancer:A?Review,″J.Urol.167:1458-1463(2002);Kue等,″EssentialRole?for?G?Proteins?in?Prostate?Cancer?Cell?Growth?and?Signaling,″J.Urol.164:2162-2167(2000);Guo等,″Mitogenic?Signaling?inAndrogen?Sensitive?and?Insensitive?Prostate?Cancer?Cell?Lines,″J.Urol.163:1027-1032(2000);Barki-Harrington等,″BradykininInduced?Mitogenesis?of?Androgen?Independent?Prostate?CancerCells,″J.Urol.166:2121-2125(2001))。在调节体内生长和新陈代谢中,取决于G蛋白的途径的重要性通过观察结果得到证实,该观察结果是:在小鼠中,雄激素独立的前列腺癌细胞的生长通过用百日咳毒素、Gi/o蛋白抑制剂治疗而减弱,(Bex等,″Influence?of?PertussisToxin?on?Local?Progression?and?Metastasis?After?OrthotopicImplantation?of?the?Human?Prostate?Cancer?Cell?Line?PC3?in?NudeMice,″Prostate?Cancer?Prostatic?Dis.2:36-40(1999))。溶血磷脂酸(″LPA″)和1-磷酸-鞘氨醇(″S1P″)是脂质调节剂,其通过已知刺激GPCR-信号的膜磷脂的调节性破坏产生。
        LPL与由Edg基因家族编码的GPCRs结合,共同称为LPL受体,以发挥不同的生物学作用。LPA刺激磷酸脂酶D活性和PC-3前列腺细胞增殖(Qi等,″Lysophosphatidic?Acid?StimulatesPhospholipase?D?Activity?and?Cell?Proliferation?in?PC-3?HumanProstate?Cancer?Cells,″J.Cell.Physiol.174:261-272(1998))。此外,之前的研究已经表明,LPA在前列腺癌细胞中是促有丝分裂的,PC-3和DU-145表达LPA1、LPA2和LPA3受体(Daaka,″MitogenicAction?of?LPA?in?Prostate,″Biochim.Biophys.Acta.1582:265-269(2002))。晚期前列腺癌表达LPL受体并取决于磷脂酰肌醇3-激酶(″PI3K″)后者为生长和进展发非雄激素依赖性信号(Kue和Daaka,″Essential?Role?for?G?Proteins?in?Prostate?Cancer?Cell?Growth?andSignaling,″J.Urol.164:2162-2167(2000))。因此,这些途径被广泛看作最有希望的治疗癌症的新方法之一(Vivanco等,″ThePhosphatidylinositol?3-Kinase?AKT?Pathway?in?Human?Cancer,″Nat.Rev.Cancer?2:489-501(2002))并且提供一种晚期的、雄激素难治疗的前列腺癌的尤其新的疗法。虽然这种方法是有前途的,但是目前在临床上还没有治疗方法以选择性地开发或抑制LPA或PI3K信号。
        本发明是要克服现有技术中存在的这些以及其它缺陷。

        ?????????????????????????发明概述
        本发明的第一方面涉及式(I)和式(II)的化合物

        其中

        X1和X2每个是任选的,并且每个可以是氧;

        X3和X4每个是任选的,并且每个可以是氧或硫;

        l是1-12的整数;

        R1选自饱和或不饱和环烃、饱和或不饱和N-杂环、饱和或不饱和O-杂环、饱和或不饱和S-杂环、饱和或不饱和混合杂环、脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1-C30烃、或或-(CH2)m-Y1其中m是0-10的整数以及Y1是饱和或不饱和环烃、饱和或不饱和N-杂环、饱和或不饱和O-杂环、饱和或不饱和S-杂环或饱和或不饱和混合杂环;

        R2是氢、脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1-C30烃、R10-N(Z)-烃-或R10-烃-其中所述的烃基是脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1-C30烃、饱和或不饱和环烃、饱和或不饱和N-杂环、饱和或不饱和O-杂环、饱和或不饱和S-杂环、饱和或不饱和混合杂环,或或-(CH2)n-Y2其中n是0-10的整数和Y2是饱和或不饱和环烃、饱和或不饱和N-杂环、饱和或不饱和O-杂环、饱和或不饱和S-杂环或饱和或不饱和混合杂环;

        R3是氢或脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1-C10烃;

        R4是任选的,或者可以是氢、脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1-C10烃、?;?、乙?;蚣谆酋;?;

        R5、R6、R7、R8、R9、R11、R12、R13、R14和R15独立地选自氢、羟基、脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1-C10烃、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、氯、氟、溴、碘、卤代烷基、二卤代烷基、三卤代烷基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、?;坊?、芳氨基、酰氨基、烷基酰氨基、二烷基酰氨基、芳基酰氨基、芳基、C5-C7环烷基、芳烷基;

        R10是H(Z)N-、H(Z)N-烃-、H(Z)N-烃-N(Z)-烃-、H(Z)N-烃-O-烃-、烃-O-烃-、烃-N(Z)-烃-、H(Z)N-烃-羰基-烃-、烃-羰基-烃-、H(Z)N-苯基-、H(Z)N-苯基烷基-、H(Z)N-苯基烷基-N(Z)-烃-、H(Z)N-苯基烷基-O-烃-、苯基烷基-O-烃-、苯基烷基-N(Z)-烃-、H(Z)N-苯基烷基-羰基-烃-或苯基烷基-羰基-烃-,其中每个烃独立地是脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1-C10基团,以及其中每个烷基是C1-C10烷基;和

        Z独立地是氢或叔丁氧羰基。
        本发明的第二方面涉及一种包括药学上可接受的载体和本发明第一方面的化合物的药物组合物。
        本发明的第三方面涉及一种破坏癌细胞的方法,该方法包括步骤:提供本发明第一方面的化合物并在有效破坏该接触的癌细胞的条件下将该化合物与癌细胞接触。
        本发明的第四方面涉及一种治疗或预防癌症的方法,该方法包括步骤:提供本发明第一方面的化合物并以治疗或预防癌症的有效方式给予患者一定量的该化合物。
        本发明的第五方面涉及一种制备式(I)化合物的方法,包括式(III)的中间体,

        其中l、R1、X3和X4如上所定义,与(i)式(HNR2R3)的合适伯胺或仲胺反应,其中R2和R3如上所定义,或与(ii)氨在含R2-H化合物存在下,在有效条件下进行反应以制备式(I)的化合物。
        本发明的第六方面涉及一种制备式(II)化合物的方法,包括步骤:式(IV)的中间体,

        其中R1和X3如上所定义,与式(HNR2R3)的伯胺或仲胺其中R2和R3如上所定义,在有效条件下反应以制备式(II)的化合物。
        本发明的第七方面涉及式(III)和式(IV)的中间体化合物。
        与之前已知的用于抑制前列腺癌细胞生长的癌症治疗法相比,本发明的癌症治疗法得到显著改善。在之前的一篇报告中已经表明,在5种前列腺癌细胞系中,通过用丝氨酸酰胺代替LPA中的甘油骨架,可以获得细胞毒性化合物(Gududuru等,″Synthesis?and?BiologicalEvaluation?of?Novel?Cytotoxic?Phospholipids?for?Prostate?Cancer,″Bioorg.Med.Chem.Lett.14:4919-4923(2004),其在此整个引入作为参考)。Gududuru等人(上文所引述)报道的最有效化合物是非选择性的并且有效力杀死前列腺癌和对照细胞系。本发明提供的化合物具有类似的或者甚至改善的效力,但是更重要地,本发明提供的化合物具有改善的选择性,特别是对于前列腺癌细胞系。本发明的化合物被证明可以有效地抗前列腺癌细胞和卵巢癌细胞。

        ???????????????????附图的简要说明
        图1说明合成噻唑烷羧酸酰胺的一种方法(方案1)。L-半胱氨酸与各种醛在所述条件下反应制得噻唑烷羧酸中间体(2a-v)(Seki等,″A?Novel?Synthesis?of(+)-Biotin?fromL-Cysteine,″J.Org.Chem.67:5527-5536(2002),其在此整个引入作为参考)。所述的中间体羧酸与胺反应以制备相应的酰胺(3-27)。
        图2说明合成噻唑烷羧酸酰胺的N-?;蚇-磺?;苌锏囊恢址椒?方案2)。N-?;蚇-磺?;苌?化合物28和29)由化合物5通过标准方法合成。
        图3说明合成噻唑羧酸酰胺的一种方法(方案3)。按照所报道的方法将噻唑烷羧酸甲酯转化为噻唑羧酸甲酯(Badr等,″Synthesis?ofOxazolidines,Thiazolidines,and?5,6,7,8-Tetrahydro-1H,3H-pyrrolo[1,2-c]Oxazole(or?Thiazole)-1,3-diones?from(3-Hydroxy-or?P-Mercapto-a-amino?Acid?Esters,″Bull.Chem.Soc.Jpn.54:1844-1847(1981),其在此整个引入作为参考),然后转化为所述的烷基酰胺。
        图4A-B说明用噻唑烷化合物4(图4A)和5(图4B)处理24-108小时后从2×106LNCaP细胞中提取的总DNA的琼脂糖凝胶电泳。结果表示对DNA断裂的治疗作用,表示细胞死亡的进展。在图4A中,化合物4的剂量和曝露时间如下所示:带1,100bp?DNA标记;带2,5μM?36h;带3,3μM?24h;带4,3μM?24h;带5,3μM48h;带6,3μM?72h;带7,3μM?108h;以及带8,50μM?36h。在图4B中,化合物5的剂量和曝露时间如下所示:带1,100bp?DNA标记;带2,5μM?24h;带3,5μM?48h;带4,5μM?72h;带5,5μM?96h;带6,3μM?96h;带7,8μM?48h;以及带8,8μM?72h。
        图5A-B表明噻唑烷化合物的AKT抑制作用,通过抑制AKT磷酸化作用测得。图5A表示使用抗磷酸基AKT(S473)或抗AKT抗体得到的免疫印迹结果。该免疫印迹通过增强化学发光显象,与通过类似治疗的总AKT相比的磷酸基AKT相对水平的变化用密度分析确定。图5B图解说明使用抗AKT的AKT的免疫检测,图5A表示使用抗磷酸基AKT进行的AKT的免疫检测。
        图6说明合成4-噻唑烷酮羧酸类的一种方法(方案4),通过与伯胺或仲胺(HNR2R3)反应将它们转化为相应的酰胺。如此反应方案中所示,不同的起始物质(其中l不同)可以用于制备各种本发明的化合物。
        图7说明合成4-噻唑烷酮羧酸类的第二种方法(方案5),通过与R2-CNO反应将它们转化为相应的酰胺。
        图8说明对本发明的噻唑烷酮化合物的核心结构进行修饰(方案6)的三种方法,以得到与环连接的砜或亚砜基团(分别是步骤a和b),以及羰基的完全还原(步骤c)。
        图9说明合成噻唑烷酮酰胺的多胺共轭物的一种方法。

        ?????????????????????发明的详细说明
        本发明的一个方面是下式(I)和(II)的化合物

        其中

        X1和X2每个是任选的,并且每个可以是氧;

        X3和X4每个是任选的,并且每个可以是氧或硫;

        l是1-12的整数;

        R1选自饱和或不饱和环烃、饱和或不饱和N-杂环、饱和或不饱和O-杂环、饱和或不饱和S-杂环、饱和或不饱和混合杂环、脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1-C30烃、或或-(CH2)m-Y1其中m是0-10的整数以及Y1是饱和或不饱和环烃、饱和或不饱和N-杂环、饱和或不饱和O-杂环、饱和或不饱和S-杂环或饱和或不饱和混合杂环;

        R2是氢、脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1-C30烃、R10-N(Z)-烃-或R10-烃-其中所述的烃基是脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1-C30烃、饱和或不饱和环烃、饱和或不饱和N-杂环、饱和或不饱和O-杂环、饱和或不饱和S-杂环、饱和或不饱和混合杂环,或或-(CH2)n-Y2其中n是0-10的整数和Y2是饱和或不饱和环烃、饱和或不饱和N-杂环、饱和或不饱和O-杂环、饱和或不饱和S-杂环或饱和或不饱和混合杂环;

        R3是氢或脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1-C10烃;

        R4是任选的,或者可以是氢、脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1-C10烃、?;?、乙?;蚣谆酋;?;

        R5、R6、R7、R8、R9、R11、R12、R13、R14和R15独立地选自氢、羟基、脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1-C10烃、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、氯、氟、溴、碘、卤代烷基、二卤代烷基、三卤代烷基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、酰胺基、芳氨基、酰氨基、烷基酰氨基、二烷基酰氨基、芳基酰氨基、芳基、C5-C7环烷基、芳烷基;

        R10是H(Z)N-、H(Z)N-烃-、H(Z)N-烃-N(Z)-烃-、H(Z)N-烃-O-烃-、烃-O-烃-、烃-N(Z)-烃-、H(Z)N-烃-羰基-烃-、烃-羰基-烃-、H(Z)N-苯基-、H(Z)N-苯基烷基-、H(Z)N-苯基烷基-N(Z)-烃-、H(Z)N-苯基烷基-O-烃-、苯基烷基-O-烃-、苯基烷基-N(Z)-烃-、H(Z)N-苯基烷基-羰基-烃-或苯基烷基-羰基-烃-,其中每个烃独立地是脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1-C10基团,以及其中每个烷基是C1-C10烷基;和

        Z独立地是氢或叔丁氧羰基。
        在此所使用的″脂肪族或非脂肪族的直链或支链烃″是指含有1个至规定上限的碳原子的亚烷基,以及含有两个至规定上限的碳原子的链烯基和炔基,不管所述的碳原子位于单一链上还是支链上。除非另有说明,烃可以包括至高达约30个碳原子,或至高达约20个碳原子,或至高达约10个碳原子。
        除非另有说明,在此所使用的术语″烷基″可以是含有至高达约30个碳原子的任何直链或支链烷基。所述的烷基可以是单独的部分或者它可以是更大基团中的一个部分,所述的更大基团例如是烷氧基、芳烷基、烷基氨基等。
        在此所使用的″饱和或不饱和环烃″可以是任何这样的环烃,包括,但不局限于苯基、联苯基、三苯基、萘基、环烷基、环烯基、环二烯基等;″饱和或不饱和N-杂环″可以是任何这样的含N杂环,包括,但不局限于氮杂-和二氮杂-环烷基如氮丙啶基、氮杂环丁烷基、二氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基和azocanyl、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、四嗪基、吡咯嗪基(pyrrolizinyl)、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、吲唑基、喹嗪基、噌啉基、quinalolinyl、2,3-二氮杂萘基、萘啶基、喹喔啉基等;″饱和或不饱和O-杂环″可以是任何这样的含O杂环,包括,但不局限于,环氧乙烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、二烷基、呋喃基、吡喃、苯并呋喃基等;″饱和或不饱和S-杂环″可以是任何这样的含S杂环,包括,但不局限于,thiranyl、硫杂环丁烷基、四氢噻吩基、二硫代环戊基、四氢噻喃基、噻吩基、噻庚英基、硫茚基等;″饱和或不饱和混合杂环″可以是含两个或多个S-、N-或O-杂原子的任何杂环,包括,但不局限于氧硫戊环基、吗啉基、噻烷基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、唑基、异唑基、oxadiaziolyl等。
        优选的R1基团包括苄基、呋喃基、吲哚基、吡啶基、苯基或取代苯基(被如上所定义的R5-R9取代)。
        优选的R2基团包括脂肪族或非脂肪族的直链或支链C1-C30烃、苯基、苯基烷基、被如上所定义的R11-R15基团取代的苯基和取代的苯基烷基。优选的脂肪族或非脂肪族的直链或支链烃是C8-C24烃,包括C10-C20烷基类,更优选C14-C18烷基类。
        优选的R3基团包括氢和C1-C10烷基类。
        优选的R4基团包括氢、?;?、乙?;图谆酋;?。
        优选的R10基团是多胺。
        整数l优选是1-10,更优选1-8、1-6或1-4。整数m优选是0-8,0-6、0-4或0-2。整数n优选是0-8,0-6、0-4或0-2。
        式(I)的示范性化合物包括,但不限于:2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物65)、N-癸基-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物66)、N-十四烷基-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物67)、N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物68)、N-十八烷基-2-(4-氧代-2-联苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物69)、2-(2-(1-(二甲氨基)萘-4-基)-4-氧代噻唑烷-3-基)-N-十八烷基乙酰胺(化合物70)、2-(2-(4-甲氧基苯基)-4-氧代噻唑烷-3-基)-N-十八烷基乙酰胺(化合物71)、2-(2-(2,6-二氯苯基)-4-氧代噻唑烷-3-基)-N-十八烷基乙酰胺(化合物72)、N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基-1-亚砜-噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物80)、N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基-1-磺?;?噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物81)、N-(3,5-二氟苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物73)、N-(3,5-二氟苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙烷硫代酰胺、N-(3,5-二(三氟甲基)苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物74)、N-(3,5-二氯苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物75)、N-(2,4-二甲氧基苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物76)、N-(萘-1-基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物77)、3-(2-(十八烷基氨基)乙基)-2-苯基噻唑烷-4-酮(化合物79)、N-(2-(2-苯基噻唑烷-3-基)乙基)十八烷-1-胺、及其盐。
        式(I)的优选化合物包括化合物68、71、80和81。
        式(II)的示范性化合物包括,但不限于:(4R)-2-(4-甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物15);(4R)-2-(4-乙氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺;N-十八烷基-2-苯基噻唑-4-羧酰胺(化合物34);(4R)-2-(3,5-二氟苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物23);(4R)-2-(4-氰基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物22);(4R)-N-十八烷基-N-甲磺?;?2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物29);(4R)-N-十八烷基-N-乙?;?2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物28);(4R)-N-庚基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物3);(4R)-N-十八烷基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物5,R-异构体);(4S)-N-十八烷基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物5,S-异构体);(4R)-N-十四烷基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺盐酸盐(化合物4);(4R)-N-十八烷基-2-联苯基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物27);(4R)-2-十二烷基-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物7);(4R)-N-十八烷基-2-(吡啶-3-基)噻唑烷-4-羧酰胺(化合物11);2-(呋喃-3-基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物12);(4R)-N-十九烷基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物6);(4R)-2-(4-羟基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺;2-(3-羟基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物14);(4R)-2-(2,4,6-三甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺;2-(3,4-二甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物16);2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物17);2-(4-乙酰胺基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物18);(4R)-2-(4-氟苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物19);(4R)-2-(2,6-二氯苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物24);(4R)-2-(4-溴苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物20);(4R)-N-十八烷基-2-对甲苯基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物26);(4R)-2-环己基-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物8);2-(4-硝基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物21);(4R)-2-(4-(二甲氨基)苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物13);(4R)-2-(1H-吲哚-3-基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物10);(4R)-2-苄基-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物9);(4R)-2-(3-溴-4-氟苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物25);(4R)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-N,N-二辛基噻唑烷-4-羧酰胺;及其盐。
        式(II)的优选化合物包括化合物5(R-异构体)、13、14、16、17、18、19、25和26。
        本发明的化合物和它们的中间体可以使用市场上可买到的或很容易合成的反应物进行合成。
        例如,式(I)的化合物可以根据图6中所示的方案4进行合成。根据一种方法,式(III)的中间体酸

        (其中l、R1、X3和X4如上所定义)与合适的胺在EDC/HOBt存在下在标准条件下反应。所述的中间体酸可以如下制得:首先将巯基乙酸、甘氨酸甲酯和芳醛在一锅反应中缩合,接着对该酯进行碱性水解(Holmes等,″Strategies?for?Combinatorial?Organic?Synthesis:Solution?and?Polymer-Supported?Synthesis?of?4-Thiazolidinones?and?4-Metathiazanones?Derived?from?Amino?Acids,″J.Org.Chem.60:7328-7333(1995),其在此整个引入作为参考)。通过用含更长碳骨架的类似物代替甘氨酸甲酯,有可能制得式(III)的化合物,并且最终制得l大于1的式(I)化合物(即,含有比亚甲基更长的亚烷基)。根据第二种方法,式(I)的噻唑烷酮酰胺也可以通过简单直接的方法进行制备(Schuemacher等,″Condensation?Between?Isocyanates?andCarboxylic?Acids?in?the?Presence?of?4-Dimethylaminopyridine(DMAP),a?Mild?and?Efficient?Synthesis?of?Amides,″Synthesis?22:243-246(2001),其在此整个引入作为参考),其包括所述的中间体酸与所需的异氰酸酯在催化量的DMAP存在下进行反应(图7)(方案5)。
        所述的噻唑烷酮化合物的其它改变例如可以通过如下实现:在回流条件下使用BH3·THF进行完全还原以除去羰基或亚砜基团X3和X4(图8)(方案6c),以及如方案6a和6b所示,使用H2O2和KMnO4氧化化合物分别得到亚砜或砜。
        此外,例如,式(II)的化合物可以通过式(IV)的中间体酸

        其中化合物(IV)可以是R-或S-立体异构体以及R1和X3如上所定义,与合适的胺在EDC/HOBt存在下在标准条件下进行反应而制备。该中间体酸可以通过L-半胱氨酸与所需的醛在所报道的条件下反应而制备。(Seki等,″A?Novel?Synthesis?of(+)-Biotin?from?L-Cysteine,″J.Org.Chem.67:5527-5536(2002),其在此整个引入作为参考)。
        还可以将本发明的化合物进行修饰以含有聚合共轭物。合适的聚合共轭物包括,但不限于,聚(烷基)胺、聚(烷氧基)胺、聚胺等。同样公知的是,含聚胺的化合物表现出许多生物学活性并且已经用作化疗剂。示范性的共轭物包括含天然存在的聚胺的那些如腐胺、亚精胺、精胺以及合成聚胺。
        根据一种方法,本发明的化合物可以通过下面方法与聚胺形成共轭:所述的中间体酸或其硝基苯基衍生物与聚胺NH2-R2反应,其中R2是R10-N(Z)-烃-或R10-烃-以及R10和Z如上所定义,示范性的合成方案在图9中给出。
        所述的化合物还可以是盐的形式,优选药学上可接受的盐。术语″药学上可接受的盐″是指保留生物有效性以及游离碱或游离酸的性质的那些盐,其在生物学上是受欢迎的。所述盐是与无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等以及与有机酸如乙酸、丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、肉铁质酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、N-乙酰半胱氨酸等形成的。其它盐是本领域熟练技术人员公知的,并且可以很容易地用于本发明。
        本发明的化合物可以以外消旋混合物的形式存在,基本上含有当量数的立体异构体。在另一种实施方案中,本发明的化合物可以使用已知方法制备或分离,获得一种立体异构体(其基本上不含相应的立体异构体)(即,基本上纯的)。术语“基本上纯的”是指立体异构体至少约95%纯度,更优选至少约98%纯度,最优选至少约99%纯度。
        本发明的另一方面涉及含有一种或多种上述确定的本发明化合物的药物组合物。典型地,本发明的药物组合物将包括本发明的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。术语″药学上可接受的载体″是指任何合适的佐剂、载体、赋形剂或稳定剂,并且可以是固体或液体形式例如,片剂、胶囊、粉剂、溶液、悬浮液或乳液。
        典型地,所述的药物组合物含有约0.01-99%,优选约20-75%的活性化合物以及含有佐剂、载体和/或赋形剂。例如,应用于粘膜可以通过气溶胶喷雾剂实现,所述的气溶胶喷雾剂以喷雾或干粉形式中含有小颗粒的本发明化合物。
        固体单位剂型可以是常规类型。所述的固体形式可以是胶囊等,例如含有本发明的化合物和载体(例如,润滑剂和惰性填料(例如,乳糖、蔗糖或玉米淀粉))的常规明胶型。在另一种实施方案中,这些化合物是用常规片剂基质如乳糖、蔗糖或玉米淀粉与粘合剂如阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶、崩解剂如玉米淀粉、马铃薯淀粉或褐藻酸以及润滑剂如硬脂酸或硬脂酸镁一起制得的片剂。
        所述的片剂、胶囊等还可以含有粘合剂如黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶;赋形剂如磷酸氢钙;崩解剂如玉米淀粉、马铃薯淀粉、褐藻酸;润滑剂如硬脂酸镁;以及甜味剂如蔗糖、乳糖或糖精。当剂量单位形式是胶囊时,除上述类型的材料外,它可以含有液体载体如脂肪油。
        各种其它物质可以以包衣的形式存在或者用于修饰该剂量单位的物理形式。例如,片剂可以用虫胶、糖或虫胶和糖包衣。除活性组分外,糖浆可以含有作为甜味剂的蔗糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、染料以及调味剂如樱桃或甜橙调味剂。
        对于口服治疗给药,这些活性化合物可以与赋形剂混合在一起,并且以片剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆等形式使用。这些组合物和制剂应含有至少0.1%的活性化合物。当然,在这些组合物中所述化合物的百分比可以改变并且可以方便地在约2%-约60%单位位剂量重量之间。这些治疗有用的组合物中活性化合物的数量使得可以获得合适的剂量。这样制备本发明的优选组合物,以便使口服剂量单位含有约1mg至800mg的活性化合物。
        本发明的活性化合物可以口服给药,例如,与惰性稀释剂或与可同化食用载体一起,或者它们可以装入到硬壳胶囊或软壳胶囊中,或者它们可以压缩成片剂,或者它们可以直接与食物混合。
        适合于注射用途的药物形式包括无菌水溶液或分散液以及无菌粉剂,所述的无菌粉剂在临用时再配制成无菌可注射溶液或分散液。在所有情况中,该形式应该是无菌的并且其流动程度应该便于很容易进行注射。它在制备和贮存条件下应该是稳定的,并且应该在抗微生物如细菌和真菌污染的条件下贮存。所述载体可以是溶剂或分散介质,例如,含有水、乙醇、多元醇(例如,甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、它们的合适混合物以及植物油。
        本发明的化合物或药物组合物还可以以可注射剂型给药,这些物质在生理学可接受的稀释剂中与药物佐剂、载体或赋形剂一起以溶液或悬浮液的形式给药。这些佐剂、载体和/或赋形剂包括,但不局限于,无菌液体,例如水和油类,有或者没有加入表面活性剂以及其它药学上和生理学上可接受的组分。说明性的油类是石油、动物油、植物油或人造油,例如,花生油、豆油或矿物油。通常,水、盐水、含水葡萄糖和相关糖的溶液以及二醇如丙二醇或聚乙二醇是优选的液体载体,特别是对于可注射溶液来说。
        这些活性化合物也可以通过胃肠外给药。这些活性化合物的溶液或悬浮液可以在水中与表面活性剂如羟丙基纤维素合适地混合来制备。分散液还可以在甘油、液体聚乙二醇及其在油类中的混合物中制备。说明性的油类是石油、动物油、植物油或人造油,例如,花生油、豆油或矿物油。通常,水、盐水、含水葡萄糖和相关糖的溶液以及二醇如丙二醇或聚乙二醇是优选的液体载体,特别是对于可注射溶液来说。在常规储存和使用条件下,这些制剂含有防腐剂以避免微生物的生长。
        当以气雾剂的形式使用时,可以将在溶液或悬浮液中的本发明化合物与合适的推进剂一起包装在加压喷雾剂容器中,所述的推进剂例如是烃推进剂如含常规佐剂的丙烷、丁烷或异丁烷。本发明的化合物还可以以常压形式给药,如在喷雾器或雾化器中。
        本发明的化合物特别是用于治疗或预防各种形式的癌症,特别是前列腺癌、乳腺癌和卵巢癌。有理由相信,当给予患者本发明的化合物或组合物时,其同样可以治疗或预防其它形式的癌症。本发明的优选化合物选择性地破坏癌细胞,使癌细胞而不是正常细胞消除。显著地,对正常细胞的损害降到最低,因为癌细胞在非常低浓度的本发明化合物存在下就容易被破坏。
        因此,本发明的另一方面涉及一种破坏癌细胞的方法,包括:提供本发明的化合物,然后在有效条件下将该化合物与癌细胞接触以破坏该接触的癌细胞。根据破坏癌细胞的各种实施方案,待破坏的细胞可以位于体内或体外(即,在培养物中)。
        本发明的还有另一方面涉及一种治疗或预防癌症的方法,包括:提供本发明的化合物,然后给予患者有效量的该化合物以治疗或预防癌症。
        根据一种实施方案,其中待治疗的患者的特征为存在癌症前期病症,并且所述的给予该化合物可有效地预防癌症前期病症发展成癌症。这可以在进一步发展成癌症之前或发展成癌症的同时,通过破坏癌症前期细胞实现。
        根据另一种实施方案,待治疗的患者的特征为存在癌症病症,并且所述的给予该化合物可有效地使癌症病症衰退或抑制癌症病症的生长。这优选通过破坏癌细胞实现,不管它们在患者身体的哪个部位。即,不管所述的癌细胞位于原发性肿瘤部位或不管所述的癌细胞已经转移并在患者体内产生继发性肿瘤。
        如在此所使用的,患者是指任何哺乳动物患者,包括,但不限于,人以及其它灵长目动物、狗、猫、马、牛、羊、猪、大鼠、小鼠以及其它啮齿类动物。
        当给予本发明的化合物时,它们可以全身性给药,或者它们可以直接给予存在癌细胞或癌症前期细胞的特定部位。因此,给予可以以任何有效的方式进行,以将所述的药物组合物或化合物释放至癌细胞或癌症前期细胞。示范性的给药方式包括,但不限于,口服、局部、经皮、胃肠外、皮下、静脉内、肌内、腹膜内、鼻内滴注、腔内或膀胱内滴注、眼内、动脉内、内损部位或粘膜(例如,鼻、咽喉和支气管的粘膜)给予该化合物或组合物。
        当本发明的化合物或药物组合物用于治疗或预防癌症时,所述的药物组合物还可以含有,或可以一起给予,目前已知的或将来开发的治疗各种类型癌症的其它药物或治疗方案。其它药物或治疗方案的实例包括,但不限于,放射治疗、化疗、外科手术以及它们的组合。
        在本发明范围内的组合物包括所有组合物,其包含有效量的本发明的化合物以获得它指定的目的。个体需要可以改变,每种组分有效量的最佳范围可以由本领域熟练技术人员确定。典型剂量包含约0.01-约100mg/kg体重。优选剂量包含约0.1-约100mg/kg体重。最优选剂量包含约1-约100mg/kg体重。给予本发明化合物的治疗方案还可以很容易由本领域熟练技术人员确定。也就是说,给药的频率和剂量大小可以通过常规优化确定,优选同时使任何副作用最小化。

        ???????????????????????实施例
        下列阐述的实施例仅仅是用于说明性目的,而不是以任何方式限制本发明的范围。

        实施例1-噻唑烷羧酸酰胺的合成
        所使用的所有试剂和溶剂是试剂级的或在使用前用标准方法提纯。对水分敏感的反应在氩气氛中进行。反应进程用薄层层析(TLC)分析监测??焖僦资褂糜蒄isher供应的硅胶(200-425目)。熔点使用Thomas-Hoover熔点测定仪在开口毛细管中测定并且是未校准的。所有化合物用NMR和MS(ESI)表征。1H?NMR光谱在Varian?300仪上记录?;灰葡喽杂谧魑诒甑腗e4Si并且以δ值的形式给出。质谱以电喷雾(ES)方式并使用Esquire-LC(Bruker)光谱仪获得。元素分析由Atlantic?Microlab?Inc.(Norcross,GA)提供的仪器进行。
        在本研究中所述的所有化合物按照简单化学进行制备。L-半胱氨酸与各种醛在所报道条件下的反应(Seki等,″A?Novel?Synthesis?of(+)-Biotin?from?L-Cysteine,″J.Org.Chem.67:5527-5536(2002),其在此整个引入作为参考)得到相应的酸(图1,2a-v),所述酸以非对映体混合物的形式被分离。使用EDC/HOBt如方案1中所示那样通过与合适的烷基胺反应,这些混合物直接用于制备相应的酰胺。由此制得的所有化合物以非对映体混合物的形式进行表征(表1)。
        将合适的羧酸(图1,2a-2v,0.3-0.5g)、EDC(1.25当量)和HOBt(1当量)在CH2Cl2(25-50mL)中的混合物搅拌10min。向这种溶液中加入合适的烷基胺(1当量)并在室温下继续搅拌6-8h。反应混合物用CH2Cl2(100-150mL)稀释并依次用水、饱和NaHCO3和盐水洗涤,接着在Na2SO4中干燥。在减压下除去溶剂,得到一粗固体,将该粗固体用柱色谱提纯。使用2M的HCl/Et2O将提纯后的化合物(3-6、12、15-18&27)转化为相应的盐酸盐。
        (2RS,4R)-2-苯基噻唑烷-4-羧酸庚基酰胺盐酸盐(化合物3·HCl):

        ?????????????????????????????????????????1H?NMR(DMSO-d6)δ8.72(s,1H),7.65(m,2H),7.43(m,3H),5.89(s,0.6H),5.84(s,0.4H),4.66(t,J=6.3Hz,0.6H),4.46(t,J=6.9Hz,0.4H),3.55-3.71(m,1H),3.24-3.34(m,1H),3.13(d,J=5.7Hz,2H),1.44(m,2H),1.25(s,8H),0.83(t,J=6.9Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C17H27N2OS307.47(N+1),实测307.10.
        (2RS,4R)-2-苯基噻唑烷-4-羧酸十四烷基酰胺盐酸盐(化合物4·HCl):

        ??????????????????????????????????????1H?NMR(DMSO-d6)δ8.69(m,1H),7.64-7.71(m,2H),7.45(m,3H),5.89(s,0.6H),5.84(s,0.4H),4.67(t,J=6.6Hz,0.6H),4.47(t,J=7.2Hz,0.4H),3.55-3.71(m,1H),3.25-3.35(m,1H),3.10-3.16(m,2H),1.44(m,2H),1.23(s,22H),0.85(t,J=6.3Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C24H40N2OS404.65(M+),实测427.30(M+Na).
        (2RS,4R)-2-苯基噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺盐酸盐(化合物5·HCl):

        ???????????????????????????????????????1H?NMR(DMSO-d6)δ8.59(d,J=5.1Hz,1H),7.63(d,J=3.9Hz,2H),7.42-7.47(m,3H),5.86(s,0.6H),5.81(s,0.4H),4.60(t,J=6.3Hz,0.6H),4.39(t,J=6.9Hz,0.4H),3.52-3.66(m,1H),3.24-3.30(m,1H),3.10-3.16(m,2H),1.42(m,2H),1.23(s,30H),0.85(t,J=6.3Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C28H49N2OS?461.76(M+1),实测461.50.
        (2RS,4R)-2-苯基噻唑烷-4-羧酸十九烷基酰胺盐酸盐(化合物6.HCl):

        ?????????????????????????????????????????1H?NMR(DMSO-d6)δ8.51(s,1H),7.62(m,2H),7.41-7.46(m,3H),5.83(s,0.6H),5.78(s,0.4H),4.53(m,0.6H),4.32(m,0.4H),3.48-3.61(m,1H),3.24-3.29(m,1H),3.11-3.15(m,2H),1.43(m,2H),1.23(s,32H),0.85(t,J=6.3Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C29H50N2OS?474.79(M+),实测497.40(M+Na).
        (2RS,4R)-2-十二烷基噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物7):

        ??????????????1H?NMR(CDCl3)δ7.18(m,1H),4.20-4.27(m,1H),3.79(m,0.3H),3.54-3.59(m,0.7H),3.08-3.34(m,4H),1.65-1.78(m,2H),1.43-1.51(m,4H),1.27(brs,48H),0.89(t,J=6Hz,6H);MS(ESI)m/z计算C34H69N2OS?553.98(M+1),实测553.60.
        (2RS,4R)-2-环己基噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物8):

        ????????????????1H?NMR(CDCl3)δ7.17(m,1H),4.10-4.20(m,1H),3.76(m,0.3H),3.54(dd,J=11.1,3.6Hz,0.7H),2.97-3.34(m,4H),2.02(m,1H),1.68-1.78(m,4H),1.48-1.54(m,2H),1.27(brs,36H),0.87(t,J=6.9Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C28H55N2OS?467.81(M+1),实测467.60.
        (2RS,4R)-2-苄基噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物9):

        ?????????1H?NMR(CDCl3)δ7.28-7.33(m,5H),7.03(s,0.7H),6.48(s,0.3H),4.55(brs,0.5H),4.18(brs,0.5H),3.82(brs,0.3H),3.54(dd,J=11.1,3.6Hz,0.7H),2.99-3.31(m,6H),1.46-1.51(m,2H),1.27(brs,30H),0.89(t,J=6.3Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C29H50N2OS?475.79(M+1),实测475.50.
        (2RS,4R)-2-(1H-吲哚-3-基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物10):

        ?????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)δ7.86(m,0.6H),7.77(m,0.4H),7.41-7.48(m,4H),7.29-7.34(m,1H),6.0(s,0.3H),5.69(s,0.7H),4.37-4.41(m,0.5H),3.76(dd,J=11.1,4.2Hz,0.5H),3.23-3.52(m,3H),2.79-3.04(m,1H),1.43(m,2H),1.27(s,30H),0.89(t,J=6.6Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C30H50N3OS500.80(M+1),实测500.60.
        (2RS,4R)-2-吡啶-3-基-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物11):

        ??????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)δ8.74(d,J=2.1Hz,1H),8.60(d,J=4.8Hz,1H),7.84(d,J=7.8Hz,1H),7.31-7.36(m,1H),7.08(m,1H),5.44(s,0.5H),5.40(s,0.5H),4.28-4.35(m,1H),3.72(dd,J=11.1,4.2Hz,1H),3.27-3.45(m,3H),2.57(m,1H),1.53-1.57(m,2H),1.26(s,30H),0.89(t,J=6.6Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C27H49N3OS?462.75(M+1),实测462.40.
        (2RS,4R)-2-呋喃-3-基-噻唑烷-4-羧酸盐酸盐(化合物12·HCl):

        ??????????????????????????1H?NMR(DMSO-d6)δ8.59(d,J=15.6Hz,1H),7.89(d,J=8.1Hz,1H),7.72(s,1H),5.86(s,0.7H),5.78(s,0.3H),4.37-4.56(m,1H),3.50-3.63(m,1H),3.11-3.23(m,3H),1.43(m,2H),1.23(s,30H),0.85(t,J=6.6Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C26H48N2O2S?451.72(M+1),实测451.60.
        (2RS,4R)-2-(4-二甲氨基-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物13):

        ????????????????????????????????????1H?MR(CDCl3)δ7.34-7.41(m,2H),6.70-6.74(m,2H),5.57(s,0.3H),5.28(s,0.7H),4.34(m,0.7H),3.90(m,0.3H),3.69(dd,J=11.1,4.2Hz,1H),3.41-3.47(m,1H),3.20-3.33(m,2H),2.97(d,J=3.6Hz,6H),1.48-1.55(m,2H),1.27(s,30H),0.89(t,J=6.3Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C30H54N3OS?504.83(M+1),实测504.60.
        (2RS,4R)-2-(3-羟基-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物14):

        ?????????????????????????????1H?NMR(DMSO-d6)δ8.59(s,1H),7.22(t,J=6.6Hz,1H),7.02(d,J=6.3Hz,2H),6.82(d,J=7.5Hz,1H),5.77(s,0.7H),5.71(s,0.3H),4.545(m,0.7H),4.37(m,0.3H),3.49-3.59(m,1H),3.13-3.27(m,3H),1.43(brs,2H),1.23(s,30H),0.85(t,J=6.3Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C28H49N2O2S?477.76(M+1),实测477.60.
        (2RS,4R)-2-(4-甲氧基-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺盐酸盐(化合物15·HCl):

        ??????????????????????????????????????????????????1H?NMR(DMSO-d6)δ8.61(m,1H),7.57(d,J=8.4Hz,2H),6.98(d,J=9Hz,2H),5.83(s,0.7H),5.78(s,0.3H),4.61(t,J=6.3Hz,0.7H),4.40(m,0.3H),3.77(s,3H),3.51-3.70(m,1H),3.22-3.31(m,1H),3.11(m,2H),1.43(m,2H),1.23(s,30H),0.84(t,J=6.6Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C29H51N2O2S?491.79(M+1),实测491.60.
        (2RS,4R)-2-(3,4-二甲氧基-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺盐酸盐(化合物16·HCl):

        ??????????????????????????????????????????????????1H?NMR(DMSO-d6)δ8.58(m,1H),7.33(d,J=4.2Hz,1H),7.14(t,J=7.5Hz,1H),6.97(d,J=8.4Hz,1H),5.81(s,0.8H),5.77(s,0.2H),4.62(m,0.7H),4.40(m,0.3H),3.78(d,J=7.8Hz,6H),3.52-3.68(m,1H),3.23-3.29(m,1H),3.12-3.13(m,2H),1.43(m,2H),1.23(s,30H),0.85(t,J=6.6Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C30H53N2O3S?521.81(M+1),实测521.60.
        (2RS,4R)-2-(3,4,5-三甲氧基-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺盐酸盐(化合物17·HCl):

        ????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(DMSO-d6)δ8.59(m,1H),7.01(d,J=5.7Hz,2H),5.80(s,0.8H),5.76(s,0.2H),4.63(m,0.7H),4.37(m,0.3H),3.80(d,J=5.7Hz,6H),3.66(s,3H),3.23-3.28(m,1H),3.12-3.13(m,2H),1.43(m,2H),1.23(s,30H),0.85(t,J=6Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C31H55N2O4S?551.84(M+1),实测551.60.
        (2RS,4R)-2-(4-乙酰氨基-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺盐酸盐(化合物18·HCl):

        ??????????????????????????????????????????????????1H?NMR(DMSO-d6)δ10.18(s,1H),8.61(m,1H),7.54-7.64(m,4H),5.82(s,0.7H),5.77(s,0.3H),4.60(m,0.8H),4.42(m,0.2H),3.56-3.64(m,1H),3.12-3.26(m,3H),2.05(s,3H),1.43(m,2H),1.23(s,30H),0.84(t,J=6Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C30H52N3O2S518.81(M+1),实测518.70.
        (2RS,4R)-2-(4-氟-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物19):

        ?????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)δ7.46-7.54(m,2H),7.13-7.20(m,1H),7.01-7.08(m,2H),5.60(s,0.3H),5.34(s,0.7H),4.76(m,0.3H),4.34(m,0.7H),3.69(dd,J=11.1,6.9Hz,1H),3.21-3.52(m,3H),1.49(m,2H),1.26(s,30H),0.89(t,J=6.3Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C28H48FN2OS?479.75(M+1),实测479.60.
        (2RS,4R)-2-(4-溴-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物20):

        ?????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)δ7.48-7.62(m,2H),7.36-7.42(m,2H),7.14(m,0.7H),6.40(m,0.3),5.57(d,J=10.2Hz,0.3H),5.33(d,J=11.1Hz,0.7H),4.32(m,0.7H),3.94(m,0.3H),3.70(dd,J=11.1,4.2Hz,1H),3.20-3.44(m,3H),1.49(m,2H),1.27(s,30H),0.89(t,J=6.3Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C28H47BrN2OS?539.66(M+),实测539.70.
        (2RS,4R)-2-(4-硝基-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物21):

        ????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)δ8.24(d,J=8.7Hz,2H),7.67(d,J=8.7Hz,2H),6.92(m,1H),5.54(s,0.5H),5.50(s,0.5H),4.24-4.31(m,1H),3.67(dd,J=10.8,4.8Hz,1H),3.27-3.44(m,3H),1.55(m,2H),1.26(s,30H),0.89(t,J=6.3Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C28H47N3O3S?506.76(M+1),实测506.60.
        (2RS,4R)-2-(4-氰基-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物22):

        ????????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)δ7.60-7.70(m,4H),6.94(m,0.6H),6.37(m,0.4),5.64(s,0.4H),5.46(s,0.6H),4.27(m,0.6H),3.96(m,0.4H),3.65-3.70(m,1H),3.20-3.45(m,3H),1.54(m,2H),1.26(s,30H),0.89(t,J=6.3Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C29H47N3OS?485.77(M+),实测508.50(M+Na).
        (2RS,4R)-2-(3,5-二氟-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物23):

        ?????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)δ7.04-7.08(m,2H),6.97(m,1H),6.79(m,1H),5.40(s,0.5H),5.36(s,0.5H),4.23-4.30(m,1H),3.66(dd,J=11.1,4.5Hz,1H),3.26-3.42(m,3H),1.33(m,2H),1.26(s,30H),0.89(t,J=6.3Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C28H47F2N2O2S?497.74(M+1),实测497.50.
        (2RS,4R)-2-(2,6-二氯-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物24):

        ?????????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)δ7.34-7.38(m,2H),7.15-7.28(m,2H),6.29(s,0.5H),6.25(s,0.5H),4.25(t,J=5.7Hz,1H),3.94(dd,J=10.5,1.8Hz,1H),3.26-3.52(m,3H),1.52(m,2H),1.26(s,30H),0.89(t,J=6Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C28H46Cl2N2O2S?529.65(M+),实测529.70.
        (2RS,4R)-2-(3-溴-4-氟-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物25):

        ????????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)δ7.71(m,1H),7.42(m,1H),7.06-7.16(m,2H),5.56(d,J=9.3Hz,0.2H),5.34(d,J=10.2Hz,0.8H),4.29(d,J=4.5Hz,0.8H),3.94(m,0.2H),3.69(dd,J=11.1,4.2Hz,1H),3.21-3.41(m,3H),1.52(m,2H),1.26(s,30H),0.89(t,J=6.3Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C28H47BrFN2OS?558.65(M+1),实测558.70.
        (2RS,4R)-2-对甲苯基-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物26):

        ???????????????????1H?NMR(CDCl3)δ7.34-7.43(m,2H),7.14-7.21(m,3H),5.59(s,0.2H),5.32(s,0.8H),4.76(m,0.2H),4.35(m,0.8H),3.70(dd,J=11.1,3.9Hz,1H),3.21-3.43(m,3H),2.36(d,J=2.7Hz,3H),1.51(m,2H),1.27(s,30H),0.89(t,J=6.3Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C29H51N2OS?475.79(M+1),实测475.60.
        (2RS,4R)-2-联苯-4-基-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺盐酸盐(化合物27·HCl):

        ??????????????????????????????????????????????????1H?NMR(DMSO-d6)δ8.59(m,1H),7.66-7.73(m,5H),7.37-7.51(m,4H),5.92(s,0.7H),5.87(s,0.3H),4.62(m,0.7H),4.41(m,0.3H),3.53-3.64(m,1H),3.26-3.32(m,1H),3.13-3.17(m,2H),1.44(m,2H),1.22(s,30H),0.84(t,J=6.3Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C34H53N2OS537.86(M+1),实测537.70.

        实施例2-N-?;蚇-磺?;苌镟邕蛲轸人狨0返暮铣?br>    N-?;蚇-磺?;苌?化合物28和29)由化合物5通过标准方法(方案2)合成。简要地说,(2RS,4R)-2-苯基噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物5)与乙酸酐或甲磺酰氯在吡啶中反应,生成所需的衍生物。
        (2RS,4R)-3-乙?;?2-苯基噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物28):

        ???????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)δ7.31-7.41(m,5H),6.01(s,1H),5.12(s,1H),3.73(m,1H),3.40(m,1H),3.31(m,1H),3.11-3.17(m,1H),2.00(s,3H),1.27-1.33(m,32H),0.89(t,J=6.3Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C30H50N2O2S?502.80(M+),实测502.60.
        (2RS,4R)-3-甲磺?;?2-苯基噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物29):

        ???????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)δ7.65-7.68(m,2H),7.32-7.36(m,3H),6.20(s,1H),4.63(dd,J=9,6Hz,1H),3.67(dd,J=12,6Hz,1H),3.47(dd,J=12.3,8.1Hz,1H),3.04-3.13(m,2H),3.02(s,3H),1.27(m,32H),0.89(t,J=6.3Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C29H50N2O3S2?538.85(M+),实测538.70.
        基于上述合成,可以预见其它?;狒?例如,含有更大的烷基)和其它磺酰氯(例如,含有更大的烷基)也可以依据这种相同的合成方法进行制备(Badr等,″Synthesis?of?Oxazolidines,Thiazolidines,and?5,6,7,8-Tetrahydro-1H,3H-pyrrolo[1,2-c]oxazole(or?thiazole)-1,3-diones?fromβ-Hydroxy-orβ-Mercapto-α-a?mino?AcidEsters,″Bull.Chem.Soc.Jpn.54:1844-1847(1981),其在此整个引入作为参考)。

        实施例3-噻唑羧酸酰胺的合成
        噻唑衍生物(化合物34)的合成由半胱氨酸如方案3中所示的方法进行。
        在0℃下,向DL-半胱氨酸(3g,24.76mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中缓慢加入SOCl2(2.76mL,37.14mmol)接着温热至室温,然后回流3h。将反应混合物在真空中浓缩,得到一残余物。将此残余物吸收到含水EtOH(1∶1,30mL)中,加入NaHCO3(2.28g,27.23mmol),10min后加入苯甲醛(2.5mL,24.76mmol)并继续搅拌3h。将CHCl3(200mL)加入到反应混合物中并用水和盐水洗涤,干燥(Na2SO4),接着在真空中除去溶剂。粗产物用柱色谱提纯,得到2-苯基噻唑烷-4-羧酸甲酯(化合物31):收率4.7g,85%;

        1H?NMR(CDCl3)δ7.51-7.62(m,2H),7.32-7.42(m,3H),5.84(s,0.4H),5.58(s,0.6H),4.24(t,J=6.3Hz,0.4H),4.01(t,J=7.5Hz,0.6H),3.83(s,3H),3.39-3.55(m,1H),3.10-3.26(m,1H);MS(ESI)m/z?224(M+1).
        用化合物31作为起始化合物,按照所报道的方法合成2-苯基噻唑-4-羧酸甲酯(化合物32)(Kue等,″Essential?Role?for?G?Proteins?inProstate?Cancer?Cell?Growth?and?Signaling,″Urol.164:2162-2167(2000),其在此整个引入作为参考)。收率0.33g,68%;

        ??????????????????1H?NMR(CDCl3)δ8.20(s,1H),8.0-8.04(m,2H),7.45-7.50(m,3H),4.0(s,3H);MS(ESI)m/z?220(M+1).
        在0℃下,向化合物32(0.5g,2.28mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入1N?NaOH(5mL)并搅拌2h。向该反应混合物中加入EtOAc(30mL)并用1N?HCl酸化。用EtOAc(3×50mL)萃取,合并的萃取液用水和盐水洗涤,干燥(Na2SO4)接着在真空中除去溶剂,得到粗酸(化合物33),按照上面实施例1中所述的一般方法将该粗酸转化为2-苯基噻唑-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物34)。收率0.30g,68%;

        ?????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)δ8.10(s,1H),7.96-7.93(m,2H),7.46-7.50(m,3H),3.49(dd,J=13.5,6.9Hz,2H),1.69(m,2H),1.27(m,30H),0.89(t,J=6.3Hz,3H);MS(ESI)m/z计算C28H45N2OS?457.73(M+1),实测457.60.

        表1:合成了的化合物的结构和物理数据

        ??化合物???R1???R2???R4???熔点??(℃)??收率??(%)??化学式???3·HCl??苯基??C7H15??H??ND??80??C17H27ClN2OS??4·HCl??苯基??C14H29??H??95??83??C24H41ClN2OS??5·HCl??苯基??C18H37??H??93??70??C28H49ClN2OS??6·HCl??苯基??C19H39??H??85??78??C29H51ClN2OS??7??正十二烷基??C18H37??H??S6??69??C34H68N2OS??8??环己基??C18H37??H??60??75??C28H54N2OS??9??苄基??C18H37??H??80??81??C29H50N2OS??10??3-吲哚基??C18H37??H??125??65??C30H49N3OS??11??3-吡啶基??C18H37??H??94??63??C27H47N3OS??12·HCl??3-呋喃基??C18H37??H??99??60??C26H47ClN2O2S??13??4-二甲氨基苯基??C18H37??H??75??75??C30H53N3OS??14??3-羟基苯基??C18H37??H??50??69??C28H48N2O2S??15·HCl??4-甲氧基苯基??C18H37??H??95??70??C29H51ClN2O2S??16·HCl??3,4-二甲氧基苯基??C18H37??H??103??83??C30H53ClN2O3S??17·HCl??3,4,5-三甲氧基苯基??C18H37??H??115??70??C31H55ClN2O4S??18·HCl??4-乙酰胺基苯基??C18H37??H??170??63??C30H52ClN3O2S??19??4-氟苯基??C18H37??H??65??73??C28H47FN2OS??20??4-溴苯基??C18H37??H??81??77??C28H47BrN2OS??21??4-硝基苯基??C18H37??H??115??60??C28H47N3O3S??22??4-氰基苯基??C18H37??H??90??70??C29H47N3OS??23??3,5-二氟苯基??C18H37??H??113??70??C28H46F2N2OS??24??2,6-二氯苯基??C18H37??H??49??80??C28H46Cl2N2OS??25??3-溴-4-氟苯基??C18H37??H??100??78??C28H46BrFN2OS??26??4-甲基苯基??C18H37??H??120??73??C29H50N2OS??27·HCl??联苯基??C18H37??H??130??70??C34H53CIN2OS??28??苯基??C18H37??COCH3??90??95??C30H50N2O2S??29??苯基??C18H37??SO2Me??55??90??C29H50N2O3S2

        实施例4-通过RT-PCR对所选择的前列腺癌细胞系进行LPA受体表达分析
        DU-145、PC-3和LNCaP人前列腺癌细胞和RH7777大鼠肝癌细胞从美国典型培养物保藏中心(manassas,VA)处获得。Universityof?Tennessee?Health?Science?Center的Mitchell?Steiner博士友好地提供PPC-1和TSU-Pr1细胞。前列腺癌细胞和RH7777细胞在5%CO2/95%空气湿润的大气压中在37℃下分别供养在补充有10%胎牛血清(Gibco,Grand?Island,NY)的RPMI?1640培养基和DMEM(Mediatech,Inc.,Herndon,VA)。
        使用TRIzol试剂(Invitrogen?Corp.,Carlsbad,CA)根据厂家的指示萃取总RNA。使用带PlatinumTaq(Invitrogen?Corp.,Carlsbad,CA)以及0.2μM引物的SuperScriptTM一步RT-PCR,使用0.5μg(LPA1)或1μg(LPA2和LPA3)总RNA进行RT-PCR。

        使用以下引物对:

        LPA1前5′-GCTCCACACACGGATGAGCAACC-3′(SEQ?ID?NO:1),

        和LPA1反5′-GTGGTCATTGCTGTGAACTCCAGC-3′(SEQ?ID?NO:2);

        LPA2前5′-CTGCTCAGCCGCTCCTATTTG-3′(SEQ?ID?NO:3),和

        LPA2反5′-AGGAGCACCCACAAGTCATCAG-3′(SEQ?ID?NO:4);

        LPA3前5′-CCATAGCAACCTGACCAAAAAGAG-3′(SEQ?ID?NO:

        5),和LPA3反5′-TCCTTGTAGGAGTAGATGATGGGG-3′(SEQ?IDNO:6);

        β-肌动蛋白前5′-GCTCGTCGTCGACAACGGCTC-3′(SEQ?IDNO:7),和

        β-肌动蛋白反5′-CAAACATGATCTGGGTCATCTTCTC-3′(SEQ?IDNO:8)。

        PCR条件如下所示:在94℃变性步骤2min后,将样品在94℃34-40周期30秒,60℃(LPA1)或58℃(LPA2和LPA3)30秒,以及72℃1min,接着在72℃额外的延长步骤7min。选择引物,横跨基因组序列的至少一个内含子以检测基因组DNA污染。在1.5%琼脂糖凝胶上分离PCR产物,用溴化乙锭染色,使用Quantity?One软件(Bio-RadLaboratories,Inc.,Hercules,CA)确定谱带强度。在不同细胞系中每个受体亚型的表达水平用与β-肌动蛋白mRNA水平相比的比值来表示。
        测定这些细胞系中的LPL受体表达,以证实在体外模型中的作用(参见下表2)。将1μg总RNA进行RT-PCR,在琼脂糖凝胶上分离PCR产物,与β-肌动蛋白相比的每个受体亚型的相对表达水平通过Quantity?One软件(Bio-Rad)确定。LPA1是在这些细胞系中表达的主要LPL受体。然而,LNCaP细胞不表达这种受体亚型。LPA3受体仅在前列腺癌细胞系中表达。RH7777细胞不表达任何已知的LPL受体。

        表2:LPL受体mRNA表达??LPL???受体??原名??RH7777??????????????相对于β-肌动蛋白的表达水平??DU145??PC-3??LNCaP??PPC-1??TSU-P15??LPA1??LPA2??LPA3??EDG-2??EDG-4??EDG-7??UDa??UD??UD??2.16??0.33??0.07??2.53??0.43??0.27??UD??0.32??0.28??2.29??0.41??0.15??2.13??0.19??UD??总LPA1-3??0??2.56??3.23??0.60??2.85??2.32

        aUD=低于检测极限

        实施例5-前列腺癌细胞中的细胞毒性试验
        对于体外细胞毒性筛选,将1000-5000细胞根据生长率平铺到96孔板的每个孔中,接着以3-5平行测定暴露于各种浓度的测试化合物96h。所有化合物都以5-20mM溶于二甲亚砜中,并在完全培养液中稀释至所需浓度。通过SRB分析测定在药物治疗结束时的细胞数目(Gududuru等,″Synthesis?and?Biological?Evaluation?of?NovelCytotoxic?Phospholipids?for?Prostate?Cancer,″Bioorg.Med.Chem.Lett.14:4919-4923(2004);Rubinstein等,″Comparison?of?in?vitroAnticancer-Drug-Screening?Data?Generated?with?a?Tetrazolium?AssayVersus?a?Protein?Assay?Against?a?Diverse?Panel?of?Human?Tumor?CellLines,″J.Natl.Cancer?Inst.82:1113-1118(1990),其每个在此整个引入作为参考)。简言之,细胞用10%三氯乙酸固定,用0.4%SRB染色,接着使用板读数器(DYNEX?Technologies,Chantilly,VA)测定在540nm的吸光度。将细胞存活率百分比对药物浓度绘图,使用WinNonlin(Pharsight?Corporation,Mountain?View,CA)通过非线性回归分析获得IC50值(抑制50%的未治疗对照组的细胞生长所需浓度)。5-氟尿嘧啶被用作阳性对照以比较新化合物的效力。
        夹心ELISA(Roche,Mannheim,Germany)(利用对DNA和组蛋白特异性的单克隆抗体)被用来确定曝露72h后由类似物诱导的细胞程序死亡的程度。本试验测定在细胞程序死亡期间由核释放到细胞质中的DNA-组蛋白络合物(单-和寡-核小体)。使用RH7777细胞是因为化合物4在受体-阴性细胞中和在受体-阳性前列腺癌细胞中的非特异性细胞毒性。
        2-芳基-噻唑烷衍生物(ATCAAs)抑制5种人前列腺癌细胞系(DU-145、PC-3、LNCaP、PPC-1和TSU-PR1)生长的能力使用磺基若丹明B(SRB)分析(如上所述)进行评价。未表达LPL受体的对照细胞系(RH7777)(Svetlov等,″EDG?Receptors?and?HepaticPathophysiology?of?LPA?and?SIP:EDG-ology?of?Liver?Injury,″Biochimica?et?Biophysica?ACT?1582:251-256(2002),其在此整个引入作为参考)也用于理解这些衍生物的抗增殖活性是否通过抑制LPL受体进行介导。
        使用目标化合物3-29的非对映体混合物来评价它们抗前列腺癌细胞系的体外抑制活性,结果概括在下表3和4中。5-氟尿嘧啶被用作对照药物。为了推导出良好的结构-活性关系,原则上IC50s应该针对纯异构体测定。测试立体异构体的混合物的一个缺点,在这种情况下是不可避免的,是不能评价每种立体异构体对生物学活性的作用。另一方面,计算得到的IC50值可以用作一种筛选方法用于选择有前途的选择性细胞毒性试剂以及用于具有最好利用度的非对映体混合物以抑制前列腺癌细胞的生长。许多这些噻唑烷类似物在处死前列腺癌细胞系中是非常有效的,其IC50值在低/亚微摩尔的范围内(表3)?;衔?-5的细胞毒性作用实验表明,链长从C7增加到C18,所述的效力也增加了。然而,烷链长度再增加一个碳单位(即,C18至C19)将导致细胞毒性显著降低。有趣地是,C14衍生物(化合物4)表现出比化合物5更高的效力,但是抗RH7777细胞系的选择性减少8倍。因此,对于在此系列化合物中观察到的保持效力和选择性来说,C18单元的烷基链是最佳的。N-?;蚇-磺?;苌?化合物28和29)比母体化合物5的细胞毒性低。相对于噻唑烷(化合物5)衍生物,用烷基或环己基代替苯基环降低了效力(化合物7和8)。在苯环和噻唑烷环之间引入亚甲基间隔基团得到化合物9,其比母体化合物5的活性低。

        表3:化合物3-17对前列腺癌细胞系的抗增殖作用???化合物?????????????????????????????IC50(μM)???RH7777a???DU-145b???PC-3b???LNCaPb???PPC-1b???TSU-Prlb??3·HCl??4·HCl??5·HCl??6·HCl??7??8??9??10??11??12·HCl??13??14??15·HCl??16·HCl??17·HCl??5-FU??52.2??3.4??25.6??NA??~20??>20??>20??>20??10.5??10.4??>20??31.0??>20??10.3??11.4??ND??44.9??2.4??5.4??>20??8.9??>20??15.3??8.9??7.5??6.6??5.3??5.7??8.7??4.5??3.9??11.9??38.5??3.0??7.8??NA??15.0??>20??16.4??11.5??9.2??8.1??6.0??6.7??~20??5.2??4.0??12.0??12.4??1.4??2.1??13.6??11.9??12.8??4.4??2.1??3.6??1.7??1.6??1.7??2.1??0.85??0.82??4.9??34.7??1.3??2.0??16.8??13.0??9.3??4.0??1.3??2.9??1.1??1.1??1.2??1.5??0.58??0.48??6.4??28.0??2.0??5.0??>20??10.7??>20??11.2??4.4??7.8??4.2??3.0??4.0??ND??2.4??2.4??3.6

        a对照细胞系。b前列腺癌细胞系。ND=未检出。NA=没有活性。

        表4:化合物18-29和34对前列腺癌细胞系的抗增殖作用??化合物?????????????????????????????IC50(μM)???RH7777a???DU-145b???PC-3b???LNCaPb???PPC-1b???TSU-Prlb??18·HCl??19??20??21??22??23??24??25??26??27·HCl??28??29??34??5-FU??21.1??17.4??>20??~20??>20??>20??>20??~20??>20??>20??>20??>20??>20??ND??3.1??5.7??13.8??15.3??>20??>20??>20??11.3??10.5??>20??~20??>20??>20??11.9??5.6??6.8??17.3??~20??>20??>20??>20??13.5??12.8??>20??~20??>20??>20??12.0??1.3??1.9??5.1??8.4??5.9??11.2??13.1??3.0??1.9??>20??16.1??>20??>20??4.9??0.55??2.1??3.7??15.3??5.0??10.6??17.1??4.7??1.9??>20??12.6??>20??>20??6.4??0.94??5.4??18.3??15.9??>20??>20??~20??14.0??8.0??>20??>20??>20??>20??3.6

        a对照细胞系。b前列腺癌细胞系。
        为了理解不饱和度对效力和选择性的影响,以及为了克服与立体异构体有关的问题,将化合物5中的中心噻唑烷核用噻唑环替换。然而,噻唑衍生物(化合物34)在低于20μM时对前列腺和RH7777细胞都没有表现出任何活性,这表明具有两个手性中心的噻唑烷环在提供效力和选择性方面起重要的作用。研究了用杂环如吲哚、吡啶或呋喃环代替苯环后合成的类似物(化合物10-12)。呋喃基衍生物(化合物12)表现出与化合物5同等的细胞毒性,但是抗RH7777细胞的选择性低3倍。
        化合物13-27的细胞毒性数据提供了苯环取代的类似物的广泛调查概述??疾煺庑├嗨莆锏腎C50值,对于苯环上的不同取代基表现出更大的耐受性。通常,最有效的类似物具有供电子取代基,例如化合物13和化合物16-18比化合物5更有效。与RH7777细胞相比,最大活性化合物之一(化合物18)(IC50值为0.55μM)在PPC-1细胞中的选择性高38倍。另一方面,具有吸电子取代基的噻唑烷类似物(化合物19-25)表现出较低的细胞毒性。通过比较化合物26和化合物27的效力,可以表明苯环被大体积基团取代降低了活性。
        从LPL受体mRNA表达研究(表2)中可以清楚,这些细胞系可以作为极好的模型体系用于研究LPL受体的作用??悸堑絊APs与神经酰胺的结构相似性(以及神经酰胺诱导细胞程序死亡的已知能力),然后测定噻唑烷类似物的抗增殖作用是否通过细胞程序死亡事件介导。使用定量夹心ELISA(测定在细胞程序死亡期间DNA-组蛋白络合物的释放)研究类似物诱导LNCaP、PC-3和RH7777细胞程序死亡的能力。计算得到的浓缩因子(治疗细胞和未治疗细胞中OD405的比值)提供了对诱导的细胞程序死亡程度的定量评价。最初,仅仅两个化合物(4和5)用于此研究。类似物(化合物4)的细胞凋亡活性在前列腺癌细胞中是选择性的,虽然在RH7777阴性对照细胞中是非选择性的(参见下表5)。类似化合物5在PC-3和LNCaP细胞中诱导细胞程序死亡,但是在PC-3细胞中诱导细胞程序死亡的程度更低,这也许是由于在此细胞系中的效力较低的原因。此数据表明,噻唑烷类似物可以作为细胞程序死亡的有效诱导剂并选择性地杀死各种前列腺癌细胞系。

        表5:噻唑烷酰胺诱导的细胞程序死亡??化合物??72h??PC-3??LNCaP??RH7777???4???2μM??5μM??10μM??1.8??18.7??54.0??14.1??75.4??80.7??2.6??3.2??2.5???5????2μM??5μM??10μM??20μM??1.4??2.3??3.4??12.7??4.5??45.2??37.1??26.1??ND??
        这些结果与通过琼脂糖凝胶电泳进行的DNA断裂的分析测试LNCaP细胞一致。LNCaP细胞用噻唑烷衍生物(化合物4或5)处理24-108小时,然后,通过简单的离心方法从2×106细胞中提取总DNA,用核糖核酸酶和蛋白酶K处理。在乙醇中沉淀后,将DNA重新溶解在Tris-EDTA缓冲液中,在琼脂糖凝胶上分离,接着通过溴化乙锭染色显像(Herrmann等,″A?Rapid?and?Simple?Method?for?theIsolation?of?Apoptotic?DNA?Fragments,″Nucl.Acids?Res.22:5506-5507(1994),其在此整个引入作为参考)。图4A-B所示的结果表明,这些化合物在LNCaP前列腺癌细胞系中都诱导细胞程序死亡。
        作为细胞毒性的另一种评价,测定AKT抑制。将来自未处理的对照细胞和用化合物处理的细胞的30μg总细胞蛋白通过SDS-PAGE分离,转入到硝化纤维素膜,分别用在Ser?473对AKT磷酸化特异性的抗-AKT和抗-磷酸基AKT抗体探测总AKT和磷酸基-AKT(CellSignaling?Technology,Beverly,MA)免疫印迹通过增强化学发光显象,与通过类似物处理的总AKT相比的磷酸基-AKT相对水平的变化用密度分析确定。图5B图解说明使用抗AKT的AKT的免疫检测,图5A表示使用抗磷酸基AKT进行的AKT的免疫检测。
        从上文中可以理解,在苯环上引入环活化基团将导致对前列腺癌细胞系的效力增加。上述结果证明了数个具有低/亚微摩尔细胞毒性和高选择性的新抗癌剂(由化合物16、17和18表示)。从本研究中,化合物18是最有效的和对细胞毒性选择性最好的化合物,其IC50为0.55μM,在PPC-1细胞中的选择性是38倍。此外,这些类似物在LNCaP、PC-3和RH7777细胞中诱导细胞程序死亡的能力提供了了解它们作用机理的重要线索。

        实施例6-噻唑烷酮酰胺的合成
        如方案4(图6)中所示,使用简单的化学方法合成噻唑烷酮衍生物(化合物65-72),其中l是1。各种4-噻唑烷酮可以通过如下合成:根据所报道的方法将巯基乙酸、甘氨酸甲酯和芳醛在一锅反应中缩合,接着对该酯进行碱性水解(Holmes等,″Strategies?forCombinatorial?Organic?Synthesis:Solution?and?Polymer-supportedSynthesis?of?4-thiazolidinones?and?4-metathiazanones?Derived?fromAmino?Acids,″J.Org.Chem.60:7328-7333(1995),其在此整个引入作为参考)。通过在EDC/HOBt存在下在标准条件下用合适的胺进行处理,获得噻唑烷酮酰胺。没有侧链的化合物65由相应的酸如图6所示(方案4)合成。噻唑烷酮酰胺(化合物73-77)通过一种直截了当的方法合成(Schuemacher等,″Condensation?Between?Isocyanatesand?Carboxylic?Acids?in?the?Presence?of?4-dimethylaminopyridine(DMAP),a?Mild?and?Efficient?Synthesis?of?Amides,″Synthesis?22:243-246(2001),其在此整个引入作为参考),其包括所述的酸化合物64a与不同的异氰酸酯在催化量的DMAP存在下进行反应(图7)(方案5)?;衔?8使用BH3·THF在条件回流下进行彻底还原,得到化合物79(图8)(方案6)。如方案6所示,使用H2O2和KMnO4对化合物68进行氧化,分别得到亚砜(化合物80)和砜(化合物81)。所有化合物都通过1H?NMR和13C?NMR、质谱以及在某些情况下通过元素分析进行表征。
        化合物以非对映异构体混合物的形式获得并且以这种形式用于生物学研究。示范性的化合物68、71、72和81的表征数据在下面给出。
        N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物68):

        1H?NMR(300MHz,CDCl3):δ0.89(t,J=6.0Hz,3H),1.26(br?s,30H),1.46(m,2H),3.16-3.29(m,3H),3.82(d,J=1.5Hz,2H),4.20(s,0.5H),4.25(s,0.5H),5.83-5.85(m,2H),7.27-7.41(m,5H);13C?NMR(300MHz,CDCl3):δ13.55,22.13,26.30,28.69,28.80,28.88,28.99,29.03,29.10,29.14,31.37,32.13,39.08,45.88,63.67,127.05,128.58,128.96,137.61,166.30,171.61;MS(ESI)m/z?511[M+Na].

        计算C29H48N2O2S:C,71.26;H,9.90;N,5.73.实测:C,71.18;H,10.03;N,5.79.
        2-(2-(4-甲氧基苯基)-4-氧代噻唑烷-3-基)-N-十八烷基乙酰胺(化合物71):

        ??????????????1H?NMR(300MHz,CDCl3):δ0.89(t,J=6.0Hz,3H),1.26(br?s,30H),1.33(s,2H),3.16-3.19(m,1H),3.2-3.29(m,2H),3.80(d,J=0.9Hz,2H),3.83(s,3H),4.16(s,0.5H),4.21(s,0.47H),5.82(s,1H),6.9(dd,J=1.8Hz,2H),7.29(dd,J=1.5Hz,2H);13C?NMR(300MHz,CDCl3):δ13.53,22.12,26.31,28.70,28.74,28.79,28.89,28.99,29.03,29.09,29.13,31.36,32.23,39.06,45.74,54.79,63.44,128.64,129.11,159.97,166.41,171.47;MS(ESI)m/z?541[M+Na].

        计算C30H50N2O3S:C,69.45;H,9.71;N,5.40.实测:C,69.30;H,9.86;N,5.43.
        2-(2-(2,6-二氯苯基)-4-氧代噻唑烷-3-基)-N-十八烷基乙酰胺(化合物72):

        ?????????????????????????????????????1H?NMR(300MHz,CDCl3):δ3.54(d,J=15.3Hz,1H),3.87(s,2H),4.25(d,J=15.3Hz,1H),5.88(s,1H),7.10(t,J=1.8Hz,1H),7.36-7.43(m,7H),8.29(s,1H);13C?NMR(300MHz,CDCl3):δ32.35,46.73,64.40,117.37,123.85,127.29,128.74,129.32,134.59,136.87,138.61,165.14,172.60;MS(ESI)m/z?403[M+Na].计算C17H14Cl2N2O2S:C,53.55;H,3.70;N,7.35.实测:C,53.39;H,3.47;N,7.36.
        N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基-1-磺?;?噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物81):

        ??????????????1H?NMR(300MHz,CDCl3):δ0.89(t,J=6.0Hz,3H),1.26(br?s,32H),3.19-3.34(m,3H),3.88-4.03(dd,J=16.5Hz,2H),4.66(s,0.5H),4.72(s,0.5H),5.67(br?s,1H),5.95(s,1H),7.38(m,2H),7.50-7.53(m,3H);13C?NMR(300MHz,CDCl3):δ13.54,22.12,26.26,28.66,28.79,28.96,29.02,29.09,29.14,31.36,39.30,44.35,49.85,81.32,125.77,128.43,128.91,130.55,163.23,165.30;MS(ESI)m/z?519[M-H].计算C29H48N2O4S:C,66.88;H,9.29;N,5.38.实测:C,66.68;H,9.27;N,5.41

        实施例7-细胞毒性试验
        使用磺基若丹明B(SRB)分析(参见上面实施例5中的说明),评价所有合成的化合物对5种人前列腺癌细胞系以及在RH7777细胞(阴性对照)中的抗增殖活性。5-氟尿嘧啶(5-FU)被用作对照药物。如表6所示,在小于50μM时,4-噻唑烷酮羧酸(化合物64a和64b)不能抑制5种前列腺癌细胞中任何一种的生长。然而,相应的酰胺(化合物66-68)表现出较高的活性。人们观察到,烷链长度增加[化合物66(C10)、67(C14)和68(C18)]增加了这些类似物在前列腺癌细胞中的抗增殖活性。有趣地是,简单的酰胺65(没有任何长的烷基链)在低于100μM时没有细胞毒性,这表明:没有烷基侧链将造成抗增殖作用的显著降低。另一方面,用各种芳基侧链替换烷基链(化合物73-78)将降低生物学活性。在此系列当中,化合物73是具有中等细胞毒性的,而其类似物(化合物76-78)在若干前列腺癌细胞系中表现出弱的细胞毒性。然而,值得一提的是,在芳环上具有吸电子取代基的噻唑烷酮酰胺(化合物74和75)在13-29μM的范围内对所有5种前列腺癌细胞系都表现出细胞毒性。

        表6:化合物64a-64b和65-78的抗增殖作用

        ??化合物??R1??Y?????????????????????????????????IC50(μM)??RH7777a??DU-145b??PC-3b??LNCaPb??PPC-1b??TSUb??64a??64b??65??66??67??68??69??70????71???72???73???74????75???76????77??78???苯基??联苯基??苯基??苯基??苯基??苯基??联苯基??二甲氨??基萘-4-??基??4-甲氧基??苯基??2,6-二氯??苯基??苯基???苯基????苯基???苯基????苯基??苯基???OH??OH??NH2??NH-C10H21??NH-C14H29??NH-C18H37??NH-C18H37??NH-C18H37????NH-C18H37???NH-C18H37???NH-3,5-??二氟苯基??NH-3,5-二??(三氟甲基)??苯基??NH-3,5-二??氯苯基??NH-2,4-??二甲氧基??苯基??NH-萘基??2,4-二甲氧基??苯基乙基??ND??>100??>100??20.0??16.4??39.6??>50??>50????31.1???>50???70.9???25.4????34.9???>100????>100??>100???>50??>100??>100??22.4??19.6??12.6??>50??>50????14.8???>50???69.0???16.2????24.0???>100????>100??>100???>50??>100??>100??20.3??13.5??11.1??>50??>50????12.6???>50???74.1???18.1????28.6???>100????>100??>100???>50??>100??>100??14.1??14.1??9.3??>50??>50????11.8???>50???24.1???14.5????13.2???82.5????31.4??>100???>50??>100??>100??15.8??10.1??7.1??>50??>50????10.7???>50???46.2???13.1????20.5???>100????>100??>100???>50??>100??>100??19.7??13.4??8.5??>50??>50????17.5???>50???53.2???16.1????17.2???60.8????69.9??>100??????????????5-FU??ND??11.9??12.0??4.9??6.4??3.6

        a对照细胞系;b前列腺癌细胞系。

        ?????????????????????表7:化合物79-81的抗增殖作用??化合物??????????????????????????IC50(μM)??RH7777a??DU-145b??PC-3b??LNCaPb??PPC-1b??TSUb??79??80??81??5-FU??>20??11.5??22.1??ND??15.8??11.2??15.5??11.9??>20??6.5??8.5??12.0??>20??7.9??10.9??4.9??12.0??5.4??5.5??6.4??6.1??6.4??9.3??3.6

        a对照细胞系;b前列腺癌细胞系。
        与化合物68(表6)相比,具有大体积的联苯基或萘基的噻唑烷酮衍生物(化合物69和70)表现出较低的细胞毒性。合成化合物71和72以了解化合物68中芳环取代的作用。人们观察到,供电子取代基保持了这些衍生物的良好抗增殖活性,而邻位吸电子取代基显著降低这些衍生物的抗增殖活性(表6)?;衔?9,其没有酰胺基,在所有5种前列腺癌细胞系中都表现出非常好的效力。值得注意的是,与对照药物5-FU相比,带亚砜或砜部分的化合物80和81抗PC-3和PPC-1细胞系都表现出更高的细胞毒性效力(表7)。
        总之,制备并识别了一系列新的和细胞毒性的4-噻唑烷酮酰胺。在此系列当中,对I型化合物(图6)详细研究了构效关系以评价它们抗5种前列腺癌细胞系和RH7777细胞(阴性对照)的抗增殖活性。该细胞毒性研究表明,所述的抗增殖活性对2-芳环取代、烷基侧链的长度以及亲脂性烷基侧链的除去或替换敏感。硫氧化是可以很好地接受的,因为与5-FU相比,化合物80和81表现出显著的细胞毒性。此研究导致发现了有效细胞毒性的4-噻唑烷酮(化合物68、80和81),其抑制所有5种人前列腺癌细胞系(DU-145、PC-3、LNCaP、PPC-1和TSU)的生长,与RH7777细胞系相比,其具有2-5-倍更低的选择性。这些4-噻唑烷酮衍生物对SAP部分具有明显改善,因为它们在非肿瘤细胞中具有更低的细胞毒性但表现出改善的选择性。

        实施例8-乳腺癌细胞和卵巢癌细胞中的细胞毒性试验
        选择每一结构式的最有效化合物并测试它们在人乳腺癌细胞系(MCF-7)和3种人卵巢癌细胞系(CHO-1、CaOv-3、SKOv-3和OVCAR-3)中的生长抑制活性。通过相同的磺基若丹明B(SRB)分析(如上所述)进行体外细胞毒性试验。测试下表8中所示的化合物抗乳腺癌细胞系和卵巢癌细胞系的活性。

        表8:化合物对乳腺癌细胞系和卵巢癌细胞系的抗增殖作用??化合物??????????????????????????????IC50(μM)??MCF-7b??CHO-1b??CaOv-3b??OVCAR-3b??SKOv-3b??3·HCl??4·HCl??5·HCl(R)??5·HCl(S)??6·HCl??7??8??9??10??11??12??13??14·HCl??15·HCl??16·HCl??17·HCl??18·HCl??19??20??21??24??25??26??27·HCl??28??29??34??66??67??68??69??70??71??72??80??81??50.3??4.2??4.2??7.4??>20??10.4??~20??18.7??10.6??9.3??NT??13.5??NT??16.3??NT??NT??NT??8.8??16.6??15.3??17.7??15.3??10.3??>20??16.3??>20??>20??13.5??8.9??15.4??>20??>20??13.0??-30??14.3??8.9??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??21.0??11.4??23.5??>20??>20??15.2??>30??11.6??9.8??19.2??13.9??2.5??18.0??NT??NT??NT??NT??NT??NT??7.7??NT??18.3??NT??5.5??4.4??4.9??5.5??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??34.0??1.6??4.5??5.2??NT??NT??NT??NT??NT??NT??2.3??NT??8.1??NT??1.2??1.4??2.0??2.3??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??47.8??2.1??8.5??18.0??NT??NT??NT??NT??NT??NT??5.4??NT??11.0??NT??3.6??2.7??2.6??4.2??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT??NT

        a乳腺癌细胞系;b卵巢癌细胞系;NT=未试验。
        在CaOV-3和SKOv-3细胞中观察化合物5的立体选择性(比较(R)异构体和(S)异构体)。2-苯基环上的取代通常将增加该化合物的细胞毒性。

        实施例9-精胺-共轭的噻唑烷酰胺的合成和试验
        如图9所示,将4-噻唑烷酮酸(其中R1是苯基以及l是1)(1.5g,6.32mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.51g,7.9mmol)和1-羟基苯并三唑(0.85g,6.32mmol)在CH2Cl2中的混合物在冰浴中冷却并搅拌10min。向这种溶液中加入4-硝基苯酚(0.78g,5.61mmol)并搅拌2h。反应混合物用CH2Cl2稀释,接着依次用冷的5%HCl、饱和NaHCO3、水和盐水洗涤,然后干燥(无水Na2SO4),接着在真空中除去溶剂。该硝基苯基酯产物(化合物100)用快速色谱(硅胶)提纯,使用EtOAc/己烷洗脱,得到1.76g(78%)。

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????1HNMR(CDCl3)δ3.70(d,J=18Hz,1H),3.85(d,J=1.2Hz,2H),4.64(d,J=17.7Hz,1H),5.88(s,1H),7.24(d,J=2.1Hz,1H),7.26(d,J=2.4Hz,1H),7.40-7.46(m,5H),8.26(d,J=1.8Hz,1H),8.28(d,J=2.1Hz,1H).
        在室温下,向该硝基苯基酯(化合物100)(0.5g,1.39mmol)在CH3OH(35mL)中的溶液中缓慢地加入精胺溶液(0.33g,1.63mmol,在CH3OH中)并搅拌1h。将所述的反应混合物在真空中进行浓缩,向该浓缩后的反应混合物中加入1∶1的(CHCl3∶CH3OH),接着通过硅藻土过滤。在真空中除去溶剂,残余物用快速色谱(硅胶)提纯,使用CHCl3/CH3OH/i-PrNH2洗脱,得到0.2g(50%)精胺共轭物(化合物101),其使用2M?HCl/Et2O转化为相应的盐酸盐。

        ?????????????????????????????????????????????????????????????????1HNMR(DMSO-d6)δ1.71-1.76(m,6H),1.95-2.0(m,2H),2.89-3.0(m,10H),3.0-3.15(m,4H),3.74(d,J=15.6Hz,1H),3.87(d,J=15.3Hz,1H),4.10(d,J=16.5Hz,1H),7.35-7.44(m,5H),8.0-8.18(m,4H),8.89(brs,2H),9.15(brs,2H).ESIMS?m/z?422.4(M++1).
        与卵巢癌细胞和MCF-7乳腺癌细胞相比,化合物101对前列腺癌细胞表现出更有效的活性,其IC50(μM)值如下:RH7777(>100),DU145(12.4),PC-3(11.1),LNCaP(26.2),PPC-1(11.7),TSU-Pr1(5.0),MCF-7(>100),CaOv-3(39.3),OVCAR-3(39.7)和SKOv-3(>100)。
        虽然在本文中已经对优选实施方案进行了详细描述,但是在不脱离本发明精神的情况下,本领域技术人员显然可以进行各种修饰、加成、取代等,因此,这些经过修饰、加成、取代等得到的实施方案也包括在由下面权利要求所限定的本发明的范围内?!  ∧谌堇醋宰ɡ鴚ww.www.4mum.com.cn转载请标明出处

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    本文标题:噻唑烷酮酰胺、噻唑烷羧酸酰胺、其制备方法及其用途.pdf
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