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    重庆时时彩是国外的吗: 作为鞘氨醇1-磷酸内皮分化基因受体激动剂的3,4-二取代丙酸酯.pdf

    关 键 词:
    作为 鞘氨醇 磷酸 内皮 分化 基因 受体 激动剂 取代 丙酸
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    摘要
    申请专利号:

    CN200480037208.5

    申请日:

    2004.12.13

    公开号:

    CN1894225A

    公开日:

    2007.01.10

    当前法律状态:

    撤回

    有效性:

    无权

    法律详情: 发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):C07D 271/06公开日:20070110|||实质审查的生效|||公开
    IPC分类号: C07D271/06(2006.01); C07D413/04(2006.01); C07D413/14(2006.01); A61K31/4245(2006.01); A61K31/427(2006.01); A61K31/443(2006.01); A61K31/506(2006.01) 主分类号: C07D271/06
    申请人: 默克公司;
    发明人: V·J·科兰德里; G·A·多赫尔蒂; J·J·哈尔; 霍培; I·E·勒吉克; L·托思; P·瓦查尔; 严林
    地址: 美国新泽西州
    优先权: 2003.12.17 US 60/530,186
    专利代理机构: 中国专利代理(香港)有限公司 代理人: 李连涛
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN200480037208.5

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2011.12.21|||2007.03.07|||2007.01.10

    法律状态类型:

    发明专利申请公布后的视为撤回|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明包括式A化合物及其药物可接受的盐。这些化合物是S1P1/Edg1受体激动剂,并且通过调节白细胞运输、在次级淋巴组织聚集淋巴细胞以及提高血管完整性而具有免疫抑制活性、抗炎活性和止血活性。本发明还涉及包含这样的化合物的药物组合物以及治疗方法或预防方法。

    权利要求书

    1: 一种由下式A表示的化合物或其药物可接受的盐: 其中: R 1 、R 2 、R 3 和R 4 各自独立选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、 C 1-6 烷基、C 2-6 烯基、C 2-6 炔基和C 1-5 烷氧基, 其中所述C 1-6 烷基、C 2-6 烯基、C 2-6 炔基和C 1-5 烷氧基各自任选 被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH、C 1-8 烷氧基和-CO 2 H, R 1 、R 2 、R 3 和R 4 中任意两个基团可以与它们所连接的原子一起 构成3-8个原子的饱和单环,任选包含1-2个氧原子; R 5 选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、C 1-4 烷基、C 2-4 烯基、 C 2-4 炔基和C 1-4 烷氧基, 其中所述C 1-4 烷基、C 2-4 烯基、C 2-4 炔基和C 1-4 烷氧基各自任选 被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-8 烷氧基; R 6 选自苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基和噻吩基,所 述各基团任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、 -I、-CN、-OH、-NR 7 R 8 、-NO 2 、苯基、噻吩基、C 1-4 烷基、C 3-6 环烷 基、C 2-4 烯基、C 2-4 炔基、C 1-4 烷氧基、C 3-6 环烷氧基、C 1-4 烷硫基和 C 2-4 酰氧基, 其中所述苯基、C 1-4 烷基、C 3-6 环烷基、C 2-4 烯基、C 2-4 炔基、C 1-4 烷氧基、C 3-6 环烷氧基、C 1-4 烷硫基和C 1-4 酰氧基各自任选被1个至 最大可取代位置数目的独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、 -I、-OH和C 1-8 烷氧基, R 6 可以在两个相邻原子上被取代以构成9-12个原子的部分芳族 的稠合双环,任选包含1-2个氧和/或硫原子并且任选被1-3个独立选 自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH和C 1-4 烷基; R 7 和R 8 独立选自-H、C 1-6 烷基、C 2-6 烯基和C 2-6 炔基,其中所述 C 1-6 烷基、C 2-6 烯基和C 2-6 炔基各自任选被1-3个独立选自以下的取代 基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-5 烷氧基, R 7 和R 8 可以与它们所连接的氮原子一起构成3-8个原子的饱和 单环,任选包含1-2个氧原子,所述环任选被1-3个独立选自以下的 取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-5 烷氧基; U、V和W独立选自-C(R 9 )-和-N-; 各个R 9 独立选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、C 1-4 烷基、 C 2-4 烯基、C 2-4 炔基和C 1-4 烷氧基, 其中所述C 1-4 烷基、C 2-4 烯基、C 2-4 炔基和C 1-4 烷氧基各自任选 被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-8 烷氧基; 对于U或V,R 9 和R 1 或者R 9 和R 2 可以与它们所连接的原子一 起构成4-8元环,任选包含1-2个氧、硫或N(R 10 )原子,由此构成8- 12个原子的部分芳族的稠合双环系,所述双环包含R 9 连接的6元芳 族环; X、Y和Z独立选自-C(R 11 )=、-O-、-N=、-N(R 12 )-和-S-,这样 所得环与Q和T一起构成芳族杂环; Q和T独立选自 前提条件是Q和T不同时 为 R 10 、R 11 和R 12 各自独立选自-H、C 1-6 烷基、C 2-6 烯基和C 2-6 炔基, 其中所述C 1-6 烷基、C 2-6 烯基和C 2-6 炔基各自任选被1-3个独立选自 以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-5 烷氧基; J选自-CO 2 H、-PO 3 H 2 、-PO 2 H 2 、-SO 3 H、-CONHSO 2 R 13 、 -PO(R 13 )OH、 R 13 选自C 1 -C 4 烷基、苯基、-CH 2 OH和CH(OH)-苯基; 各个R 14 独立选自-H和-CH 3 。
    2: 权利要求1的化合物,所述化合物或其药物可接受的盐由下 式I表示: 其中: R 1 、R 2 、R 3 和R 4 各自独立选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、 C 1-6 烷基、C 2-6 烯基、C 2-6 炔基和C 1-5 烷氧基, 其中所述C 1-6 烷基、C 2-6 烯基、C 2-6 炔基和C 1-5 烷氧基各自任选 被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH、C 1-8 烷氧基和-CO 2 H, R 1 、R 2 、R 3 和R 4 中任意两个基团可以与它们所连接的原子一起 构成3-8个原子的饱和单环,任选包含1-2个氧原子; R 5 选自-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、C 1-4 烷基、C 2-4 烯基、C 2-4 炔基和C 1-4 烷氧基, 其中所述C 1-4 烷基、C 2-4 烯基、C 2-4 炔基和C 1-4 烷氧基各自任选 被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-8 烷氧基; R 6 选自苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基和噻吩基,所 述各基团任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、 -I、-CN、-OH、-NR 7 R 8 、-NO 2 、苯基、C 1-4 烷基、C 3-6 环烷基、C 2-4 烯 基、C 2-4 炔基、C 1-4 烷氧基、C 3-6 环烷氧基、C 1-4 烷硫基和C 2-4 酰氧基, 其中所述苯基、C 1-4 烷基、C 3-6 环烷基、C 2-4 烯基、C 2-4 炔基、C 1-4 烷氧基、C 3-6 环烷氧基、C 1-4 烷硫基和C 1-4 酰氧基各自任选被1个至 最大可取代位置数目的独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、 -I、-OH和C 1-8 烷氧基; R 6 可以在两个相邻原子上被取代以构成9-12个原子的部分芳族 的稠合双环,任选包含1-2个氧和/或硫原子并且任选被1-3个独立选 自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH和C 1-4 烷基; R 7 和R 8 独立选自-H、C 1-6 烷基、C 2-6 烯基和C 2-6 炔基,其中所述 C 1-6 烷基、C 2-6 烯基和C 2-6 炔基各自任选被1-3个独立选自以下的取代 基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-5 烷氧基, R 7 和R 8 可以与它们所连接的氮原子一起构成3-8个原子的饱和 单环,任选包含1-2个氧原子,所述环任选被1-3个独立选自以下的 取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-5 烷氧基; U、V和W独立选自-C(R 9 )-和-N-; 各个R 9 独立选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、C 1-4 烷基、 C 2-4 烯基、C 2-4 炔基和C 1-4 烷氧基, 其中所述C 1-4 烷基、C 2-4 烯基、C 2-4 炔基和C 1-4 烷氧基各自任选 被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-8 烷氧基; 对于U或V,R 9 和R 1 或者R 9 和R 2 可以与它们所连接的原子一 起构成4-8元环,任选包含1-2个氧、硫或N(R 10 )原子,由此构成8- 12个原子的部分芳族的稠合双环系,所述双环包含R 9 连接的6元芳 族环; X、Y和Z独立选自-C(R 11 )=、-O-、-N=、-N(R 12 )-和-S-,这样 所得环与Q和T一起构成芳族杂环; Q和T独立选自 前提条件是Q和T不同时 为 R 10 、R 11 和R 12 各自独立选自-H、C 1-6 烷基、C 2-6 烯基和C 2-6 炔基, 其中所述C 1-6 烷基、C 2-6 烯基和C 2-6 炔基各自任选被1-3个独立选自 以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-5 烷氧基。
    3: 权利要求2的化合物,其中R 5 为甲基。
    4: 权利要求2的化合物,其中R 6 选自苯基和吡啶基,所述各基 团任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:F、-Cl、-Br、-I、-CN、 -OH、-NR 7 R 8 、-NO 2 、C 1-4 烷基、C 3-6 环烷基、C 2-4 烯基、C 2-4 炔基、 C 1-4 烷氧基、C 1-4 烷硫基、C 3-6 环烷氧基和C 1-4 酰氧基, 其中所述C 1-4 烷基、C 3-6 环烷基、C 2-4 烯基、C 2-4 炔基、C 1-4 烷氧 基、C 1-4 烷硫基、C 3-6 环烷氧基和C 1-4 酰氧基各自任选被1个至最大 可取代位置数目的独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、 -OH和C 1-8 烷氧基; R 7 和R 8 独立选自-H、C 1-6 烷基、C 2-6 烯基和C 2-6 炔基,其中所述 C 1-6 烷基、C 2-6 烯基和C 2-6 炔基各自任选被1-3个独立选自以下的取代 基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-5 烷氧基, R 7 和R 8 可以与它们所连接的氮原子一起构成3-8个原子的饱和 单环,任选包含1-2个氧原子,所述环任选被1-3个独立选自以下的 取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-5 烷氧基。
    5: 权利要求2的化合物,其中V和W为-CH-。
    6: 权利要求2的化合物,所述化合物为下式Ia的化合物或其药 物可接受的盐: 其中: R 1 和R 2 独立选自-H、-OH和甲基,或者R 1 和R 2 可以与它们所 连接的原子一起构成环丙基; U和V各自独立选自-C(R 9 )-和-N-; 各个R 9 独立选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、C 1-4 烷基、 C 2-4 烯基、C 2-4 炔基和C 1-4 烷氧基,其中所述C 1-4 烷基、C 2-4 烯基、C 2-4 炔基和C 1-4 烷氧基各自任选被1-3个独立选自以下的取代基取代: -F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-8 烷氧基, 对于U或V,R 9 和R 1 或者R 9 和R 2 可以与它们所连接的原子一 起构成5元环,由此构成9个原子的部分芳族的稠合双环系,所述 双环包含R 9 连接的6元芳族环; A选自-N-和-C(R 13 )-,其中R 13 选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、 -CH 3 、-OCH 3 、-CF 3 、乙炔基、-NO 2 和-NH 2 ; R a 选自NR 7 R 8 、C 1-4 烷基、C 3-6 环烷基、C 1-4 烷氧基、C 3-6 环烷氧 基、C 1-4 烷硫基和C 1-4 酰氧基,其中所述C 1-4 烷基、C 3-6 环烷基、C 1-4 烷氧基、C 3-6 环烷氧基、C 1-4 烷硫基和C 1-4 酰氧基各自任选被1个至 最大可取代位置数目的独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、 -I和-OH; R 7 和R 8 独立选自-H和C 1-6 烷基,任选被1-3个独立选自以下的 取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-5 烷氧基, R 7 和R 8 可以与它们所连接的氮原子一起构成3-8个原子的饱和 单环,任选包含1-2个氧原子,所述环任选被1-3个独立选自以下的 取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-5 烷氧基; R b 选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-CH 3 、-OCH 3 、-CF 3 、乙炔 基、-NO 2 和-NH 2 。
    7: 权利要求2的化合物,所述化合物为下式Ib的化合物或其药 物可接受的盐: 其中: R 1 选自-H、-OH和甲基; A选自-N-和-C(R 13 )-,其中R 13 选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、 -CH 3 、-OCH 3 、-CF 3 、乙炔基、-NO 2 和-NH 2 ; R a 选自NR 7 R 8 、C 1-4 烷基、C 3-6 环烷基、C 1-4 烷氧基、C 3-6 环烷氧 基、C 1-4 烷硫基和C 1-4 酰氧基,其中所述C 1-4 烷基、C 3-6 环烷基、C 1-4 烷氧基、C 3-6 环烷氧基、C 1-4 烷硫基和C 1-4 酰氧基各自任选被1个至 最大可取代位置数目的独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、 -I和-OH; R 7 和R 8 独立选自-H和C 1-6 烷基,任选被1-3个独立选自以下的 取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-5 烷氧基, R 7 和R 8 可以与它们所连接的氮原子一起构成3-8个原子的饱和 单环,任选包含1-2个氧原子,所述环任选被1-3个独立选自以下的 取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-5 烷氧基; R b 选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-CH 3 、-OCH 3 、-CF 3 、乙炔 基、-NO 2 和-NH 2 。
    8: 权利要求2的化合物,所述化合物为下式Ic的化合物或其药 物可接受的盐: 其中: R 1 和R 2 独立选自-H、-OH和甲基,或者R 1 和R 2 可以与它们所 连接的原子一起构成环丙基; U和V各自独立选自-C(R 9 )-和-N-; 各个R 9 独立选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、C 1-4 烷基、 C 2-4 烯基、C 2-4 炔基和C 1-4 烷氧基,其中所述C 1-4 烷基、C 2-4 烯基、C 2-4 炔基和C 1-4 烷氧基各自任选被1-3个独立选自以下的取代基取代: -F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-8 烷氧基, 对于U或V,R 9 和R 1 或者R 9 和R 2 可以与它们所连接的原子一 起构成5元环,由此构成9个原子的部分芳族的稠合双环系,所述 双环包含R 9 连接的6元芳族环; A选自-N-和-C(R 13 )-,其中R 13 选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、 -CH 3 、-OCH 3 、-CF 3 、乙炔基、-NO 2 和-NH 2 ; R a 选自NR 7 R 8 、C 1-4 烷基、C 3-6 环烷基、C 1-4 烷氧基、C 3-6 环烷氧 基、C 1-4 烷硫基和C 1-4 酰氧基,其中所述C 1-4 烷基、C 3-6 环烷基、C 1-4 烷氧基、C 3-6 环烷氧基、C 1-4 烷硫基和C 1-4 酰氧基各自任选被1个至 最大可取代位置数目的独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、 -I和-OH; R 7 和R 8 独立选自-H和C 1-6 烷基,任选被1-3个独立选自以下的 取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-5 烷氧基, R 7 和R 8 可以与它们所连接的氮原子一起构成3-8个原子的饱和 单环,任选包含1-2个氧原子,所述环任选被1-3个独立选自以下的 取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-5 烷氧基; R b 选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-CH 3 、-OCH 3 、-CF 3 、乙炔 基、-NO 2 和-NH 2 。
    9: 权利要求2的化合物,所述化合物为下式Id的化合物或其药 物可接受的盐: 其中: R 1 和R 2 独立选自-H、-OH和甲基,或者R 1 和R 2 可以与它们所 连接的原子一起构成环丙基; U和V各自独立选自-C(R 9 )-和-N-; 各个R 9 独立选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、C 1-4 烷基、 C 2-4 烯基、C 2-4 炔基和C 1-4 烷氧基,其中所述C 1-4 烷基、C 1-4 烯基、C 1-4 炔基和C 1-4 烷氧基各自任选被1-3个独立选自以下的取代基取代: -F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-8 烷氧基, R 9 和R 1 或者R 9 和R 2 可以与它们所连接的原子一起构成5元环, 由此构成9个原子的部分芳族的稠合双环系,所述双环包含R 9 连接 的6元芳族环; A选自-N-和-C(R 13 )-,其中R 13 选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、 -CH 3 、-OCH 3 、-CF 3 、乙炔基、-NO 2 和-NH 2 ; R a 选自NR 7 R 8 、C 1-4 烷基、C 3-6 环烷基、C 1-4 烷氧基、C 3-6 环烷氧 基、C 1-4 烷硫基和C 1-4 酰氧基,其中所述C 1-4 烷基、C 3-6 环烷基、C 1-4 烷氧基、C 3-6 环烷氧基、C 1-4 烷硫基和C 1-4 酰氧基各自任选被1个至 最大可取代位置数目的独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、 -I和-OH; R 7 和R 8 独立选自-H和C 1-6 烷基,任选被1-3个独立选自以下的 取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-5 烷氧基, R 7 和R 8 可以与它们所连接的氮原子一起构成3-8个原子的饱和 单环,任选包含1-2个氧原子,所述环任选被1-3个独立选自以下的 取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C 1-5 烷氧基; R b 选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-CH 3 、-OCH 3 、-CF 3 、乙炔 基、-NO 2 和-NH 2 。
    10: 权利要求2的化合物,所述化合物选自下表的化合物: ??Ex. ??R a ??R b ??A ??U ??R 2 ??R 1 ??1 ??i-PrO- ??-CN ??-CH= ??=CH- ??H ??H ??2 ??i-PrO- ??Cl- ??-CH= ??=CH- ??H ??H ??3 ??i-PrO- ??Br- ??-CH= ??=CH- ??H ??H ??4 ??i-PrO- ??MeO- ??-CH= ??=CH- ??H ??H ??5 ??i-PrO- ??Me- ??-CH= ??=CH- ??H ??H ??6 ??i-PrO- ??F- ??-CH= ??=CH- ??H ??H ??8 ? ? ??i-PrO- ? ? ??-CF 3 ? ? ??-CH= ? ? ??=CH- ? ? ??R 2 和R 3 结合在一起 ??构成环丙基 ? ??9 ??i-PrO- ??-CF 3 ??-CH= ??=CH- ??H ??Me ??10 ??i-PrO- ??-CN ??-CH= ??=CH- ??H ??Me ??11 ??i-PrO- ??-CH 3 ??-CH= ??=CH- ??H ??Me ??12 ??i-PrO- ??-CF 3 ??-CH= ??=CH- ??Me ??H ??13 ??i-PrO- ??-CN ??-CH= ??=CH- ??Me ??H ??14 ??i-PrO- ??-CH 3 ??-CH= ??=CH- ??Me ??H ??15 ??i-PrO- ??Cl- ??-N= ??=CH- ??H ??H ??16 ??i-Pr-NH- ??Cl- ??-N= ??=CH- ??H ??H ??17 ? ??2,2,2-三氟-1-甲基乙 ??氧基 ??Cl- ? ??-N= ? ??=CH- ? ??H ? ??H ? ??18 ??吡咯烷基 ??Cl- ??-N= ??=CH- ??H ??H ??19 ??吗啉-4-基 ??Cl- ??-N= ??=CH- ??H ??H ??20 ??i-Pr-N(Me)- ??Cl- ??-N= ??=CH- ??H ??H ??21 ??2,2,2-三氟乙氧基 ??Cl- ??-N= ??=CH- ??Me ??H ??22 ? ??2,2,2-三氟-1-甲基 ??乙氧基 ??Cl- ? ??-N= ? ??=CH- ? ??Me ? ??H ? ??23 ??3,3-二氟哌啶基 ??Cl- ??-N= ??=CH- ??Me ??H ??24 ??3,3-二氟吡咯烷基 ??Cl- ??-N= ??=CH- ??Me ??H ??25 ??吗啉-4-基 ??-CF 3 ??-N= ??=CH- ??Me ??H ??26 ? ??3,3-二氟吡咯烷基 ? ??Cl- ? ??-N= ? ??=CH- ? ??R 2 和R 3 结合在一起 ??构成环丙基 ??27 ? ??2,2,2-三氟乙氧基 ? ??Cl- ? ??-N= ? ??=CH- ? ??R 2 和R 3 结合在一起 ??构成环丙基 ??28 ? ??2,2,2-三氟-1-甲基 ??乙氧基 ??Cl- ? ??-N= ? ??=CH- ? ??R 2 和R 3 结合在一起 ??构成环丙基 ??29 ? ??1-Me-n-PrO- ? ??Cl- ? ??-N= ? ??=CH- ? ??R 2 和R 3 结合在一起 ??构成环丙基 ??30 ? ??i-PrO- ? ??Cl- ? ??-N= ? ??=CH- ? ??R 2 和R 3 结合在一起 ??构成环丙基 ??31 ??i-Bu- ??Cl- ??-N= ??=CH- ??H ??H ??32 ??i-Pr-N(Me)- ??I- ??-N= ??=CH- ??H ??H ??33 ??i-Pr-N(Me)- ??-CN ??-N= ??=CH- ??H ??H ??34 ??3,3-二氟吡咯烷基 ??I ??-N= ??=CH- ??H ??H ??35 ??3,3-二氟吡咯烷基 ??-CN ??-N= ??=CH- ??H ??H ??36 ? ??i-PrO- ? ??-CN ? ??-CH= ? ??=CH- ? ??R 2 和R 3 结合在一起 ??构成环丙基 ??37 ? ??2,2,2-三氟-1-甲基 ??乙氧基 ??-CN ? ??-CH= ? ??=CH- ? ??R 2 和R 3 结合在一起 ??构成环丙基 ??38 ? ??i-PrO- ? ??MeO- ? ??-CH= ? ??=CH- ? ??R 2 和R 3 结合在一起 ??构成环丙基 ??39 ? ??2,2,2-三氟乙氧基- ? ??-CN ? ??-CH= ? ??=CH- ? ??R 2 和R 3 结合在一起 ??构成环丙基 ??40 ??2,2,2-三氟-1- ??-CN ??-CH= ??=CH- ??R 2 和R 3 结合在一起 ??三氟甲基乙氧基 ??构成环丙基 ??43 ? ??1-Me-n-PrO- ? ??-CN ? ??-CH= ? ??=CH- ? ??R 2 和R 3 结合在一起 ??构成环丙基 ??44 ? ??2,2,2-三氟-1-甲基乙 ??氧基 ??-CN ? ??-N= ? ??=CH- ? ??R 2 和R 3 结合在一起 ??构成环丙基 ??45 ? ??i-PrO- ? ??I ? ??-N= ? ??=CH- ? ??R 2 和R 3 结合在一起 ??构成环丙基 ??48 ??乙氧基 ??-CN ??-N= ??=CH- ??H ??H ??49 ? ??2,2,2-三氟-1-甲基乙 ??氧基 ??-CN ? ??-N= ? ??=CH- ? ??H ? ??H ? ??50 ??2-Me-n-Pr- ??-CN ??-N= ??=CH- ??H ??H ??51 ? ??2-甲基-1,1-二氟-正 ??丙基 ??H ? ??-CH= ? ??=CH- ? ??H ? ??H ? ??52 ? ??2,2,2-三氟-1-甲基乙 ??氧基 ??I- ? ??-N= ? ??=CH- ? ??H ? ??H ? ??53 ??环戊基氧基 ??Cl- ??-CH= ??=CH- ??H ??H ??54 ??2-Me-n-PrO- ??Cl- ??-CH= ??=CH- ??H ??H ??55 ? ??2,2,2-三氟-1-甲基乙 ??氧基 ??-CN ? ??-CH= ? ??=CH- ? ??H ? ??H ? ??56 ? ??2,2,2-三氟-1-甲基乙 ??氧基 ??Cl- ? ??-CH= ? ??=CH- ? ??H ? ??H ? ??57 ??i-PrO- ??Cl- ??-C(Cl)= ??=CH- ??H ??H ??58 ??环丙基甲氧基 ??Cl- ??-CH= ??=CH- ??H ??H ??60 ? ??2,2,2-三氟-1-甲基乙 ??氧基 ??-NO 2 ? ??-CH= ? ??=CH- ? ??H ? ??H ? ??61 ??2,2,2-三氟乙氧基 ??-CN ??-CH= ??=CH- ??H ??H ??62 ? ??2,2,2-三氟-1-三氟甲 ??基乙氧基 ??-CN ? ??-CH= ? ??=CH- ? ??H ? ??H ? ??63 ??1-Me-n-PrO- ??-CN ??-CH= ??=CH- ??H ??H ??65 ? ??2,2,2-三氟-1-甲基乙 ??氧基 ??-NH 2 ? ??-CH= ? ??=CH- ? ??H ? ??H ? ??66 ??1-Me-n-PrO- ??-CN ??-CH= ??=CH- ??Me ??H ??67 ? ??2,2,2-三氟-1-三氟 ??甲基乙氧基 ??-CN ? ??-CH= ? ??=CH- ? ??Me ? ??H ? ??68 ??2,2,2-三氟乙氧基 ??-CN ??-CH= ??=CH- ??Me ??H ??69 ??i-PrO- ??-CN ??-CH= ??=N- ??H ??H ??70 ? ??2,2,2-三氟-1-甲基 ??乙氧基 ??-CN ? ??-N= ? ??=N- ? ??H ? ??H ? ??71 ??2,2,2-三氟乙氧基 ??-CN ??-CH= ??=N- ??H ??H ??72 ? ??2,2,2-三氟-1-三氟 ??甲基乙氧基 ??-CN ? ??-CH= ? ??=N- ? ??H ? ??H ? ??73 ??2,2,2-三氟乙氧基 ??-CN ??-CH= ??=N- ??Me ??H ??74 ? ??2,2,2-三氟-1-甲基 ??乙氧基 ??-CN ? ??-N= ? ??=N- ? ??Me ? ??H ? ??75 ??i-PrO- ??-CF 3 ??-CH= ??=CH- ??H ??H ??79 ??i-PrO- ??-CN ??-CH= ??=CH- ??OH ??OH ??80 ??i-PrO- ??-CN ??-CH= ??=CH- ??OH ??OH 或者任何以上化合物的药物可接受的盐。
    11: 权利要求2的化合物,所述化合物选自下表的化合物: 或者任何以上化合物的药物可接受的盐。
    12: 一种治疗需要这种治疗的哺乳动物患者的免疫调节异常的方 法,该方法包括给予所述患者治疗所述免疫调节异常有效量的权利 要求1的化合物。
    13: 权利要求12的方法,其中所述免疫调节异常是选自以下的 自身免疫性疾病或慢性炎性疾?。合低承院彀呃谴?、慢性类风湿性 关节炎、I型糖尿病、炎性肠病、胆汁性肝硬化、葡萄膜炎、多发性 硬化、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎、大疱性类天疱疮、结节病、 银屑病、自身免疫性肌炎、韦格纳肉芽肿病、鱼鳞病、格雷夫斯眼 病和哮喘。
    14: 权利要求12的方法,其中所述免疫调节异常是骨髓或器官 移植排斥反应或者移植物抗宿主病。
    15: 权利要求12的方法,其中所述免疫调节异常选自:器官或 组织移植、移植引起的移植物抗宿主病、自身免疫综合征,包括类 风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、桥本甲状腺炎、多发性硬化、重 症肌无力、I型糖尿病、葡萄膜炎、后葡萄膜炎、变应性脑脊髓炎、 肾小球肾炎、感染后自身免疫性疾病包括风湿热和感染后肾小球肾 炎、炎性和高增生性皮肤病、银屑病、特应性皮炎、接触性皮炎、 湿疹性皮炎、脂溢性皮炎、扁平苔藓、天疱疮、大疱性类天疱疮、 大疱性表皮松解症、荨麻疹、血管性水肿、血管炎、红斑、皮肤嗜 酸粒细胞增多、红斑狼疮、痤疮、斑秃、角膜结膜炎、春季结膜炎、 贝切特氏病相关性葡萄膜炎、角膜炎、疱疹性角膜炎、圆锥形角膜、 角膜上皮营养不良、角膜白斑、眼天疱疮、莫伦溃疡、巩膜炎、格 雷夫斯眼病、伏格特-小柳-原田综合征、结节病、花粉变态反应、可 逆阻塞性气道疾病、支气管哮喘、变应性哮喘、内源性哮喘、外源 性哮喘、尘埃性哮喘、慢性或顽固性哮喘、晚期哮喘和气道高反应 性、支气管炎、胃溃疡、局部缺血疾病和血栓形成引起的血管损伤、 缺血性肠病、炎性肠病、坏死性小肠结肠炎、热灼伤相关性肠损伤、 乳糜泻、直肠炎、嗜酸细胞性胃肠炎、肥大细胞病、节段性回肠炎、 溃疡性结肠炎、偏头痛、鼻炎、湿疹、间质性肾炎、古德帕斯彻综 合征、溶血性尿毒症综合征、糖尿病性肾病、多发性肌炎、格-巴二 氏综合征、梅尼埃尔氏病、多神经炎、多发性神经炎、单神经炎、 神经根病、甲状腺机能亢进、突眼性甲状腺肿、纯红细胞再生障碍、 再生障碍性贫血、再生不良性贫血、特发性血小板减少性紫癜、自 身免疫性溶血性贫血、粒细胞缺乏症、恶性贫血、巨红细胞性贫血、 红细胞发生不能、骨质疏松症、结节病、肺纤维症、特发性间质性 肺炎、皮肌炎、寻常白斑病、寻常鱼鳞病、光过敏、皮肤T细胞淋 巴瘤、动脉硬化、动脉粥样硬化、主动脉炎综合征、结节性多动脉 炎、非炎性心肌病、硬皮病、韦格纳肉芽肿病、斯耶格伦综合征、 肥胖症、嗜酸性筋膜炎、齿龈损伤、牙周组织损伤、牙槽骨损伤、 牙骨质损伤、肾小球肾炎、通过预防脱发或者使头发萌生和/或促进 头发产生及头发生长进行治疗的男性型脱发或老年性脱发、肌肉萎 缩症、脓皮病和赛塞利综合征、阿狄森氏病、在进行保存、移植或 患上缺血性疾病时发生的器官缺血-再灌注损伤、内毒素休克、假膜 性结肠炎、药物或辐射引起的结肠炎、缺血性急性肾功能不全、慢 性肾功能不全、肺氧或药物引起的中毒症、肺癌、肺气肿、白内障、 铁质沉着病、色素性视网膜炎、老年性黄斑变性、玻璃体瘢痕形成、 角膜碱烧伤、皮炎多形性红斑、线状IgA大疱性皮炎和水泥性皮炎、 龈炎、牙周炎、脓毒病、胰腺炎、由环境污染、衰老、致癌作用、 癌转移和低气压病引起的疾病、组胺或白三烯-C 4 释放引起的疾病、 贝切特氏病、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、硬化性胆管 炎、部分肝切除、急性肝坏死、由毒素、病毒性肝炎、休克或缺氧 引起的坏死、乙型肝炎、非甲/非乙型肝炎、肝硬化、酒精性肝硬化、 肝衰竭、暴发性肝衰竭、迟发性肝衰竭、“慢性加急性”肝衰竭、 化疗作用的扩大、巨细胞病毒感染、HCMV感染、爱滋病、癌症、 老年性痴呆、创伤和慢性细菌感染。
    16: 权利要求12的方法,其中所述免疫调节异常选自 1)多发性硬化, 2)类风湿性关节炎, 3)系统性红斑狼疮, 4)银屑病, 5)移植器官或组织的排斥反应, 6)炎性肠病, 7)源自淋巴的恶性肿瘤, 8)急性和慢性淋巴细胞白血病和淋巴瘤,和 9)胰岛素和非胰岛素依赖性糖尿病。
    17: 一种对需要免疫抑制的哺乳动物患者抑制免疫系统的方法, 该方法包括给予所述患者免疫抑制有效量的权利要求1的化合物。
    18: 一种药物组合物,该组合物包含权利要求1的化合物以及药 物可接受的载体。
    19: 一种治疗需要这种治疗的哺乳动物患者的呼吸道疾病的方 法,该方法包括给予所述患者治疗所述呼吸道疾病有效量的权利要 求1的化合物。
    20: 权利要求19的方法,其中所述呼吸道疾病选自哮喘、慢性 支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、成人呼吸窘迫综合征、婴儿呼吸窘 迫综合征、咳嗽、嗜酸性肉芽肿、呼吸道合胞病毒细支气管炎、支 气管扩张、特发性肺纤维化、急性肺损伤和闭塞性细支气管炎伴机 化性肺炎。
    21: 一种治疗需要这种治疗的患者的血管完整相关性疾病的方 法,其中所述疾病选自血管性水肿、血管炎、局部缺血疾病和血栓 形成引起的血管损伤、缺血性肠病、炎性肠病、坏死性小肠结肠炎、 热灼伤相关性肠损伤、动脉硬化、动脉粥样硬化、主动脉炎综合征、 在进行保存、移植或患上缺血性疾病时发生的器官缺血-再灌注损伤、 内毒素休克、假膜性结肠炎、药物或辐射引起的结肠炎、缺血性急 性肾功能不全、慢性肾功能不全、肺氧或药物引起的中毒症、脓毒 病、胰腺炎、组胺或白三烯-C 4 释放引起的疾病、由毒素、病毒性肝 炎、休克或缺氧引起的坏死、老年性痴呆和创伤,该方法包括给予 所述患者治疗所述疾病有效量的权利要求1的化合物。
    22: 一种治疗需要这种治疗的患者的脑水肿或肺水肿相关性疾病 的方法,该方法包括给予所述患者治疗所述疾病有效量的权利要求1 的化合物。
    23: 权利要求22的方法,其中所述疾病选自休克、脓毒病、急 性呼吸窘迫综合征和脑水肿。
    24: 权利要求1的化合物,所述化合物为下式If的化合物或其 药物可接受的盐: 其中: R 1 和R 2 为-H,或者R 1 和R 2 可以与它们所连接的原子一起构成 环丙基; U和V为-C(R 9 )-; 各个R 9 为-H,或者 对于U或V,R 9 和R 1 或者R 9 和R 2 可以与它们所连接的原子一 起构成5元环,由此构成9个原子的部分芳族的稠合双环系,所述 双环包含R 9 连接的苯环; R a 选自C 1-4 烷氧基和C 3-6 环烷氧基,所述C 1-4 烷氧基和C 3-6 环烷 氧基任选被1个至最大可取代位置数目的氟取代; R b 选自C 1-4 烷基和C 2-4 烯基。
    25: 权利要求24的化合物,所述化合物选自下列化合物: 或者任何以上化合物的药物可接受的盐。
    26: 权利要求1的化合物,所述化合物为下式Ig的化合物或其 药物可接受的盐: 其中: A选自-N-或-CH-; 选自下列基团: R 1 和R 2 为-H,或者R 1 和R 2 可以与它们所连接的原子一起构成 环丙基; U和V为-C(R 9 )-; 各个R 9 为-H,或者 对于U或V,R 9 和R 1 或者R 9 和R 2 可以与它们所连接的原子一 起构成5元环,由此构成9个原子的部分芳族的稠合双环系,所述 双环包含R 9 连接的苯环; R a 选自噻吩基、NR 7 R 8 、C 1-4 烷基、C 3-6 环烷基、C 1-4 烷氧基和C 3-6 环烷氧基,其中所述C 1-4 烷基、C 3-6 环烷基、C 1-4 烷氧基和C 3-6 环烷 氧基各自任选被1个至最大可取代位置数目的氟取代; R 7 和R 8 独立选自-H和C 1-6 烷基,任选被1-3个氟取代, R 7 和R 8 可以与它们所连接的氮原子一起构成3-8个原子的饱和 单环,所述环任选被1-3个氟取代。
    27: 权利要求26的化合物,所述化合物选自下列化合物: 或者任何以上化合物的药物可接受的盐。
    28: 权利要求1的化合物,所述化合物为下式Ih的化合物或其 药物可接受的盐: 其中: A选自-N-或-CH-; 选自下列基团: R 1 和R 2 为-H,或者R 1 和R 2 可以与它们所连接的原子一起构成 环丙基; R 5 为-H或-CH 3 ; U和V为-C(R 9 )-; 各个R 9 为-H,或者 对于U或V,R 9 和R 1 或者R 9 和R 2 可以与它们所连接的原子一 起构成5元环,由此构成9个原子的部分芳族的稠合双环系,所述 双环包含R 9 连接的苯环; R a 选自-F、NR 7 R 8 、C 1-4 烷基、C 3-6 环烷基、C 1-4 烷氧基和C 3-6 环 烷氧基,其中所述C 1-4 烷基、C 3-6 环烷基、C 1-4 烷氧基和C 3-6 环烷氧 基各自任选被1个至最大可取代位置数目的氟取代; R 7 和R 8 独立选自-H和C 1-6 烷基,任选被1-3个氟取代, R 7 和R 8 可以与它们所连接的氮原子一起构成3-8个原子的饱和 单环,所述环任选被1-3个氟取代; R b 为Cl或I; J选自-CO 2 H、-PO 3 H 2 、-PO 2 H 2 、-SO 3 H、-CONHSO 2 R 13 、 -PO(R 13 )OH, R 13 选自C 1 -C 4 烷基、苯基、-CH 2 OH和CH(OH)-苯基; 各个R 14 独立选自-H和-CH 3 。
    29: 权利要求28的化合物,其中: 对于U来讲,R 9 和R 1 与它们所连接的原子一起构成5元环,由 此构成9个原子的部分芳族的稠合双环系,所述双环包含R 9 连接的 苯环; R 5 为CH 3 ; R b 为Cl; J选自-CO 2 H、 其中各个R 14 独立选自-H和-CH 3 。
    30: 权利要求28的化合物,所述化合物选自下列化合物: 或者任何以上化合物的药物可接受的盐。

    说明书


    作为鞘氨醇1-磷酸(内皮分化基因)受体激动剂的(3,4-二取代)丙酸酯

        【发明背景】

        本发明涉及为S1P1/Edg1受体激动剂的化合物,这些化合物可调节白细胞运输、在次级淋巴组织聚集淋巴细胞以及提高血管完整性,因此具有免疫抑制活性、抗炎活性和止血活性。本发明还涉及包含这样的化合物的药物组合物以及治疗方法或预防方法。

        已经证实免疫抑制药和抗炎药可用于许多自身免疫性疾病和慢性炎性疾病(包括系统性红斑狼疮、慢性类风湿性关节炎、I型糖尿病、炎性肠病、胆汁性肝硬化、葡萄膜炎、多发性硬化以及其它疾病,例如节段性回肠炎(Crohn′s?disease)、溃疡性结肠炎、大疱性类天疱疮、结节病、银屑病、自身免疫性肌炎、韦格纳肉芽肿病(Wegener′sgranulomatosis)、鱼鳞病、格雷夫斯眼病(Graves?ophthalmopathy)、特应性皮炎和哮喘)、慢性肺病、急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征和脓毒病?;怪な邓强捎糜谥瘟瓢┲?、淋巴瘤和白血病的化疗方案。

        尽管上述各种疾病的基础发病机理可能完全不同,但是它们的共同之处是激活免疫系统以及出现各种自身抗体、自反应性淋巴细胞和/或激活参与先天免疫的细胞。这样的自反应性可能是部分因为丧失体内平衡控制而造成,正常的免疫系统运作在体内平衡控制下进行。类似地,在骨髓或器官移植之后,宿主免疫细胞识别外来的组织抗原,并开始产生细胞应答和体液应答,包括导致移植排斥反应的抗体、细胞因子和细胞毒性淋巴细胞。

        自身免疫作用或排斥作用的一种最终后果是增加血管通透性以及由炎性细胞和它们释放的介质引起的组织破坏作用??寡滓?例如NSAID)主要通过阻滞上述介质的作用或分泌而起作用,但不能改善疾病的免疫基础。另一方面,细胞毒性药(例如环磷酰胺)以非特异性方式作用,使得正常应答和自身免疫应答均被阻断。事实上,与死于自身免疫性疾病一样,用这样的非特异性免疫抑制药治疗的患者很可能死于感染。

        环孢菌素A是一种预防移植器官排斥反应的药物。FK-506是另一种被批准用于预防移植器官(尤其是肝脏移植)排斥反应的药物。身体免疫系统动员它的巨大天然?;ひ蜃涌庖耘懦庖浦驳耐饫吹鞍?,环孢菌素A和FK-506就是通过抑制免疫系统而起作用?;锋呔谹被批准用于治疗严重的银屑病,并且已被欧洲管理机构批准用于治疗特应性皮炎。

        尽管环孢菌素A和FK-506有效延迟或抑制移植排斥反应,但是它们可引起多种不良副作用,包括肾毒性、神经毒性和胃肠不适。因此,仍然需要开发没有上述副作用的免疫抑制剂,并且也非常需要这样的免疫抑制剂。

        免疫抑制化合物FTY720是目前在进行临床试验的淋巴细胞聚集剂。FTY720在哺乳动物体内代谢为鞘氨醇1-磷酸受体的有效激动剂化合物。激动鞘氨醇1-磷酸受体将调节白细胞运输,诱导淋巴结和派伊尔氏淋巴集结中的淋巴细胞(T细胞和B细胞)聚集而不会造成淋巴细胞缺乏,并且破坏脾构造,由此干扰T细胞依赖性抗体应答。S1P受体激动剂还通过增强内皮完整性以及抑制激活免疫系统引发的血管损伤而具有抗炎特性。需要这样的免疫抑制和消炎作用来防止器官移植后的排斥反应,治疗自身免疫性疾病以及治疗主要缺陷在于血管完整性的疾病,例如急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征和脓毒病,参见Groeneveld,A.B.J.2003.Vascular?Pharm.39:247-256。

        鞘氨醇1-磷酸是有生物活性的鞘脂类代谢物,由造血细胞分泌,贮存在血小板内并从活化血小板释放。Yatomi,Y.,T.Ohmori,G.Rile,F.Kazama,H.Okamoto,T.Sano,K.Satoh,S.Kume,G.Tigyi,Y.Igarashi和Y.Ozaki.2000.Blood.96:3431-8。它作为激动剂作用于G蛋白偶联受体家族以调节细胞增殖、分化、存活以及运动。Fukushima,N.,I.Ishii,J.J.A.Contos,J.A.Weiner和J.Chun.2001.Lysophospholipid?Receptors(溶血磷脂受体).Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.41:507-34;Hla,T.,M.-J.Lee,N.Ancellin,J.H.Paik和M.J.Kluk.2001.Lysophospholipids-Receptor?revelations(溶血磷脂-受体的新发现).Science.294:1875-1878;Spiegel,S.和S.Milstien.2000.Functions?of?a?new?family?of?sphingosine-1-phosphate?Receptors(新的鞘氨醇-1-磷酸受体家族的功能).Biochim.Biophys.Acta.1484:107-16;Pyne,S.和N.Pyne.2000.Sphingosine-1-phosphate?signalling?via?theendothelial?differentiation?gene?family?of?G-protein?coupled?Receptors(鞘氨醇-1-磷酸信号通过G蛋白偶联受体的内皮分化基因家族传导)。Pharm.&?Therapeutics.88:115-131。已经鉴定出5种鞘氨醇1-磷酸受体(S1P1、S1P2、S1P3、S1P4和S1P5,也称为内皮分化基因Edg1、Edg5、Edg3、Edg6、Edg8),它们广泛分布于细胞和组织,并且很好地保存于人和啮齿动物(参见下表)。结合S1P受体引起通过Gq-、Gi/o、G12-、G13-和Rho-依赖性途径的信号转导。已证实S1P1和S1P3的配体通过Rac-和Rho-诱导性激活作用促进血管生成、趋化性以及粘着连接装配,参见Lee,M.-J.,S.Thangada,K.P.Claffey,N.Ancellin,C.H.Liu,M.Kluk,M.Volpi,R.I.Sha′afi和T.Hla.1999.Cell.99:301-12。通过S1P受体(主要是S1P1)装配皮质肌动蛋白细胞骨架结构并增强细胞与细胞的连接以及细胞与胞外基质相互作用,S1P增强内皮屏障的完整性,参见Garcia,J.G.N,F.Liu,A.D.Verin,A.Birukova,M.A.Dechert,W.T.Gerthoffer,J.R.Bamburg,D.English,2001.J.Clin.Invest.108:689-701,S1P受体激动剂(包括FTY720)能够在小鼠抑制VEGF诱导的血管通透性,参见Sanchez,T.,T.Estrada-Hernandez,J.-H.Paik,M.-T.Wu,K.Venkataraman,V.Brinkmann,K.Claffey和T.Hla.2003.J.Biol.Chem.278:47281-47290。

        给予动物鞘氨醇1-磷酸将诱导外周血中淋巴细胞聚集到次级淋巴器官,由此产生有用的治疗性免疫抑制作用,参见Mandala,S.,R.Hajdu,J.Bergstrom,E.Quackenbush,J.Xie,J.Milligan,R.Thornton,G.-J.Shei,D.Card,C.Keohane,M.Rosenbach,J.Hale,C.L.Lynch,K.Rupprecht,W.Parsons,H.Rosen.2002.Science.296:346-349。然而,鞘氨醇1-磷酸还具有心血管及支气管收缩作用,这类作用限制了它作为治疗药物的用途。静脉给予鞘氨醇1-磷酸将使大鼠的心率减少、心室收缩减弱和血压降低,参见Sugiyama,A.,N.N.Aye,Y.Yatomi,Y.Ozaki和K.Hashimoto.2000.Jpn.J.Pharmacol.82:338-342。在人气道平滑肌细胞中,鞘氨醇1-磷酸调节促进支气管收缩、气道炎症以及哮喘中气道重塑的收缩、细胞生长以及细胞因子的产生,参见Ammit,A.J.,A.T.Hastie,L.C.Edsall,R.K.Hoffman,Y.Amrani,V.P.Krymskaya,S.A.Kane,S.P.Peters,R.B.Penn,S.Spiegel,R.A.Panettieri.Jr.2001,FASEB?J.15:1212-1214。鞘氨醇1-磷酸的不良作用与它对所有S1P受体的非选择性有效激动剂活性有关。

        本发明包括S1P1/Edg1受体的激动剂,它们相对S1P3/Edg3受体具有选择性。S1P1/Edg1受体选择性激动剂相对现有疗法具有优势,拓宽了淋巴细胞聚集药和血管完整药的治疗窗,使得在较高给药剂量下具有更好的耐受性,因此提高单一疗法的功效。

        虽然免疫抑制剂和抗炎剂主要用于治疗骨髓、器官以及移植物的排斥反应,但是这些化合物的其它用途包括治疗关节炎(特别是类风湿性关节炎)、胰岛素依赖性糖尿病、非胰岛素依赖性糖尿病、多发性硬化、银屑病、炎性肠病、节段性回肠炎、红斑狼疮、哮喘、变态反应、慢性肺病、急性肺损伤、急性呼吸道疾病、脓毒病等。

        因此,本发明主要提供比以前的化合物更安全、更有效的免疫抑制剂和血管完整性化合物。根据本文的描述,以上及其它目的对于本领域普通技术人员来讲是显而易见的。

        S1P受体一览表??名称??同义词??偶联的G蛋白??mRNA表达??S1P1??Edg1,LPB1??Gi/o??广泛分布,内皮细胞??S1P2??Edg5,LPB2,??AGR16,H218??Gi/o,Gq,G12/13??广泛分布,血管平滑肌??细胞??S1P3??Edg3,LPB3??Gi/o,Gq,G12/13??广泛分布,内皮细胞??S1P4??Edg6,LPC1??Gi/o??淋巴组织,淋巴细胞系??S1P5??Edg8,LPB4,??NRG1??Gi/o??脑,脾

        发明概述

        本发明包括下式A的化合物及其药物可接受的盐:

        这些化合物是S1P1/Edg1受体激动剂,可调节白细胞运输、在次级淋巴组织聚集淋巴细胞以及提高血管完整性,因此具有免疫抑制活性、抗炎活性和止血活性。本发明还涉及包含这样的化合物的药物组合物以及治疗方法或预防方法。

        发明详述

        本发明包括下式I的化合物或其药物可接受的盐:

        其中:

        R1、R2、R3和R4各自独立选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和C1-5烷氧基,

        其中所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和C1-5烷氧基各自任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH、C1-8烷氧基和-CO2H,

        R1、R2、R3和R4中任意两个基团可以与它们所连接的原子一起构成3-8个原子的饱和单环,任选包含1-2个氧原子;

        R5选自-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C1-4烷氧基,

        其中所述C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C1-4烷氧基各自任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-8烷氧基;

        R6选自苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基(pyridizinyl)和噻吩基,所述各基团任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、-NR7R8、-NO2、苯基、C1-4烷基、C3-6环烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、C3-6环烷氧基、C1-4烷硫基和C2-4酰氧基,

        其中所述苯基、C1-4烷基、C3-6环烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、C3-6环烷氧基、C1-4烷硫基和C1-4酰氧基各自任选被1个至最大可取代位置数目的独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-8烷氧基;

        R6可以在两个相邻原子上被取代以构成9-12个原子的部分芳族的稠合双环,任选包含1-2个氧和/或硫原子并且任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH和C1-4烷基;

        R7和R8独立选自-H、C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基,其中所述C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基各自任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-5烷氧基,

        R7和R8可以与它们所连接的氮原子一起构成3-8个原子的饱和单环,任选包含1-2个氧原子,所述环任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-5烷氧基;

        U、V和W独立选自-C(R9)-和-N-;

        各个R9独立选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C1-4烷氧基,

        其中所述C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C1-4烷氧基各自任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-8烷氧基;

        对于U或V,R9和R1或者R9和R2可以与它们所连接的原子一起构成4-8元环,任选包含1-2个氧、硫或N(R10)原子,由此构成8-12个原子的部分芳族的稠合双环系,所述双环包含R9连接的6元芳族环;

        X、Y和Z独立选自-C(R11)=、-O-、-N=、-N(R12)-和-S-,这样所得环与Q和T一起构成芳族杂环;

        Q和T独立选自或前提条件是Q和T不同时为

        R10、R11和R12各自独立选自-H、C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基,其中所述C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基各自任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-5烷氧基。

        在两个相邻原子上被取代构成9-12个原子的部分芳族的稠合双环且任选包含1-2个氧和/或硫原子的R6包括例如二氢喹啉、四氢喹啉、色满、二氢苯并噻喃等。

        X、Y、Z、Q和T构成的芳族杂环包括例如吡咯、呋喃、噻吩、吡唑、咪唑、_唑、异_唑、噻唑、异噻唑、三唑、_二唑、噻二唑和四唑。

        本发明的一个实施方案包括这样的式I化合物:其中R5为甲基。

        本发明的另一个实施方案包括这样的式I化合物:其中R6选自苯基和吡啶基,所述各基团任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、-NR7R8、-NO2、C1-4烷基、C3-6环烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、C3-6环烷氧基和C1-4酰氧基,其中所述C1-4烷基、C3-6环烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、C3-6环烷氧基和C1-4酰氧基各自任选被1个至最大可取代位置数目的独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-8烷氧基;

        R7和R8独立选自-H、C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基,其中所述C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基各自任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-5烷氧基,

        R7和R8可以与它们所连接的氮原子一起构成3-8个原子的饱和单环,任选包含1-2个氧原子,所述环任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-5烷氧基。

        本发明的另一个实施方案包括这样的式I化合物:其中V和W为-CH-。

        本发明的另一个实施方案包括下式Ia的化合物或其药物可接受的盐:

        其中:

        R1和R2独立选自-H、-OH和甲基,或者R1和R2可以与它们所连接的原子一起构成环丙基;

        U和V各自独立选自-C(R9)-和-N-;

        各个R9独立选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C1-4烷氧基,其中所述C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C1-4烷氧基各自任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-8烷氧基,

        对于U或V,R9和R1或者R9和R2可以与它们所连接的原子一起构成5元环,由此构成9个原子的部分芳族的稠合双环系,所述双环包含R9连接的6元芳族环;

        A选自-N-和-C(R13)-,其中R13选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-CH3、-OCH3、-CF3、乙炔基、-NO2和-NH2;

        Ra选自NR7R8、C1-4烷基、C3-6环烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷氧基、C1-4烷硫基和C1-4酰氧基,其中所述C1-4烷基、C3-6环烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷氧基、C1-4烷硫基和C1-4酰氧基各自任选被1个至最大可取代位置数目的独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I和-OH;

        R7和R8独立选自-H和C1-6烷基,任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-5烷氧基,

        R7和R8可以与它们所连接的氮原子一起构成3-8个原子的饱和单环,任选包含1-2个氧原子,所述环任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-5烷氧基;

        Rb选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-CH3、-OCH3、-CF3、乙炔基、-NO2和-NH2。

        本发明的另一个实施方案包括下式Ib的化合物或其药物可接受的盐:

        其中:

        R1选自-H、-OH和甲基;

        A选自-N-和-C(R13)-,其中R13选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-CH3、-OCH3、-CF3、乙炔基、-NO2和-NH2;

        Ra选自NR7R8、C1-4烷基、C3-6环烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷氧基、C1-4烷硫基和C1-4酰氧基,其中所述C1-4烷基、C3-6环烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷氧基、C1-4烷硫基和C1-4酰氧基各自任选被1个至最大可取代位置数目的独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I和-OH;

        R7和R8独立选自-H和C1-6烷基,任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-5烷氧基,

        R7和R8可以与它们所连接的氮原子一起构成3-8个原子的饱和单环,任选包含1-2个氧原子,所述环任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-5烷氧基;

        Rb选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-CH3、-OCH3、-CF3、乙炔基、-NO2和-NH2。

        本发明的另一个实施方案包括下式Ic的化合物或其药物可接受的盐:

        其中:

        R1和R2独立选自-H、-OH和甲基,或者R1和R2可以与它们所连接的原子一起构成环丙基;

        U和V各自独立选自-C(R9)-和-N-;

        各个R9独立选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C1-4烷氧基,其中所述C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C1-4烷氧基各自任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-8烷氧基,

        对于U或V,R9和R1或者R9和R2可以与它们所连接的原子一起构成5元环,由此构成9个原子的部分芳族的稠合双环系,所述双环包含R9连接的6元芳族环;

        A选自-N-和-C(R13)-,其中R13选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-CH3、-OCH3、-CF3、乙炔基、-NO2和-NH2;

        Ra选自NR7R8、C1-4烷基、C3-6环烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷氧基、C1-4烷硫基和C1-4酰氧基,其中所述C1-4烷基、C3-6环烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷氧基、C1-4烷硫基和C1-4酰氧基各自任选被1个至最大可取代位置数目的独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I和-OH;

        R7和R8独立选自-H和C1-6烷基,任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-5烷氧基,

        R7和R8可以与它们所连接的氮原子一起构成3-8个原子的饱和单环,任选包含1-2个氧原子,所述环任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-5烷氧基;

        Rb选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-CH3、-OCH3、-CF3、乙炔基、-NO2和-NH2。

        本发明的另一个实施方案包括下式Id的化合物或其药物可接受的盐:

        其中:

        R1和R2独立选自-H、-OH和甲基,或者R1和R2可以与它们所连接的原子一起构成环丙基;

        U和V各自独立选自-C(R9)-和-N-;

        各个R9独立选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C1-4烷氧基,其中所述C1-4烷基、C1-4烯基、C1-4炔基和C1-4烷氧基各自任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-8烷氧基,

        R9和R1或者R9和R2可以与它们所连接的原子一起构成5元环,由此构成9个原子的部分芳族的稠合双环系,所述双环包含R9连接的6元芳族环;

        A选自-N-和-C(R13)-,其中R13选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-CH3、-OCH3、-CF3、乙炔基、-NO2和-NH2;

        Ra选自NR7R8、C1-4烷基、C3-6环烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷氧基、C1-4烷硫基和C1-4酰氧基,其中所述C1-4烷基、C3-6环烷基、C1-4烷氧基、C3-6环烷氧基、C1-4烷硫基和C1-4酰氧基各自任选被1个至最大可取代位置数目的独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I和-OH;

        R7和R8独立选自-H和C1-6烷基,任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-5烷氧基,

        R7和R8可以与它们所连接的氮原子一起构成3-8个原子的饱和单环,任选包含1-2个氧原子,所述环任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-5烷氧基;

        Rb选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-CH3、-OCH3、-CF3、乙炔基、-NO2和-NH2。

        在下文的实施例中进一步举例说明本发明。

        本发明还包括一种治疗需要这种治疗的哺乳动物患者的免疫调节异常的方法,该方法包括给予所述患者治疗所述免疫调节异常有效量的式I化合物或式A化合物。

        本实施方案包括在以上方法中,其中所述免疫调节异常选自以下的自身免疫性疾病或慢性炎性疾?。合低承院彀呃谴?、慢性类风湿性关节炎、I型糖尿病、炎性肠病、胆汁性肝硬化、葡萄膜炎、多发性硬化、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎、大疱性类天疱疮、结节病、银屑病、自身免疫性肌炎、韦格纳肉芽肿病、鱼鳞病、格雷夫斯眼病和哮喘。

        本实施方案也包括在以上方法中,其中所述免疫调节异常是骨髓或器官移植排斥反应或移植物抗宿主病。

        本实施方案也包括在以上方法中,其中所述免疫调节异常选自器官或组织移植、移植引起的移植物抗宿主病、自身免疫综合征,包括类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、桥本甲状腺炎(Hashimoto′sthyroiditis)、多发性硬化、重症肌无力、I型糖尿病、葡萄膜炎、后葡萄膜炎、变应性脑脊髓炎、肾小球肾炎、感染后自身免疫性疾病(包括风湿热和感染后肾小球肾炎)、炎性和高增生性皮肤病、银屑病、特应性皮炎、接触性皮炎、湿疹性皮炎、脂溢性皮炎、扁平苔藓、天疱疮、大疱性类天疱疮、大疱性表皮松解症、荨麻疹、血管性水肿、血管炎、红斑、皮肤嗜酸粒细胞增多、红斑狼疮、痤疮、斑秃、角膜结膜炎、春季结膜炎、贝切特氏病(Behcet′s?disease)相关性葡萄膜炎、角膜炎、疱疹性角膜炎、圆锥形角膜、角膜上皮营养不良、角膜白斑、眼天疱疮、莫伦溃疡(Mooren′s?ulcer)、巩膜炎、格雷夫斯眼病、伏格特-小柳-原田综合征(Vogt-Koyanagi-Harada?syndrome)、结节病、花粉变态反应、可逆阻塞性气道疾病、支气管哮喘、变应性哮喘、内源性哮喘、外源性哮喘、尘埃性哮喘、慢性或顽固性哮喘、晚期哮喘和气道高反应性、支气管炎、胃溃疡、局部缺血疾病和血栓形成引起的血管损伤、缺血性肠病、炎性肠病、坏死性小肠结肠炎、热灼伤相关性肠损伤、乳糜泻、直肠炎、嗜酸细胞性胃肠炎、肥大细胞病、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎、偏头痛、鼻炎、湿疹、间质性肾炎、古德帕斯彻综合征(Goodpasture′s?syndrome)、溶血性尿毒症综合征、糖尿病性肾病、多发性肌炎、格-巴二氏综合征(Guillain-Barre?syndrome)、梅尼埃尔氏病(Meniere′s?disease)、多神经炎、多发性神经炎、单神经炎、神经根病、甲状腺机能亢进、突眼性甲状腺肿(Basedow′s?disease)、纯红细胞再生障碍、再生障碍性贫血、再生不良性贫血、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、粒细胞缺乏症、恶性贫血、巨红细胞性贫血、红细胞发生不能、骨质疏松症、结节病、肺纤维症、特发性间质性肺炎、皮肌炎、寻常白斑病、寻常鱼鳞病、光过敏、皮肤T细胞淋巴瘤、动脉硬化、动脉粥样硬化、主动脉炎综合征、结节性多动脉炎、非炎性心肌病、硬皮病、韦格纳肉芽肿病、斯耶格伦综合征(Sjogren′ssyndrome)、肥胖症、嗜酸性筋膜炎、齿龈损伤、牙周组织损伤、牙槽骨损伤、牙骨质(substantia?ossea?dentis)损伤、肾小球肾炎、男性型脱发或老年性脱发(通过预防脱发或者使头发萌生和/或促进头发产生及头发生长进行治疗)、肌肉萎缩症、脓皮病和赛塞利综合征(Sezary′ssyndrome)、阿狄森氏病(Addison′s?disease)、在进行保存、移植或患上缺血性疾病时发生的器官缺血-再灌注损伤、内毒素休克、假膜性结肠炎、药物或辐射引起的结肠炎、缺血性急性肾功能不全、慢性肾功功能不全、肺氧或药物引起的中毒症、肺癌、肺气肿、白内障、铁质沉着病、色素性视网膜炎、老年性黄斑变性、玻璃体瘢痕形成、角膜碱烧伤、皮炎多形性红斑、线状IgA大疱性皮炎和水泥性皮炎、龈炎、牙周炎、脓毒病、胰腺炎、由环境污染、衰老、致癌作用、癌转移和低气压病引起的疾病、组胺或白三烯-C4释放引起的疾病、贝切特氏病、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、硬化性胆管炎、部分肝切除、急性肝坏死、由毒素、病毒性肝炎、休克或缺氧引起的坏死、乙型肝炎、非甲/非乙型肝炎、肝硬化、酒精性肝硬化、肝衰竭、暴发性肝衰竭、迟发性肝衰竭、“慢性加急性”肝衰竭、化疗作用的扩大、巨细胞病毒感染、HCMV感染、爱滋病(AIDS)、癌症、老年性痴呆、创伤和慢性细菌感染。

        本实施方案也包括在以上方法中,其中所述免疫调节异常选自

        1)多发性硬化,

        2)类风湿性关节炎,

        3)系统性红斑狼疮,

        4)银屑病,

        5)移植器官或组织的排斥反应,

        6)炎性肠病,

        7)源自淋巴的恶性肿瘤,

        8)急性和慢性淋巴细胞白血病和淋巴瘤,和

        9)胰岛素和非胰岛素依赖性糖尿病。

        本发明还包括一种对需要免疫抑制的哺乳动物患者抑制免疫系统的方法,该方法包括给予所述患者免疫抑制有效量的式I化合物或式A化合物。

        本发明还包括一种药物组合物,该组合物包含式I或式A化合物以及药物可接受的载体。

        本发明还包括一种治疗需要这种治疗的哺乳动物患者的呼吸道疾病或病症的方法,该方法包括给予所述患者治疗所述呼吸道疾病或病症有效量的式I化合物或式A化合物。本实施方案包括在以上方法中,其中所述呼吸道疾病或病症选自哮喘、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、成人呼吸窘迫综合征、婴儿呼吸窘迫综合征、咳嗽、嗜酸性肉芽肿、呼吸道合胞病毒细支气管炎、支气管扩张、特发性肺纤维化、急性肺损伤和闭塞性细支气管炎伴机化性肺炎。

        本发明还包括一种治疗需要这种治疗的患者的血管完整相关性疾病或病症的方法,其中所述疾病或病症选自血管性水肿、血管炎、局部缺血疾病和血栓形成引起的血管损伤、缺血性肠病、炎性肠病、坏死性小肠结肠炎、热灼伤相关性肠损伤、动脉硬化、动脉粥样硬化、主动脉炎综合征、在进行保存、移植或患上缺血性疾病时发生的器官缺血-再灌注损伤、内毒素休克、假膜性结肠炎、药物或辐射引起的结肠炎、缺血性急性肾功能不全、慢性肾功能不全、肺氧或药物引起的中毒症、脓毒病、胰腺炎、组胺或白三烯-C4释放引起的疾病、由毒素、病毒性肝炎、休克或缺氧引起的坏死、老年性痴呆和创伤,该方法包括给予所述患者治疗所述疾病或病症有效量的式I或式A化合物。

        本发明还包括一种治疗需要这种治疗的患者的脑水肿或肺水肿相关性疾病或病症的方法,该方法包括给予所述患者治疗所述疾病或病症有效量的式I化合物或式A化合物。在本实施方案中包括选自以下的疾病或病症:休克、脓毒病、急性呼吸窘迫综合征和脑水肿。

        本实施方案也包括在以上方法中,其中所述患者也患有呼吸道疾病或病症。

        本实施方案也包括在以上方法中,其中所述患者也患有心血管疾病或病症。

        除非另有说明,否则采用以下的定义描述本发明。

        当本发明说明书的分子式中出现氮原子时,应当理解的是存在足够的氢原子或取代基满足氮原子的化合价。

        术语“卤素”包括F、Cl、Br和I。

        术语“烷基”是指具有指定碳原子数的直链或支链结构及它们的组合结构。因此,C1-6烷基包括例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、仲丁基、叔丁基、丁基、戊基、己基、1,1-二甲基乙基、环丙基、环丁基、环戊基和环己基。

        术语“烯基”是指具有指定碳原子数的以及至少一个碳碳双键的直链或支链结构及它们的组合结构,其中氢可以被其它碳碳双键替代。C2-6烯基包括例如乙烯基、丙烯基、1-甲基乙烯基、丁烯基等。

        术语“炔基”是指具有指定碳原子数的以及至少一个碳碳三键的直链或支链结构及它们的组合结构。C3-6炔基包括例如丙烯基、1-甲基乙烯基、丁烯基等。

        术语“烷氧基”是指具有指定碳原子数的直链、支链或环状烷氧基。C1-6烷氧基包括例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基等。

        术语“烷硫基”是指具有指定碳原子数的直链、支链或环状烷硫基。C1-6烷硫基包括例如甲硫基、丙硫基、异丙硫基等。

        术语“环烷基”是指任选结合直链或支链结构并且具有指定碳原子数的单环、二环或三环结构?;吠榛ɡ缁繁?、环戊基、环庚基、金刚烷基、环十二烷基甲基、2-乙基-1-二环[4.4.0]癸基、环丁基甲基、环丙基甲基等。

        术语“环烷氧基”是指通过氧原子连接到分子的以上定义的环烷基(环烷基-O),包括例如环戊氧基、环丙基甲氧基等。

        术语“?;笔侵复佑谢嵬讶ヴ腔玫降挠谢挪⑶揖哂型ㄊ絉-C(O)-,其中R是直链或支链烷基,R与羰基碳原子一起具有指定数目的碳原子。例如,C2-4?;ㄒ阴;?、丙?;投□;?。术语“酰氧基”是指通过氧原子连接到分子的以上定义的?;??;?O),包括例如乙酰氧基等。

        对于本说明书来讲,以下缩写词具有指定含义:

        Me????=????????甲基

        Et????=????????乙基

        n-Pr????=???????正丙基

        i-Pr????=???????异丙基

        n-Bu????=???????正丁基

        i-Bu????=???????异丁基

        s-Bu????=???????仲丁基

        t-Bu????=???????叔丁基

        c-Pr????=???????环丙基

        c-Bu????=???????环丁基

        c-Pen???=???????环戊基

        c-Hex???=???????环己基

        术语“治疗”不仅包括治疗患者以缓解其疾病或病症的病征和症状,而且包括预防性治疗无症状患者以防止疾病或病症的发生或进展。术语“治疗有效量”是指由研究人员、兽医、医学博士或其它临床医师所确定的上述药物或药剂在组织、系统、动物或人中引发生物反应或药物反应的量。该术语还包括将防止或减少出现某些生物学或医学事件的风险的剂量,所述事件是研究人员、兽医、医生或其它临床医师在组织、系统、动物或人上所要预防的事件。

        本发明包括药物可接受的盐和水合物。药物可接受的盐包括金属(无机)盐和有机盐;在Remington′s?Pharmaceutical?Sciences,第17版,第1418页,(1985)中列举了这类盐。本领域技术人员众所周知的是根据物理化学稳定性、流动性、吸湿性和溶解性选择合适的盐形式。本领域技术人员能够理解的是药物可接受的盐包括但不限于无机酸的盐例如盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、氢溴酸盐和硝酸盐,或者有机酸的盐,例如苹果酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐或双羟萘酸盐、水杨酸盐和硬脂酸盐。类似地,药物可接受的阳离子包括但不限于钠、钾、钙、铝、锂和铵(尤其是仲胺的铵盐)。因为上文指出的原因,本发明的优选盐包括钾盐、钠盐、钙盐和铵盐。式I或式A化合物的晶型、水合物和溶剂合物也包括在本发明范围内。

        对于本说明书来讲,“药物可接受的水合物”是指本发明化合物与一个或多个水分子结晶形成的水合物形式。

        式I化合物或式A化合物可能包含一个或多个不对称中心,由此能够以外消旋物和外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物以及各非对映异构体形式存在。本发明包括所有以上异构体形式的式I化合物或式A化合物。

        本发明部分化合物包含烯属双键,除非另有说明,否则这些双键包括E型和Z型几何异构体。

        本发明部分化合物可能存在不同的氢连接点,称为互变异构体。这样的例子可以是称为酮-烯醇互变异构体的酮及其烯醇形式。式I化合物或式A化合物包括各互变异构体以及它们的混合物。

        式I或式A化合物可以被分离为对映异构体的非对映异构体对,例如用合适的溶剂(例如甲醇、乙酸乙酯或它们的混合物)通过分步结晶分离。由此获得的对映异构体对可以通过常规方法(例如采用旋光酸作为拆分剂)分离为各立体异构体。

        或者,采用已知构型的纯净的旋光原料或试剂,通过立体有择合成法可以得到通式I或式A的化合物的对映异构体。

        本发明还包括一种或多种立体异构体形式的式I化合物或式A化合物的基本纯净形式或者立体异构体混合物形式。本发明包括所有这样的异构体。

        由于本发明化合物具有S1P1/Edg1激动剂活性,所以是可用于治疗或预防自身免疫性或慢性炎性疾病的免疫调节剂。在适宜免疫抑制的情况下,本发明化合物可用于抑制免疫系统,例如可用于骨髓、器官或移植物排斥反应、自身免疫性或慢性炎性疾病,包括系统性红斑狼疮、慢性类风湿性关节炎、I型糖尿病、炎性肠病、胆汁性肝硬化、葡萄膜炎、多发性硬化、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎、大疱性类天疱疮、结节病、银屑病、自身免疫性肌炎、韦格纳肉芽肿病、鱼鳞病、格雷夫斯眼病和哮喘。本发明化合物还可用于提高血管完整性。

        更具体地讲,本发明化合物可用于治疗或预防选自以下的疾病或病症:器官或组织移植、移植引起的移植物抗宿主病、自身免疫综合征,包括类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、桥本甲状腺炎、多发性硬化、重症肌无力、I型糖尿病、葡萄膜炎、后葡萄膜炎、变应性脑脊髓炎、肾小球肾炎、感染后自身免疫性疾病(包括风湿热和感染后肾小球肾炎、炎性和高增生性皮肤病、银屑病、特应性皮炎、接触性皮炎、湿疹性皮炎、脂溢性皮炎、扁平苔藓、天疱疮、大疱性类天疱疮、大疱性表皮松解症、荨麻疹、血管性水肿、血管炎、红斑、皮肤嗜酸粒细胞增多、红斑狼疮、痤疮、斑秃、角膜结膜炎、春季结膜炎、贝切特氏病相关性葡萄膜炎、角膜炎、疱疹性角膜炎、圆锥形角膜、角膜上皮营养不良、角膜白斑、眼天疱疮、莫伦溃疡、巩膜炎、格雷夫斯眼病、伏格特-小柳-原田综合征、结节病、花粉变态反应、可逆阻塞性气道疾病、支气管哮喘、变应性哮喘、内源性哮喘、外源性哮喘、尘埃性哮喘、慢性或顽固性哮喘、晚期哮喘和气道高反应性、支气管炎、胃溃疡、局部缺血疾病和血栓形成引起的血管损伤、缺血性肠病、炎性肠病、坏死性小肠结肠炎、热灼伤相关性肠损伤、乳糜泻、直肠炎、嗜酸细胞性胃肠炎、肥大细胞病、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎、偏头痛、鼻炎、湿疹、间质性肾炎、古德帕斯彻综合征、溶血性尿毒症综合征、糖尿病性肾病、多发性肌炎、格-巴二氏综合征、梅尼埃尔氏病、多神经炎、多发性神经炎、单神经炎、神经根病、甲状腺机能亢进、突眼性甲状腺肿、纯红细胞再生障碍、再生障碍性贫血、再生不良性贫血、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、粒细胞缺乏症、恶性贫血、巨红细胞性贫血、红细胞发生不能、骨质疏松症、结节病、肺纤维症、特发性间质性肺炎、皮肌炎、寻常白斑病、寻常鱼鳞病、光过敏、皮肤T细胞淋巴瘤、动脉硬化、动脉粥样硬化、主动脉炎综合征、结节性多动脉炎、非炎性心肌病、硬皮病、韦格纳肉芽肿病、斯耶格伦综合征、肥胖症、嗜酸性筋膜炎、齿龈损伤、牙周组织损伤、牙槽骨损伤、牙骨质损伤、肾小球肾炎、男性型脱发或老年性脱发(通过预防脱发或者使头发萌生和/或促进头发产生及头发生长进行治疗)、肌肉萎缩症、脓皮病和赛塞利综合征、阿狄森氏病、在进行保存、移植或患上缺血性疾病时发生的器官缺血-再灌注损伤、内毒素休克、假膜性结肠炎、药物或辐射引起的结肠炎、缺血性急性肾功能不全、慢性肾功能不全、肺氧或药物引起的中毒症、肺癌、肺气肿、白内障、铁质沉着病、色素性视网膜炎、老年性黄斑变性、玻璃体瘢痕形成、角膜碱烧伤、皮炎多形性红斑、线状IgA大疱性皮炎和水泥性皮炎、龈炎、牙周炎、脓毒病、胰腺炎、由环境污染、衰老、致癌作用、癌转移和低气压病引起的疾病、组胺或白三烯-C4释放引起的疾病、贝切特氏病、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、硬化性胆管炎、部分肝切除、急性肝坏死、由毒素、病毒性肝炎、休克或缺氧引起的坏死、乙型肝炎、非甲/非乙型肝炎、肝硬化、酒精性肝硬化、肝衰竭、暴发性肝衰竭、迟发性肝衰竭、“慢性加急性”肝衰竭、化疗作用的扩大、巨细胞病毒感染、HCMV感染、爱滋病、癌症、老年性痴呆、创伤和慢性细菌感染。

        本发明化合物还可用于治疗或预防阿尔茨海默病(Alzheimer′sdisease)。

        本发明实施方案还包括一种对需要这种治疗的哺乳动物患者预防或治疗移植抵抗或者器官或组织的移植排斥反应的方法,该方法包括给予治疗有效量的式I化合物或式A化合物。

        本发明另一种实施方案是一种对需要这种抑制的哺乳动物患者抑制免疫系统的方法,该方法包括给予所述患者抑制免疫系统有效量的式I化合物或式A化合物。

        更具体地讲,本文介绍的方法包括一种治疗或预防骨髓或器官移植排斥反应的方法,该方法包括给予需要这种治疗或预防的哺乳动物患者治疗或预防骨髓或器官移植排斥反应有效量的式I化合物或式A化合物或者它们的药物可接受的盐或水合物。

        本发明化合物还可用于治疗呼吸道疾病或病症,例如哮喘、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、成人呼吸窘迫综合征、婴儿呼吸窘迫综合征、咳嗽、嗜酸性肉芽肿、呼吸道合胞病毒细支气管炎、支气管扩张、特发性肺纤维化、急性肺损伤和闭塞性细支气管炎伴机化性肺炎。

        此外本发明化合物是S1P1/Edg1受体的选择性激动剂,其选择性优于S1P3/Edg3受体。Edg1选择性激动剂优于现有的疗法,拓宽了淋巴细胞聚集剂的治疗窗,使得在较高给药剂量下有更好的耐受性,因此提高了单一疗法的功效。

        本发明还包括药物制剂,其中包含药物可接受的载体以及式I或式A化合物或者它们的药物可接受的盐或水合物。所述制剂的一种优选实施方案是在制剂中还包括第二种免疫抑制剂。其它免疫抑制剂的例子包括但不限于硫唑嘌呤、布喹那钠、脱氧精胍菌素、mizaribine、霉考酚酸吗啉代酯、环孢菌素、FK-506、雷帕霉素、FTY720和ISAtx247(Isotechnika)。将式I或式A化合物与其它免疫抑制剂(包括上述的一种或多种免疫抑制剂)联合给药的方法也包括在本发明中。

        本发明化合物(包括它们的盐和水合物)可用于治疗自身免疫性疾病,包括预防骨髓移植、外来器官移植物的排斥反应和/或相关的疾患和疾病。

        本发明化合物可以通过任何方式给药,只要这种方式可使活性成分化合物与温血动物体内的作用部位有效接触。例如,可以通过口服、局部(包括透皮给药)、眼、口腔、鼻内、吸入、阴道内、直肠、脑池内和胃肠外给药。此处使用的术语“胃肠外”是指包括以下的给药模式:皮下、静脉内、肌内、关节内注射或输注、胸骨内和腹膜内给药。

        本发明化合物可以通过用于联合药物的任何常规方法以单独的治疗剂或组合的治疗剂给予??梢越鼋龈枵庑┲瘟萍帘旧?,但是通常结合药用载体给药,药用载体根据所选给药途径和标准药学实践来选择。

        给药剂量将取决于接受者的年龄、健康和体重、疾病的严重程度、联合疗法的类型(如果有的话)、治疗频率和所需效果的性质。通常,活性成分化合物的日剂量为约0.1-2000毫克/天。通常,每天分1次或多次给予1-100毫克可有效获得所需疗效。这些剂量是治疗自身免疫性疾病、预防外来器官移植物排斥反应和/或相关疾患和疾病的有效量。

        活性成分可以固体剂型(例如胶囊剂、片剂、锭剂、糖锭剂、颗粒剂和散剂)或液体剂型(酏剂、糖浆剂、乳剂、分散体和混悬剂)口服给予?;钚猿煞只箍梢晕蘧禾寮列?例如分散体、混悬剂或溶液剂)胃肠外给药。其它剂型也可用于给予活性成分,例如用于局部给药的软膏剂、乳膏剂、滴剂、透皮贴剂或散剂,用于眼部给药的眼用溶液剂或混悬剂(即滴眼剂),用于吸入或鼻内给药的气雾剂或粉末组合物,或者用于直肠或阴道给药的乳膏剂、软膏剂、喷雾剂或栓剂。

        明胶胶囊剂包含活性成分和粉末载体,例如乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等。类似的稀释剂可用于制备压制片剂。片剂和胶囊剂均可制备为缓释产品,用于在数小时内连续释放药物。压制片剂是包糖衣或薄膜包衣的,以便遮蔽任何不良味道并且使片剂与空气隔绝,或者是肠溶包衣的,用于在胃肠道中选择性崩解。

        口服液体剂型可以包含着色剂和矫味剂,从而增加患者的接受度。

        一般而言,水、合适的油、盐水、葡萄糖水溶液以及相关的糖溶液和二元醇(例如丙二醇或聚乙二醇)是用于胃肠外溶液剂的合适载体。胃肠外给药的溶液剂优选包含活性成分的水溶性盐、合适的稳定剂,如果需要,还可包含缓冲物质??寡趸?例如单独的亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、抗坏血酸或它们的组合)是合适的稳定剂?;箍墒褂媚仕峒捌溲魏鸵叶匪囊宜崮?。胃肠外溶液剂还可包含防腐剂,例如苯扎氯铵、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和三氯叔丁醇。

        合适的药用载体参见本领域的标准参考课本Remington′sPharmaceutical?Sciences,A.Osol。

        对于吸入给药,本发明化合物可以方便地以气溶胶喷雾给药,气溶胶喷雾由压力包装或喷雾器产生。本发明化合物还可以粉末形式给予,粉末可用于配制,可以借助于吹入粉末吸入器吸入粉末组合物。吸入法的优选给药系统是定量吸入(MDI)气雾剂,它可配制为式I或式A化合物在合适抛射剂(例如碳氟化合物或碳氢化合物)中的混悬剂或溶液剂。

        对于眼部给药,眼用制剂可以配制为在适当眼用溶媒中具有合适重量百分数的式I化合物或式A化合物的溶液或混悬液,这样化合物与眼表面的接触维持足够长的时间,从而允许化合物渗过眼的角膜和内区。

        用于给予本发明化合物的药物剂型在下面举例说明:

        ????????????????????????胶囊剂

        大量单元胶囊剂如下制备:在每个标准两节式硬质明胶胶囊中装入100毫克粉末状活性成分、150毫克乳糖、50毫克纤维素和6毫克硬脂酸镁。

        ????????????????????软质明胶胶囊剂

        准备活性成分与可消化油(例如豆油、棉籽油或橄榄油)的混合物,将其通过正电压排出泵注入明胶中制成包含100毫克活性成分的软质明胶胶囊剂。将胶囊剂洗涤后干燥。

        ???????????????????????片剂

        大量片剂通过常规方法制备,这样剂量单位为100毫克活性成分、0.2毫克胶态二氧化硅、5毫克硬脂酸镁、275毫克微晶纤维素、11毫克淀粉和98.8毫克乳糖??梢杂τ檬实钡陌吕丛黾邮士谛曰蜓映傥?。

        ??????????????????????注射剂

        将1.5%(重量)活性成分在10%(体积)丙二醇中搅拌,制备适合注射给药的胃肠外组合物。溶液剂用注射用水改变体积后灭菌。

        ??????????????????????混悬剂

        制备水性混悬液用于口服,这样每5毫升包含100毫克微细活性成分、100毫克羧甲基纤维素钠、5毫克苯甲酸钠、1.0克山梨糖醇溶液(U.S.P.)以及0.025毫升香草醛。

        本发明化合物在逐步给予或者联合另外的治疗剂给予时,通??梢允褂孟嗤募列?。当各药物以物理组合给予时,剂型和给药途径应当根据各组合药物间的相容性来选择。因此,术语联合给药应当理解为包括将两种药物同时或序贯给予,或者两种活性成分以固定的剂量组合给予。

        合成方法

        流程1展示了一种制备本发明通式结构i的化合物4-(1,2,4-_二唑-3-基)芳基丙酸的简便方法。本领域技术人员已知通式结构ii的N-羟基脒中间体的制备方法,代表性制备方法可以参见WO?03/061567A2。这类中间体可以用活化羧酸在适当碱和溶剂存在下处理,得到通式结构iii的N-酰氧基脒。此反应中的羧酸可以用试剂(例如N,N′-二环己基碳二亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、1,1′-羰基二咪唑或双(2-氧代-3-_唑烷基)膦酰氯)活化得到?;?,使用合适的碱(如果需要)例如三乙胺、N,N-二异丙基乙胺或碳酸氢钠,溶剂采用例如1,2-二氯乙烷、甲苯、二甲苯、THF、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺或N-甲基吡咯烷酮?;蛘咴谏鲜黾詈腿芗链嬖谙?,也可使用酰氯、酸酐、?;溥虻玫絠ii。中间体iii可以用本领域技术人员已知的方法分离(例如结晶、硅胶色谱法、HPLC),在随后的步骤中,通过在合适溶剂(例如1,2-二氯乙烷、甲苯、二甲苯、THF、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺或N-甲基吡咯烷酮)中加热而环化/脱水,得到结构iv的1,2,4-_二唑。iii至iv的转化可能需要更多的碱,在此情况下可以使用试剂如吡啶、N,N-二异丙基乙胺或四丁基氟化铵。不分离出N-酰氧基脒iii可能更方便或更合乎需要,在这种情况下ii至iv的转化可以是连续的过程。制备1,2,4-_二唑的其它方法很可能与本发明有关,为本领域技术人员所熟知,并且已在文献中综述(参见Clapp,L.B.,“1,2,3-and?1,2,4-Oxadiazoles”,第366-91页,ComprehensiveHeterocyclic?Chemistry,第6卷,Potts,K.T.主编,Pergamon?Press,1984)。

        最终化合物i可以通过iv的酯裂解获得(即),裂解可以在碱性、酸性或还原性条件下完成,这取决于-CO2A的化学结构。此反应的代表性例子包括(但不限于):如果-A为-CH3或-CH2CH3,在室温或室温以上,将iv用氢氧化锂、氢氧化钠或氢氧化钾的水溶液在合适的助溶剂(例如甲醇、乙醇、二_烷或THF)存在下处理,可以得到i;如果-A为-C(CH3)3,将iv用三氟乙酸或盐酸在合适溶剂(例如甲醇、乙醇、乙酸乙酯或THF)中处理,可以得到i;如果-A为-CH2Ph,在常压或常压以上压力的氢气以及钯催化剂(例如钯/碳或氢氧化钯/碳)存在下,搅拌iv在合适溶剂(例如甲醇、乙醇、乙酸乙酯或THF)中的溶液可以得到i。

        流程1

        流程2展示了制备通式结构viii的化合物4-(1,2,4-_二唑-3-基)芳基丙酸的相对方便的方法??梢允紫劝凑樟鞒?介绍的ii转化为iv的类似方法,将N-羟基脒v转化为1,2,4-_二唑中间体vi。vi(C=Cl、Br、I或OSO2CF3)和α,β-不饱和羧酸酯的偶合反应可以在Heck条件下进行,即在合适溶剂(二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮)中,在室温或室温以上,将偶合反应物的混合物用催化量钯(II)盐(乙酸钯(II)、氯化钯(II))或钯(0)源(三(二亚苄基丙酮)合钯(0)、四(三苯基膦)合钯(0))处理,可加入或不加配体(例如三苯基膦、1,1′-联苯-2-基(二叔丁基)膦)和叔胺碱(三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、N-甲基二环己基胺),得到vii。vii的双键可以通过催化氢化还原(在常压或常压以上的氢气压力以及钯催化剂例如钯/碳或氢氧化钯/碳存在下,搅拌vii在合适溶剂(例如甲醇、乙醇、乙酸乙酯或THF)中的溶液),或者将vii用三(仲丁基)硼氢化锂的THF溶液在-78℃处理或用甲醇镁的甲醇溶液在室温下处理。按照流程1介绍的iv转化为i的类似方法,通过酯裂解获得最终化合物viii。

        流程2

        中间体vii还能够进一步官能化得到本发明的其它化合物(流程3)??梢匀缦峦瓿蓈ii至相应环丙基羧酸酯ix转化:将vii用碘化三甲基氧化锍和强碱(氢化钠、叔丁醇钾)在二甲亚砜中处理或者在催化量乙酸钯存在下用重氮甲烷在合适溶剂(乙醚、二甲氧基乙烷、四氢呋喃)中处理。按照流程1介绍的iv转化为i的类似方法,可以将酯裂解为x。在催化四氧化锇存在下,将vii用氧化剂(例如N-甲基吗啉N-氧化物)在合适溶剂中处理可以得到二醇xi,再次酯裂解将得到xii。在催化量酸(三氟化硼-乙醚溶液、甲苯磺酸(toluene?fulfonic?acid)、五氧化二磷)存在下,中间体xi也可用酮或掩蔽的酮在合适溶剂(二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、甲苯)中于室温或室温以上处理,得到环化结构1,3-二氧戊环xlii。进行前述的酯裂解将得到xliii。

        流程3

        可以用其它方法加工中间体vi得到本发明化合物(流程4)。在镍(0)或钯(0)催化剂存在下,将vi用官能化有机锌试剂(例如xiii)在适当溶剂(二甲氧基乙烷、四氢呋喃、二_烷、甲苯)中于室温或室温以上处理,然后进行酯裂解(按照流程1介绍的vi转化为i的方法),可以得到xiv。vi和乙烯基三丁基锡进行Stille偶合反应,然后氧化所得苯乙烯可以获得醛xv,xv可用于制备本发明多种类型的化合物。这些制备包括(但不限于):1)将xv用(甲氧基羰基-甲基)膦酸双(2,2,2-三氟乙基)酯处理,得到顺α,β-不饱和酯xvi。然后分别用流程3介绍的将vii转化为x或者vii转化为xii的类似方法,可将该中间体加工为环丙基羧酸酯xvii或二醇xviii。2)将醛xv用Reformatsky试剂处理,然后将所得产物的羟基转化为允许随后的基团形成/还原反应的官能团(例如草酸酯、黄原酸酯、硫代氨基甲酸芳基酯)。按照流程1介绍的vi转化为i的类似条件进行酯裂解,可得到xx。

        流程4

        流程5展示了制备通式结构xxvii的化合物5-(1,2,4-_二唑-3-基)-4-取代的茚满-1-基乙酸的方便的方法。在氯化镁和三乙胺存在下,将苯甲酰氯xxi首先用乙基丙二酸的钾盐在乙腈中处理,得到β-酮酯,然后将其通过催化氢化还原(常压或常压以上的氢气,钯金属催化剂,醇溶剂)或化学还原(三乙基硅烷/三氟乙酸)为芳基丙酸酯xxii。先进行酯皂化反应并生成酰氯,然后进行分子内Friedel-Crafts反应,得到茚满酮xxiii。该中间体可以通过各种不同方法加工为茚满乙酸酯xxiv,包括但不限于先进行Wittig、Homer-Wadsworth-Emmons或Reformatsky同系化(homologation),然后还原所得α,β-不饱和酯或β-羟基酯得到xxiv??梢园凑找韵氯霾街璧乃承蚴箈xiv的5-甲氧基转化为xxv的腈:1)用强Lewis酸(BCl3、BBr3)在合适溶剂(二氯甲烷、二氯乙烷)中脱甲基化,得到苯酚;2)利用三氟甲基磺酸酐在碱(吡啶、三甲基吡啶)存在下于合适溶剂(二氯甲烷、二氯乙烷)中生成三氟甲磺酸酯;3)在钯(0)催化剂存在下,在室温或室温以上将三氟甲磺酸酯用氰化锌或氰化铜在合适溶剂(四氢呋喃、二_烷、N-甲基吡咯烷酮、N,N-二甲基甲酰胺)中处理。将腈xxv用羟基胺在醇溶剂(MeOH、EtOH)中于室温或室温以上处理,得到N-羟基脒xxvi。按照流程1介绍的ii转化为i的类似方法,可以将xxvi转化为终产物xxvii。

        流程5

        流程6展示了制备通式结构xxxi的化合物5-(1,2,4-_二唑-3-基)-6-取代的茚满-1-基乙酸的方便的方法。在室温或室温以下,取代的苯甲醚xxviii可以用3-氯丙酰氯在强Lewis酸(氯化钛(IV)、氯化锡(IV))存在下于合适溶剂(二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、硝基苯)中处理,得到酮xxix。加热xxix的硫酸溶液,得到茚满酮xxx。将这些茚满酮中间体置于流程5介绍的xxiii转化为xxvii的类似反应条件下,将得到通式结构xxxi的最终化合物。

        流程6

        流程7展示了制备通式结构xxxv的化合物5-(1,2,4-_二唑-3-基)-4-取代的茚满-2-基甲酸的方便的方法。通式结构xxxii的3-(3-(甲氧基)苯基)-3-氧代丙酸酯可以用甲氧基甲基乙酰氯在强Lewis酸(氯化钛(IV)、氯化锡(IV))存在下于溶剂硝基甲烷中处理,得到茚满酮羧酸酯xxxiii。xxxiii的酮基可以通过催化氢化还原(常压或常压以上的氢气,钯金属催化剂,醇溶剂)或化学还原(三乙基硅烷/三氟乙酸),得到茚满-2-基甲酸酯xxxiv。采用一系列类似于流程5介绍的用xxiv制备xxviii的反应,中间体xxxiv可以转化为目标化合物xxxv。

        流程7

        流程8展示了分别制备通式结构xxxix的化合物5-(1,3,4-噻二唑-2-基)芳基丙酸和通式结构xli的化合物5-(1,3,4-_二唑-2-基)芳基丙酸的方便的方法。将酰肼xxxvi用活化羧酸在适当碱和溶剂存在下处理,得到N,N′-二?;聏xxvii。此反应中的羧酸可以被活化,采用试剂例如N,N′-二环己基碳二亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、1,1′-羰基二咪唑或双(2-氧代-3-_唑烷基)膦酰氯,在合适碱(如果需要)(例如三乙胺、N,N-二异丙基乙胺或碳酸氢钠)存在下,于溶剂(例如1,2-二氯乙烷、甲苯、二甲苯、N,N-二甲基甲酰胺或N-甲基吡咯烷酮)中?;??;蛘咴谏鲜黾詈腿芗链嬖谙?,也可使用酰氯、酸酐、?;溥虻玫絰xxvii。将xxxvii与Lawesson试剂在吡啶中加热,然后与五硫化二磷一起加热,可以转化为1,3,4-噻二唑中间体xxxviii?;蛘?,将xxxvii与三氯氧化磷一起加热,可以转化为1,3,4-_二唑中间体xl。按照流程2、3和4介绍的用于相应1,2,4-_二唑类似物的方法,xxxviii和xl均可被分别加工为为最终羧酸xxxix和xli。

        流程8

        在流程9中,本发明通式结构I的杂环戊二烯(heteropentalene)衍生物的定义如下:呋喃衍生物:X=O,Z=Y=CH;噻吩衍生物:X=S,Z=Y=CH;吡咯衍生物:X=NH,Z=Y=CH;N-取代的吡咯衍生物:X=NR,Z=Y=CH;1,3-_唑衍生物:X=O,Z=CH,Y=N,或者X=O,Z=N,Y=CH,或者X=NH,Y=O,Z=CH;1,3-噻唑衍生物:X=S,Z=CH,Y=N,或者X=S,Z=N,Y=CH,或者X=NH,Y=S,Z=CH;1,3-咪唑衍生物:X=NH,Z=CH,Y=NH,或者X=NH,Z=NH,Y=CH,其中每个氮都可以被烷基化;1,3,4-三唑衍生物,其中每个氮都可以被烷基化。

        流程9展示了制杂环戊二烯衍生物I的方便的方法。有机金属试剂xliv是市售的,或者可以根据此类有机金属试剂的性质,用适当的杂芳基卤按照已知方法制备;同样,xlv是市售的,或者可通过公开文献中的现有方法获得。根据xliv和xlv的性质,xliv与xlv可以进行钯(0)或镍(0)介导的偶合反应(也称为Stille、Suzuki、Kumada、Negishi反应)及其改良反应。根据xliv和xlv的性质,可能需要使用钯(0)或镍(0)的不同配体来改变前述转化的效率。这样的配体和/或含这些配体的钯(0)或镍(0)络合物的结构和用法有先例可参考,包括(但不限于)Hartwig、Buchwald、Fu和Knochel的著作。杂芳基卤xlviii可以通过许多方法获得,包括(但不限于)使用N-碘丁二酰亚胺、N-溴丁二酰亚胺、N-氯丁二酰亚胺和溴或碘,采用不同的溶剂例如甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、酸式酸,通常在酸性条件并在盐(例如乙酸钠或乙酸钾)存在下反应。随后可在类似用于xliv与xlv的偶合条件下,使xlvii与R6M偶合。通过以上流程2-4图示的步骤顺序,将芳基卤il转化为所需丙酸衍生物1。

        流程9

        流程10介绍了一种制备1,3,4-_二唑和1,3,4-噻二唑衍生物的方法。原料xxv可以根据流程5介绍的方法合成。两步还原xxv确保了在芳基腈存在下将甲酯选择性转化为伯醇。DIBALH还原可以在不同溶剂中进行,包括二氯甲烷、二氯乙烷和甲苯,而硼氢化钠还原反应最好在质子溶剂(例如甲醇或乙醇)中完成。将两步还原法得到的游离醇用苄基亲电子试剂(例如苄基溴)和碱(例如氢化钠、叔丁醇钾或氢氧化钠)?;の谢裭i。尽管在酸性及碱性条件下直接水解li均能够得到所需酸lii,但是采用还原/氧化顺序的两步反应可以得到更高的收率,例如(但不限于)图示的DIBAl还原反应/氧化铬(IV)介导的氧化反应。采用以下标准的已知顺序反应分离出N,N′-二?;耹iii(由不同R6-单?;卵苌?:先与适当?;确从?,然后在Schotten-Baumann条件下偶合。通过流程8介绍的合成策略,N,N′-二?;耹iii可以被转化为1,3,4-噻二唑或1,3,4-_二唑liv。通过例如将苄基醚用钯/活性碳和氢还原性裂解而脱去末端醇的?;?,得到lv。尽管lv的最终氧化反应可以通过一步法完成,但是对于制备所需羧酸lvi,采用两步顺序反应更有效,例如(但不限于)Swern氧化反应/氧化铬(IV)介导的氧化反应。

        流程10

        流程11展示了制备通式结构lxi的化合物1-(1,3-咪唑-4-基)芳基丙酸的方便的方法。Jetter(Synthesis,1998,829-831)制备的官能化锌酸盐lvii可以用二卤化芳族化合物例如lviii(J=I)和催化量Pd(0)选择性交叉偶合,得到4-取代的咪唑lix。随后可以用适当取代的芳基硼酸、Cu(II)催化剂和胺碱(例如吡啶或三乙胺)按照Lam的方法(Tetrahedron?Lett.1998,39,2941-2944),使lix?N-芳基化。按照流程2、3和4进一步操作,能够分离出相应的1-(1,3-咪唑-4-基)芳基丙酸lxi。

        流程11

        流程12展示了本发明中lxv类的(2-芳基-四唑-5-基)丙酸化合物的合成方法。Sharpless(J.Org.Chem.2001,66,7945-7950)演示的lxii类腈与叠氮化钠和锌盐的反应可以得到5-取代的四唑lxiii。利用上述流程11中的Cu(II)条件,lxiii可以用硼酸N-芳基化,得到lxiv类化合物。流程2、3和4介绍的其它转化反应将得到相应的(2-芳基-四唑-5-基)丙酸lxv。

        流程12

        流程13介绍了本发明中lxx类的5-(1,2,4-三唑-3-基)丙酸化合物的方便的合成方法。腈lxvi可以用氯甲基氨基铝处理(Garigipati,Tetrahedron?Lett.1991,31,1969-1972),得到脒lxvii。酰肼lxviii可以与脒lxvii按照Meckler的方法(Tetrahedron?Lett.1987,28,5133-516)在醇溶剂(例如乙醇)中缩合,得到三唑lxix。通过流程2、3和4介绍的其它步骤得到3-(1,2,4-三唑-5-基)丙酸lxx。

        流程13

        本领域技术人员能够理解的是根据所存在官能团的特性,可能希望或必需以不同的顺序进行上述的各个反应以制备本发明化合物。本领域技术人员还能够理解的是本发明化合物中官能团的特性可能在最终化合物或用于制备它们的中间体上产生不对称中心。通过本领域技术人员已知的方法可以获得各立体异构体,这些方法包括但不限于:立体有择合成、利用对映体纯的酸或碱拆分最终化合物的盐或者用于制备所述盐的任何中间体、通过采用对映体纯的固定相的HPLC拆分最终化合物或者用于制备它们的任何中间体。

        代表性实施例

        下面举例说明本发明化合物:

        ????????????????????????总则

        溶液浓缩在减压旋转蒸发器中进行。常规快速色谱法在硅胶(230-400目)上进行??焖偕追ɑ共捎肂iotage?F1ash?Chromatography装置(Dyax?Corp.),标注尺寸的预填充柱中的硅胶(32-63mM,60_孔径)。除非另有说明,否则NMR谱用CDCl3溶液获得。偶合常数(J)表示为赫兹(Hz)。缩写:乙醚(ether),三乙胺(TEA),N,N-二异丙基乙胺(DIEA),饱和水溶液(sat′d),室温(rt),小时(h),分钟(min)。

        ???????????????????????HPLC条件

        HPLC?A:YMC?ODS?A,5μ,4.6×50mm柱,梯度:10∶90-95∶5?v/vCH3CN∶H2O+0.05%TFA,4.5min,然后在95∶5?v/v?CH3CN∶H2O+0.05%TFA保持1.5min;流速2.5ml/min,二极管阵列检测200-400nM。

        HPLC?B:Advantage?ARMOR?C18?5μm?250×20mm柱(AnalyticalSales?and?Services,Inc.);梯度:10∶90-95∶5?v/v?CH3CN∶H2O+0.05%TFA,10min,等梯度95∶5?v/v?CH3CN∶H2O+0.05%TFA,15min,等梯度10∶90?v/v?CH3CN∶H2O+0.05%TFA,10min;流速10ml/min;在254nm进行UV检测。

        N-羟基脒中间体的制备

        ????????????????????????N-羟基脒1

        ??????????N-羟基3-甲基-4-(2-(叔丁氧羰基)乙基)苯甲脒

        步骤A:3-(3-甲基-4-氰基苯基)丙烯酸叔丁酯

        10.0g(51.0mmol)4-溴-2-甲基苯甲腈的80ml?1,4-二_烷溶液用7.19g(56.1mmol)丙烯酸叔丁酯、10.96g(56.1mol)N-甲基二环己基胺、228mg(0.76mol)2-(二叔丁基膦基)联苯和396mg(0.38mol)三(二亚苄基丙酮)合二钯(0)-氯仿加合物处理。将所得混合物在70℃加热16小时,冷却至室温。通过滤纸过滤反应混合物,浓缩滤液。将粗产物分为四部分。用色谱法处理(4个Biotage?40M柱,19∶1?v/v己烷/EtOAc用作洗脱剂),然后合并产物部分,得到10.0g标题化合物:

        ????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.55(s,9H),2.58(s,3H),6.44(d,J=16.0,1H),7.41(d,J=8.0,1H),7.45(s,1H),7.53(d,J=16.0,1H),7.61(d,J=8.0,1H).

        步骤B:3-(3-甲基-4-氰基苯基)丙酸叔丁酯

        将5.0g(20.6mmol)3-(3-甲基-4-氰基苯基)丙烯酸叔丁酯(步骤A)、500mg?10%钯/碳和200ml?EtOAc的混合物在1atm氢气、室温下搅拌16小时。过滤除去催化剂。浓缩滤液,得到5.04g标题化合物:

        ???????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.42(s,9H),2.53(s,3H),2.55(t,J=7.6,2H),2.93(t,J=7.6,2H),7.12(d,J=7.8,1H),7.17(s,1H),7.51(d,J=7.8,1H).

        步骤C:N-羟基3-甲基-4-(2-(叔丁氧羰基)乙基)苯甲脒

        将2.5g(10.2mmol)3-(3-甲基-4-氰基苯基)丙酸叔丁酯(步骤B)、0.85g(12.2mmol)羟胺盐酸盐、2.57g(30.6mmol)碳酸氢钠和30ml甲醇的混合物在封闭管中于100℃加热16小时。冷却反应混合物至室温,然后浓缩。残余物在EtOAc(50ml)和水(50ml)之间分配。分离出有机层,用饱和NaCl(3×50ml)洗涤,经硫酸镁干燥,浓缩。通过Biotage40M柱色谱(7∶3?v/v己烷/EtOAc用作洗脱剂),得到1.65g(58%)标题化合物(白色固体):

        ????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.45(s,9H),2.40(s,3H),2.54(t,J=7.8,2H),2.90(t,J=7.8,2H),5.05(s,2H),7.04(d,J=7.8,1H),7.08(s,1H),7.27(d,J=7.8,1H).

        ?????????????????????????N-羟基脒2

        ??????(R/S)-N-羟基3-甲基-4-(2-(叔丁氧羰基)丙基)苯甲脒

        标题化合物按照用于N-羟基脒1的类似方法制备,在步骤A中用甲基丙烯酸叔丁酯替代丙烯酸叔丁酯。用50%羟胺水溶液替代羟胺盐酸盐和三乙胺,在步骤C中,将反应混合物用微波反应器在180℃加热15分钟:

        1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.11(d,J=6.2,3H),1.40(s,9H),2.41(s,1.5H),2.47(s,1.5H),2.62(m,2H),2.95(m,1H),4.88(bs,2H),5.90(bs,0.5H),6.48(bs,0.5H),7.04(m,2H),7.28(m,0.5H),7.37(m,0.5H).

        ???????????????????????N-羟基脒3

        ??(R/S)-N-羟基3-甲基-4-(1-甲基-2-(叔丁氧羰基)乙基)苯甲脒

        标题化合物按照用于N-羟基胺1的类似方法制备,在步骤A中用丁烯酸叔丁酯替代丙烯酸叔丁酯。用50%羟胺水溶液替代羟胺盐酸盐和三乙胺,在步骤C中,将反应混合物用微波反应器在180℃加热15分钟:

        ?????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.28(d,J=1.1,3H),1.39(s,9H),2.42(s,1.5H),2.50(m,3.5H),3.23(m,1H),5.09(bs,2H),5.80(bs,0.5H),5.92(bs,0.5H),7.09(m,2H),7.29(m,0.5H),7.41(m,0.5H).

        ?????????????????????????N-羟基脒4

        (1R,2R/1S,2S)-N-羟基3-甲基-4-(2-(叔丁氧羰基)环丙-1-基)苯甲脒

        步骤A:(1R,2R/1S,2S)-2-(4-氰基-3-甲基苯基)环丙烷甲酸叔丁酯

        在室温下,在30分钟内向0.89g(37.0mmol)氢化钠(60%分散于矿物油中)的20ml?DMSO悬浮液中分几批加入8.14g(37.0mmol)碘化三甲基氧化锍。将混合物在室温下搅拌1小时,然后分几批加入固体的3-(3-甲基-4-氰基苯基)丙烯酸叔丁酯(N-羟基脒1,步骤A)。将悬浮液在室温下搅拌2小时,在50℃加热1小时。冷却反应混合物至室温,用30ml水稀释,用乙醚(5×75ml)萃取。有机相用水(3×50ml)、饱和NaCl(3×50ml)洗涤,经硫酸镁干燥,浓缩。用Biotage?40M柱色谱(17∶3?v/v己烷/EtOAc用作洗脱剂),得到1.80g标题化合物:

        ????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.27(m,1H),1.50(s,9H),1.63(m,1H),1.88(m,1H),2.44(m,1H),2.54(s,1H),6.98(d,J=8.0,1H),7.04(s,1H),7.52(d,J=8.0,1H).

        步骤B:(1R,2R/1S,2S)-N-羟基3-甲基-4-(2-(叔丁氧羰基)环丙-1-基)苯甲脒

        标题化合物按照用于N-羟基脒1的类似方法制备,在步骤C中用50%羟胺水溶液替代羟胺盐酸盐。将反应混合物用微波反应器在180℃加热15分钟:

        ???????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.24(m,1H),1.48(s,9H),1.55(m,1H),1.84(m,1H),2.41(s,3H),2.43(m,1H),4.83(bs,2H),6.91(dd,J=1.6,6.4,1H),6.95(s,1H),7.29(d,J=2.5,1H).

        ??????????????????????N-羟基脒5

        ??????N-羟基2-甲基-6-(2-(叔丁氧羰基)乙基)烟碱脒

        步骤A:2-甲基-3-羟基-6-碘吡啶

        向1.05g(9.62mmol)2-甲基-3-羟基吡啶和2.04g(19.24mmol)碳酸钠的10ml?H2O和5ml?CH3OH悬浮液中分几批加入2.44g(9.62mmol)碘。室温下搅拌30分钟后,反应混合物用5.0N?HCl酸化直到pH=3?;旌衔镉肊tOAc(3×20ml)萃取。合并有机层,经硫酸镁干燥,浓缩。用Biotage?40M柱色谱(1∶9?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到1.04g标题化合物:

        ??????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ2.28(s,3H),6.76(d,J=8.2,1H),7.34(d,J=8.7,1H).

        步骤B:2-甲基-3-苄氧基-6-碘吡啶

        将810mg(3.45mmol)2-甲基-3-羟基-6-碘吡啶(步骤A)、533μl(4.48mmol)苄基溴、953mg(6.89mmol)碳酸钾和催化量四丁基碘化铵的10ml丙酮悬浮液回流3小时,冷却至室温。通过硅藻土饼滤出固体,用EtOAc洗涤,浓缩滤液。用Biotage?40M柱色谱(1∶19?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到1.03g标题化合物:

        ??????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ2.48(s,3H),5.04(s,2H),6.79(d,J=8.4,1H),7.32-7.42(m,6H).

        步骤C:(2E)-3-(5-苄氧基-6-甲基吡啶-2-基)丙烯酸叔丁酯

        向828mg(2.55mmol)2-甲基-3-苄氧基-6-碘吡啶(步骤B)、746μl(5.09mmol)丙烯酸叔丁酯、535mg(6.37mmol)碳酸氢钠、708mg(255mmol)四丁基氯化铵和20mg研碎的4A分子筛的10ml?DMF溶液中加入29mg(0.13mmol)乙酸钯。在60℃搅拌5小时后,冷却反应混合物至室温,用EtOAc(20ml)稀释,然后通过硅藻土饼过滤。滤液用盐水(100ml)、H2O(3×100ml)和盐水(100ml)洗涤。有机层经硫酸钠干燥,浓缩。用Biotage?40M柱色谱(2∶23?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到703mg标题化合物:

        ???????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.52(s,9H),2.53(s,3H),5.09(s,2H),6.70(d,J=15.6,2H),7.06(d,J=8.5,1H),7.18(d,J=8.5,1H),7.37-7.42(m,5H),7.52(d,J=15.8,2H).

        步骤D:3-(5-羟基-6-甲基吡啶-2-基)丙酸叔丁酯

        将700mg(2.15mmol)(2E)-3-(5-苄氧基-6-甲基吡啶-2-基)丙烯酸叔丁酯(步骤C)和100mg?20%氢氧化钯/碳的20ml?EtOH溶液在1atm氢气氛下搅拌过夜。催化剂通过硅藻土饼滤出,用EtOAc充分洗涤。浓缩滤液。用Biotage?40M柱色谱(7∶13?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到450mg标题化合物:

        ????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.41(s,9H),2.49(s,3H),2.63(d,J=7.4,2H),2.98(d,J=7.4,2H),6.90(d,J=8.3,1H),7.05(d,J=8.3,1H).

        步骤E:3-(5-三氟甲基磺酰氧基-6-甲基吡啶-2-基)丙酸叔丁酯

        向450mg(1.90mmol)3-(5-羟基-6-甲基吡啶-2-基)丙酸叔丁酯(步骤D)和881mg(2.47mmol)N-苯基-双(三氟甲磺酰亚胺)的10ml?CH2Cl2溶液中加入661μl(3.79mmol)N,N-二异丙基乙胺。将混合物在室温下搅拌过夜,然后浓缩。用Biotage?40M柱色谱(2∶23?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到664mg标题化合物:

        ????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.41(s,9H),2.57(s,3H),2.70(d,J=7.3,2H),3.05(d,J=7.4,2H),7.10(d,J=8.5,1H),7.45(d,J=8.5,1H).

        步骤F:3-(5-氰基-6-甲基吡啶-2-基)丙酸叔丁酯

        向729mg(1.97mmol)3-(5-三氟甲基磺酰氧基-6-甲基吡啶-2-基)丙酸叔丁酯(步骤E)和464mg(3.95mmol)氰化锌的10ml?DMF溶液中加入137mg(0.12mmol)四(三苯基膦)合钯(0)。在85℃搅拌4小时后,反应混合物用10ml?EtOAc稀释,通过硅藻土饼过滤。固体用EtOAc(3×10ml)洗涤,浓缩滤液。用Biotage?40M柱色谱(3∶17?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到487mg标题化合物:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1HNMR(500MHz,CDCl3)δ1.42(s,9H),2.71(d,J=7.4,2H),2.73(s,3H),3.09(d,J=7.3,2H),7.12(d,J=8.0,1H),7.77(d,J=8.0,1H).

        步骤G:N-羟基2-甲基-6-(2-(叔丁氧羰基)乙基)烟碱脒

        标题化合物按照用于N-羟基脒1的类似方法制备,在N-羟基脒1步骤C中用3-(3-甲基-4-氰基苯基)丙酸叔丁酯替代3-(5-氰基-6-甲基吡啶-2-基)丙酸叔丁酯(步骤F):

        ??????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.41(m,9H),2.60-2.69(m,5H),3.04(d,J=7.5,2H),4.92(br.s,1H),6.05-6.60(m,1H),7.01-7.04(m,1H),7.56-7.66(m,1H).

        ???????????????????????N-羟基脒6

        ????(R/S)-N-羟基2-甲基-6-(2-(叔丁氧羰基)丙基)烟碱脒

        标题化合物按照用于N-羟基脒5的类似方法制备,在步骤C中用丁烯酸叔丁酯替代丙烯酸叔丁酯。

        羧酸中间体的制备

        ?????????????????????????羧酸1

        ?????????????????3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸

        步骤A:3-溴-4-羟基苯甲酸甲酯

        3.9g(18.0mmol)3-溴-4-羟基苯甲酸的20ml?3∶1?v/vCH2Cl2/CH3OH溶液用10.8ml?2.0M(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷的己烷溶液处理。将混合物在室温下搅拌2小时,然后浓缩,得到4.6g标题化合物:

        ???????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ3.90(s,3H),5.93(bs,1H),7.05(d,J=8.5,1H),7.92(dd,J=2.1,8.5,1H),8.19(d,J=2.0,1H).

        步骤B:3-溴-4-异丙氧基苯甲酸甲酯

        将4.6g(19.9mmol)3-溴-4-羟基苯甲酸甲酯(步骤A)、2.2ml(21.9mmol)2-碘丙烷、5.5g(39.8mmol)碳酸钾和10ml?DMF的混合物在65℃搅拌3小时?;旌衔镉?0ml?EtOAc稀释,用饱和NaCl、水(3x)和饱和NaCl洗涤。有机层经硫酸镁干燥,浓缩。用Biotage?40M柱色谱(24∶1?v/v?己烷/EtOAc),得到4.3g标题化合物:

        ????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.44(d,J=6.2,6H),3.91(s,3H),4.71-4.79(m,1H),6.99(d,J=8.9,1H),8.18(dd,J=2.2,8.8,1H),8.24(d,J=2.1,1H).

        步骤C:3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸甲酯

        将1.32g(4.83mmol)3-溴-4-异丙氧基苯甲酸甲酯(步骤B)、341mg(2.90mmol)氰化锌、67mg(0.12mmol)1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁、44mg(0.05mmol)三(二亚苄基丙酮)合二钯(0)-氯仿络合物、50μl水和5.0ml?DMF的混合物在120℃搅拌48小时。冷却混合物,然后在EtOAc和饱和NaCl之间分配。分离出水层,用3x?EtOAc萃取。合并有机层,经硫酸镁干燥,浓缩。用Biotage?40M柱色谱(9∶1?v/v己烷/EtOAc),得到802mg标题化合物:

        ???????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.44(d,J=6.2,6H),3.91(s,3H),4.71-4.79(m,1H),6.99(d,J=8.9,1H),8.18(dd,J=2.2,8.8,1H),8.24(d,J=2.1,1H).

        步骤D:3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸

        802mg(3.66mmol)3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸甲酯(步骤C)的5.0ml?EtOH溶液用770μl?5.0N?NaOH处理。将混合物在室温下搅拌16小时,然后浓缩。残余物在EtOAc和HCl水溶液之间分配。分离出有机层,经硫酸钠干燥后浓缩,得到706mg标题化合物:

        ???1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.46(d,J=6.0,6H),4.74-4.81(m,1H),7.02(d,J=9.0,1H),8.24(dd,J=2.3,8.9,1H),8.32(d,J=2.0,1H).

        ????????????????????????羧酸2

        ????????????????3-氯-4-异丙氧基苯甲酸

        步骤A:3-氯-4-异丙氧基苯甲酸甲酯

        在0℃,1.42g(7.63mmol)3-氯-4-羟基苯甲酸甲酯、585μl(7.63mmol)2-丙醇和3.0g(11.45mmol)三苯基膦的20ml?THF溶液用2.25ml(11.45mmol)偶氮二甲酸二异丙酯处理。将混合物在室温下搅拌16小时,然后浓缩。用Biotage?40M柱色谱(19∶1?v/v己烷/EtOAc用作洗脱剂),得到1.77g标题化合物:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.41(d,J=6.2,6H),4.63-4.70(m,1H),6.93(d,J=8.7,1H),7.89(dd,J=2.2,8.6,1H),8.05(d,J=2.0,1H).

        步骤B:3-氯-4-异丙氧基苯甲酸

        标题化合物按照用于羧酸1步骤D的类似方法制备,用3-氯-4-异丙氧基苯甲酸甲酯(步骤A)替代3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸甲酯:

        ??????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.43(d,J=5.9,6H),4.66-4.73(m,1H),6.96(d,J=8.9,1H),7.97(dd,J=2.1,8.7,1H),8.12(d,J=2.0,1H),11.7(bs,1H).

        ???????????????????????羧酸3-6

        以下羧酸中间体按照用于羧酸2的类似方法制备,在步骤A中用适当苯甲酸酯替代3-氯-4-羟基苯甲酸甲酯。

        ???????????????????????羧酸7

        ????????????????3-氟-4-异丙氧基苯甲酸

        步骤A:1-异丙氧基-2-氟-4-溴苯

        标题化合物按照用于羧酸2步骤A的类似方法制备,用2-氟-4-溴苯酚替代3-氯-4-羟基苯甲酸甲酯:

        ???????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.35(d,J=6.0,6H),4.46-4.53(m,1H),6.85(t,J=8.7,1H),7.16(dt,J=2.0,8.7,1H),7.22(dd,J=2.5,10.5,1H).

        步骤B:3-氟-4-异丙氧基苯甲酸

        在-78℃,639mg(2.74mmol)1-异丙氧基-2-氟-4-溴苯(步骤A)的10ml?THF溶液用1.64ml?2.0M正丁基锂的庚烷溶液处理。在-78℃搅拌30分钟后,将混合物倒在300g碎干冰上,让其升至室温?;旌衔镌?00ml?2.0N?NaOH和100ml?Et2O之间分配。分离出水层,用5.0NHCl酸化至pH?2,用CH2Cl2(3×50ml)萃取。合并有机层,经硫酸镁干燥,浓缩,得到380mg标题化合物:

        ????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.41(d,J=6.2,6H),4.65-4.73(m,1H),7.00(t,J=8.5,1H),7.79-7.87(m,2H).

        ????????????????????????羧酸8

        ????????????3-三氟甲基-4-(2-(S)-丁氧基)苯甲酸

        步骤A:3-三氟甲基-4-(2-(S)-丁氧基)苯甲腈

        在-10℃,1.1g(5.9mmol)4-氟-3-三氟甲基苯甲腈和485mg(6.5mmol)(S)-(+)-2-丁醇的10ml?THF溶液用235mg(5.9mmol)氢化钠处理。将所得混合物在低温下搅拌2小时,然后用10ml水猝灭。猝灭的溶液用30ml?Et2O萃取,经硫酸镁干燥,浓缩。用Biotage?40M柱色谱(4∶1?v/v己烷/乙酸乙酯用作洗脱剂),得到550mg标题化合物:

        ????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz)δ0.99(t,J=7.6,3H),1.35(d,J=6.2,3H),1.58-1.83(m,2H),4.51(七重峰,1H),7.04(d,J=8.7,1H),7.75(d,J=8.7,1H),7.85(s,1H).

        步骤B:3-三氟甲基-4-(2-(S)-丁氧基)苯甲酸

        550mg(2.2mmol)3-三氟甲基-4-(2-(S)-甲基丙氧基)苯甲腈(步骤A)的5ml乙醇溶液用1.5ml?5.0N?NaOH处理,加热至80℃3小时。然后浓缩反应物,用2N?HCl处理,用30ml?EtOAc萃取,干燥后浓缩,得到600mg标题化合物:

        ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500Mhz)δ0.99(t,J=7.3,3H),1.43(d,J=5.9,3H),1.73-1.83(m,2H),4.54(七重峰,1H),7.02(d,J=8.9,1H),8.21(d,J=8.9,1H),8.32(s,1H).

        ????????????????????????羧酸9

        ????????????3-三氟甲基-4-(异丙氧基)苯甲酸

        标题化合物按照用于羧酸8的类似方法制备,在步骤A中用异丙醇替代(S)-2-丁醇:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500Mhz)δ8.36(s,1H),8.26(d,J=8.7,1H),7.08(d,J=8.7,1H),4.75-4.82(m,1H),1.44(d,J=5.9,6H).

        ????????????????????????羧酸10

        ????????(R/S)-3-三氟甲基-4-(1-(三氟甲基)乙氧基)苯甲酸

        标题化合物按照用于羧酸8的类似方法制备,在步骤A中用1,1,1-三氟-2-丙醇替代(S)-2-丁醇:

        1H?NMR(500Mhz)δ8.41(d,J=2.1,1H),8.31(dd,J=2.1,6.6,1H),7.14(d,J=8.7,1H),4.89-4.96(m,1H),1.63(d,J=6.4,3H).

        ????????????????????????羧酸11

        ????3-氧基-4-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)苯甲酸

        步骤A:5-甲?;?2-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)苯甲腈

        在0℃,向0.50g(4.38mmol)1,1,1-三氟-2-丙醇的15ml?DMF溶液中加入0.13g(5.26mmol)氢化钠(60%分散于矿物油中)。在搅拌10分钟后,加入0.65g(4.38mmol)2-氟-5-甲?;郊纂?。将反应混合物逐步升至室温,搅拌过夜?;旌衔镉?0ml?EtOAc稀释,用盐水(10ml)、水(3×10ml)和盐水(10ml)洗涤。有机层经硫酸镁干燥,浓缩。用Biotage40M柱色谱(4∶1?v/v?己烷/EtOAc用作洗脱剂),得到0.44g标题化合物:

        ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.67(d,J=6.4,3H),4.95(m,1H),7.22(d,J=8.9,1H),8.12(dd,J=2.0,6.7,1H),8.16(s,1H),9.96(s,1H).

        步骤B:3-氰基-4-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)苯甲酸

        在0℃,向440mg(1.81mmol)5-甲?;?2-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)苯甲腈(步骤A)的20ml丙酮溶液中,滴加Jones试剂溶液(在0℃将0.27g(2.71mmol)氧化铬(VI)溶于0.25ml浓硫酸中,用2ml水稀释)。将反应混合物逐步升至室温,搅拌过夜,浓缩。残余物用20ml?EtOAc稀释,用盐水(10ml)、水(3×10ml)和盐水(10ml)洗涤。有机层经硫酸镁干燥,浓缩,得到0.44g标题化合物:

        ????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.69(d,J=6.4,3H),4.94(m,1H),7.16(d,J=9.1,1H),8.34(dd,J=2.0,6.9,1H),8.42(d,J=2.1,1H).

        ????????????????????羧酸12-14

        以下羧酸中间体按照用于羧酸11的类似方法制备,在步骤A中用适当醇替代2,2,2-三氟乙醇。

        ???????????????????????羧酸15

        ??????????????3,5-二氯-4-异丙氧基苯甲酸

        步骤A:3,5-二氯-4-异丙氧基苯甲酸甲酯

        在室温下,向2.0g(9.05mmol)3,5-二氯-4-羟基苯甲酸甲酯的15mlDMF溶液中加入2.3g(13.57mmol)2-碘丙烷和3.75g(27.14mmol)碳酸钾。室温下搅拌过夜后,混合物用50ml?EtOAc稀释,用盐水(30ml)、水(3×30ml)和盐水(30ml)洗涤。有机层经硫酸镁干燥,浓缩。用Biotage40M柱色谱(9∶1?v/v己烷/EtOAc用作洗脱剂),得到1.88g标题化合物:

        ????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.41(d,J=6.2,6H),3.94(s,3H),4.75(m,1H),8.00(s,2H).

        步骤B:3,5-二氯-4-异丙氧基苯甲酸

        向1.88g(7.15mmol)3,5-二氯-4-异丙氧基苯甲酸甲酯(步骤A)的20ml甲醇溶液中加入4ml?5.0N氢氧化钠溶液。将混合物在室温下搅拌过夜,浓缩。残余物在EtOAc(30ml)和1N?NaOH(30ml)之间分配。分离出水层,用EtOAc(2×30ml)洗涤,用5.0N?HCl酸化至pH=1,然后用EtOAc(3×30ml)萃取。合并有机层,经硫酸镁干燥后浓缩,得到1.51g标题化合物:

        1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.43(d,J=6.2,6H),4.79(m,1H),8.07(s,2H).

        ????????????????????羧酸16-19

        以下羧酸中间体按照用于羧酸15的类似方法制备,在步骤A中分别用适当的苯甲酸酯和烷基卤替代3,5-二氯-4-羟基苯甲酸甲酯和2-碘丙烷。

        ?????????????????????羧酸20

        ????5-氰基-6-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)烟酸

        步骤A:5,6-二氯烟酸甲酯

        在室温下,向2.15g(11.2mmol)5,6-二氯烟酸的10ml?v∶v?1∶1CH2Cl2/CH3OH溶液中,滴加8.4ml(16.8mmol)(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(2.0M的己烷溶液)。将混合物在室温下搅拌30分钟,然后浓缩。用Biotage?40M柱色谱(1∶19?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到1.85g标题化合物:

        ????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ3.98(s,3H),8.35(d,J=1.8,1H),8.88(d,J=1.8,1H).

        步骤B:5-氯-6-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)烟酸甲酯

        在-78℃,向630mg(3.06mmol)5,6-二氯烟酸甲酯(步骤A)和349μl(3.06mmol)1,1,1-三氟-2-丙醇的10ml?THF溶液中,加入3.1ml(3.06mmol)双(三甲基甲硅烷基)氨基钠(1.0M的THF溶液)。在-78℃搅拌30分钟后,在0℃搅拌5小时,加入10ml饱和氯化铵猝灭反应物。将混合物倒入盐水中,用CH2Cl2(3×20ml)萃取。合并有机层,经硫酸镁干燥,浓缩。用Biotage?40M柱色谱(3∶97?v/v?Et2O/己烷用作洗脱剂),得到627mg标题化合物:

        ????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.56(d,J=6.4,3H),3.93(s,3H),5.86(m,1H),8.27(d,J=2.1,1H),8.67(d,J=2.0,1H).

        步骤C:5-氰基-6-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)烟酸甲酯

        向627mg(2.21mmol)5-氯-6-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)烟酸甲酯(步骤B)、123mg(0.22mmol)、156mg(1.33mmol)氰化锌和29mg(0.44mmol)锌粉的5.0ml?DMF溶液中,加入101mg(0.11mmol)三(二亚苄基丙酮)合二钯(0)。在120℃搅拌过夜后,通过硅藻土饼过滤混合物,用EtOAc洗涤。滤液用盐水(10ml)、水(3×10ml)和盐水(10ml)洗涤。有机层经硫酸镁干燥,浓缩。用Biotage?40M柱色谱(1∶9?v/vEtOAc/己烷用作洗脱剂),得到498mg标题化合物:

        ?????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.59(d,J=6.6,3H),3.97(s,3H),5.93(m,1H),8.54(d,J=2.2,1H),8.96(d,J=2.3,1H).

        步骤D:5-氰基-6-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)烟酸

        向363mg(1.32mmol)5-氰基-6-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)烟酸甲酯(步骤C)和5.0ml?1,1,1-三氟-2-丙醇的5.0ml?Et2O溶液中,加入530μl(2.65mmol)5.0N?NaOH。室温下搅拌过夜后,混合物用Et2O(20ml)稀释,用稀HCl(2×10ml)洗涤,经硫酸钠干燥后浓缩,得到327mg标题化合物:

        ????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.46(d,J=6.4,3H),5.92(m,1H),8.52(d,J=2.1,1H),8.86(d,J=2.0,1H).

        ????????????????????羧酸21

        ??????????????5-氰基-6-乙氧基烟酸

        向498mg(1.82mmol)5-氰基-6-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)烟酸甲酯(羧酸20步骤C)的10ml?EtOH溶液中加入1.8ml?5.0N?NaOH。室温下搅拌过夜后,混合物用Dowex?H阳离子交换树脂酸化至pH=3。滤出树脂,浓缩滤液,得到160mg标题化合物:

        ?????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.37(t,J=7.1,3H),4.50(d,J=7.1,2H),8.43(d,J=2.1,1H),8.85(d,J=2.3,1H).

        ????????????????????羧酸22

        ?????????????5-氰基-6-异丁基烟酸

        步骤A:5-氰基-6-羟基烟酸乙酯

        向716mg(2.44mmol)6-羟基-5-碘烟酸乙酯和573mg(4.88mmol)氰化锌的10ml?DMF溶液中,加入169mg(0.15mmol)四(三苯基膦)合钯(0)。在80℃搅拌过夜后,通过硅藻土饼过滤混合物。滤液用盐水(10ml)、水(3×10ml)和盐水(10ml)洗涤,经硫酸镁干燥,浓缩。用Biotage40M柱色谱(4∶1?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到222mg标题化合物:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????1HNMR(500MHz,CD3OD)δ1.29(d,J=7.1,3H),4.28(q,J=7.1,2H),8.31(d,J=2.5,1H),8.42(d,J=2.8,1H).

        步骤B:6-氯-5-氰基烟酸乙酯

        向222mg(1.16mmol)5-氰基-6-羟基烟酸乙酯(步骤A)的5mlSOCl2溶液中加入500μl?DMF?;亓鞴购?,冷却混合物至室温,浓缩。将残余物溶于EtOAc(20ml)中,用盐水(10ml)、饱和碳酸氢钠(10ml)和盐水(10ml)洗涤,经硫酸钠干燥,浓缩。用Biotage?40M柱色谱(1∶9v/v?EtOAc/己烷),得到145mg标题化合物:

        1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.44(d,J=7.1,3H),4.46(q,J=7.1,2H),8.58(d,J=2.1,1H),9.15(d,J=2.1,1H).

        步骤C:5-氰基-6-异丁基烟酸乙酯

        向145mg(0.69mmol)6-氯-5-氰基烟酸乙酯(步骤B)、1.65ml(0.83mmol)异丁基溴化锌(0.5M的THF溶液)和100ml?1-甲基-2-吡咯烷酮溶液中加入18mg(0.03mmol)双(三叔丁基膦)合钯(0)。在65℃搅拌过夜后,冷却反应混合物至室温,通过硅藻土饼过滤。浓缩滤液。用Biotage?40S柱色谱(1∶19?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到75mg标题化合物:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ0.99(d,J=6.7,6H),1.43(t,J=7.1,3H),2.27(m,1H),2.99(d,J=7.3,2H),4.45(q,J=7.1,2H),8.50(d,J=2.1,1H),9.28(d,J=2.3,1H).

        步骤D:5-氰基-6-异丁基烟酸

        标题化合物按照羧酸11步骤D介绍的类似方法制备,用5-氰基-6-异丁基烟酸乙酯替代3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸甲酯:

        ???????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ0.98(d,J=6.8,6H),2.23(m,1H),2.95(d,J=7.3,2H),8.57(d,J=2.0,1H),9.20(d,J=2.0,1H).

        ????????????????????羧酸23

        ????????4-(1,1-二氟-2-甲基丙基)苯甲酸

        步骤A:4-(1-羟基-2-甲基丙基)苯甲酸乙酯

        在-40℃,向3.19g(11.6mmol)4-碘代苯甲酸乙酯的10ml?THF溶液中加入6.4ml(12.7mmol)异丙基氯化镁(2.0M的THF溶液)。在-40℃搅拌1小时后,加入1.26ml(13.9mmol)异丁醛。在-40℃搅拌1小时后,加入10ml饱和碳酸氢钠猝灭反应物。让混合物升至室温,倒入盐水(20ml)中。水层用CH2Cl2(3×20ml)萃取。合并有机层,经硫酸钠干燥,浓缩。用Biotage?40M柱色谱(1∶9?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到2.08g标题化合物:

        ?????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ0.82(d,J=6.9,3H),0.96(d,J=6.6,3H),1.39(t,J=7.1,3H),1.95(m,1H),2.09(br.s,1H),4.36(q,J=7.1,2H),4.45(d,J=6.4,1H),7.37(d,J=8.2,2H),7.99(d,J=8.3,2H).

        步骤B:4-异丁?;郊姿嵋阴?br>
        向2.08g(9.36mmol)4-(1-羟基-2-甲基丙基)苯甲酸乙酯(步骤A)和1.64g(14.04mmol)4-甲基吗啉N-氧化物的20ml?CH2Cl2溶液中加入164mg(0.47mmol)四丙基过钌酸铵和少量碾碎的4A分子筛。室温下搅拌2小时后,通过硅藻土饼过滤混合物,浓缩滤液。用Biotage?40M柱色谱(1∶19?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到2.0g标题化合物:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.23(t,J=6.9,6H),1.41(t,J=7.1,3H),3.56(m,1H),4.41(q,J=7.1,2H),7.99(dd,J=1.7,6.5,2H),8.13(dd,J=1.9,6.7,2H).

        步骤C:4-(1,1-二氟-2-甲基丙基)苯甲酸乙酯

        在0℃,向2.34ml(12.7mmol)双((2-甲氧基乙基)氨基)三氟化硫的5ml甲苯溶液中加入115μl(0.91mmol)三氟化硼-乙醚溶液。将混合物搅拌在0℃搅拌1小时后,加入2.0g(9.08mmol)4-异丁?;郊姿嵋阴?步骤B)的10ml甲苯溶液。在50℃搅拌过夜,冷却反应混合物至室温,加入20ml饱和碳酸氢钠?;旌衔镉肅H2Cl2(3×20ml)萃取。合并有机层,经硫酸镁干燥,浓缩。用Biotage?40M柱色谱(1.0L?3∶97v/v?Et2O/己烷和1.0L?1∶9?v/v?Et2O/己烷用作洗脱剂),得到896mg原料(极性部分)和1.14g标题化合物:

        ????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ0.99(d,J=6.9,6H),1.41(t,J=7.1,3H),2.33(m,1H),4.40(q,J=7.1,2H),7.50(d,J=8.2,2H),8.09(d,J=8.4,2H).

        步骤D:4-(1,1-二氟-2-甲基丙基)苯甲酸

        标题化合物按照羧酸11步骤D介绍的类似方法制备,用4-(1,1-二氟-2-甲基丙基)苯甲酸乙酯替代3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸甲酯:

        ????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.00(d,J=6.8,6H),2.34(m,1H),7.56(d,J=8.4,2H),8.17(d,J=8.5,2H).

        ????????????????????羧酸24

        ????5-碘-6-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)烟酸

        步骤A:6-氯-5-碘烟酸乙酯

        向2.03g(7.66mmol)6-羟基-5-碘烟酸的15ml?SOCl2溶液中加入1ml?DMF?;亓鞴购?,浓缩混合物。将残余物用10ml?EtOH处理,浓缩。重复该过程3次。用Biotage?40M柱色谱(1∶19?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到2.34g标题化合物:

        ???????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.41(d,J=7.1,3H),4.41(q,J=7.1,2H),8.71(d,J=2.1,1H),8.93(d,J=2.1,1H).

        步骤B:5-碘-6-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)烟酸乙酯

        在室温下,向120mg(0.39mmol)6-氯-5-碘烟酸乙酯(步骤A)和52μl(0.58mmol)1,1,1-三氟-2-丙醇的5ml?THF溶液中加入578μl(0.58mmol)双(三甲基甲硅烷基)氨基钠(1.0M的THF溶液)?;亓鞴购?,浓缩反应混合物。用Biotage?40S柱色谱(1∶49?v/v?Et2O/己烷用作洗脱剂),得到73mg标题化合物:1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.39(t,J=7.1,3H),1.55(d,J?=6.6,3H),4.38(q,J=7.1,2H),5.79(m,1H),8.66(d,J=2.1,1H),8.73(d,J=2.0,1H).

        步骤C:5-碘-6-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)烟酸

        标题化合物按照羧酸20步骤D介绍的类似方法制备,用5-碘-6-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)烟酸乙酯(步骤C)替代5-氰基-6-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)烟酸甲酯:

        ????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.57(d,J=6.4,3H),5.81(m,1H),8.72(d,J=2.0,1H),8.81(d,J=2.1,1H).

        ????????????????????????羧酸25

        ???4-(三氟甲基)-6-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)烟酸

        在-78℃,向180mg(1.56mmol)1,1,1-三氟-2-丙醇的10ml?THF溶液中加入1.56ml(1.56mmol)双(三甲基甲硅烷基)氨基钠(1.0M的THF溶液)。在-78℃30分钟后,加入250mg(1.04mmol)6-氯-4-(三氟甲基)烟酸甲酯。将反应混合物逐步升至室温,搅拌过夜?;旌衔镉?0mlEtOAc稀释,用盐水洗涤。有机层经硫酸镁干燥,浓缩。用HPLC?B纯化,得到160mg标题化合物:

        1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.57(d,J=6.6,3H),5.91(m,1H),7.26(s,1H),8.98(s,1H).

        ????????????????????????羧酸26

        ????????????????5-碘-6-异丙氧基烟酸

        步骤A:6-羟基-5-碘烟酸乙酯

        将4.6g(17.36mmol)5-碘-6-羟基烟酸和7.0ml浓硫酸的40ml乙醇悬浮液回流16小时。冷却反应混合物至室温,过滤,得到3.0g标题化合物(白色固体):

        ????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1HNMR(500MHz,DMSO)δ1.25(t,J=6.9,3H),4.21(q,J=6.6,2H),8.05(d,J=1.4,1H),8.33(d,J=1.3,1H).

        步骤B:5-碘-6-异丙氧基烟酸乙酯

        向500mg(1.71mmol)6-羟基-5-碘烟酸乙酯(步骤A)的10ml?DMF溶液中加入330mg(1.96mmol)2-碘丙烷和1.67g(5.11mmol)碳酸铯。在50℃搅拌16小时后,反应混合物在EtOAc(20ml)和水(20ml)之间分配。有机层用盐水(3×20ml)洗涤,经硫酸镁干燥,浓缩。用Biotage25+M柱色谱(4∶1?v/v?己烷/EtOAc用作洗脱剂),得到210mg(37%)标题化合物(白色固体):

        ????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.40(m,9H),4.37(q,J=7.1,2H),5.37(m,1H),8.59(d,J=2.1,1H),8.74(d,J=2.0,1H).

        步骤C:5-碘-6-异丙氧基烟酸

        向210mg(0.63mmol)5-碘-6-异丙氧基烟酸乙酯(步骤B)的2.5ml异丙醇溶液中加入250μl?5.0N?NaOH。室温下搅拌5小时后,反应混合物在EtOAc(10ml)和1.0N?HCl(10ml)之间分配。分离出有机层,用盐水(3×5ml)洗涤,经硫酸镁干燥后浓缩,得到190mg标题化合物:

        ????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.44(d,J=6.4,6H),5.44(m,1H),8.66(d,J=2.1,1H),8.83(d,J=2.1,1H).

        ????????????????????羧酸27

        ????????????5-三氟甲基-6-(吗啉-4-基)烟酸

        步骤A:2-羟基-3-三氟甲基-5-溴吡啶

        将1.95g(12mmol)2-羟基-3-三氟甲基-吡啶和0.8ml溴的10mlMeOH溶液在室温下搅拌20小时。将溶液浓缩,残余物在100ml?EtOAc和25ml水之间分配。分离各层,有机层用25ml?5%Na2S2O3、25ml饱和NaCl洗涤,干燥后浓缩。用Biotage?40M柱色谱(3∶1?己烷/丙酮用作洗脱剂),得到1.84g标题化合物:ESI-MS(m/z)242.1,244.1;HPLC?A:2.22min。

        步骤B:2-氯-3-三氟甲基-5-溴吡啶

        将1.83g(7.6mmol)2-羟基-3-三氟甲基-5-溴吡啶(步骤A)的15mlPOCl3的混合物回流加热3小时。冷却混合物,倒在200g冰上。所得混合物用200ml?CH2Cl2萃取。将萃取液干燥后浓缩。用Biotage?40M柱色谱(己烷用作洗脱剂),得到1.11g标题化合物:

        ????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ8.14(d,J=2.0,1H),8.64(d,J=2.0,1H).

        步骤C:2-(吗啉-4-基)-3-三氟甲基-5-溴吡啶

        将260mg(1.0mmol)2-氯-3-三氟甲基-5-溴吡啶(步骤B)和3ml吗啉的混合物在80℃加热1小时。冷却混合物,浓缩。残余物在50mlCH2Cl2和1.0N?NaOH之间分配,分离各层。将有机物干燥后浓缩。用Biotage?40S柱色谱(19∶1?v/v己烷/乙醚用作洗脱剂),得到290mg标题化合物:

        1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ3.29(app?t,J=5.5,4H),3.82(app?t,J=5.5,4H);7.95(d,J=2.0,1H),8.45(d,J=2.0,1H.

        步骤D:2-(吗啉-4-基)-3-三氟甲基-5-氰基吡啶

        在氩气氛下,将160mg(0.63mmol)2-(吗啉-4-基)-3-三氟甲基-5-溴吡啶(步骤C)、117mg(1.0mmol)氰化锌、20.1mg(0.22mmol)三(二亚苄基丙酮)合二钯(0)、48.7mg(0.088mmol)1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁和2ml?N-甲基吡咯烷酮的混合物在100℃搅拌1小时。将混合物冷却,在乙醚和水之间分配。干燥有机层,浓缩。用Biotage?40S柱色谱(依次用9∶1?v/v?己烷/乙醚、17∶3?v/v?己烷/乙醚作为洗脱剂),得到87mg标题化合物:ESI-MS(m/z)258.2;HPLC?A:3.04min。

        步骤E:5-三氟甲基-6-(吗啉-4-基)-烟酸

        将249mg(0.97mmol)2-(吗啉-4-基)-3-三氟甲基-5-氰基吡啶(步骤D)的5ml?1∶1?v/v?5N?NaOH/EtOH溶液回流加热1小时。将混合物冷却,在20ml乙醚和20ml水之间分配。分离出水层,用浓HCl调节至pH=4。将沉淀固体滤出,用水冲洗后干燥,得到138mg标题化合物:

        ????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ3.52(app?t,J=5.0,4H),3.78(app?t,J=5.0,4H),8.40(d,J=2.0,1H),8.90(d,J=2.0,1H);ESI-MS(m/z)277.3;HPLC?A:2.71min.

        制备实施例

        ??????????????????????????实施例1

        3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        步骤A:3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯

        将25mg(0.09mmol)N-羟基脒1、21mg(0.10mmol)羧酸1、26mg(0.14mmol)N-(3-二甲氨基-丙基)-N′-乙基碳二亚胺和5ml乙腈的混合物在室温下搅拌2小时,然后在120℃搅拌16小时。冷却反应混合物至室温,浓缩。用Biotage?40S柱色谱(17∶3?v/v己烷/EtOAc用作洗脱剂),得到23mg标题化合物:1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.43(s,9H),1.47(d,J=6.2,6H),2.57(t,J=7.7,2H),2.65(s,3H),2.95(t,J=7.7,2H),4.76-4.83(m,1H),7.11(d,J=8.9,1H),7.17-7.19(m,2H),7.99(d,J=8.2,1H),8.33(dd,J=2.3,9.0,1H),8.42(d,J=2.0,1H).

        步骤B:3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        将23mg(0.05mmol)3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯(步骤A)的4∶1?v/v?CH2Cl2/TFA溶液在室温下搅拌30分钟。浓缩混合物。通过HPLC?B纯化,得到17mg标题化合物:

        ??????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.47(d,J=6.2,6H),2.66(s,3H),2.74(t,J=7.8,2H),3.01(t,J=7.8,2H),4.76-4.82(m,1H),7.11(d,J=9.0,1H),7.19-7.21(m,2H),8.01(d,J=8.3,1H),8.33(dd,J=2.3,8.9,1H),8.42(d,J=2.1,1H).

        ????????????????????实施例2-7

        以下实施例按照实施例1介绍的类似方法制备,在步骤A中用适当的羧酸替代羧酸1。

        ??1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.40(d,J=5.9,6H),2.61(s,3H),2.66(t,J=7.8,2H).2.96??(t,J=7.8,2H),4.80,(m,1H),7.24(m,2H),7.31(m,1H),7.89(m,1H),7.96(m,2H)

        ?????????????????????????实施例7

        3-(4-(5-(5-(2-甲基丙基)吡啶-2-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙

        ????????????????????????????酸

        步骤A:叔丁基3-(4-(5-(5-(2-甲基丙基)吡啶-2-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        标题化合物按照实施例1介绍的类似方法制备,在步骤A中用5-(2-甲基丙基)吡啶甲酸替代羧酸1:

        ????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.43(s,9H),2.57(t,J=7.8,2H),2.67(s,3H),2.95(t,J=7.7,2H),7.17-7.19(m,2H),8.06-8.09(m,2H),8.19(d,J=8.5,1H),8.91(d,J=2.1,1H).

        步骤B:3-(4-(5-(5-(2-甲基丙基)吡啶-2-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        标题化合物用叔丁基3-(4-(5-(5-(2-甲基丙基)吡啶-2-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸(步骤A)按照实施例1步骤B介绍的类似方法制备:

        ??????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ0.87(d,J=6.7,6H),1.84-1.92(m,1H),2.54-2.57(m,7H),2.87(t,J=7.7,2H),7.13-7.17(m,2H),7.83(dd,J=2.0,8.1,1H),7.91(d,J=7.8,1H),8.20(d,J=8.1,1H),8.51(s,1H).

        ????????????????????????实施例8

        (1S,2S/1R,2R)-2-(4-(5-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-

        ????????????????基)-3-甲基苯基)环丙烷甲酸

        步骤A:3-(4-溴-2-甲基苯基)-5-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑

        标题化合物按照实施例1步骤A介绍的类似方法制备,用2-甲基-4-溴苯甲脒替代N-羟基脒1,并且用羧酸9替代羧酸1:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.44(d,J=5.9,6H),2.67(s,3H),4.78(spt,J=6.2,1H),7.15(d,J=8.9,1H),7.48(dd,J=2.0,8.4,1H),7.51(s,1H),7.97(d,J=8.2,1H),8.30(dd,J=2.2,8.8,1H),8.43(d,J=2.3,1H).

        步骤B:(2E)-3-(4-(5-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙烯酸叔丁酯

        向181mg(0.41mmol)3-(4-溴-2-甲基苯基)-5-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑(步骤A)、66μl(0.45mmol)丙烯酸叔丁酯、6.1mg(0.02mmol)1,1′-联苯-2-基(二叔丁基)膦和132μl(0.62mmol)N-甲基二环己基胺的5.0ml?1,4-二_烷溶液中加入9.4mg(0.01mmol)三(二亚苄基丙酮)合二钯(0)-氯仿络合物。将反应混合物在70℃搅拌16小时,冷却至室温,然后通过硅藻土饼过滤。浓缩滤液。用Biotage?40S柱色谱(1∶19?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到116mg标题化合物:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz.CDCl3)δ1.44(d,J=5.9,6H),1.55(s,9H),2.70(s,3H),4.78(spt,J=6.2,1H),6.46(d,J=16.0,1H),7.15(d,J=8.9,1H),7.47-7.49(m,2H),7.60(d,J=16.0,1H),8.11(d,J=8.0,1H),8.31(dd,J=2.1,8.8,1H),8.43(d,J=2.0,1H).

        步骤C:(1S,2S/1R,2R)-2-(4-(5-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)环丙烷甲酸叔丁酯

        向30mg(0.14mmol)碘化三甲基氧化锍的5.0ml?DMSO悬浮液中加入30mg(0.14mmol,60%的矿物油)氢化钠。将混合物在室温下搅拌1小时。向反应混合物中加入61mg(0.12mmol)(2E)-3-(4-(5-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙烯酸叔丁酯(步骤B)。室温下搅拌15分钟,然后在50℃搅拌1小时后,冷却反应混合物至室温,在50ml?EtOAc和50ml?H2O之间分配。分离出水层,用EtOAc萃取三次。合并有机层,用盐水洗涤,经硫酸镁干燥,浓缩。用Biotage?40S柱色谱(3∶17?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到37mg标题化合物:

        ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.26-1.31(m,1H),1.43(d,J=5.9,6H),1.48(s,9H),1.56-1.61(m,1H),1.88-1.92(m,1H),2.44-2.49(m,1H),2.65(s,3H),4.75-4.80(m,1H),7.03-7.06(m,2H),7.13(d,J=8.9,1H),8.00(d,J=8.0,1H),8.30(dd,J=2.0,8.7,1H),8.42(d,J=2.1,1H).

        步骤D:(1S,2S/1R,2R)-2-(4-(5-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)环丙烷甲酸

        标题化合物按照实施例1步骤B介绍的类似方法制备,用(1S,2S/1R,2R)-2-(4-(5-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)环丙烷甲酸叔丁酯替代3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯:

        ????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.43-1.49(m,7H),1.70-1.74(m,1H),1.97-2.01(m,1H),2.62-2.66(m,4H),4.76-4.79(m,1H),7.06-7.09(m,2H),7.14(d,J=8.7,1H),8.02(d,J=8.0,1H),8.30(dd,J=2.2,8.8,1H),8.42(d,J=2.0,1H).

        ????????????????????????实施例9-11

        以下实施例按照实施例1介绍的类似方法制备,在步骤A中用N-羟基脒2替代N-羟基脒1。

        ??实施例??Riii?HPLC?A(min)??ESI-MS(M+H)??9??-CF3?4.6??449.3?1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.18(d,J=6.9,3H),1.41(d,J=6,6H),2.62(s,3H),??2.75(m,2H),3.02(m,1H),4.92(m,1H),7.20(d,J=8.0,1H),7.23(s,1H),7.4l(d,J=??9.4,1H),7.95(d,J=8.0,1H),8.38(m,2H)??10??-CN??4.3??406.3?1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.19(d,J=6.9,3H),1.47(d,J=5.9,6H),2.64(s,3H),??2.77(m,2H),3.05(m,1H),4.96(m,1H),7.22(d,J=8.1,1H),7.25(8,1H),7.43(d,J=??8.7,1H),7.97(d,J=8.0,1H),8.43(m,2H)??11??-CH3??4.7??395.3?1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.19(d,J=6.6,3H),1.39(d,J=6.0,6H),2.27(s,3H),??2.62(s,3H),2.78(m,2H),3.04(m,1H),4.76(m,1H),7.09(d,J=8.7,1H),7.20(d,J=??7.8,1H),7.23(s,1H),7.95(m,2H)8.00(m,1H)

        ?????????????????????????????????实施例12-14

        以下实施例按照实施例1介绍的类似方法制备,在步骤A中用N-羟基脒3替代N-羟基脒1。

        ??实施例??Riv??HPLC?A(min)??ESI-MS(M+H)??12??-CF3??4.9??449.3?1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.33(d,J=7.1,3H),1.41(d,J=5.9,6H),2.63(m,5H),??3.29(m,1H),4.91(m,1H),7.24(m,2H),7.41(m,1H),7.97(m,1H),8.35(m,2H)??13??-CN??4.5??406.3?1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.33(d,J=7.1,3H),1.41(d,J=5.9,6H),2.62(m,5H),??3.28(m,1H),4.92(m,1H)。7.24(m,2H),7.39(d,J=8.9,1H),7.96(d,J=8.1,1H),??8.38(m,2H)??14??-CH3??4.9??395.3?1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.32(d,J=6.9,3H),1.37(d,J=5.9,6H),2.24(s,3H),??2.60(m,5H),3.27(m,1H),4.73(m,1H),7.05(d,J=8.5,1H),7.22(m,2H),7.95(m,??3H)

        ??????????????????????????????????实施例15

        3-(4-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙

        ????????????????????????????????????酸

        步骤A:3-(4-(5-(5,6-二氯吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯

        向200mg(1.04mmol)5,6-二氯烟酸的5.0ml?CH2Cl2溶液中加入273μl(3.13mmol)乙二酰氯和1滴DMF。室温下搅拌过夜后,将混合物浓缩,用甲苯(3×5ml)共沸干燥。将残余物溶于5.0ml二氯乙烷中,加入到242mg(0.87mmol)N-羟基脒1和182μl(1.30mmol)三乙胺的5.0ml二氯乙烷溶液中。室温下搅拌1小时,在120℃搅拌过夜后,冷却反应混合物至室温,浓缩。用Biotage?40S柱色谱(1∶19?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到303mg标题化合物:1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.44(s,9H),2.58(t,J=7.8,2H),2.65(s,3H),2.95(t,J=7.7,2H),7.17-7.19(m,2H),8.00(d,J=8.5,1H),8.53(d,J=2.0,1H),9.08(d,J=2.0,1H).

        步骤B:3-(4-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯

        向138mg(0.32mmol)3-(4-(5-(5,6-二氯吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯和36.5μl(0.48mmol)2-丙醇的10ml?THF溶液中加入477μl(0.48mmol)双(三甲基甲硅烷基)氨基钠(1.0M的THF溶液)。将混合物回流过夜,冷却至室温,浓缩。用Biotage?40S柱色谱(1∶19?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到106mg标题化合物:

        ??????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.43(s,9H),1.44(d,J=6.2,6H),2.58(t,J=7.8,2H),2.65(s,3H),2.95(t,J=7.7,2H),5.49(m,1H),7.17-7.18(m,2H),8.00(d,J=8.4,1H),8.38(d,J=2.0,1H),8.86(d,J=2.3,1H).

        步骤C:3-(4-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        标题化合物按照实施例1步骤B介绍的类似方法制备,用3-(4-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯替代3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基-苯基)丙酸叔丁酯:

        ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.35(d,J=6.2,6H),2.55(s,3H),2.58(t,J=7.7,2H),2.89(t,J=7.7,2H),5.44(m,1H),7.15-7.19(m,2H),7.90(d,J=8.0,1H),8.38(d,J=2.0,1H),8.80(d,J=2.3,1H).

        ????????????????????????实施例16

        3-(4-(5-(5-氯-6-异丙基氨基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)

        ???????????????????????????丙酸

        步骤A:3-(4-(5-(5-氯-6-异丙基氨基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯

        在封闭管中,将31mg(0.07mmol)3-(4-(5-(5,6-二氯吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯(实施例15步骤A)和120μl(1.4mmol)2-丙胺的5.0ml?THF溶液加热至100℃过夜。冷却混合物至室温,浓缩。用Biotage?40S柱色谱(1∶9?v/v?Et2O/己烷用作洗脱剂),得到28mg标题化合物:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.32(d,J=6.4,6H),1.43(s,9H),2.57(t,J=7.7,2H),2.64(s,3H),2.94(t,J=7.7,2H),4.41(m,1H),5.32(d,J=7.5,1H),7.16-7.17(m,2H),7.99(d,J=8.5,1H),8.18(d,J=1.8,1H),8.85(d,J=1.8,1H).

        步骤B:3-(4-(5-(5-氯-6-异丙基氨基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        标题化合物按照实施例1步骤B介绍的类似方法制备,用3-(4-(5-(5-氯-6-异丙基氨基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯(步骤A)替代3-(4-(5-(3-氰基-4-(2-丙氧基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基-苯基)丙酸叔丁酯:

        ?????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz.CD3OD)δ1.31(d,J=6.4,6H),2.61(s,3H),2.65(t,J=7.6,2H),2.96(t,J=7.7,2H),4.42(m,1H),7.22-7.25(m,2H),7.94(d,J=8.0,1H),8.24(d,J=2.1,1H),8.77(d,J=1.8,1H).

        ?????????????????????实施例17-20

        以下实施例按照实施例15介绍的类似方法制备,在步骤B中用适当醇替代2-丙醇,或者按照实施例16介绍的类似方法制备,在步骤A中用适当的胺替代2-丙胺。

        ????????????????????实施例21-24

        以下实施例按照实施例15介绍的类似方法制备,在步骤A中用N-羟基脒3替代N-羟基脒1并在步骤B中用适当醇替代2-丙醇,或者按照实施例16介绍的类似方法制备,在步骤A中用适当的胺替代2-丙胺。

        ?????????????????????????实施例25

        3-(4-(5-(5-三氟甲基-6-(吗啉-4-基)吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲

        ????????????????????????基苯基)丁酸

        以下实施例按照实施例15介绍的类似方法制备,在步骤A中用N-羟基脒3替代N-羟基脒1并用5-三氟甲基-6-(吗啉-4-基)烟酸替代羧酸1:

        ??????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.34(d,J=6.8,3H),2.58-2.67(m,5H),3.30(m,1H),3.63(t,J=4.6,4H),3.81(t,J=4.6,4H),7.25-7.28(m,2H),7.99(d,J=7.8,1H),8.61(d,J=2.1,1H),9.12(d,J=2.1,1H).

        ????????????????????????实施例26-30

        以下实施例按照实施例15介绍的类似方法制备,在步骤A中用羟基脒4替代羟基脒1,在步骤B中用适当醇或胺替代2-丙醇。

        ????????????????????????实施例31

        3-(4-(5-(5-氯-6-异丁基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        步骤A:3-(4-(5-(5-氯-6-异丁基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯

        向86mg(0.20mmol)3-(4-(5-(5,6-二氯吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯(实施例15步骤A)、5.1mg(0.01mmol)双(三叔丁基膦)合钯(0)和200μl?1-甲基-2-吡咯烷酮的5.0ml?THF溶液中加入475μl(0.24mmol)异丁基溴化锌(0.5M的THF溶液)。将反应混合物回流4小时,冷却至室温,然后通过硅藻土饼过滤。浓缩滤液。用Biotage?40S柱色谱(7∶93?v/v?Et2O/己烷用作洗脱剂),得到55mg标题化合物:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ0.99(d,J=6.7,6H),1.44(8,9H),2.28(m,1H),2.58(t,J=7.7,2H),2.66(s,3H),2.93-2.97(m,4H),7.18-7.20(m,2H),8.01(d,J=8.5,1H),8.42(d,J=1.8,1H),9.22(d,J=1.9,1H).

        步骤B:3-(4-(5-(5-氯-6-异丁基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        标题化合物按照实施例1步骤B介绍的类似方法制备,用3-(4-(5-(5-氯-6-异丁基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯(步骤A)替代3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基-苯基)丙酸叔丁酯:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ0.93(d,J=6.7,6H),2.21(m,1H),2.57(s,3H),2.59(t,J=7.7,2H),2.87-2.91(m,4H),4.42(m,1H),7.17-7.20(m,2H),7.93(d,J=7.8,1H),8.48(d,J=1.9,1H),9.12(d,J=1.8,1H).

        ????????????????????????实施例32

        3-(4-(5-(5-碘-6-(N-异丙基-N-甲基氨基)吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-

        ????????????????????3-甲基苯基)丙酸

        标题化合物按照实施例16介绍的类似方法制备,用6-羟基-5-碘烟酸替代5,6-二氯烟酸并用N-异丙基-N-甲基胺替代2-丙胺:

        ??????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.26(d,J=6.6,6H),2.64(s,3H),2.73(t,J=7.7,2H),2.96(s,3H),3.00(t,J=7.7,2H),4.46(m,1H),7.18-7.20(m,2H),7.99(d,J=8.5,1H),8.75(d,J=1.8,1H),8.94(d,J=1.9,1H).

        ????????????????????????实施例33

        3-(4-(5-(5-氰基-6-(N-异丙基-N-甲基氨基)吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-

        ?????????????????????基)-3-甲基苯基)丙酸

        步骤A:3-(4-(5-(5-氰基-6-(N-异丙基-N-甲基氨基)吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯

        向250mg(0.44mmol)3-(4-(5-碘-6-(N-异丙基-N-甲基氨基)吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯(实施例32)和104mg(0.89mmol)氰化锌的5.0ml溶液中加入31mg(0.03mmol)四(三苯基膦)合钯(0)。将混合物在80℃搅拌过夜,冷却至室温,然后通过硅藻土饼过滤。滤液用盐水(20ml)、水(2×20ml)和盐水(20ml)洗涤。有机层经硫酸钠干燥,浓缩。用Biotage?40S柱色谱(1∶9v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到129mg标题化合物:

        ????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.30(d,J=6.6,6H),1.43(s,9H),2.58(t,J=7.7,2H),2.64(s,3H),2.95(t,J=7.7,2H),3.23(s,3H),5.14(m,1H),7.17-7.18(m,2H),7.99(d,J=8.5,1H),8.48(d,J=2.5,1H),9.02(d,J=2.5,1H).

        步骤B:3-(4-(5-(5-氰基-6-(N-异丙基-N-甲基氨基)吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        标题化合物按照实施例1步骤B介绍的类似方法制备,用3-(4-(5-(5-氰基-6-(N-异丙基-N-甲基氨基)吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯(步骤A)替代3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基-苯基)丙酸叔丁酯:

        ????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.31(d,J=6.7?6H),2.61(s,3H),2.65(t,J=7.6,2H),2.96(t,J=7.7,2H),3.24(s,3H),5.14(m,1H),7.22-7.26(m,2H),7.95(d,J=8.0,1H),8.55(d,J=2.5,1H),9.02(d,J=2.5,1H).

        ????????????????????????实施例34

        3-(4-(5-(6-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)-5-碘吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-

        ???????????????????????甲基苯基)丙酸

        标题化合物按照实施例32介绍的类似方法制备,用3,3-二氟吡咯烷替代N-异丙基-N-甲基胺:

        ????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1HNMR(500MHz,DMSO)δ2.48-2.59(m,7H),2.86(t,J=7.6,2H),3.40(t,J=7.3,2H),4.17(t,J=13,2H),7.25(d,J=8.0,1H),7.28(s,1H),9.92(d,J=7.8,1H),8.70(d,J=2.1,1H),8.87(d,J=2.1,1H).

        ????????????????????????实施例35

        3-(4-(5-(6-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)-5-乙炔基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-

        ???????????????????基)-3-甲基苯基)丙酸

        步骤A:3-(4-(5-(6-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)-5-(三甲基甲硅烷基)乙炔基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯

        向61mg(0.10mmol)3-(4-(5-(6-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)-5-碘吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯(实施例34)的5.0ml1,4-二_烷溶液中加入1mg(0.005mmol)碘化铜(II)、20mg(0.21mmol)(三甲基甲硅烷基)乙炔、12mg(0.12mmol)二异丙基胺和2.6mg(0.005mmol)双(三叔丁基膦)合钯(0)。将混合物在室温下搅拌16小时,浓缩。用Biotage?25S柱色谱(9∶1?v/v?己烷/EtOAc用作洗脱剂),得到43mg标题化合物(黄色固体):1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ0.26(s,9H),1.45(s,9H),2.46(m,2H),2.58(t,J=7.8,2H),2.66(s,3H),2.96(t,J=7.8,2H),4.15(t,J=7.3,2H),4.32(t,J=13,2H),7.18(s,1H),7.19(s,1H),8.01(m,1H),8.34(d,J=2.3,1H),8.88(d,J=2.3,1H).

        步骤B:3-(4-(5-(6-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)-5-(三甲基甲硅烷基)乙炔基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        标题化合物按照实施例1步骤B介绍的类似方法制备,用3-(4-(5-(6-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)-5-(三甲基甲硅烷基)乙炔基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯(步骤A)替代3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯:

        ????????????????????????????1H?NMR(500MHz,DMSO)δ0.24(s,9H),2.49(m,4H),2.86(t,J=7.5,2H),4.06(t,J=7.3,2H),4.27(t,J=13,2H),7.24(d,J=8.3,1H),7.28(s,1H),7.92(d,J=7.8,1H),8.21(d,J=2.3,1H),8.84(d,J=2.3,1H).

        步骤C:3-(4-(5-(6-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)-5-乙炔基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        将5mg?3-(4-(5-(6-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)-5-(三甲基甲硅烷基)乙炔基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸的200μl四丁基氟化铵(1.0M的THF溶液)溶液在室温下搅拌2小时。通过HPLC?B纯化,得到标题化合物:

        ??????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,DMSO)δ2.48(m,4H),2.86(t,J=7.3,2H),4.09(t,J=7.3,2H),4.24(t,J=13,2H),7.24(d,J=8.4,1H),7.28(s,1H),7.92(d,J=8.0,1H),8.27(d,J=2.3,1H),8.86(d,J=2.3,1H).

        ????????????????????????实施例36

        (1R,2R/1S,2S)-2-(4-(5-(4-异丙氧基-3-氰基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-

        ????????????????????甲基苯基)环丙烷甲酸

        步骤A:(1R,2R/1S,2S)-2-(4-(5-(4-异丙氧基-3-氰基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)环丙烷甲酸叔丁酯

        标题化合物按照实施例1介绍的类似方法制备,在步骤A中用N-羟基脒4替代N-羟基脒1:

        ????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.41-1.46(m,7H),1.59(m,1H),1.94(m,1H),2.50(m,1H),2.61(s,3H),4.93(m,1H),7.10(dd,J=1.5,8.2,1H),7.14(8,1H),7.40(d,J=8.9,1H),7.96(d,J=8.0,1H),8.36-8.39(m,2H).

        ????????????????????????????实施例37-44

        以下实施例按照实施例36介绍的类似方法制备,用适当的酸替代羧酸1。

        ????????????????????????实施例45

        (1R,2R/1S,2S)-2-(4-(5-(5-(5-碘-6-异丙氧基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-

        ????????????????基)-3-甲基苯基)环丙烷甲酸

        标题化合物按照实施例15介绍的类似方法制备,在步骤A中用N-羟基脒4替代N-羟基脒1并用5-碘-6-氯烟酰氯替代5,6-二氯烟酰氯:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.42(m,7H),1.60(m,1H),1.93(m,1H),2.49(m,1H),2.61(s,3H),5.45(m,1H),7.10(d,J=8.2,1H),7.15(s,1H),7.29(m,1H),7.96(t,J=8.0,1H),8.78(d,J=2.3,1H),8.89(d,J=2.3,1H).

        ?????????????????????????实施例46

        (1R,2R/1S,2S)-2-(4-(5-(5-(4-碘-6-异丙氧基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-

        ??????????????????基)-3-甲基苯基)环丙烷甲酸

        步骤A:(1R,2R/1S,2S)-2-(4-(5-(5-(4-氟苯基)-6-异丙氧基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)环丙烷甲酸叔丁酯

        向60mg(0.11mmol)(1R,2R/1S,2S)-2-(4-(5-(5-碘-6-异丙氧基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)环丙烷甲酸叔丁酯(实施例45)的10ml?THF溶液中加入19mg(0.32mmol)氟化钾、22mg(0.16mmol)4-氟苯基硼酸和2.73mg(0.005mmol)双(三叔丁基膦)合钯(0)。将混合物在80℃搅拌16小时,浓缩。用Biotage?25S柱色谱(19∶1?v/v?己烷/EtOAc用作洗脱剂),得到45mg标题化合物:

        ???????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.32(m,1H),1.41(d,J=6.2,6H),1.51(s,9H),1.62(m,1H),1.92(m,1H),2.57(m,1H),2.68(s,3H),5.55(m,1H),7.10(m,2H),7.19(m,2H),7.62(m,2),8.03(m,1H),8.34(d,J=2.3,1H),8.98(d,J=2.3,1H).

        步骤B:(1R,2R/1S,2S)-2-(4-(5-(5-(4-氟苯基)-6-异丙氧基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)环丙烷甲酸

        标题化合物按照实施例1介绍的类似方法制备,在步骤B中用(1R,2R/1S,2S)-2-(4-(5-(5-(4-氟苯基)-6-异丙氧基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)环丙烷甲酸叔丁酯(步骤A)替代3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基-苯基)丙酸叔丁酯:

        ?????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.35(d,J=6.2,6H),1.40(m,1H)1.57(m,1H),1.91(m,1H),2.47(m,1H),2.57(s,3H),5.48(m,1H),7.04(m,1H),7.09(m,1H),7.15(m,2H),7.58(m,2H),7.91(d,J=8.0,1H),8.22(d,J=2.3,1H),8.81(d,J=2.3,1H).

        ?????????????????????实施例47-64

        以下实施例按照实施例1介绍的类似方法制备,在步骤A中用适当的酸替代羧酸1。

        ??????????????????????????实施例65

        2-(4-(5-(5-(4-氨基-6-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-

        ?????????????????????基)-3-甲基苯基)丙酸

        将24mg(0.046mmol)2-(4-(5-(5-(4-硝基-6-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯(实施例60)的5.0ml乙醇溶液加入到50mg(0.23mmol)氯化锡(II)二水合物中。将混合物在70℃加热16小时,冷却至室温,在EtOAc(10ml)和1.0N?NaOH(10ml)之间分配。分离出有机层,用盐水(3×5ml)洗涤,经硫酸镁干燥,浓缩。将残余物溶于CH2Cl2中,加入200ml三氟乙酸,得到11.5mg标题化合物:

        ????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.56(d,J=9.5,3H),2.61(s,3H),2.66(t,J=7.5,2H),2.97(t,J=7.5,2H),5.16(m,1H),7.23(m,3H),7.66(dd,J=2.1,6.4,1H),7.71(d,J=2.1,1H),7.93(d,J=7.7,1H).

        ?????????????????????????实施例66-68

        以下实施例按照实施例1介绍的类似方法制备,在步骤A中用N-羟基脒3替代N-羟基脒1。

        ??????????????????????????实施例69

        3-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-6-甲基氮茚-2-基)

        ????????????????????????????丙酸

        步骤A:3-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-6-甲基氮茚-2-基)丙酸叔丁酯

        标题化合物按照实施例1介绍的类似方法制备,在步骤A中用N-羟基脒5替代N-羟基脒1:

        ????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.44(s,9H),1.48(d,J=6.2,6H),2.75(t,J=7.6,2H),2.89(s,3H),3.13(t,J=7.4,2H),4.80(m,1H),7.12(d,J=8.9,1H),7.18(d,J=8.0,1H),8.27(d,J=8.0,1H),8.33(dd,J=2.1,9.0,1H),8.42(d,J=2.3,1H).

        步骤B:3-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-6-甲基氮茚-2-基)丙酸

        标题化合物按照实施例1步骤B介绍的类似方法制备,用3-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-6-甲基氮茚-2-基)丙酸叔丁酯(步骤A)替代3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基-苯基)丙酸叔丁酯:

        ??????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.46(d,J=6.2,6H),2.92(t,J=7.2,2H),3.07(s,3H),3.31(m,2H),4.96(m,1H),7.45(d,J=9.1,1H),7.84(d,J=8.2,1H),8.44(dd,J=2.3,8.9,1H),8.48(d,J=2.3,1H),8.92(d,J=8.2,1H).

        ?????????????????????????????实施例70-72

        以下实施例按照实施例69介绍的类似方法制备,在步骤A中用适当的羧酸替代羧酸1。

        ???????????????????????????实施例73

        3-(5-(5-(3-氰基-4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-6-甲基

        ??????????????????????吡啶-2-基)丁酸

        标题化合物按照实施例69介绍的类似方法制备,在步骤A中分别用羧酸5和N-羟基脒6替代羧酸1和N-羟基脒5:

        ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.47(d,J=8.9,3H),2.86(dd,J=6.1,17.1,1H),2.99(dd,J=8.9,17.1,1H),3.09(s,3H),3.63(m,1H),4.92(q,J=8.2,2H),7.55(d,J=8.9,1H),7.89(d,J=8.4,1H),8.51(dd,J=2.3,8.9,1H),8.58(d,J=2.0,1H),8.95(d,J=8.5,1H).

        ??????????????????????????实施例74

        3-(5-(5-(5-氰基-6-(2,2,2-三氟-1-甲基乙氧基)吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-

        ???????????????????3-基)-6-甲基氮茚-2-基)丁酸

        标题化合物按照实施例73介绍的类似方法制备,用羧酸10替代羧酸1:

        ??????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.47(d,J=7.1,3H),1.63(d,J=6.6,3H),2.86(dd,J=6.1,17.1,1H),3.00(dd,J=8.9,17.2,1H),3.10(s,3H),3.64(m,1H),6.11(m,1H),7.91(d,J=8.4,1H),8.97(d,J=8.4,1H),8.99(d,J=2.2,1H),9.27(d,J=2.3,1H).

        ??????????????????????????实施例75

        3-(4-(3-(4-(异丙氧基)-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-5-基)-3-甲基苯

        ???????????????????????????基)丙酸

        步骤A:4-溴-2-甲基苯甲酸苄酯

        向1.26g(5.86mmol)4-溴-2-甲基苯甲酸的10ml?CH2Cl2悬浮液中加入1.5ml(17.6mmol)乙二酰氯和两滴DMF。室温下搅拌过夜后,浓缩反应混合物。残余物用甲苯(3×5ml)共沸干燥,然后溶于10mlCH2Cl2中,向其加入667μl(6.45mmol)苄醇、1.23(8.79mmol)三乙胺和催化量的4-二甲氨基吡啶。室温下搅拌1小时后,将反应混合物倒入20盐水中。水层用CH2Cl2(3×10ml)萃取。合并有机层,经硫酸镁干燥,然后浓缩。用Biotage?40S柱色谱(1∶19?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到1.58g标题化合物:

        ?????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ2.58(s,3H),5.33(s,2H),7.33-7.44(m,7H),7.81(d,J=8.5,1H).

        步骤B:(E/Z)-3-(4-苄氧基羰基-3-甲基)丙烯酸甲酯

        将1.58g(5.18mmol)4-溴-2-甲基苯甲酸苄酯(步骤A)、1.66ml(7.77mmol)的80ml?N-甲基二环己基胺溶液和77.2mg(0.26mmol)2-(二叔丁基膦基)联苯的10ml?1,4-二_烷溶液用513μl(5.70mmol)丙烯酸甲酯和119mg(0.13mol)三(二亚苄基丙酮)合二钯(0)-氯仿加合物处理。将所得混合物在70℃加热3小时,然后冷却至室温。通过硅藻土饼过滤反应混合物,用EtOAc洗涤,浓缩滤液。用Biotage?40M柱色谱(3∶7?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到657mg标题化合物:

        ????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ2.61(s,3H),3.80(s,3H),5.34(s,2H),6.46-7.96(m,10H).

        步骤C:(4-羧基-3-甲基)丙酸甲酯

        向437mg(1.41mmol)(E/Z)-3-(4-苄氧基羰基-3-甲基)丙烯酸甲酯(步骤B)的10ml?EtOAc溶液中加入50mg?10wt%Pd/C。在室温、1atm氢气氛下搅拌,通过硅藻土饼滤出催化剂,用EtOAc洗涤。浓缩滤液,得到标题化合物(白色固体):

        1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ2.63(s,3H),2.66(d,J=7.7,2H),2.97(d,J=7.8,2H),3.68(s,3H),7.10-7.26(m,2H),8.00(d,J=8.7,1H).

        步骤D:3-(4-(3-(4-(异丙氧基)-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸甲酯

        标题化合物按照实施例1介绍的类似方法制备,在步骤A中分别用(4-羧基-3-甲基)丙酸甲酯(步骤C)和N-羟基(4-异丙氧基-3-三氟甲基)苯甲脒替代羧酸1和N-羟基脒1:

        ????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.42(d,J=6.0,6H),2.68(t,J=7.7,2H),2.75(s,3H),3.01(t,J=7.7,2H),3.69(s,3H),4.75(m,1H),7.11(d,J=9.0,1H),7.19-7.27(m,2H),8.09(d,J=8.7,1H),8.27(dd,J=2.1,8.7,1H),8.38(d,J=2.0,1H).

        步骤E:3-(4-(3-(4-(异丙氧基)-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸

        向33mg(0.07mmol)3-(4-(3-(4-(异丙氧基)-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸甲酯(步骤D)的2.0ml?EtOH溶液中加入200μl(1.0mmol)5.0N?NaOH。将混合物在室温下搅拌过夜。通过HPLC?B纯化,得到22mg标题化合物:

        ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.40(d,J=6.0,6H),2.66(t,J=7.7,2H),2.74(s,3H),2.99(t,J=7.6,2H),4.87(m,1H),7.28-7.37(m,3H),8.06(d,J=8.0,1H),8.30-8.31(m,2H).

        ?????????????????????实施例76

        2,2-二氟-3-羟基-3-(4-(4-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-

        ????????????????3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        步骤A:5-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-3-(2-甲基-4-乙烯基苯基)-1,2,4-_二唑

        向1.12g(2.54mmol)3-(4-溴-2-甲基苯基)-5-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑(实施例12)、816μl(2.79mmol)三丁基(乙烯基)锡和848mg(5.58mmol)氟化铯的20ml?1,4-二_烷溶液中加入32mg(0.06mmol)双(三叔丁基膦)合钯(0)。在100℃搅拌2小时后,通过硅藻土饼过滤混合物,浓缩。用Biotage?40M柱色谱(1∶19?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到873mg标题化合物。

        步骤B:1-(4-(5-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)乙-1,2-二醇

        向215mg(0.55mmol)5-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-3-(2-甲基-4-乙烯基苯基)-1,2,4-_二唑和78mg(0.66mmol)4-甲基吗啉N-氧化物的12ml?3∶1?v∶v?THF/H2O混合溶剂的溶液中加入347μl(0.03mmol)四氧化锇(2.5wt%)。室温下搅拌过夜后,将混合物倒入盐水中,用EtOAc(3×20ml)萃取。合并有机层,经硫酸钠干燥,浓缩。用Biotage40S柱色谱(7∶3?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到143mg标题化合物:

        ?????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.43(d,J=5.9,6H),2.30(br.s,2H),2.67(s,3H),3.68(dd,J=8.1,11.4,1H),3.80(dd,J=3.6,11.3,1H),4.78(m,1H),4.86(dd,J=3.5,8.0,1H),7.13(d,J=8.7,1H),7.32-7.34(m,2H),8.05(d,J=8.0,1H),8.29(dd,J=2.2,8.8,1H),8.41(d,J=2.1,1H).

        步骤C:4-(5-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯甲醛

        将49mg(0.12mmol)1-(4-(5-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)乙-1,2-二醇和37mg(0.17mmol)高碘酸钠溶于9ml?2∶1?v∶v?THF/H2O混合溶剂中。室温下搅拌4小时后,将混合物倒入盐水中,用EtOAc(3×10ml)萃取。合并有机层,经硫酸镁干燥,浓缩。用Biotage?40S柱色谱(1∶9?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到40mg标题化合物:

        ????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.44(d,J=5.9,6H),2.78(s,3H),4.79(m,1H),7.16(d,J=9.0,1H),7.84-7.86(m,2H),8.28(d,J=8.5,1H),8.32(dd,J=2.2,8.9,1H),8.44(d,J=2.1,1H),10.09(s,1H).

        步骤D:2,2-二氟-3-羟基-3-(4-(4-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯

        将37mg(0.56mmol)锌粉和5μl(0.06mmol)二溴乙烷的5.0ml?THF悬浮液加热至65℃1分钟,冷却至室温。向此悬浮液中加入4μl(0.03mmol)三甲基氯硅烷,所得混合物在室温下搅拌15分钟,然后冷却至0℃。向混合物中依次加入53μl(0.41mmol)溴代二氟乙酸乙酯、40mg?4-(5-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯甲醛(步骤C)的1ml?THF溶液。在0℃搅拌10分钟后在室温下搅拌过夜,浓缩混合物。用Biotage?40S柱色谱(1∶4?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到42mg标题化合物:

        ??????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.32(t,J=7.2,3H),1.44(d,J=6.0,6H),2.70(s,3H),4.34(q,J=7.1,2H),4.78(m,1H),5.22(dd,J=7.6,15.4,1H),7.15(d,J=8.9,1H),7.41-7.43(m,2H),8.10(d,J=8.0,1H),8.30(dd,J=2.1,8.7,1H),8.42(d,J=2.0,1H).

        步骤E:2,2-二氟-3-羟基-3-(4-(4-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        标题化合物按照实施例75步骤E介绍的类似方法制备,用2,2-二氟-3-羟基-3-(4-(4-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯(步骤D)替代3-(4-(3-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸甲酯:

        ??????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.34(d,J=6.2,6H),2.60(s,3H),4.85(m,1H),5.09(dd,J=7.7,17.0,1H),7.35-7.42(m,3H),7.99(d,J=8.1,1H),8.31-8.33(m,2H).

        ???????????????????????实施例77

        2,2-二氟-3-(4-(4-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-

        ????????????????????甲基苯基)丙酸

        步骤A:2,2-二氟-3-(4-(4-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯

        在℃,向29mg(0.06mmol)2,2-二氟-3-羟基-3-(4-(4-(4-(异丙氧基)-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯(实施例75步骤D)和21mg(0.17mmol)4-二甲氨基吡啶的5.0ml?CH2Cl2溶液中加入10μl(0.11mmol)氯代氧代乙酸甲酯。在0℃搅拌10分钟后在室温下搅拌20分钟,反应混合物用20ml?EtOAc稀释,用稀HCl(10ml)、饱和碳酸氢钠(10ml)和盐水(10ml)洗涤。有机层经硫酸镁干燥,浓缩,得到粗制的酯产物。

        向上述酯(0.06mmol)和35ml(0.11mmol)三(三甲基甲硅烷基)硅烷的5.0ml甲苯溶液中加入2mg(0.01mmol)2,2′-偶氮二异丁腈(AIBN)?;亓鞴购?,加入3mg?AIBN,将混合物回流5小时,浓缩。用Biotage40S柱色谱(1∶9?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到11mg标题化合物:

        ????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.29(t,J=7.1,3H),1.44(d,J=6.0,6H),2.67(s,3H),3.42(t,J=16.3,2H),4.28(q,J=7.1,2H),4.78(m,1H),7.14(d,J=9.0,1H),7.24-7.26(m,2H),8.05(d,J=8.5,1H),8.30(dd,J=2.1,8.8,1H),8.42(d,J=2.1,1H).

        步骤B:2,2-二氟-3-(4-(4-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        标题化合物按照实施例75介绍的类似方法制备,在步骤E中用2,2-二氟-3-(4-(4-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯(步骤A)替代3-(4-(3-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸甲酯:

        ????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.41(d,J=5.9,6H),2.64(s,3H),3.45(t,J=16.7,2H),4.92(m,1H),7.29-7.32(m,2H),7.43(d,J=8.4,1H),8.01(d,J=7.8,1H),8.38-8.40(m,2H).

        ????????????????????????????实施例78

        (1R,2S/1S,2R)-2-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-

        ??????????????????????甲基苯基)环丙烷甲酸

        步骤A:(2Z)-3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙烯酸甲酯

        在-78℃,向85mg(0.24mmol)4-(5-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯甲醛(实施例76步骤C)和322mg(1.22mmol)18-冠-6的5.0THF溶液中加入487μl(0.24mmol)双(三甲基甲硅烷基)氨基钾(0.5M的甲苯溶液)。在-78℃搅拌30分钟后,将反应物用10ml饱和碳酸氢钠猝灭,将混合物用CH2Cl2(3×10ml)萃取。合并有机层,经硫酸镁干燥,浓缩。通过HPLC?B纯化,得到64mg标题化合物:

        ?????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.291.48(d,J=6.0,6H),2.69(s,3H),3.74(s,3H),4.80(m,1H),6.04(d,J12.6,1H),6.99(d,J=12.6,1H),7.14(d,J=8.2,1H),7.53(d,J=8.0,1H),8.07(d,J=8.0,1H),8.34(dd,J=2.3,8.9,1H),8.43(d,J=2.2,1H).

        步骤B:(1R,2S/1S,2R)-2-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)环丙烷甲酸甲酯

        在0℃,向47mg(0.12mmol)(2Z)-3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙烯酸甲酯(步骤A)和重氮甲烷(2.33mmol,用343mg?1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍制备)的10ml?1∶2?v∶vCH2Cl2/Et2O溶液中加入少量乙酸钯(II)。在搅拌30分钟后,加入三滴乙酸猝灭反应物。浓缩混合物。用Biotage?40S柱色谱(1∶4?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到20mg标题化合物:

        ?????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.41(m,1H),1.47(d,J=5.9,6H),1.76(m,1H),2.15(m,1H),2.60(m,1H),2.65(s,3H),3.48(s,3H),4.79(m,1H),7.11(d,J=9.0,1H),7.22-7.26(m,2H),7.99(d,J=8.0,1H),8.33(dd,J=2.1,9.0,1H),8.41(d,J=2.1,1H).

        步骤C:(1R,2S/1S,2R)-2-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)环丙烷甲酸

        标题化合物按照实施例75步骤E介绍的类似方法制备,用(1R,2S/1S,2R)-2-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)环丙烷甲酸甲酯(步骤B)替代3-(4-(3-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸甲酯:

        ????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.42-1.48(m,7H),2.15(m,1H),2.63-2.72(m,4H),4.79(m,1H),7.11(d,J=9.2,1H),7.23-7.26(m,2H),7.98(d,J=7.8,1H),8.33(dd,J=2.1,9.0,1H),8.41(d,J=2.1,1H).

        ?????????????????????????实施例79

        赤型(+/-)-2,3-二羟基-3-(4-(4-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-

        ????????????????????基)-3-甲基苯基)丙酸

        步骤A:赤型(+/-)-2,3-二羟基-3-(4-(4-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸甲酯

        向388mg(0.96mmol)(2Z)-3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙烯酸甲酯(实施例19)和135mg(1.15mmol)4-甲基吗啉N-氧化物的12.0ml?3∶1?v∶v?THF/H2O混合溶剂的溶液中加入603μl(0.05mmol)四氧化锇(2.5wt%)。室温下搅拌过夜后,将混合物倒入盐水中,用CH2Cl2(3×20ml)萃取。合并有机层,经硫酸钠干燥,浓缩。用Biotage?40M柱色谱(4∶1?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到217mg标题化合物:

        ??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.48(d,J=6.0,6H),2.67(s,3H),3.72(s,3H),4.54(d,J=4.3,1H),4.80(m,1H),5.06(d,J=4.1,1H),7.12(d,J=8.9,1H),7.26-7.31(m,2H),8.05(d,J=7.7,1H),8.32(dd,J=2.3,9.0,1H),8.40(d,J=2.1,1H).

        步骤B:赤型(+/-)-2,3-二羟基-3-(4-(4-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        标题化合物按照实施例75步骤E介绍的类似方法制备,用赤型(+/-)-2,3-二羟基-3-(4-(4-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸甲酯(步骤A)替代3-(4-(3-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸甲酯:

        ?????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.45(d,J=6.2,6H),2.65(s,3H),4.37(d,J=5.3,1H),4.93-4.96(m,2H),7.40-7.44(m,3H),8.00(d,J=8.2,1H),8.42(dd,J=2.1,9.0,1H),8.44(d,J=2.1,1H).

        ??????????????????????实施例80

        苏型(+/-)-2,3-二羟基-3-(4-(4-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-

        ??????????????????基)-3-甲基苯基)丙酸

        标题化合物按照实施例79介绍的类似方法制备,在步骤A中用(2E)-3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙烯酸甲酯替代(2Z)-3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙烯酸甲酯:

        ??????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.47(d,J=7.0,6H),2.66(s,1H),2.67(s,3H),3.37(s,1H),4.35(d,J=3.0,1H),4.95(m,1H),5.12(d,J=2.8,1H),7.46(m,3H),8.05(m,1H),8.42(m,2H).

        ????????????????????????????实施例81

        (4R,5R/4S,5S)-5-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-

        ???????????????甲基苯基)-1,3-二氧戊环-4-甲酸

        步骤A:(4R,5R/4S,5S)-5-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)-1,3-二氧戊环-4-甲酸甲酯

        将77mg(0.18mmol)赤型(+/-)-2,3-二羟基-3-(4-(4-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸甲酯(实施例79步骤A)、156ml(1.77mmol)二甲氧基甲烷和1.5g(5.28mmol)五氧化二磷的10ml?CH2Cl2悬浮液在室温下搅拌过夜。将反应物用H2O(10ml)猝灭,倒入20ml饱和碳酸氢钠中?;旌衔镉肅H2Cl2(3×10ml)萃取。合并有机层,经硫酸镁干燥,浓缩。用Biotage?40S柱色谱(1∶3?v/v?EtOAc/己烷用作洗脱剂),得到41mg标题化合物:

        ????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.48(d,J=6.2,6H),2.68(s,3H),3.30(s,3H),4.80(m,1H),4.84(d,J=7.6,1H),5.19(s,1H),5.29(d,J=7.5,1H),5.67(s,1H),7.12(d,J=9.1,1H),7.29-7.32(m,2H),8.07(d,J=8.0,1H),8.33(dd,J=2.1,8.9,1H),8.42(d,J=2.0,1H).

        步骤B:(4R,5R/4S,5S)-5-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)-1,3-二氧戊环-4-甲酸

        标题化合物按照实施例75步骤E介绍的类似方法制备,用(4R,5R/4S,5S)-5-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)-1,3-二氧戊环-4-甲酸甲酯(步骤A)替代3-(4-(3-(4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1,2,4-_二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸甲酯:

        ???????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.45(d,J=6.1,6H),2.63(s,3H),4.83(d,J=7.8,1H),4.94(m,1H),5.12(s,1H),5.34(d,J=7.5,1H),5.57(s,1H),7.36-7.39(m,2H),7.43(d,J=9.2,1H),8.01(d,J=8.1,1H),8.41(dd,J=2.3,8.9,1H),8.44(d,J=2.0,1H).

        ???????????????????????实施例82

        (4R,5S/4S,5R)-5-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-

        ????????????甲基苯基)-1,3-二氧戊环-4-甲酸

        标题化合物按照实施例79介绍的类似方法制备,在步骤A中用苏型(+/-)-2,3-二羟基-3-(4-(4-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸酯(实施例80)替代赤型(+/-)-2,3-二羟基-3-(4-(4-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸酯:

        ??????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.47(d,J=6.2,6H),2.66(s,3H),2.70(s,1H),3.37(s,1H),4.41(d,J=5.4,1H),4.95(m,1H),5.12(d,J=5.5,1H),7.44(m,3H),8.13(m,1H),8.39(m,2H).

        ????????????????实施例83-86

        以下实施例按照实施例1介绍的类似方法制备,在步骤A中用适当的羧酸替代羧酸1。

        ????????????????????????实施例87

        3-(4-(2-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸

        步骤A:N′-(3-氰基-4-异丙氧基苯基羰基)-4-溴-2-甲基苯甲酰肼

        将170mg(0.83mmol)3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸的10ml无水CH2Cl2和10μl?DMF溶液用1.0ml乙二酰氯处理。将反应混合物加热至50℃10分钟,冷却至室温,减压除去溶剂。将所得粗产物溶于10mlEtOAc中,一次性加入剧烈搅拌下的209mg?4-溴-2-甲基苯甲酰肼(0.91mmol)、20ml?EtOAc和20ml碳酸氢钠饱和水溶液的两相混合物。30分钟后,过滤收集沉淀,用2×10ml水冲洗,用干燥器干燥过夜。用1H?NMR发现产物(299mg)纯度>95%,直接用于下一环化步骤无需进一步纯化:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,temp.=50℃,CDCl3)δ1.55(d,J=6.5,6H),2.51(s,3H),4.78(sep,J=6.5,1H),7.04(d,J=9.0,1H),7.42(s,2H),7.48(s,1H),8.02(dd,J=9.0,2.0,1H),8.10(d,J=2.0,1H),8.66(d,J=2.0,1H),9.18(d,J=2.0,1H).

        步骤B:2-(3-氰基-4-异丙氧基-苯基)-5-(4-溴-2-甲基苯基)-1,3,4-噻二唑

        在烘箱干燥的高压管中,将240mg(0.58mmol)N′-(3-氰基-4-异丙氧基苯基羰基)-4-溴-2-甲基苯甲酰肼(步骤A)与40ml无水甲苯、300mg?Lawesson试剂(0.74mmol)和100μl吡啶混合。高压管用塑料/特氟隆帽密封,将反应混合物加热至125℃2h。将所得混合物冷却至室温,减压除去溶剂,残余固体溶于10ml吡啶中。向此混合物中加入0.5g五硫化二磷,将混合物加热至110℃。将反应混合物与冰-水合并,用2×100ml?EtOAc萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥,减压除去溶剂。通过Biotage?40S快速色谱(洗脱剂:己烷/EtOAc-4/1)分离出239mg纯标题化合物:

        ??????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ1.49(d,J=6.5,6H),2.65(s,3H),4.79(sep,J=6.5,1H),7.13(dd,J=9.0,2.0,1H),7.50(dd,J=9.0,2.0,1H),7.56(d,J=2.0,1H),7.63(d,J=8.0,1H),8.17(d,J=2.0,1H),8.24(dd,J=8.0,2.0,1H).

        步骤C:3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)-2-丙烯酸叔丁酯

        在烘箱干燥的烧瓶中,在氩气氛下,将10mg?2-(二叔丁基膦基)联苯(0.03mmol)和13mg三(二亚苄基丙酮)合二钯-氯仿络合物(0.015mmol)溶于10ml无水二_烷中,将溶液用氩气脱气。用注射器向此混合物依次加入100μl?N,N-二环己基甲基胺(0.45mmol)、55μl丙烯酸叔丁酯(0.38mmol)和125mg(0.30mmol)2-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-5-(4-溴-2-甲基苯基)-1,3,4-噻二唑(步骤B)的二_烷(1ml)溶液。将所得混合物在氩气氛下于95℃加热2小时。反应混合物用20ml?EtOAc稀释,通过一次性玻璃料滤片过滤,浓缩。通过Biotage?40S柱色谱(洗脱剂:己烷/EtOAc=4/1)分离出纯产物,为(E)-和(Z)-立体异构体的混合物:

        ?????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3,主要,(E)-立体异构体)δ1.46(d,J=6.5,6H),2.69(s,3H),4.79(sep,J=6.5,1H),6.47(d,J=15.5,1H),7.12(d,J=9.0,1H),7.51(d,J=9.0,1H),7.52(s,1H),7.61(d,J=15.5,1H),7.80(d,J=8.0,1H),8.18(d,J=2.0,1H),8.25(dd,J=8.0,2.0,1H).

        步骤D:3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯

        将120mg(0.26mmol)3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)-2-丙烯酸叔丁酯(步骤C)、41mg钯/活性碳(10%w/w;0.025mmol)和15ml甲醇/EtOAc(1/1)的混合物在常压氢气下氢化2小时。通过一次性玻璃料滤片过滤不均匀混合物以除去钯,浓缩滤液。ESI-MS和1H?NMR分析发现粗产物是纯净的,直接用于下一步骤无需再纯化:

        ??????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ1.46(s,9H),1.49(d,J=6.5,6H),2.61(t,J=7.5,2H),2.65(s,3H),2.97(t,J=7.5,2H),4.79(sep,J=6.5,1H),7.11(d,J=9.0,1H),7.18(d,J=9.0,1H),7.23(s,1H),7.69(d,J=8.0,1H),8.18(d,J=2.0,1H),8.24(dd,J=8.0,2.0,1H).

        步骤E:3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        将3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯(110mg,0.23mmol,步骤D)用20%三氟乙酸的二氯甲烷溶液(10ml)在室温下处理3小时。减压除去溶剂,将残余固体溶于甲苯中,再次浓缩。通过Biotage?40S柱色谱(洗脱剂:二氯甲烷/甲醇=9/1)分离出纯净产物:

        ???????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ1.49(d,J=6.5,6H),2.65(s,3H),2.77(t,J=8.0,2H),3.03(t,J=8.0,2H),4.79(sep,J=6.5,1H),7.11(d,J=9.0,1H),7.21(d,J=9.0,1H),7.24(s,1H),7.70(d,J=8.0,1H),8.17(d,J=2.0,1H),8.25(dd,J=8.0,2.0,1H).

        ???????????????????????实施例88-89

        以下实施例按照实施例87介绍的类似方法制备,在步骤A中用适当的羧酸替代3-氰基-4异丙氧基苯甲酸。

        ???????????????????????实施例90

        (R/S)-3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)

        ??????????????????????????丁酸

        标题化合物按照实施例87介绍的类似方法制备,在步骤C中用丁烯酸叔丁酯替代丙烯酸叔丁酯:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ1.49(d,J=6.5,6H),1.50(d,J=7.0,3H),2.65(s,3H),2.75(m,1H),3.36(m,2H),4.79(sep,J=6.5,1H),7.13(d,J=9.0,1H),7.23(dd,J=9.0,1.0,1H),7.26(d,J=1.0,1H),7.71(d,J=8.0,1H),8.17(d,J=2.0,1H),8.25(dd,J=8.0,2.0,1H).

        ????????????????????????????实施例91

        3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙基噻吩基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        步骤A:N′-(3-氰基-4-氟苯基)-4-溴-2-甲基苯甲酰肼

        标题化合物按照实施例87步骤A介绍的类似方法制备,用3-氰基-4-氟苯甲酸替代3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸:

        ???????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,DMSO)δ8.42(d,J=4.6,1H),8.28-8.29(m,1H),7.70(t,J=8.9,1H),7.55(s,1H),7.47-7.51(m,1H),7.37(d,J=8.0,1H),2.41(s,3H).

        步骤B:N′-(3-氰基-4-异丙基噻吩基)-4-溴-2-甲基苯甲酰肼

        在烘箱干燥的高压管中,将氢化钠(95%)(0.8mmol,0.025g)加入到2-丙硫醇(0.8mmol,0.09ml)的DMF(4ml)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌10分钟,然后加入N′-(3-氰基-4-氟苯基羰基)-4-溴-2-甲基苯甲酰肼(0.53mmol,0.2g)。将反应混合物在100℃加热16小时,冷却至室温,与水混合。过滤收集所得沉淀,用水洗涤,得到0.1g(44%)标题化合物。

        ?????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,DMSO)δ8.28(s,1H),8.14(d,J=8.0,1H),7.76(d,J=8.2,1H),7.55(s,1H),7.49(d,J=7.8,1H),7.36(d,J=8.0,1H),3.80-3.90(m,1H),2.40(s,3H),1.34(d,J=6.2,6H)

        步骤C:2-(3-氰基-4-异丙基噻吩基)-5-(4-溴-2-甲基苯基)-1,3,4-噻二唑

        标题化合物按照实施例87步骤B介绍的类似方法制备,用N′-(3-氰基-4-异丙基噻吩基)-4-溴-2-甲基苯甲酰肼(步骤B)替代N′-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-4-溴-2-甲基苯甲酰肼:ESI-MS(m/z)432.0;HPLCA:3.30min。

        步骤D:3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙基噻吩基)-1,3,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯

        将双(三叔丁基膦)合钯(0)(5mg)加入到2-(3-氰基-4-异丙基噻吩基)-5-(4-溴-2-甲基苯基)-1,3,4-噻二唑(0.15mmol,0.066g,步骤C)的3-乙氧基-3-氧代丙基溴化锌(0.5M的THF溶液)(0.31mmol,0.61ml)溶液中,该溶液已用氩气脱气。将反应混合物在氩气氛、室温下搅拌5小时,然后真空浓缩。用硅胶色谱法纯化(用20%EtOAc/己烷洗脱),得到所需产物。ESI-MS(m/z)452.3;HPLC?A:2.85min。

        步骤E:3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙基噻吩基)-1,3,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        将氢氧化钠(5N)(0.44mmol,0.1ml)加入到3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙基噻吩基)-1,3,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯(0.09mmol,步骤D)的乙醇(2ml)溶液中。将反应混合物在50℃搅拌1小时。将反应物用2N?HCl酸化至pH<7,产物用EtOAc(20ml)萃取。将有机物经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。用硅胶色谱法纯化(用10%甲醇/二氯甲烷洗脱),得到12mg标题化合物:

        ????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ8.26(s,1H),8.24(d,J=8.3,1H),7.74(d,J=7.7,1H),7.62(d,J=8.3,1H),7.28(s,1H),7.24(d,J=8.0,1H),3.70-3.78(m,1H),3.02-3.10(m,2H),2.76-2.82(m,2H),2.68(s,3H),1.47(d,J=6.4,6H);ESI-MS(m/z)423.9;HPLC?A:3.79min.

        ??????????????????????实施例92

        3-(4-(5-(3-氰基-4-(1-甲基丙氧基)苯基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)

        ?????????????????????????丙酸

        步骤A:2-(3-碘-4-异丙氧基苯基)-5-(4-溴-2-甲基苯基)-1,3,4-噻二唑

        标题化合物按照实施例87步骤A和B介绍的类似方法制备,在步骤A中用3-碘-4-异丙氧基苯甲酸替代3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸:

        ?????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,DMSO)δ8.36(s,1H),7.95(dd,J=7.3,1.4,1H),7.56(s,1H),7.52(d,J=8.3,1H),7.38(d,J=8.9,1H),7.15(d,J=8.9,1H),4.76-4.84(m,1H),2.51(s,3H),1.34(d,J=6.0,6H).

        步骤B:2-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-5-(4-溴-2-甲基苯基)-1,3,4-噻二唑

        将2-(3-碘-4-异丙氧基苯基)-5-(4-溴-2-甲基苯基)-1,3,4-噻二唑(0.78mmol;0.4g,步骤A)、氰化锌(0.47mmol,0.55g)、三(二亚苄基丙酮)合二钯(0)(0.039mmol,0.036g)和1,1′-双(二苯基膦基)-二茂铁(0.094mmol,0.052g)溶于DMF(5ml)中,在120℃加热3小时。真空浓缩反应物。用硅胶色谱法纯化(用10%EtOAc/己烷洗脱),得到0.25g所需产物。ESI-MS(m/z)416.1;HPLC?A:4.22min。

        步骤C:3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,3,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯

        标题化合物按照实施例91步骤D介绍的类似方法制备,用2-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-5-(4-溴-2-甲基苯基)-1,3,4-噻二唑(步骤B)替代3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙基噻吩基)-1,3,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯:ESI-MS(m/z)436.3;HPLC?A:4.08min。

        步骤D:3-(4-(5-(3-氰基-4-羟基苯基)-1,3,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯

        在0℃,将三氯化硼(1M的CH2Cl2溶液,3ml)加入到3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,3,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯(0.6mmol,步骤C)的二氯甲烷(40ml)溶液中。让反应混合物在4小时内升至室温,然后在室温下搅拌16小时。反应混合物用二氯甲烷(50ml)稀释,用水(50ml)洗涤。将有机物经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。用硅胶色谱法(用EtOAc洗脱),得到0.12g标题化合物。

        ?????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ8.17(s,1H),8.13(s,1H),7.68(s,1H),7.24(s,1H),7.20-7.24(m,2H),4.14-4.23(m,2H),2.98-3.08(m,2H),2.68-2.78(m,2H),2.64(s,3H),1.30(t,J=7.1,3H);ESI-MS(m/z)394.2;HPLC?A:2.71min.

        步骤E:(R/S)-3-(4-(5-(3-氰基-4-(1-甲基丙氧基苯基)-1,3,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯

        将2-碘丁烷(0.9mmol;0.14g)加入到3-(4-(5-(3-氰基-4-羟基苯基)-1,3,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯(0.03mmol,0.01g,步骤D)和碳酸钾(0.9mmol,0.011g)的DMF(1ml)溶液中。将反应混合物在70℃加热1小时。用硅胶色谱法纯化(用EtOAc/己烷洗脱),得到所需产物:ESI-MS(m/z)450.2;3.16min。

        步骤F:(R/S)-3-(4-(5-(3-氰基-4-(1-甲基丙氧基)苯基)-1,3,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        标题化合物按照实施例91步骤E介绍的类似方法制备,用(R/S)-3-(4-(5-(3-氰基-4-(1-甲基丙氧基苯基)-1,3,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯(步骤E)替代3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙基噻吩基)-1,3,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ8.25(d,J=8.7,1H),8.19(s,1H),7.71(d,J=7.8,1H),7.26(s,1H),7.22(d,J=7.8,1H),7.11(d,J=8.7,1H),4.52-4.60(m,1H),3.04(t,J=7.6,2H),2.77(t,J=7.7,2H),2.66(s,3H),1.85-1.95(m,1H),1.76-1.84(m,1H),1.45(d,J=6.0,3H),1.08(t,J=7.3,3H);ESI-MS(m/z)422.2;2.82min.

        ?????????????????????实施例93-101

        以下实施例按照实施例92介绍的类似方法制备,在步骤E中用适当的烷基卤替代2-碘丁烷。

        ?????????????????????实施例102

        3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,3,4-_二唑-3-基)-5-甲基苯基)丙酸

        步骤A:2-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-5-(4-溴-2-甲基苯基)-1,3,4-_二唑

        在烘箱干燥的圆底烧瓶中,将145mg(0.35mmol)N′-(3-氰基-4-异丙氧基苯基羰基)-4-溴-2-甲基苯甲酰肼(实施例87步骤A)与10ml无水二甲苯和5ml三氯氧化磷混合,将不均匀的反应混合物加热至回流6小时。将所得均匀混合物冷却至室温,与200ml冰-水混合,中和至pH>10,用EtOAc(2×150ml)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥,减压除去溶剂。粗制化合物通过Biotage?40S快速色谱法纯化(洗脱剂:己烷/EtOAc-4/1),得到121mg标题化合物:

        ???????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ1.50(d,J=7.0,6H),2.78(s,3H),4.80(sep,J=7.0,1H),7.14(d,J=9.0,1H),7.54(dd,J=9.0,2.0,1H),7.58(d,J=2.0,1H),7.91(d,J=8.5,1H),8.30(d,J=2.0,1H),8.33(dd,J=8.5,2.0,1H).

        步骤B:2-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,3,4-_二唑-3-基)-5-甲基苯基)丙酸

        标题化合物用2-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-5-(4-溴-2-甲基苯基)-1,3,4-_二唑(步骤A)按照实施例87步骤C-E介绍的类似方法制备:???????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ1.48(d,J=6.0,6H),2.60(t,J=7.5,2H),2.75(s,3H),2.98(t,J=7.5,2H),4.80(sep,J=6.0,1H),7.13(d,J=9.0,1H),7.21(m,2H),7.95(d,J=8.0,1H),8.28(d,J=2.5,1H),8.31(dd,J=8.5,2.5,1H).

        ????????????????????????实施例103

        3-(4-(5-(5-氯-6-异丙氧基-吡啶-3-基)-1,3,4-_二唑-3-基)-5-甲基苯基)

        ???????????????????????????丙酸

        标题化合物用5-氯-6-异丙氧基烟酸按照实施例87步骤A和实施例102介绍的类似方法制备:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1HNMR(500MHZ,CDCl3)δ1.47(d,J=6.5,6H),2.78(s,3H),2.80(t,J=7.5,2H),3.05(t,J=7.5,2H),5.50(sep,J=6.0,1H),7.25(m,2H),7.99(d,J=7.5,1H),8.36(d,J=2.5,1H),8.81(d,J=2.5,1H).

        ?????????????????????????实施例104

        3-(4-(5-(3-氰基-4-(2-甲基丙基)苯基)-1,3,4-噻二唑-3-基)-5-甲基苯基)

        ???????????????????????????丙酸

        步骤A:2-氨基-5-(4-溴-3-甲基苯基)-1,2,4-噻二唑

        在烘箱干燥的圆底烧瓶中,将7.0g?4-溴-3-甲基苯甲酸(32.6mmol)溶于10ml二氯甲烷中,向该溶液中加入30ml二甲基甲酰胺,所得混合物用7.0ml乙二酰氯在50℃处理30分钟。冷却反应混合物至室温,减压除去溶剂。将残余白色固体溶于50ml?EtOAc中,在10分钟内加入搅拌下的两相体系(150ml?EtOAc、150ml碳酸氢钠饱和溶液和7.5g氨基硫脲(81.4mmol))。将所得反应混合物在室温下搅拌3小时,分离出有机层,水层用2×250ml?EtOAc萃取。合并的有机萃取液经硫酸钠干燥,浓缩,得到被氨基硫脲污染的粗产物。将此粗产物用25ml净硫酸在室温下处理30分钟。反应混合物用500ml冰-水混合物稀释,用固体氢氧化钠碱化至pH>13,通过外部冰浴控制等温线。碱性不均匀溶液用3×300ml?EtOAc萃取,有机萃取液经硫酸钠干燥,浓缩。粗产物用Biotage?40L柱色谱法纯化(洗脱剂:己烷/EtOAc=1/1),得到3.7g标题化合物:

        ????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ2.56(s,3H),5.28(s,2H),7.42(d,J=6.5,1H),7.44(d,J=6.5,1H),7.49(s,1H).

        步骤B:4-(2-氨基-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基丙烯酸叔丁酯

        在烘箱干燥的烧瓶中,在氩气氛下,将232mg?2-(二叔丁基膦基)联苯(0.78mmol)和400mg三(二亚苄基丙酮)合二钯-氯仿络合物(0.39mmol)溶于40ml无水二_烷中,将溶液用氩气脱气。用注射器向此混合物依次加入3.30ml二环己基甲基胺(1.56mmol)、1.11ml丙烯酸叔丁酯(9.72mmol)、2.10g?2-氨基-5-(4-溴-3-甲基苯基)-1,2,4-噻二唑(7.78mmol,步骤A)的10ml二_烷溶液。将所得混合物用氩气脱气,在氩气氛下于100℃加热30分钟。通过玻璃料滤片过滤反应混合物,浓缩。通过Biotage?40L柱色谱法纯化(洗脱剂:己烷/EtOAc),分离出标题化合物(白色固体)(2.62g):

        ??????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ1.57(s,9H),2.61(s,3H),6.44(d,J=17.5,1H),7.42(d,J=6.5,1H),7.45(s,1H),7.59(m,2H).

        步骤C:4-(2-氨基-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基丙酸叔丁酯

        将4-(2-氨基-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙烯酸叔丁酯(2.62g,步骤B)溶于150ml甲醇/EtOAc混合物(1/1)中,加入1.40g钯/活性碳(10%w/w,13mmol),将所得混合物在55psi氢气氛下氢化36小时。通过滤纸减压过滤不均匀混合物,随后通过一次性玻璃料滤片除去痕量钯,浓缩滤液。粗产物直接用于下一步骤无需再纯化:

        ??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ1.47(s,9H),2.57(s,3H),2.59(t,J=8.0,2H),2.95(t,J=8.0,2H),5.16(s,2H),7.13(d,J=7.5,1H),7.18(s,1H),7.51(d,J=7.5,1H).

        步骤D:4-(2-溴-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基丙酸叔丁酯

        将4-(2-氨基-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯(步骤C)溶于100ml乙腈中,依次加入3.2g溴化铜(II)和1.5ml亚硝酸异戊酯。将混合物在室温下搅拌40分钟,用500ml?EtOAc稀释,与300ml水混合。分离出有机层,水层用200ml?EtOAc洗涤,合并的有机萃取液用盐水洗涤,经硫酸钠干燥后浓缩。通过Biotage?40L柱色谱分离出纯净产物:

        ??????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ1.46(s,9H),2.59(s,3H),2.60(t,J=8.0,2H),2.97(t,J=8.0,2H),5.16(s,2H),7.19(d,J=8.0,1.5,1H),7.22(d,J=1.0,1H),7.60(d,J=8.0,1H);13C?NMR{H}(500MHZ,CDCl3)δ21.4,28.0,30.74,36.5,80.6,126.3,126.4,130.7,131.8,137.3,138.4,144.2,171.3,171.8;ESI-MS(m/z)obsd.382/384(强度=1/1)。

        步骤E:2-(2-甲基丙基)-5-溴苯甲腈

        将5-溴-2-碘代苯甲腈(3.25mmol)与6.5ml?0.5M异丁基溴化锌溶液混合,将溶液用氩气脱气,一次性加入100mg四(三苯基膦)合钯,在氩气氛、室温下搅拌溶液48小时。减压除去溶剂,残余混合物通过Biotage?40L柱色谱法纯化,得到标题化合物:

        ???????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ0.97(d,J=8.5,6H),2.00(m,1H),2.71(d,J=7.5,2H),7.19(d,J=8.5,1H),7.65(dd,J=8.5,2.0,1H),7.76(d,J=2.0,1H).

        步骤F:(3-氰基-4-(2-甲基苯基)苯基)硼酸频哪醇酯

        将2-(2-甲基丙基)-5-溴苯甲腈(120mg,0.50mmol,步骤E)与140mg二硼酸二频哪醇酯(bis(pinacolato)diboron)(0.55mmol)、150mg乙酸钾(1.50mmol)和5ml二甲亚砜混合。所得溶液用氩气脱气,向该溶液中加入50mg[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)-二氯甲烷络合物。将混合物加热至80℃1小时,冷却至室温,通过Biotage?40L柱色谱(洗脱剂:己烷/EtOAc=10/1)分离出产物,为所需产物和原料的混合物(混合物中含约60%产物)。将混合物直接使用无需再纯化。

        步骤G:3-(4-(5-(3-氰基-4-(2-甲基丙基)苯基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯

        将33mg(0.086mmol)4-(2-溴-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯(步骤D)、50mg(3-氰基-4-(2-甲基苯基)苯基)硼酸频哪醇酯(步骤F)、123mg碳酸钠十水合物(0.43mmol)、100μl水和2ml二甲基甲酰胺的搅拌溶液用氩气脱气。向此溶液中加入10mg四(三苯基膦)合钯(0.009mmol),将溶液用氩气脱气,在氩气氛下加热至80℃0.5小时。减压除去溶剂,粗制浓缩物通过制备型TLC纯化(洗脱剂:己烷/EtOAc=4/1),得到22mg标题化合物:

        ????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ1.03(d,J=7.0,6H),1.47(s,9H),2.09(m,1H),2.61(t,J=7.5,2H),2.66(s,3H),2.83(d,J=7.5,2H),2.98(t,J=8.0,2H),7.21(d,J=8.0,1.5,1H),7.24(s,1H),7.46(d,J=8.5,1H),7.71(d,J=8.0,1H),8.21(dd,J=8.0,1.5,1H),8.26(d,J=1.5,1H).

        步骤H:2-(4-(5-(3-氰基-4-(2-甲基丙基)苯基-1,3,4-噻二唑-3-基)-5-甲基苯基)丙酸

        将2-(4-(5-(3-氰基-4-(2-甲基丙基)苯基-1,3,4-噻二唑-3-基)-5-甲基苯基)丙酸叔丁酯(20mg,0.043mmol,步骤F)用20%三氟乙酸的二氯甲烷溶液(10ml)在室温下处理3小时。减压除去溶剂,将残余固体溶于甲苯中,除去溶剂,得到标题化合物:

        ??????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ1.03(d,J=7.0,6H),2.10(m,1H),2.68(s,3H),2.78(t,J=7.5,2H),2.84(d,J=7.5,2H),3.06(t,J=8,0,2H),7.24(d,J=8.5,1.5,1H),7.28(s,1H),7.48(d,J=8.5,1H),7.73(d,J=8.0,1H),8.21(dd,J=8.0,2.0,1H),8.27(d,J=2.0,1H).

        ???????????????????????实施例105

        3-(4-(2-(3-氰基-4-氰基甲氧基苯基)-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙

        ???????????????????????????酸

        步骤A:3-氰基-4-氟苯甲酸

        在0℃,将氧化铬(14.77mmol;1.48g)溶于硫酸(1.1ml)和水(3.4ml)的溶液中。在0℃,向此溶液中加入3-氰基-4-氟苯甲醛(13.4mmol;2.0g)和丙酮(17ml)的混合物。让反应混合物升至室温,搅拌6小时。然后将反应物用甲醇(20ml)和水(50ml)猝灭,产物用EtOAc(2×50ml)萃取。合并的有机物用盐水(50ml)洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到2.25g产物:

        ????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ8.39(d,J=5.0,1H),8.28-8.29(m,1H),7.64(t,J=8.9,1H).

        步骤B:3-(4-(3-(3-氰基-4-氟苯基)-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯

        标题化合物用3-氰基-4-氟苯甲酸(步骤A)按照实施例87步骤A-C介绍的类似方法制备。

        步骤C:3-(4-(3-(3-氰基-4-氰基甲氧基苯基)-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯

        将乙醇腈(0.013mmol,0.1ml)加入到3-(4-(3-(3-氰基-4-氟苯基)-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯(0.012mmol,0.005g,步骤B)的THF(1ml)溶液中。向反应混合物中加入氢化钠(95%,5mg),在75℃加热16小时。反应物用EtOAc(20ml)稀释,用水(20ml)洗涤。将有机物经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。通过硅胶色谱(用25%EtOAc/己烷洗脱),得到标题化合物:ESI-MS(m/z)461.2;HPLC?A:3.94min。

        步骤D:3-(4-(3-(3-氰基-4-氰基甲氧基苯基)-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸

        按照实施例87步骤E介绍的类似方法,用3-(4-(3-(3-氰基-4-氰基甲氧基苯基)-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯,制备标题化合物:

        ?????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ8.30-8.38(m,2H),7.72(d,J=7.7,1H),7.26(s,1H),7.20-7.24(m,2H),4.15(d,J=7.1,2H),3.04(t,2H),2.77(t,J=7.4,2H),2.66(s,3H).ESI-MS(m/z)405.1;HPLC?A:3.12min.

        ??????????????????????实施例106-109

        以下实施例按照实施例105介绍的类似方法制备,在步骤C中用适当醇替代乙醇腈。

        ??实施例??Rxiv??????????????????????表征??106????CF3CH(CH3)-?1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ8.31(dd,J=6.8,2.0,??1H),8.25(s,1H),7.72(d,J=7.8,1H),7.27(s,1H),7.23??(d,J=8.7,1H),4.38-4.95(m,1H),3.05(t,J=7.6,2H),??2.77(t,J=7.6,2H),2.67(s,3H),1.70(d,J=6.4,3H);??ESI-MS(m/z)462.1;HPLC?A:2.75min????107?????(FCH2)2CH-?1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ8.27(dd,J=7.1,1.7,??1H),8.24(s,1H),7.70(d,J=7.8,1H),7.27(s,1H),7.25??(s,1H),7.22(d,J=8.0,1H),4.92-5.04(m,1H),4.84(t,???J=4.8,2H),4.74(d,J=4.6,2H),3.04(t,J=7.6,2H),??2.77(t,J=7.6,2H),2.65(s,3H);ESI-MS(m/z)444.2;??HPLC?A:3.28min???109????HCF2CH2-?1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ8.30(d,J=8.7,1H),??8.25(s,1H),7.71(d,J=7.8,1H),7.26(s,1H),7.22(d,J??=7.8,1H),7.16(d,J=8.9,1H),4.40-4.48(m,2H),3.04??(t,J=7.6,2H),2.77(t,J=7.6,2H),2.66(s,3H);ESI-??MS(m/z)430.2;HPLC?A:3.31min

        ???????????????????实施例110

        (R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-2,3-

        ????????????二氢-1-H-茚-1-基)甲酸甲酯

        步骤A:3-(3-甲氧基-2-甲基苯基)-3-氧代丙酸乙酯

        将亚硫酰二氯(118ml)加入到3-甲氧基-2-甲基苯甲酸(98.8g,595mmol)中,加热至回流。2小时后,冷却反应混合物至室温,真空浓缩。使残余物与甲苯(2×300ml)共沸,将所得固体放置一边。加入冷却至5℃的丙二酸单乙酯钾盐(208g,1.22mol)的乙腈(1.50L)悬浮液、三乙胺(166ml,1.49mol),然后加入MgCl2(142g,1.49mol)。撤去冷却浴,在室温下搅拌混合物3.5小时。将混合物重新冷却至5℃,在10分钟内加入上述酰氯的乙腈溶液(100ml)。让混合物升至室温,搅拌15小时,真空浓缩,与甲苯(2xml)共沸。将残余物悬浮于EtOAc(750ml)和甲苯(750ml)中,在冰浴中冷却,缓慢加入4N?HCl(750ml)。撤去冷却浴,将两相混合物剧烈搅拌30分钟。分离各层,有机层用饱和NaHCO3(2×1.0L)洗涤,经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩,通过硅胶快速色谱法纯化(5,10%EtOAc/庚烷),得到138g标题化合物(浅黄色液体):1H?NMR(500MHz,CDCl3)分析表明产物是酮酯和烯醇(2.5∶1)的混合物。对于酮酯:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????δ1.23(t,3H,J=7.2Hz),2.34(s,3H),3.85(s,3H),3.89(s,2H),4.17(q,2H,J=7.1Hz),6.97(d,1H,J=7.8Hz),7.14(d,1H,J=8.7Hz),7.22(d,1H,J=7.9Hz).

        步骤B:3-(3-甲氧基-2-甲基苯基)丙酸乙酯

        向3-(3-甲氧基-2-甲基苯基)-3-氧代丙酸乙酯(137.2g,595mmol,步骤A)的乙醇(924ml)溶液中加入10%Pd-C(13.7g),施加3atm的氢气。将混合物加热至60℃20小时,冷却至室温,通过Celite_过滤。真空浓缩滤液,残余物通过硅胶快速色谱法纯化(2%EtOAc/己烷),得到110.8g标题化合物(浅黄色液体):

        ???????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.25(t,3H,J=7.1Hz),2.19(s,3H),2.55(t,2H,J=8.0Hz),2.95(t,2H,J=8.0Hz),3.82(s,3H),4.14(q,2H,J=7.1Hz),6.73(d,1H,J=8.2Hz),6.78(d,1H,J=7.6Hz),7.10(d,1H,J=7.9Hz).

        步骤C:3-甲氧基-2-甲基苯基丙酸

        将3-(3-甲氧基-2-甲基苯基)丙酸乙酯(36.3g,165mmol,步骤B)的无水乙醇(200ml)和5N?NaOH(99ml)溶液加热至回流30分钟,冷却至室温。真空浓缩反应混合物,将所得固体物质溶于H2O(100ml)中,用冰浴冷却。然后滴加浓HCl(50ml)。在pH=4,再加入300ml水有利于搅拌。将酸化混合物搅拌30分钟,过滤,固体用水(2×100ml)和Et2O(2×100ml)洗涤。3小时后,用五氧化二磷真空干燥固体过夜,得到29.3g标题化合物(白色固体):

        ?????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ2.15(s,3H),2.50(t,2H,J=7.9Hz),2.90(t,2H,J=7.9Hz),3.78(s,3H),6.75(d,2H,J=8.0Hz),7.05(t,1H,J=8.0Hz).

        步骤D:5-甲氧基-4-甲基-茚满-1-酮

        将SOCl2(144ml)加入到3-甲氧基-2-甲基苯基丙酸(步骤C)中,混合物加热至回流。2小时后,真空浓缩反应混合物,与二氯乙烷(2×50ml)共沸。将所得酰氯溶于二氯甲烷(250ml)中,在冰浴中冷却,滴加1.0M?SnCl4的二氯甲烷溶液(155ml,155mmol)。让紫色反应混合物升至室温1小时,用300ml?H2O/300g碎冰猝灭。分离各层,有机层用2N?HCl(2×150ml)、H2O(2×150ml)和盐水(2×150ml)洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(10,30%EtOAc/庚烷),得到琥珀色固体,将其与己烷(100ml)在0℃研磨,得到16.6g标题化合物(灰白色粉末)。己烷滤液通过以上快速色谱进一步纯化,又得到1.00g灰白色固体:

        ????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ2.18(s,3H),2.67-2.69(m,2H),2.98-3.01(m,2H),3.92(s,3H),6.89(d,1H,J=8.5Hz),7.63(d,1H,J=8.5Hz).

        步骤E:(5-甲氧基-4-甲基-2,3-二氢-1H-1-茚-1-亚基)乙酸乙酯

        用套管向活性锌粉(556mg,8.51mmol)和THF(2.5ml)的混合物中滴加5-甲氧基-4-甲基-茚满-1-酮(1.00g,5.68mmol,步骤D)和溴代乙酸乙酯(819μl,7.38mmol)的THF(5ml)溶液。通过在浸入60℃油浴1分钟引发反应。10分钟后,将反应物用2N?HCl(10ml)猝灭,用EtOAc(10ml)萃取。有机层用水(1×10ml)、盐水(1×10ml)洗涤,经硫酸镁干燥,然后过滤。真空除去溶剂,残余物通过硅胶快速色谱法纯化(2,5%EtOAc/己烷),得到1.26g粗产物,将其用己烷重结晶,得到1.01g标题化合物(白色固体):

        ????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.32(t,3H,J=7.1Hz),2.15(s,3H),2.94-2.97(m,2H),3.29-3.32(m,2H),3.87(s,3H),4.20,(q,2H,J=7.1Hz),6.17(t,1H,J=2.5Hz),6.79(d,1H,J=8.8Hz),7.43(d,1H,J=8.5Hz).

        步骤F:(2E-)-(5-甲氧基-4-甲基-2,3-二氢-1H-茚-1-亚基)乙酸

        向(5-甲氧基-4-甲基-2,3-二氢-1H-1-茚-1-亚基)乙酸乙酯(8.28g,33.6mmol,步骤E)的3∶2∶1?THF∶CH3OH∶H2O(83ml)溶液中加入5.0NNaOH(14.8ml,74.0),将所得溶液加热至回流。2小时后,将反应混合物真空浓缩后溶于水(150ml)中,冷却至0℃。水层用浓HCl酸化(pH<2),过滤所得沉淀,用水(150ml)洗涤,用五氧化二磷真空干燥。总共分离出6.75g标题化合物(白色固体):

        ??????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ2.18(s,3H),3.22-3.29(m,2H),3.50-3.52(m,2H),3.80(s,3H),6.26(s,1H),6.82(d,1H,J=8.2Hz),7.12(d,1H,J=8.3Hz).

        步骤G:(R)-(5-甲氧基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        向(2E-)-(5-甲氧基-4-甲基-2,3-二氢-1H-茚-1-亚基)乙酸(1.0g,4.58mmol,步骤F)的甲醇(10ml)溶液中加入[(S)-(-)-2,2′-双(二苯基膦基)-1,1′-联萘]合钌(II)(36.0mg,0.0458mmol)和三乙胺(64μl,0.458mmol)。将所得混合物置于3atm氢气氛下,在室温振荡24小时。通过Celite_过滤反应混合物,真空浓缩。将残余物溶于THF(5ml)和甲醇(5ml)中,用TMSCHN2(6.51ml,13.0mmol)在室温下处理。1小时后,真空浓缩反应混合物,通过硅胶快速色谱法纯化(3%EtOAc/己烷),得到828mg标题化合物(无色液体):

        ?????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.71-1.78(m,1H),2.15(s,3H),2.37-2.46(m,2H),2.73-2.81(m,2H),2.86-2.92(m,1H),3.53-3.59(m,1H),3.73(s,3H),3.82(s,3H),6.69(d,1H,J=8.2Hz),6.96(d,1H,J=8.2Hz).

        步骤H:(R)-(5-羟基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        将1.0M三溴化硼的二氯甲烷溶液(16.2ml,16.2mmol)加入到(R或S)-(5-甲氧基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(1.52g,6.49mmol,步骤F)的二氯甲烷(5ml)冰冷溶液中。撤去冷却浴,在室温下搅拌反应混合物。1小时后,将反应混合物缓慢转移到甲醇的冰冷溶液(50ml)。真空除去甲醇,残余物在EtOAc和饱和NaH2PO4之间分配。有机层用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩,通过硅胶快速色谱法纯化(5,10%EtOAc/己烷),得到1.22g标题化合物(白色固体):

        ?????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.71-1.78(m,1H),2.16(s,3H),2.35-2.44(m,2H),2.71-2.79(m,2H),2.86-2.90(m,1H),3.54(p,1H,J=7.3Hz),3.72(s,3H),4.83(s,1H),6.61(d,1H,J=8.0Hz),6.85(d,1H,J=8.0Hz).

        步骤I:(R)-(5-三氟甲基磺酰氧基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        向冷却至0℃的吡啶(440μl,5.45mmol)的二氯甲烷(5.0ml)溶液中加入三氟甲磺酸酐(840μl,4.99mmol)。将所得混合物搅拌5分钟,加入固体(R或S)-(5-羟基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(1.00g,1.34mmol,步骤H)。让反应混合物升至室温,搅拌1小时,用二氯甲烷稀释。有机层用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(10%EtOAc/己烷),得到1.46g标题化合物(浅黄色液体):

        ?????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.69-1.91(m,1H),2.33(s,3H),2.38-2.56(m,2H),2.69-2.79(m,1H),2.79-3.01(m,2H),3.49-3.65(m,1H),3.76(s,3H),7.09(s,2H).

        步骤J:(R)-(5-氰基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        在氩气氛下,向(R或S)-(5-三氟甲基磺酰氧基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(1.00g,2.84mmol,步骤I)的N-甲基吡咯烷酮(13ml)溶液中加入氰化锌(267mg,2.27mmol)、Pd2dba3(13.0mg,14.2μmol)和dppf(19.0mg,34.1μmol),将反应混合物加热至100℃。16小时后,真空浓缩反应混合物,在EtOAc和H2O之间分配。分离各层,有机层用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩滤液,残余物通过硅胶快速色谱法纯化(5,10%EtOAc/己烷),得到553mg标题化合物(白色固体):

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.76-1.80(m,1H),2.41-2.50(m,5H),2.73(dd,1H,J=5.8,15.8Hz),2.78-2.84(m,1H),2.91(ddd,1H,J=4.8,8.7,13.5Hz)3.61-3.67(m,1H),3.71,(s,3H),7.07(d,1H,J=7.8Hz),7.43(d,1H,J=7.7Hz).

        步骤K:(R)-(5-(N-羟基甲脒基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        向(R或S)-(5-氰基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(724mg,3.16mmol,步骤J)的甲醇(10ml)溶液中加入羟胺盐酸盐(285mg,4.11mmol)和三乙胺(660μl,474mmol),加热至回流。14小时后,冷却反应混合物至室温,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(10,30,50%EtOAc/己烷),得到318mg原料和352mg标题化合物,1H?NMR分析显示为偕胺肟和伯酰胺(2∶1)的不可分离的混合物。对于偕胺肟:

        ????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.72-1.84(m,1H),2.37(s,3H),2.43-2.51(m,2H),2.76-2.87(m,2H),2.90-2.96(m,1H),3.64(p,1H,J=7.2Hz),3.76(s,3H),4.85,(br,s,2H),7.05(d,1H,J=7.5Hz),7.31(d,1H,J=8.0Hz).

        步骤L:(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        向5-氯-6-异丙氧基烟酸(289mg,1.34mmol)的乙腈(5.0ml)溶液中加入EDC·HCl(257mg,1.34mmol)。将所得溶液在室温下搅拌30分钟,加入(R或S)-(5-(N-羟基甲脒基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(352mg,步骤K)。1小时后,真空浓缩反应混合物。将残余物溶于EtOAc中,用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩后溶于THF(1.5ml)中。加入1.0M?TBAF的THF溶液(1.34ml),将所得黄色溶液在室温下搅拌1.5小时。将反应混合物真空浓缩后溶于EtOAc中,用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩,通过硅胶快速色谱法纯化(10%EtOAc/己烷),得到277mg标题化合物(白色固体)。此产物用己烷重结晶,得到176mg产物,>99%ee:

        ??????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.44(d,6H,J=6.2Hz),1.78-1.85(m,1H),2.43-2.46(m,1H),2.49(dd,1H,J=9.3,15.6Hz),2.56(s,3H),2.81(dd,1H,J=5.5,15.5Hz),2.86-2.93(m,1H),3.73(s,3H),5.49,(七重峰,1H,J=6.2Hz),7.14(d,1H,J=7.8Hz),7.85(d,1H,J=7.8Hz),8.38(d,1H,J=2.3Hz),8.85(d,1H,J=2.3Hz).

        步骤M:(R或S)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸

        向(R或S)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(176mg,0.398mmol,步骤L)的THF(3ml)和水(1ml)溶液中加入氢氧化锂一水合物(167mg,3.98mmol)。将反应混合物加热至50℃3小时,冷却至室温,在EtOAc和5%柠檬酸之间分配。有机层用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(2%CH3OH/CH2Cl2/0.2%HCO2H),得到154mg标题化合物(白色固体):

        ????????1H?NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.37(d,6H,J=6.2Hz),1.69-1.73(m,1H),2.31-2.38(m,2H),2.49(s,3H),2.72(dd,1H,J=5.6,15.6Hz),2.81-2.85(m,1H),2.92-2.96(m,1H),3.50-3.52(m,1H),5.43(七重峰,1H,J=6.1Hz),7.30(d,1H,J=8.0Hz),7.77(d,1H,J=7.8Hz),8.48(s,1H),8.89(s,1H);HPLC?A:rt=4.32min,m/z=428.2(M+H)+.

        ?????????????????实施例111-113

        以下实施例按照实施例110介绍的类似方法制备,但是步骤G中反应物的还原采用10%Pd-C作为催化剂,用甲醇作为溶剂。

        ??????????????????????????实施例114

        (R/S)-5-[5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基]-4-甲基-茚

        ??????????????????????????满-2-甲酸

        步骤A:5-甲氧基-4-甲基-茚满-3-氧代-2-甲酸乙酯

        向3-(3-甲氧基-2-甲基苯基)-3-氧代丙酸乙酯(5.31g,20.1mmol,实施例110步骤A)的硝基甲烷(150ml)溶液中滴加AlCl3、甲氧基甲基乙酰氯(24.1mmol,2.20ml)的硝基甲烷(40ml)溶液。然后将反应物加热至80℃2小时,冷却至室温,倒入100ml?10%草酸水溶液中。加入100ml?Et2O,分离各层。有机层用饱和NaHCO3(1×100ml)、盐水(1×100ml)洗涤,经硫酸钠干燥。过滤混合物,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(0,2,5%EtOAc/己烷),得到4.10g标题化合物,为灰白色固体:

        ???????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.31(t,3H,J=7.2Hz),2.51(s,3H),3.23,(dd,1H,J=8.5,16.7Hz),3.40(dd,1H,J=5.0?16.7Hz),3.69(dd,1H,J=4.4,8.5Hz),3.86,(s,3H),4.24(q,2H,J=7.0Hz),7.10(d,1H,J=8.5Hz),7.25(d,1H,J=8.7Hz);HPLC/MS:m/z?249(M+H)+.

        步骤B:5-甲氧基-4-甲基-茚满-2-甲酸乙酯

        向冷却至0℃的5-甲氧基-4-甲基-茚满-3-氧代-2-甲酸乙酯(1.01g,4.07mmol,步骤A)的三氟乙酸(10ml)溶液中滴加三乙基硅烷(1.95ml,12.2mmol)。让反应混合物升至室温,搅拌17小时,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(0,2,3%EtOAc/己烷),得到0.910g标题化合物,为无色液体:

        ????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.29(t,3H,J=7.2Hz),2.13(s,3H),3.14-3.20(m,4H),3.31(五重峰,1H,J=8.8Hz),3.80,(s,3H),4.18(q,2H,J=7.2Hz),6.68(d,1H,J=8.3Hz),6.98(d,1H,J=8.1Hz);HPLC/MS:m/z?235(M+H)+.

        步骤C:5-羟基-4-甲基-茚满-2-甲酸乙酯

        向冷却至0℃的5-甲氧基-4-甲基-茚满-2-甲酸乙酯(896mg,3.82mmol,步骤B)的二氯甲烷(10ml)溶液中滴加BBr3(1.0M的二氯甲烷溶液,19.1ml,19.1mmol)。将反应混合物在0℃搅拌30分钟,升至室温。2小时后,将反应混合物缓慢转移到冰冷甲醇溶液(10ml)。让所得溶液升至室温,真空浓缩,与甲醇(2×5ml)共沸。残余物在EtOAc(15ml)和饱和NaH2PO4(5ml)之间分配。分离各层,EtOAc层用H2O(1×5ml)、盐水(1×5ml)洗涤后干燥(MgSO4)。过滤混合物,真空浓缩,通过硅胶快速色谱法纯化(10,20%EtOAc/己烷),得到560mg标题化合物:

        ??????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ2.15(s,3H),3.13-3.22(m,4H),3.35(五重峰,1H,J=8.6Hz),3.73,(s,3H),4.66(s,1H),6.61(d,1H,J=8.1Hz),6.89(d,1H,J=8.1Hz).

        步骤D:5-三氟磺酰氧基-4-甲基-茚满-2-甲酸乙酯

        在0℃,将三氟甲磺酸酐(492μl,2.92mmol)加入到吡啶(258μl,3.19mmol)和二氯甲烷(3ml)溶液中。5分钟后,加入5-羟基-4-甲基-茚满-2-甲酸乙酯(548mg,2.66mmol,步骤C)的二氯甲烷(3ml)溶液。将所得溶液在0℃搅拌30分钟,在室温下搅拌1小时。反应混合物用二氯甲烷(10ml)稀释,用水(1×10ml)、盐水(1×10ml)洗涤,经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩滤液。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(5%EtOAc/己烷),得到907mg标题化合物,为无色液体:

        ????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1HNMR(500MHz,CDCl3)δ2.26(s,3H),3.20-3.29(m,4H),3.37-3.44(m,1H),3.74,(s,3H),7.04(d,1H,J=8.2Hz),7.07(d,1H,J=8.4Hz).

        步骤E:5-氰基-4-甲基-茚满-2-甲酸乙酯

        向5-三氟磺酰氧基-4-甲基-茚满-2-甲酸乙酯(905mg,2.68mmol,步骤D)的N-甲基吡咯烷酮(7ml)溶液中加入氰化锌(251mg,2.14mmol)、Pd2dba3(12.2mg,0.0134mmol)和dppf(17.8mg,0.0321mmol),将反应混合物加热至100℃。16小时后,将反应混合物真空浓缩,在Et2O(10ml)和水(10ml)之间分配。分离各层,水层用Et2O(2×10ml)反萃取。合并的Et2O层用H2O(1×15ml)、盐水(1×15ml)洗涤,经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩滤液,残余物通过硅胶快速色谱法纯化(5,10%EtOAc/己烷),得到409mg标题化合物(白色固体):

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ2.42(s,3H),3.19-3.39(m,5H),3.73,(s,3H),7.11(d,1H,J=8.8Hz),7.41(d,1H,J=8.8Hz);13C?NMR(500MHz,CDCl3)δ17.6,34.9,36.7,42.5,52.1,110.8,118.5,122.3,131.5,137.5,141.7,146.7,175.1.

        步骤F:5-(N-羟基甲脒基)-4-甲基-茚满-2-甲酸甲酯

        向5-氰基-4-甲基-茚满-2-甲酸乙酯(239mg,1.11mmol,步骤E)的甲醇(5ml)溶液中加入羟胺盐酸盐(100mg,1.44mmol)和三乙胺(232μl,1.67mmol),加热至回流。14小时后,冷却反应混合物至室温,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(10,30,50%EtOAc/己烷),得到85mg原料和105mg标题化合物,1H?NMR分析显示是不可分离的2∶1偕胺肟与伯酰胺的混合物。对于偕胺肟:

        ??????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ2.33(s,3H),3.17-3.39(m,5H),4.77,(br,s,2H),7.06(d,1H,J=7.8Hz),7.21(d,1H,J=7.8Hz).

        步骤G:5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-2-甲酸甲酯

        向5-(N-羟基甲脒基)-4-甲基-茚满-2-甲酸甲酯(36mg,0.145mmol,步骤F)和5-氯-6-异丙氧基烟酸(31.2mg,0.145mmol)的乙腈(1.0ml)溶液中加入EDC·HCl。将所得溶液加热至50℃?3小时,然后加热至120℃(封闭管)。15小时后,冷却反应混合物至室温,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(5,10%?EtOAc/己烷),得到17mg标题化合物(白色固体):

        ????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.43(d,6H,J=6.2Hz),2.55(s,3H),3.25-3.34(m,5H),3.75(s,3H),5.48,(七重峰,1H,J=6.2Hz),7.17(d,1H,J=7.8Hz),7.85(d,1H,J=7.8Hz),8.35(d,1H,J=2.0Hz),8.85(d,1H,J=2.0Hz).

        步骤H:5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-2-甲酸

        将氢氧化锂(3.3mg,0.0795mmol)加入到5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-2-甲酸甲酯(17.0mg,0.0397mmol,步骤G)的THF(1.0ml)和水(300μl)溶液中,加热至50℃。30分钟后,真空浓缩反应混合物,在EtOAc(5ml)和5%柠檬酸(2ml)之间分配。分离各层,有机层用水(3×2ml)、盐水(1×2ml)洗涤,经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩滤液。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(3%?CH3OH/CH2Cl2/1%?HCO2H),得到15.2mg标题化合物(白色固体):

        1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.41(d,6H,J=6.2Hz),2.51(s,3H),3.19-3.41(m,5H),5.49(七重峰,1H,J=6.2Hz),7.17(d,1H,J=8.0Hz),7.78(d,1H,J=7.8Hz),8.39(s,1H),8.83(s,1H);HPLC?A:rt=4.11min,m/z=414.3(M+H)+.

        ???????????????????????实施例115

        (R/S)-5-[5-(5-氯-6-(吗啉-4-基)吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基]-4-甲基-茚

        ????????????????????????满-2-甲酸

        标题化合物按照实施例114介绍的类似方法制备,在步骤G中用5-氯-6-(吗啉-4-基)烟酸替代5-氯-6-异丙氧基烟酸:

        ?????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,DMSO)δ2.46(s,3H),3.09-3.68(m,13H),7.22(d,1H,J=8.0Hz),7.75(d,1H,J=7.8Hz),8.26(d,1H,J=2.3Hz),8.36(s,1H),13.0(br,s,1H);HPLC?A:rt=2.83min,m/z=441.3(M+H)+.

        ????????????????????????实施例116

        (5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-6-甲基-茚满-1-基)

        ???????????????????????????乙酸

        步骤A:3′-氯-3-甲基-4-甲氧基苯丙酮

        在-2℃,将5.0g(37.5mmol)氯化铝的100ml?CH2Cl2悬浮液用3.6ml(37.7mmol)3-氯丙酰氯处理。将所得混合物在低温下搅拌15分钟,此时混合物是均匀的。将溶液用4.2ml(34mmol)2-甲基苯甲醚处理,在低温下搅拌30分钟。将反应混合物倒在175g冰上。加入浓HCl(~5ml),混合物用400ml乙醚萃取。萃取液用150ml饱和NaHCO3洗涤,干燥后浓缩。用己烷重结晶,得到6.11g标题化合物:

        ??????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ2.25(s,3H),3.41(t,J=6.5,2H),3.90(s,3H),3.92(t,J=6.5,2H),6.86(d,J=8.5,1H),7.77(d,J=1.5,1H),7.83(dd,J=1.5,8.5).

        步骤B:5-甲氧基-6-甲基茚满酮

        将5.24g(24.6mmol)3′-氯3-甲基-4-甲氧基苯丙酮(步骤A)和50ml浓H2SO4的混合物在90℃搅拌20小时。冷却混合物,倒在300g冰上?;旌衔镉?00ml?EtOAc萃取。将萃取液干燥后浓缩。用Biotage?40M柱色谱(9∶1?v/v?己烷/EtOAc,7∶3?v/v?己烷/EtOAc用作洗脱剂),得到2.55g不纯产物。用己烷重结晶,得到1.94纯净标题化合物:

        ??????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ2.22(s,3H),2.64-2.66(m,2H),3.06(app?t,J=5.5,2H),3.91(s,3H),6.83(s,1H),7.52(s,1H).

        步骤C:(5-甲氧基-6-甲基-2,3-二氢-1H-茚-1-亚基)乙酸乙酯

        用套管向活性锌粉(1.46g,22.3mmol)和THF(10ml)的混合物中滴加5-甲氧基-6-甲基茚满酮(2.62g,14.8mmol,步骤B)和溴代乙酸乙酯(2.14ml,19.3mmol)的THF(15ml)溶液。将反应物加热至回流45分钟,冷却至室温。反应物用2N?HCl猝灭,用EtOAc萃取。有机层用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥,然后过滤。真空除去溶剂,残余物用硅胶快速色谱法纯化(5%EtOAc/己烷),得到2.64g产物,将其用己烷重结晶,得到2.02g标题化合物(白色固体):

        ????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.35(t,3H,J=7.2Hz),2.24(s,3H),304-3.06(m,2H),3.29-3.31(m,2H),3.88(s,3H),4.23,(q,2H,J=7.1Hz),6.16(t,1H,J=2.4Hz),6.79(d,1H,J=8.8Hz),7.38(d,1H,J=8.5Hz).

        步骤D:(5-羟基-6-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        将(5-甲氧基-6-甲基-2,3-二氢-1H-茚-1-亚基)乙酸乙酯(407mg,1.75mmol,步骤C)的甲醇(5ml)溶液在氮气氛下加入到10%Pd-C(41mg)中。向所得混合物通入1atm氢气。2小时后,过滤混合物,真空浓缩,得到385mg无色液体,将其溶于二氯甲烷(3ml)中,冷却至0℃。加入1.0M?BBr3溶液(8.22ml),将反应混合物升至室温。2小时后,将反应混合物缓慢加入冰冷的甲醇(10ml),升至室温。真空浓缩反应混合物,与甲醇(2×5ml)共沸,在EtOAc和饱和NaH2PO4之间分配。有机层用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(5%EtOAc/己烷),得到295mg标题化合物(白色固体):

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.66-1.89(m,1H),2.26(s,3H),2.34-2.50(m,2H),2.72-2.93(m,3H),3.47-3.58(m,1H),3.81(s,3H),6.69(s,1H),6.97(s,1H).

        步骤E:(5-三氟甲基磺酰氧基-6-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        向冷却至0℃的吡啶(0.13ml,1.61mmol)的二氯甲烷(1.0ml)溶液中加入三氟甲磺酸酐(0.25ml,1.47mmol)。将所得混合物搅拌5分钟,加入固体(5-羟基-6-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(295mg,1.34mmol,步骤D)。让反应混合物升至室温,搅拌30分钟,用二氯甲烷稀释。有机层用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(10%EtOAc/己烷),得到405mg标题化合物(浅黄色液体):

        ????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.69-1.91(m,1H),2.33(s,3H),2.38-2.56(m,2H),2.69-2.79(m,1H),2.79-3.01(m,2H),3.49-3.65(m,1H),3.76(s,3H),7.09(s,2H).

        步骤F:(5-氰基-6-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        在氩气氛下,向(5-三氟甲基磺酰氧基-6-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(405mg,1.15mmol,步骤E)的N-甲基吡咯烷酮(5ml)溶液中加入Pd2dba3(5.00mg,0.00546mmol)、dppf(7mg,0.0127mmol)和Zn(CN)2。将反应混合物加热至100℃15小时,冷却至室温,用EtOAc稀释。有机层用H2O洗涤几次,干燥(盐水,MgSO4),过滤,真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(10%EtOAc/己烷),得到176mg标题化合物(白色固体):

        ?????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.71-1.90(m,1H),2.36-2.60(m,5H),2.71-2.82(m,1H),2.82-2.96(m,2H),3.55-3.68(m,1H),3.76(s,3H),7.11(s,1H),7.47(s,1H).

        步骤G:(5-(N-羟基甲脒基)-6-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        向(5-氰基-6-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(176mg,0.770mmol,步骤F)的甲醇(3ml)溶液中加入羟胺盐酸盐(69.0mg,0.001mmol)和三乙胺(160μl,0.0012mmol),加热至回流。14小时后,冷却反应混合物至室温,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱纯化(10,30,50%EtOAc/己烷),得到85mg原料和105mg标题化合物,1H?NMR分析显示为偕胺肟与伯酰胺(2∶1)的混合物。对于偕胺肟:

        ????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.69-1.84(m,1H),2.36-2.57(m,5H),2.75-3.06(m,3H),3.51-3.69(m,1H),3.78(s,3H),4.83(s,2H),7.07(s,1H),7.29(s,1H).

        步骤H:(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-6-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        向4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯甲酸(34.0mg,0.114mmol)的乙腈(2.0ml)溶液中加入EDC·HCl(22.0mg,0.114mmol)。将所得溶液在室温下搅拌30分钟,(5-(N-羟基甲脒基)-6-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(30.0mg,0.114mmol,步骤G)。1小时后,真空浓缩反应混合物。将残余物溶于EtOAc中,用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩后溶于THF(1.5ml)。加入1.0M?TBAF的THF溶液(120μl),将所得黄色溶液在室温下搅拌15小时。将反应混合物真空浓缩后溶于EtOAc中,用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩,通过硅胶快速色谱法纯化(10%EtOAc/己烷),得到27.0mg标题化合物(白色固体):

        1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.51(d,6H,J=5.9Hz),1.82-1.87(m,1H),2.45-2.50(m,1H),2.52(dd,1H,J=8.9,15.6Hz),2.68(s,3H),2.85(dd,1H,J=5.7,15.6Hz),2.94-3.01(m,2H),3.66-3.77(m,1H),3.79(s,3H),4.84,(七重峰,1H,J=6.2Hz),7.16(d,1H,J=9.0Hz),7.19(s,1H),7.95(s,1H),8.37(dd,1H,J=2.0,8.9Hz),8.47(d,1H,J=2.3Hz).

        步骤I:(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-6-甲基-茚满-1-基)乙酸

        向(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-6-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(23.0mg,0.053mmol,步骤H)的THF(2ml)和水(0.7ml)溶液中加入氢氧化锂一水合物(4.0mg,0.107mmol)。将反应混合物加热至50℃3小时,冷却至室温,在EtOAc和5%柠檬酸之间分配。有机层用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(2%?CH3OH/CH2Cl2/0.2%?HCO2H),得到28.0mg白色薄膜状标题化合物:

        ????????1H?NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.34(d,6H,J=5.9Hz),1.60-1.74(m,1H),2.25-2.39(m,2H),2.55(s,3H),2.64-2.92(m,3H),3.42-3.47(m,1H),4.85-5.05(m,1H),7.32(s,1H),7.56(d,1H,J=9.4Hz),7.86(s,1H),8.38(d,1H,J=9.6Hz),8.51(s,1H);HPLC?A:rt=3.84min,m/z=418.5(M+H)+.

        ???????????????????????实施例117

        以下实施例按照实施例116介绍的类似方法制备,在步骤H中用适当的羧酸替代4-异丙氧基-3-(三氟甲基)苯甲酸。

        生物学活性

        本发明化合物的S1P1/Edg1、S1P3/Edg3、S1P2/Edg5、S1P4/Edg6或S1P5/Edg8活性可以通过以下测定法进行评价:

        配体与Edg/S1P受体的结合测定法

        在反应混合物中使用具有鞘氨醇激酶活性的粗制酵母提取物,用γ33P-ATP和鞘氨醇酶促合成33P-鞘氨醇-1-磷酸,所述反应混合物包含50mM?KH2PO4、1mM巯基乙醇、1mM?Na3VO4、25mM?KF、2mM氨基脲、1mM?Na2EDTA、5mM?MgCl2、50mM鞘氨醇、0.1%TritonX-114和1mCiγ33P-ATP(NEN;比活3000Ci/mmol)。反应产物用丁醇抽提,33P-鞘氨醇-1-磷酸用HPLC纯化。

        用无酶的解离溶液收获表达EDG/S1P受体的细胞(SpecialtyMedia,Lavallette,NJ)。将细胞用冷PBS洗涤一次,然后悬浮于结合测定缓冲液中,该缓冲液包含50mM?HEPES-Na(pH?7.5)、5mMMgCl2、1mM?CaCl2和0.5%无脂肪酸的BSA。将33P-鞘氨醇-1-磷酸与0.1nM鞘氨醇-1-磷酸在结合测定缓冲液中用超声波处理;在96孔微量滴定盘中将100μl配体混合物加入到100μl细胞(1×106细胞/ml)中。在室温、温和搅拌下结合60分钟。细胞用Packard?FiltermateUniversal?Harvester收集到GF/B滤板上。将滤板干燥30分钟后,向各孔中加入40μl?Microscint?20,用Wallac?Microbeta?ScintillationCounter(闪烁计数器)测量结合量。非特异性结合定义为在0.5μM冷鞘氨醇-1-磷酸存在下保留的放射剂量。

        或者用细胞膜进行配体结合测定,细胞膜用表达Edg/S1P受体的细胞制备。细胞用无酶的解离溶液收获,然后用冷PBS洗涤一次。将细胞在冰冷的20mM?HEPES(pH?7.4)和10mM?EDTA中用Kinematica?polytron(设在5档,10秒)匀浆,从而使其破碎。将匀浆在4℃以48,000xg离心15分钟,将沉淀悬浮于20mM?HEPES(pH?7.4)和0.1mM?EDTA中。再进行一次离心,将最终沉淀悬浮于20mMHEPES(pH?7.4)、100mM?NaCl和10mM?MgCl2中。使用0.5-2μg膜蛋白,按照上述方法进行配体结合测定。

        Edg/S1P受体的激动剂和拮抗剂可以用33p-鞘氨醇-1-磷酸结合测定法进行鉴定。将化合物用DMSO、甲醇或其它溶剂稀释,然后在微量滴定盘中与包含33P-鞘氨醇-1-磷酸的探针和结合测定缓冲液混合。加入由表达Edg/S1P受体的细胞制备的膜,按照上述方法与33P-鞘氨醇-1-磷酸结合。通过测量不同化合物浓度下的结合量并用非线性回归软件(例如MRLCalc(Merck?Research?Laboratories)或PRISM(GraphPad?Software))进行数据分析,从而测定化合物对所述受体的亲和力。采用由转染各相应受体(S1P1/Edg1、S1P3/Edg3、S1P2/Edg5、S1P4/Edg6、S1P5/Edg8)的细胞制备的膜,测量化合物存在下的33P-鞘氨醇-1-磷酸结合水平,从而确定化合物对Edg/S1P受体的选择性。

        35S-GTPγS结合测定法

        用35S-GTPγS结合测定法测量S1P/Edg受体对G蛋白的功能性偶联。将按照配体与Edg/S1P受体的结合测定法制备的膜(1-10μg膜蛋白)用200μl培养基在96孔微量滴定盘中温育,培养基中含20mMHEPES(pH?7.4)、100mM?NaCl、10mM?MgCl2、5μM?GDP,0.1%无脂肪酸的BSA(Sigma,产品目录号A8806)、不同浓度的鞘氨醇-1-磷酸和125pM35S-GTPγS(NEN;比活1250Ci/mmol)。在室温、温和搅拌下结合1小时,用Packard?Filtermate?Universal?Harvester将膜收获到GF/B滤板上,从而终止结合。干燥滤板30分钟后,向各孔中加入40μl?Microscint?20,用Wallac?Microbeta?Scintillation?Counter测量结合量。

        Edg/S1P受体的激动剂和拮抗剂可以用35S-GTPγS结合测定法区别。将化合物用DMSO、甲醇或其它溶剂稀释,然后加入到微量滴定盘以提供0.01nM至10μM的最终测定浓度。加入由表达S1P/Edg受体的细胞制备的膜,按照上述方法与35S-GTPγS结合。在没有天然配体或其它已知激动剂存在下测定时,刺激35S-GTPγS结合高于内源水平的化合物被认为是激动剂,而抑制35S-GTPγS结合的内源水平的化合物被认为是反向激动剂。拮抗剂用35S-GTPγS结合测定法在次最大浓度天然配体或已知S1P/Edg受体激动剂存在下检测,此时化合物降低35S-GTPγS结合水平。测定不同浓度化合物存在下的结合量,用于测量化合物作为S1P/Edg受体的激动剂、反向激动剂或拮抗剂的功效。为了评价激动剂,高于基础水平的刺激百分数计算为化合物存在下的结合量除以没有配体下的结合量,再乘以100。用非线性回归曲线拟合程序MRLCalc(Merck?Research?Laboratories)绘制剂量反应曲线,EC50值定义为获得50%的最大刺激作用所必需的激动剂浓度。采用由转染各相应受体的细胞制备的膜,测量化合物存在下35S-GTPγS结合水平,从而确定化合物对S1P/Edg受体的选择性。

        细胞内钙流出测定法

        S1P/Edg受体对细胞内钙活动化相关性G蛋白的功能性偶联采用FLIPR(荧光成像读板仪(Fluorescence?Imaging?Plate?Reader),Molecular?Devices)测量。收获表达S1P/Edg受体的细胞,用测定缓冲液(Hanks缓冲盐溶液(Hanks?Buffered?Saline?Solution,BRL),含有20mM?HEPES、0.1%BSA和710μg/ml丙磺舒(probenicid)(Sigma))洗涤一次。在37℃、5%CO2下,将细胞在包含500nM钙敏感性染料Fluo-4(Molecular?Probes)的相同缓冲液中标记1小时。将细胞用缓冲液洗涤两次,然后以1.5×105/孔(90μl)接种到聚赖氨酸包被的96孔黑色微量滴定盘。如下准备96孔配体板:将鞘氨醇-1-磷酸或其它激动剂用200μl测定缓冲液稀释以得到2倍于最终测试浓度的浓度。将配体板和细胞板加载于FLIPR仪器,用于分析。将板平衡至37℃。将等体积配体转移到细胞板开始测定,以3分钟的时间间隔记录钙流出。细胞反应定量为面积(总和)或最大峰高(最大值)。在没有天然配体存在下评价激动剂:将化合物用适当溶剂稀释,转移到Fluo-4标记的细胞。如下评价拮抗剂:将Fluo-4标记的细胞用不同浓度的化合物预处理15分钟,然后通过加入天然配体或其它S1P/Edg受体激动剂引发钙流出。

        表达S1P/Edg受体的细胞的制备

        有许多方法可用于克隆S1P1/Edg1、S1P3/Edg3、S1P2/Edg5、S1P4/Edg6或S1P5/Edg8。这些方法包括但不限于:(1)RACE?PCR克隆技术(Frohman等,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA?85:8998-9002)??梢圆捎?′和/或3′RACE产生全长cDNA序列;(2)直接功能性表达Edg/S1P?cDNA,然后在适当的表达载体系统构建包含S1P/Edg的cDNA文库;(3)筛选在噬菌体或质粒穿梭载体中构建的包含S1P/Edg的cDNA文库,所述噬菌体或质粒穿梭载体具有标记的简并寡核苷酸探针,该探针用S1P/Edg蛋白的氨基酸序列设计;(4)筛选在噬菌体或质粒穿梭载体中构建的包含S1P/Edg的cDNA文库,所述噬菌体或质粒穿梭载体具有编码S1P/Edg蛋白的部分cDNA。利用与S1P/Edg蛋白相关的其它蛋白的已知氨基酸序列设计简并寡核苷酸引物,特异性PCR扩增S1P/Edg?DNA片段,从而获得所述部分cDNA;(5)筛选在噬菌体或质粒穿梭载体中构建的包含S1P/Edg的cDNA文库,所述噬菌体或质粒穿梭载体具有与哺乳动物S1P/Edg蛋白同源的部分cDNA或寡核苷酸。这种策略还包括采用用于PCR扩增S1P/Edg?cDNA的基因特异性寡核苷酸引物;或者(6)设计5′和3′基因特异性寡核苷酸,采用S1P/Edg核苷酸序列作为模板,这样可以通过已知的RACE技术产生全长cDNA,或者为了分离全长形式的S1P/Edg编码核苷酸序列,可以通过同样的已知RACE技术产生部分编码区,从而产生并分离部分编码区,这些部分编码区在许多类型的cDNA和/或基因组文库中筛选出其中一种时用作探针。

        对本领域技术人员显而易见的是,其它类型的文库以及用其它细胞类型或物种类型构建的文库可用于分离S1P/Edg编码DNA或S1P/Edg同源物。其它类型的文库包括但不限于用其它细胞获得的cDNA文库。

        对本领域技术人员显而易见的是,合适的cDNA文库可以用具有S1P/Edg活性的细胞或细胞系制备。对于选择用于制备cDNA文库以分离S1P/Edg编码cDNA的细胞或细胞系,可以首先利用任何已知的相关测定法测量细胞相关性S1P/Edg活性。

        制备cDNA文库可以通过本领域公知的标准技术完成。众所周知的cDNA文库构建技术可以参见例如Sambrook等,1989,MolecularCloning:A?Laboratory?Manual;Cold?Spring?Harbor?Laboratory,ColdSpring?Harbor,New?York?;ゲ笵NA文库还可以从许多商业来源获得,包括但不限于Clontech?Laboratories,Inc.和Stratagene。

        包含S1P/Edg样蛋白编码DNA的表达载体可以用于在重组宿主细胞中表达S1P/Edg。这样的重组宿主细胞可以在合适条件下进行培养,以产生S1P/Edg或生物学等价形式。表达载体可以包括但不限于克隆载体、修饰克隆载体,尤其是设计的质?;虿《?。市售的哺乳动物表达载体可能适合重组S1P/Edg表达。

        重组宿主细胞可以是原核细胞或真核细胞,包括但不限于细菌(例如大肠杆菌(E.coli))、真菌细胞(例如酵母)、哺乳动物细胞(包括但不限于源自牛、猪、猴子和啮齿动物的细胞系)以及昆虫细胞(包括但不限于源自果蝇和蚕的细胞系)。

        各种S1P/Edg受体的核苷酸序列是本领域已知的。参见例如下列文献:

        S1P1/Edg1人

        Hla,T.和T.Maciag,1990,An?abundant?transcript?induced?indifferentiating?human?endothelial?cell?encodes?a?polypeptide?withstructural?similarities?to?G-protein?coupled?receptors(分化中的人内皮细胞中诱导的高丰度转录物编码具有G蛋白偶联受体结构相似性的多肽).J.Biol?Chem.265:9308-9313,其通过引用全部结合到本文中。

        WO?91/15583,1991年10月17日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        WO?99/46277,1999年9月16日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        S1P1/Edg1小鼠

        WO?0059529,2000年10月12日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        美国专利第6,323,333号,2001年11月27日授权,其通过引用全部结合到本文中。

        S1P1/Edg1大鼠

        Lado,D.C.,C.S.Browe,A.A.Gaskin,J.M.Borden和A.J.MacLennan,1994,Cloning?of?the?rat?edg-1?immediate-early?gene:expression?pattern?suggests?diverse?functions(大鼠edg-1立即早期基因的克?。罕泶锿际奖砻鞫嘌怨δ?.Gene?149:331-336,其通过引用全部结合到本文中。

        美国专利第5,585,476号,1996年12月17日授权,其通过引用全部结合到本文中。

        美国专利第5,856,443号,1999年1月5日授权,其通过引用全部结合到本文中。

        S1P3/Edg3人

        An,S.,T.Bleu,W.Huang,O.G.Hallmark,S.R.Coughlin,E.J.Goetzl,1997,Identification?of?cDNAs?encoding?two?G?protein-coupledreceptors?for?lysosphingolipids(编码两种针对溶血鞘脂的G蛋白偶联受体的cDNA的鉴定)FEBS?Lett.417:279-282,其通过引用全部结合到本文中。

        WO?99/60019,1999年11月25日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        美国专利第6,130,067号,2000年10月10日授权,其通过引用全部结合到本文中。

        S1P3/Edg3小鼠

        WO?01/11022,2001年2月15日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        S1P3/Edg3大鼠

        WO?01/27137,2001年4月19日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        S1P2/Edg5人

        An,S.,Y.Zheng,T.Bleu?2000?Sphingosine?1-Phosphate-inducedcell?proliferation,survival,and?related?signaling?events?mediated?by?GProtein-coupled?receptors?Edg3?and?Edg5(鞘氨醇1-磷酸诱导的细胞增殖、存活及由G蛋白偶联受体Edg3和Edg5介导的相应信号转导事件).J.Biol.Chem?275:288-296,其通过引用全部结合到本文中。

        WO?99/35259,1999年7月15日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        WO?99/54351,1999年10月28日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        WO?00/56135,2000年9月28日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        S1P2/Edg5小鼠

        WO?00/60056,2000年10月12日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        S1P2/Edg5大鼠

        Okazaki,H.,N.Ishizaka,T.Sakurai,K.Kurokawa,K.Goto,M.Kumada,Y.Takuwa,1993,Molecular?cloning?of?a?novel?putative?Gprotein-coupled?receptors?expressed?in?the?cardiovascular?system(心血管系统内表达的新型推定G蛋白偶联受体的分子克隆).Biochem.Biophys.Res.Comm.190:1104-1109,其通过引用全部结合到本文中。

        MacLennan,A.J.,C.S.Browe,A.A.Gaskin,D.C.Lado,G.Shaw,1994,Cloning?and?characterization?of?a?putative?G-protein?coupledreceptor?potentially?involved?in?development(潜在参与发育的推定G蛋白偶联受体的克隆和表征).Mol.Cell.Neurosci.5:201-209,其通过引用全部结合到本文中。

        美国专利第5,585,476号,1996年12月17日授权,其通过引用全部结合到本文中。

        美国专利第5,856,443号,1999年1月5日授权,其通过引用全部结合到本文中。

        S1P4/Edg6人

        Graler,M.H.,G.Bernhardt,M.Lipp?1998?EDG6,a?novel?G-protein-coupled?receptors?related?to?receptors?for?bioactivelysophospholipids,is?specifically?expressed?in?lymphoid?tissue(新的生物活性溶血磷脂受体相关性G蛋白偶联受体在淋巴组织中特异性表达).Genomics?53:164-169,其通过引用全部结合到本文中。

        WO?98/48016,1998年10月29日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        美国专利第5,912,144号,1999年6月15日授权,其通过引用全部结合到本文中。

        WO?98/50549,1998年11月12日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        美国专利第6,060,272号,2000年5月9日授权,其通过引用全部结合到本文中。

        WO?99/35106,1999年7月15日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        WO?00/15784,2000年3月23日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        WO?00/14233,2000年3月16日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        S1P4/Edg6小鼠

        WO?00/15784,2000年3月23日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        S1P5/Edg8人

        Im,D.-S.,J.Clemens,T.L.Macdonald,K.R.Lynch?2001,Characterization?of?the?human?and?mouse?sphingosine?1-phosphatereceptor,S1P5(Edg-8):Structure-Activity?relationship?of?sphingosine1-phosphate?receptors(人和小鼠鞘氨醇1-磷酸受体S1P5(Edg-8)的表征:鞘氨醇1-磷酸受体的结构-活性关系).Biochemistry?40:14053-14060,其通过引用全部结合到本文中。

        WO?00/11166,2000年3月2日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        WO?00/31258,2000年6月2日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        WO?01/04139,2001年1月18日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        EP?1?090?925,2001年4月11日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        S1P5/Edg8大鼠

        Im,D.-S.,C.E.Heise,N.Ancellin,B.F.O′Dowd,G.-J.Shei,R.P.Heavens,M.R.Rigby,T.Hla,S.Mandala,G.McAllister,S.R.George,K.R.Lynch?2000,Characterization?of?a?novel?sphingosine?1-phosphate?receptor,Edg-8(新的鞘氨醇1-磷酸受体Edg-8的表征).J.Biol.Chem.275:14281-14286,其通过引用全部结合到本文中。

        WO?01/05829,2001年1月25日公布,其通过引用全部结合到本文中。

        测量心血管作用

        本发明化合物对心血管参数的影响可以通过以下方法进行评价:

        将成年雄性大鼠(体重约350g)的股动脉和股静脉插上导管,分别用于测量动脉压和静脉内给予化合物。将大鼠用戊巴比妥(Nembutal)(55mg/kg,ip)麻醉。用Gould?Po-Ne-Mah数据获取系统记录血压和心率。心率从动脉脉搏波获得。在适应期后,采集基础读数(约20分钟),求出数据平均值。静脉内(推注约5秒或者滴注15分钟)给予化合物,在给予化合物后,每隔1分钟记录数据,记录60分钟。数据计算为心率峰值变化或者平均动脉压,或者计算为心率变化或血压变化对时间曲线下的面积。数据表达为平均值±SEM。用单尾Student配对t检验与基础值进行统计学对比,在p<0.05具有显著性。

        以下文献介绍了S1P对大鼠心血管系统的影响:Sugiyama,A.,N.N.Aye,Y.Yatomi,Y.Ozaki,K.Hashimoto,2000,Effects?ofSphingosine-1-Phosphate,a?naturally?occurring?biologically?activelysophospholipid,on?the?rat?cardiovascular?system(天然存在的生物活性溶血磷脂鞘氨醇1-磷酸对大鼠心血管系统的影响).Jpn.J.Pharmacol.82:338-342,其通过引用全部结合到本文中。

        测量小鼠急性毒性

        将一只小鼠静脉内给予(尾静脉)0.1ml溶于无毒溶媒的受试化合物,观察毒性症状。严重症状可能包括死亡、痉挛、瘫痪或无意识。也记录较轻的症状,可能包括共济失调、呼吸困难、发怒或相比正常时活动减少。在记录症状后,将以上给药溶液用相同的溶媒稀释。将稀释后的剂量以相同的方式给予第二只小鼠,同样地观察症状。重复以上过程,直到出现不产生症状的剂量为止。该剂量被认为是估计无作用剂量。将此剂量给予另一只小鼠,以证实不会出现症状。

        评价淋巴细胞减少

        将化合物按照测量小鼠急性毒性使用的方式给药,如下评价给药后3小时小鼠的淋巴细胞减少。在用CO2使小鼠意识丧失后,打开胸腔,通过直接心脏穿刺抽取0.5ml血液,将血液立即用EDTA稳定,用校正后的临床血液学自动分析仪进行血液学评价,用于鼠分类计数(H2000,CARESSE,Culver?City?CA)。通过比较三只测试处理的小鼠与三只溶媒处理的小鼠的血液学参数,建立淋巴细胞减少。采用改进的上述稀释方法,通过耐受性确定用于本评价的剂量。对于此目的,希望无作用,但弱作用也是可接受的,将严重毒性剂量连续稀释至仅产生弱作用。

        实施例化合物的体外活性

        本文公开实施例中的化合物具有作为免疫调节剂的用途,因为根据上述测定方法所测得的活性证实,相对于S1PR3/Edg3受体,本发明化合物是S1P1/Edg1受体的有效、选择性激动剂。具体地讲,根据上述35S-GTPγS结合测定计算的对S1P1/Edg1受体的EC50与对S1P3/Edg3受体的EC50的比率,本文公开实施例中的化合物对S1P1/Edg1受体的选择性是对S1PR3/Edg3受体的100倍以上,并且通过上述35S-GTPγS结合测定计算的结合S1P1/Edg1受体的EC50小于50nM。

        下面描述一种制备实施例110的替代方法:

        ?????????????替代方法-实施例110

        (R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满

        ????????????????-1-基)乙酸

        步骤A:3-(3-甲氧基-2-甲基苯基)-3-氧代丙酸乙酯

        将亚硫酰二氯(118ml)加入到3-甲氧基-2-甲基苯甲酸(98.8g,595mmol)中,加热至回流。2小时后,冷却反应混合物至室温,真空浓缩。使残余物与甲苯(2×300ml)共沸,将所得固体放置一边。向丙二酸单乙酯钾盐(208g,1.22mol)的乙腈(1.50L)悬浮液(冷却至5℃)中加入三乙胺(166ml,1.49mol),然后加入MgCl2(142g,1.49mol)。撤去冷却浴,在室温下搅拌混合物3.5小时。将混合物重新冷却至5℃,在10分钟内加入上述酰氯的乙腈溶液(100ml)。让混合物升至室温,搅拌15小时,真空浓缩,与甲苯(2×ml)共沸。将残余物悬浮于EtOAc(750ml)和甲苯(750ml),在冰浴中冷却,缓慢加入4N?HCl(750ml)。撤去冷却浴,将两相混合物剧烈搅拌30分钟。分离各层,有机层用饱和NaHCO3(2×1.0L)洗涤,经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩,通过硅胶快速色谱法纯化(5,10%EtOAc/庚烷),得到138g标题化合物(浅黄色液体):1H?NMR(500MHz,CDCl3)表明为酮酯和烯醇(2.5∶1)的混合物。对于酮酯:

        ????????????????????????????????????????????????????????????????????δ1.23(t,3H,J=7.2Hz),2.34(s,3H),3.85(s,3H),3.89(s,2H),4.17(q,2H,J=7.1Hz),6.97(d,1H,J=7.8Hz),7.14(d,1H,J=8.7Hz),7.22(d,1H,J=7.9Hz).

        步骤B:3-(3-甲氧基-2-甲基苯基)丙酸乙酯

        向3-(3-甲氧基-2-甲基苯基)-3-氧代丙酸乙酯(137.2g,595mmol,步骤A)的乙醇(924ml)溶液中加入10%Pd/C(13.7g),通入3atm氢气。将混合物加热至60℃20小时,冷却至室温,通过Celite_过滤。真空浓缩滤液,残余物通过硅胶快速色谱法纯化(2%EtOAc/己烷),得到110.8g标题化合物(浅黄色液体):

        ????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.25(t,3H,J=7.1Hz),2.19(s,3H),2.55(t,2H,J=8.0Hz),2.95(t,2H,J=8.0Hz),3.82(s,3H),4.14(q,2H,J=7.1Hz),6.73(d,1H,J=8.2Hz),6.78(d,1H,J=7.6Hz),7.10(d,1H,J=7.9Hz).

        步骤C:3-甲氧基-2-甲基苯基丙酸

        将3-(3-甲氧基-2-甲基苯基)丙酸乙酯(36.3g,165mmol,步骤B)的无水乙醇(200ml)和5N?NaOH(99ml)溶液加热至回流30分钟,冷却至室温。真空浓缩反应混合物,将所得固体物质溶于水(100ml),用冰浴冷却。然后滴加浓HCl(50ml)。在pH=4,另外加入300ml水以有利于搅拌。将酸化的混合物搅拌30分钟,过滤,固体用H2O(2×100ml)和Et2O(2×100ml)洗涤。3小时后,将固体用五氧化二磷真空干燥过夜,得到29.3g标题化合物(白色固体):

        ?????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ2.15(s,3H),2.50(t,2H,J=7.9Hz),2.90(t,2H,J=7.9Hz),3.78(s,3H),6.75(d,2H,J=8.0Hz),7.05(t,1H,J=8.0Hz).

        步骤D:5-甲氧基-4-甲基-茚满-1-酮

        将SOCl2(144ml)加入到3-甲氧基-2-甲基苯基丙酸(步骤C)中,将混合物加热至回流。2小时后,真空浓缩反应混合物,与二氯乙烷(2×50ml)共沸。将所得酰氯溶于二氯甲烷(250ml),在冰浴中冷却,滴加1.0M?SnCl4的二氯甲烷溶液(155ml,155mmol)。让紫色反应混合物升至室温1小时,用300ml?H2O/300g碎冰猝灭。分离各层,有机层用2N?HCl(2×150ml)、水(2×150ml)和盐水(2×150ml)洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(10,30%EtOAc/庚烷),得到琥珀色固体,将其与己烷(100ml)在0℃研磨,得到16.6g标题化合物(灰白色粉末)。己烷滤液用以上快速色谱进一步纯化,又得到1.00g灰白色固体:

        ???????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ2.18(s,3H),2.67-2.69(m,2H),2.98-3.01(m,2H),3.92(s,3H),6.89(d,1H,J=8.5Hz),7.63(d,1H,J=8.5Hz).

        步骤E:(5-甲氧基-4-甲基-2,3-二氢-1H-1-茚-1-亚基)乙酸乙酯

        用套管向活性锌粉(556mg,8.51mmol)和THF(2.5ml)的混合物中滴加5-甲氧基-4-甲基-茚满-1-酮(1.00g,5.68mmol,步骤D)和溴代乙酸乙酯(819μl,7.38mmol)的THF(5ml)溶液。通过在浸入60℃油浴1分钟引发反应。10分钟后,将反应物用2N?HCl(10ml)猝灭,用EtOAc(10ml)萃取。有机层用水(1×10ml)、盐水(1×10ml)洗涤,经硫酸镁干燥,然后过滤。真空除去溶剂,残余物通过硅胶快速色谱法纯化(2,5%EtOAc/己烷),得到1.26g产物,将其用己烷重结晶,得到1.01g标题化合物(白色固体):

        ?????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.32(t,3H,J=7.1Hz),2.15(s,3H),2.94-2.97(m,2H),3.29-3.32(m,2H),3.87(s,3H),4.20,(q,2H,J=7.1Hz),6.17(t,1H,J=2.5Hz),6.79(d,1H,J=8.8Hz),7.43(d,1H,J=8.5Hz).

        步骤F:(2E-)-(5-甲氧基-4-甲基-2,3-二氢-1H-茚-1-亚基)乙酸

        向(5-甲氧基-4-甲基-2,3-二氢-1H-1-茚-1-亚基)乙酸乙酯(8.28g,33.6mmol,步骤E)的3∶2∶1?THF∶CH3OH∶H2O(83ml)溶液中加入5.0NNaOH(14.8ml,74.0),将所得溶液加热至回流。2小时后,将反应混合物真空浓缩后溶于水(150ml),冷却至0℃。水层用浓HCl酸化(pH<2),过滤所得沉淀,用水(150ml)洗涤,用五氧化二磷真空干燥。总共分离出6.75g标题化合物(白色固体):

        ??????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ2.18(s,3H),3.22-3.29(m,2H),3.50-3.52(m,2H),3.80(s,3H),6.26(s,1H),6.82(d,1H,J=8.2Hz),7.12(d,1H,J=8.3Hz).

        步骤G:(R)-(5-甲氧基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        向(2E-)-(5-甲氧基-4-甲基-2,3-二氢-1H-茚-1-亚基)乙酸(1.0g,4.58mmol,步骤F)的甲醇(10ml)溶液中加入[(S)-(-)-2,2′-双(二苯基膦基)-1,1′-联萘]合钌(II)(36.0mg,0.0458mmol)和三乙胺(64μl,0.458mmol)。将所得混合物置于3atm氢气氛下,在室温振荡24小时。通过Celite_过滤反应混合物,真空浓缩。将残余物溶于THF(5ml)和甲醇(5ml),用TMSCHN2(6.51ml,13.0mmol)在室温下处理。1小时后,真空浓缩反应混合物,通过硅胶快速色谱法纯化(3%EtOAc/己烷),得到828mg标题化合物(无色液体):

        ????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.71-1.78(m,1H),2.15(s,3H),2.37-2.46(m,2H),2.73-2.81(m,2H),2.86-2.92(m,1H),3.53-3.59(m,1H),3.73(s,3H),3.82(s,3H),6.69(d,1H,J=8.2Hz),6.96(d,1H,J=8.2Hz).

        步骤H:(R)-(5-羟基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        将1.0M三溴化硼的二氯甲烷溶液(16.2ml,16.2mmol)加入到(R)-(5-甲氧基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(1.52g,6.49mmol,步骤F)的二氯甲烷(5ml)冰冷溶液中。撤去冷却浴,在室温下搅拌反应混合物。1小时后,将反应混合物缓慢转移到甲醇的冰冷溶液(50ml)。真空除去甲醇,残余物在EtOAc和饱和NaH2PO4之间分配。有机层用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩,通过硅胶快速色谱法纯化(5,10%EtOAc/己烷),得到1.22g标题化合物(白色固体):

        ?????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.71-1.78(m,1H),2.16(s,3H),2.35-2.44(m,2H),2.71-2.79(m,2H),2.86-2.90(m,1H),3.54(p,1H,J=7.3Hz),3.72(s,3H),4.83(s,1H),6.61(d,1H,J=8.0Hz),6.85(d,1H,J=8.0Hz).

        步骤I:(R)-(5-三氟甲基磺酰氧基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        向冷却至0℃的吡啶(440μl,5.45mmol)的二氯甲烷(5.0ml)溶液中加入三氟甲磺酸酐(840μl,4.99mmol)。将所得混合物搅拌5分钟,加入固体(R)-(5-羟基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(1.00g,1.34mmol,步骤H)。让反应混合物升至室温,搅拌1小时,用二氯甲烷稀释。有机层用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(10%EtOAc/己烷),得到1.46g标题化合物(浅黄色液体):

        ???????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.69-1.91(m,1H),2.33(s,3H),2.38-2.56(m,2H),2.69-2.79(m,1H),2.79-3.01(m,2H),3.49-3.65(m,1H),3.76(s,3H),7.09(s,2H).

        步骤J:(R)-(5-氰基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        在氩气氛下,向(R)-(5-三氟甲基磺酰氧基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(1.00g,2.84mmol,步骤I)的N-甲基吡咯烷酮(13ml)溶液中加入氰化锌(267mg,2.27mmol)、Pd2dba3(13.0mg,14.2μmol)和dppf(19.0mg,34.1μmol),将反应混合物加热至100℃。16小时后,真空浓缩反应混合物,在EtOAc和H2O之间分配。分离各层,有机层用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩滤液,残余物通过硅胶快速色谱法纯化(5,10%EtOAc/己烷),得到553mg标题化合物(白色固体):

        ?????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.76-1.80(m,1H),2.41-2.50(m,5H),2.73(dd,1H,J=5.8,15.8Hz),2.78-2.84(m,1H),2.91(ddd,1H,J=4.8,8.7,13.5Hz)3.61-3.67(m,1H),3.71,(s,3H),7.07(d,1H,J=7.8Hz),7.43(d,1H,J=7.7Hz).

        步骤K:(R)-(5-(N-羟基甲脒基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        向(R)-(5-氰基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(724mg,3.16mmol,步骤J)的甲醇(10ml)溶液中加入羟胺盐酸盐(285mg,4.11mmol)和三乙胺(660μl,474mmol),加热至回流。14小时后,冷却反应混合物至室温,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(10,30,50%EtOAc/己烷),得到318mg原料和352mg标题化合物,1H?NMR分析显示为偕胺肟和伯酰胺(2∶1)的不可分离的混合物。对于偕胺肟:

        ?????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.72-1.84(m,1H),2.37(s,3H),2.43-2.51(m,2H),2.76-2.87(m,2H),2.90-2.96(m,1H),3.64(p,1H,J=7.2Hz),3.76(s,3H),4.85,(br,s,2H),7.05(d,1H,J=7.5Hz),7.31(d,1H,J=8.0Hz).

        步骤L:(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        向5-氯-6-异丙氧基烟酸(289mg,1.34mmol)的乙腈(5.0ml)溶液中加入EDC·HCl(257mg,1.34mmol)。将所得溶液在室温下搅拌30分钟,加入(R)-(5-(N-羟基甲脒基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(352mg,步骤K)。1小时后,真空浓缩反应混合物。将残余物溶于EtOAc中,用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩后溶于THF(1.5ml)。加入1.0M?TBAF的THF溶液(1.34ml),将所得黄色溶液在室温下搅拌1.5小时。将反应混合物真空浓缩后溶于EtOAc中,用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩,通过硅胶快速色谱法纯化(10%EtOAc/己烷),得到277mg标题化合物(白色固体)。此产物用己烷重结晶,得到176mg产物,>99%ee:

        ?????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.44(d,6H,J=6.2Hz),1.78-1.85(m,1H),2.43-2.46(m,1H),2.49(dd,1H,J=9.3,15.6Hz),2.56(s,3H),2.81(dd,1H,J=5.5,15.5Hz),2.86-2.93(m,1H),3.73(s,3H),5.49,(七重峰,1H,J=6.2Hz),7.14(d,1H,J=7.8Hz),7.85(d,1H,J=7.8Hz),8.38(d,1H,J=2.3Hz),8.85(d,1H,J=2.3Hz).

        步骤M:(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸

        向(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(176mg,0.398mmol,步骤L)的THF(3ml)和水(1ml)溶液中加入氢氧化锂一水合物(167mg,3.98mmol)。将反应混合物加热至50℃3小时,冷却至室温,在EtOAc和5%柠檬酸之间分配。有机层用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(2%CH3OH/CH2Cl2/0.2%HCO2H),得到154mg标题化合物(白色固体):

        ????????1H?NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.37(d,6H,J=6.2Hz),1.69-1.73(m,1H),2.31-2.38(m,2H),2.49(s,3H),2.72(dd,1H,J=5.6,15.6Hz),2.81-2.85(m,1H),2.92-2.96(m,1H),3.50-3.52(m,1H),5.43(七重峰,1H,J=6.1Hz),7.30(d,1H,J=8.0Hz),7.77(d,1H,J=7.8Hz),8.48(s,1H),8.89(s,1H);HPLC?A:rt=4.32min,m/z=428.2(M+H)+.

        本发明的一个实施方案包括下式A的化合物或其药物可接受的盐:

        其中:

        R1、R2、R3和R4各自独立选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和C1-5烷氧基,

        其中所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和C1-5烷氧基各自任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH、C1-8烷氧基和-CO2H,

        R1、R2、R3和R4中任意两个基团可以与它们所连接的原子一起构成3-8个原子的饱和单环,任选包含1-2个氧原子;

        R5选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C1-4烷氧基,

        其中所述C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C1-4烷氧基各自任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-8烷氧基;

        R6选自苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基和噻吩基,所述各基团任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、-NR7R8、-NO2、苯基、噻吩基、C1-4烷基、C3-6环烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、C3-6环烷氧基、C1-4烷硫基和C2-4酰氧基,

        其中所述苯基、C1-4烷基、C3-6环烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、C3-6环烷氧基、C1-4烷硫基和C1-4酰氧基各自任选被1个至最大可取代位置数目的独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-8烷氧基,

        R6可以在两个相邻原子上被取代以构成9-12个原子的部分芳族的稠合双环,任选包含1-2个氧和/或硫原子并且任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH和C1-4烷基;

        R7和R8独立选自-H、C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基,其中所述C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基各自任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-5烷氧基,

        R7和R8可以与它们所连接的氮原子一起构成3-8个原子的饱和单环,任选包含1-2个氧原子,所述环任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-5烷氧基;

        U、V和W独立选自-C(R9)-和-N-;

        各个R9独立选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C1-4烷氧基,

        其中所述C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C1-4烷氧基各自任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-8烷氧基;

        对于U或V,R9和R1或者R9和R2可以与它们所连接的原子一起构成4-8元环,任选包含1-2个氧、硫或N(R10)原子,由此构成8-12个原子的部分芳族的稠合双环系,所述双环包含R9连接的6元芳族环;

        X、Y和Z独立选自-C(R11)=、-O-、-N=、-N(R12)-和-S-,这样所得环与Q和T一起构成芳族杂环;

        Q和T独立选自或前提条件是Q和T不同时为

        R10、R11和R12各自独立选自-H、C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基,其中所述C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基各自任选被1-3个独立选自以下的取代基取代:-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-5烷氧基;

        J选自-CO2H、-PO3H2、-PO2H2、-SO3H、-CONHSO2R13、-PO(R13)OH、

        R13选自C1-C4烷基、苯基、-CH2OH和CH(OH)-苯基;

        各个R14独立选自-H和-CH3。

        本发明的另一个实施方案包括下式If的化合物或其药物可接受的盐:

        其中:

        R1和R2为-H,或者R1和R2可以与它们所连接的原子一起构成环丙基;

        U和V为-C(R9)-;

        各个R9为-H,或者

        对于U或V,R9和R1或者R9和R2可以与它们所连接的原子一起构成5元环,由此构成9个原子的部分芳族的稠合双环系,所述双环包含R9连接的苯环;

        Ra选自C1-4烷氧基和C3-6环烷氧基,所述C1-4烷氧基和C3-6环烷氧基任选被1个至最大可取代位置数目的氟取代;

        Rb选自C1-4烷基和C2-4烯基。

        本发明的另一个实施方案包括下式Ig的化合物或其药物可接受的盐:

        其中:

        A选自-N-或-CH-;

        选自下列基团:

        R1和R2为-H,或者R1和R2可以与它们所连接的原子一起构成环丙基;

        U和V为-C(R9)-;

        各个R9为-H,或者

        对于U或V,R9和R1或者R9和R2可以与它们所连接的原子一起构成5元环,由此构成9个原子的部分芳族的稠合双环系,所述双环包含R9连接的苯环;

        Ra选自噻吩基、NR7R8、C1-4烷基、C3-6环烷基、C1-4烷氧基和C3-6环烷氧基,其中所述C1-4烷基、C3-6环烷基、C1-4烷氧基和C3-6环烷氧基各自任选被1个至最大可取代位置数目的氟取代;

        R7和R8独立选自-H和C1-6烷基,任选被1-3个氟取代,

        R7和R8可以与它们所连接的氮原子一起构成3-8个原子的饱和单环,所述环任选被1-3个氟取代。

        本发明的另一个实施方案包括下式Ih的化合物或其药物可接受的盐:

        其中:

        A选自-N-或-CH-;

        选自下列基团:

        R1和R2为-H,或者R1和R2可以与它们所连接的原子一起构成环丙基;

        R5为-H或-CH3;

        U和V为-C(R9)-;

        各个R9为-H,或者

        对于U或V,R9和R1或者R9和R2可以与它们所连接的原子一起构成5元环,由此构成9个原子的部分芳族的稠合双环系,所述双环包含R9连接的苯环;

        Ra选自-F、NR7R8、C1-4烷基、C3-6环烷基、C1-4烷氧基和C3-6环烷氧基,其中所述C1-4烷基、C3-6环烷基、C1-4烷氧基和C3-6环烷氧基各自任选被1个至最大可取代位置数目的氟取代;

        R7和R8独立选自-H和C1-6烷基,任选被1-3个氟取代,

        R7和R8可以与它们所连接的氮原子一起构成3-8个原子的饱和单环,所述环任选被1-3个氟取代;

        Rb为Cl或I;

        J选自-CO2H、-PO3H2、-PO2H2、-SO3H、-CONHSO2R13、-PO(R13)OH、

        R13选自C1-C4烷基、苯基、-CH2OH和CH(OH)-苯基;

        各个R14独立选自-H和-CH3。

        此实施方案中包括这样的式Ih或合物:其中对于U,R9和R1与它们所连接的原子一起构成5元环,由此构成9个原子的部分芳族的稠合双环系,所述双环包含R9连接的苯环;

        R5为CH3;

        Rb为Cl;

        J选自-CO2H、

        其中各个R14独立选自-H和-CH3。

        下面是本发明的另外一些实施例:

        ??????????????????????实施例118

        3-(4-(5-(3-氰基-4-(2-噻吩基)苯基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙

        ??????????????????????????酸

        步骤A:(3-氰基-4-(2-噻吩基)苯基硼酸频哪醇酯

        标题化合物用5-溴-2-碘代苯甲腈按照实施例104步骤E和F介绍的类似方法制备,在步骤E中用2-噻吩基溴化锌替代异丁基溴化锌:ESI-MS(m/z)312.3;HPLC?A:4.13min。

        步骤B:3-(4-(5-(3-氰基-4-(2-噻吩基)苯基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯

        标题化合物按照实施例104步骤G介绍的类似方法制备,用(3-氰基-4-(2-噻吩基)苯基)硼酸频哪醇酯(步骤A)替代(3-氰基-4-(2-甲基苯基)苯基)硼酸频哪醇酯:ESI-MS(m/z)488.2;HPLC?A:4.47min。

        步骤C:2-(4-(5-(3-氰基-4-(2-噻吩基)苯基-1,3,4-噻二唑-3-基)-5-甲基苯基)丙酸

        标题化合物用3-(4-(5-(3-氰基-4-(2-噻吩基)苯基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯(步骤B)按照实施例104步骤H介绍的类似方法制备。ESI-MS(m/z)432.2;HPLC?A:3.69min。

        ????????????????????实施例119

        3-(4-(5-(3-乙基-4-乙氧基苯基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        步骤A:5-溴-2-乙氧基苯乙烯

        将甲基三苯基溴化_(1.09g,3.05mmol)加入到叔丁醇钾(0.5g,2.29mmol)的THF(8ml)溶液中。所得反应混合物变为嫩黄色,搅拌40分钟,然后冷却至-78℃。将5-溴-2-乙氧基苯甲醛溶于THF(2ml),加入到搅拌了2小时的反应物中。让反应物升至室温,用乙醚稀释,通过硅藻土过滤。滤液用盐水洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。通过硅胶色谱(用15%EtOAc/己烷洗脱),得到320mg所需产物:

        ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1HNMR(500MHZ,CDCl3)δ7.58(d,J=2.5Hz,1H),7.31(dd,J=6.4,2.4Hz,1H),6.96-7.04(m,1H),6.74(d,J=8.7Hz,1H),5.77(d,1H),5.32(d,1H),4.03-4.07(m,2H),1.45(t,J=7.0Hz,3H).

        步骤B:(4-乙氧基-3-乙烯基苯基)硼酸频哪醇酯

        标题化合物按照实施例104步骤F介绍的类似方法制备,用5-溴-2-乙氧基苯乙烯(步骤A)替代2-(2-乙基丙基)-5-溴苯甲腈:ESI-MS(m/z)275.2;HPLC?A:4.17min。

        步骤C:3-(4-(5-(4-乙氧基-3-乙烯基苯基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯

        标题化合物按照实施例104步骤G介绍的类似方法制备,用(4-乙氧基-3-乙烯基苯基)硼酸频哪醇酯(步骤B)替代(3-氰基-4-(2-甲基苯基)苯基)硼酸频哪醇酯:ESI-MS(m/z)451.3;HPLC?A:4.63min。

        步骤D:3-(4-(5-(3-乙基-4-乙氧基苯基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        将3-(4-(5-(4-乙氧基-3-乙烯基苯基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯(0.01g,0.025mmol)的甲醇(1.5ml)和乙酸乙酯(1.5ml)溶液用氮气脱气。向反应混合物中加入10%钯/碳(0.01g),在氢气氛下搅拌30分钟。将反应物通过一次性玻璃料滤片过滤,真空浓缩。将所得油状物溶于20%三氟乙酸的二氯甲烷溶液(4ml),在室温下搅拌2小时,然后真空浓缩反应物。通过硅胶色谱(用2%甲醇/二氯甲烷洗脱),得到4.5mg标题化合物:

        ??????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ7.86(s,1H),7.83(d,J=8.5Hz,1H),7.69(d,J=7.8Hz,1H),7.23(s,1H),7.19(d,J=7.5Hz,1H),6.93(d,J=8.2Hz,1H),4.20-4.30(m,2H),3.00-3.08(m,2H),2.70-2.79(m,4H),2.65(s,3H),1.48-1.52(m,3H),1.23-1.32(m,3H),ESI-MS(m/z)453.3;HPLC?A:4.68min.

        ?????????????????????????实施例120

        3-(4-(5-(4-乙氧基-3-乙烯基苯基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸

        标题化合物用3-(4-(5-(4-乙氧基-3-乙烯基苯基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯(实施例119步骤C)按照实施例104步骤H介绍的类似方法制备:

        ??????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ8.15(s,1H),7.90(d,J=7.8Hz,1H),7.69(d,J=7.8Hz,1H),7.24(s,1H),7.19(d,J=7.3Hz,1H),7.18-7.40(m,1H),6.96-7.04(m,1H),5.92(d,1H),5.39(d,1H),4.15-4.22(m,2H),3.00-3.08(m,2H),2.72-2.81(m,2H),2.65(s,3H),1.50-1.58(m,3H).

        ??????????????????????????实施例121

        3-(4-(5-(3-氰基-4-(2-氟-1-氟甲基-乙氧基)苯基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-3-

        ?????????????????????????乙基苯基)丙酸

        步骤A:3-(4-(2-溴-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙烯酸叔丁酯

        标题化合物按照实施例104步骤D介绍的方法制备,用3-(4-(2-氨基-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙烯酸叔丁酯(实施例104步骤B)替代3-(4-(2-氨基-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯。ESI-MS(m/z)383.0;HPLC?A:4.10min。

        步骤B:3-氰基-4-氟苯基硼酸

        在-78℃,将硼酸三甲酯(1.37ml,12mmol)加入到5-溴-2-氟苯甲腈(2.0g,10mmol)的甲苯(16ml)和THF(4ml)溶液中。1小时内缓慢加入正丁基锂(2.5M的己烷溶液;4.8ml),将溶液搅拌30分钟,然后让其升至室温1小时。将反应物冷却至0℃,用20ml?1N?HCl猝灭。产物用乙酸乙酯(2×200ml)萃取,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。通过硅胶色谱(用5%甲醇/二氯甲烷洗脱),得到0.33g所需产物。

        步骤C:3-(4-(3-(3-氰基-4-氟苯基)-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙烯酸叔丁酯

        将3-(4-(2-溴-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙烯酸叔丁酯(0.15g,0.39mmol,步骤A)、3-氰基-4-氟苯基硼酸(0.097g,0.59mmol,步骤B)和碳酸钠(0.21g,1.95mmol)溶于DMF(6ml)和水(0.2ml)。将反应混合物用氩气罐脱气5分钟,然后加入四(三苯基膦)合钯(0.1g)。将反应物在80℃加热3小时。反应物用水稀释,用乙酸乙酯(2×100ml)萃取。合并的有机物经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。用硅胶色谱法纯化(用10%乙酸乙酯/己烷洗脱),得到0.05g产物:ESI-MS(m/z)422.2;HPLC?A:4.21min。

        步骤D:3-(4-(3-(3-氰基-4-氟苯基)-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)环丙烷甲酸叔丁酯

        标题化合物按照实施例78步骤B介绍的类似方法制备,用3-(4-(3-(3-氰基-4-氟苯基)-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙烯酸叔丁酯替代(2Z)-3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,2,4-_二唑-3-基)-3-甲基苯基)丙烯酸甲酯:ESI-MS(m/z)436.2;HPLC?A:4.22min。

        步骤E:3-(4-(3-(3-氰基-4-(2-氟-1-氟甲基乙氧基苯基))-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)环丙烷甲酸

        标题化合物用3-(4-(3-(3-氰基-4-氟苯基)-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)环丙烷甲酸叔丁酯(步骤D)和1,3-二氟-2-丙醇按照实施例105步骤C和实施例104步骤H介绍的类似方法制备:

        ????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ8.28(d,1H),8.24(s,1H),7.71(d,J=8.0Hz,1H),7.27(s,1H),7.14(s,1H),7.09(d,J=7.8Hz,1H),4.93-5.04(m,1H),4.84(d,J=4.8Hz,2H),4.74(d,J=4.8Hz,2H),2.66(s,3H),1.98-2.05(m,1H),1.72-1.789(m,1H),1.46-1.52(m,1H),1.26-1.30(m,1H)ESI-MS(m/z)456.1;HPLC?A:3.44min.

        ????????????????????实施例122-123

        以下实施例按照实施例121介绍的类似方法制备,在步骤E中用适当醇替代1,3-二氟-2-丙醇。

        ????????????????????实施例124

        3-(4-(5-(3-氰基-4-(2-丙氧基)苯基)-1,3-噻唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸

        步骤A:2-(4-溴-2-甲基苯基)-1,3-噻唑

        将5-溴-2-碘甲苯(0.15g,1.18mmol)和2-三丁基甲锡烷基噻唑(0.45g,1.18mmol)的THF(4ml)溶液在封闭管中用氩气罐脱气5分钟。加入氯化双(三苯基膦)合钯(II)(1.18mmol),将反应物加盖并密封,在90℃加热6小时。用硅胶色谱法纯化(用100%己烷洗脱),得到0.12g所需产物:

        ???????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ7.95(d,J=3.0Hz,1H),7.63(d,J=8.3Hz,1H),7.50(s,1H),7.44(d,J=2.8Hz,2H),2.60(s,3H).

        步骤B:(5-溴-2-(4-溴-2-甲基苯基))-1,3-噻唑

        将2-(4-溴-2-甲基苯基)-1,3-噻唑(0.12g,0.47mmol,步骤A)溶于乙酸(1ml)中。加入1ml?2%溴的乙酸溶液,将反应物在60℃加热1.5小时。反应物用二氯甲烷(100ml)稀释,用饱和碳酸氢钠(1×100ml)洗涤。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。用硅胶色谱法纯化(用15%乙酸乙酯/己烷洗脱),得到0.11g所需产物:

        ???????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ7.82(s,1H),7.57(d,J=8.3Hz,1H),7.50(s,1H),7.44(d,J=8.0Hz,1H),2.57(s,3H).

        步骤C:5-(3-氰基-4-氟苯基)-2-(4-溴-2-甲基苯基)-1,3-噻唑

        标题化合物按照实施例121步骤C介绍的类似方法制备,用5-溴-2-(4-溴-2-甲基苯基))-1,3-噻唑(步骤B)替代3-(4-(2-溴-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙烯酸叔丁酯:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1HNMR(500MHZ,CDCl3)δ8.07(s,1H),7.87(s,2H),7.68(d,J=8.0Hz,1H),7.54(s,1H),7.48(d,J=7.8Hz,1H),7.32-7.36(m,1H).2.66(s,3H).

        步骤D:5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-2-(4-溴-2-甲基苯基)-1,3-噻唑

        标题化合物按照实施例105步骤C介绍的类似方法制备,用5-(3-氰基-4-氟苯基)-2-(4-溴-2-甲基苯基)-1,3-噻唑(实施例124,步骤C)替代3-(4-(3-(3-氰基-4-氟苯基)-1,3,4-噻二唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸叔丁酯,并且用2-丙醇替代乙醇腈:

        ????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?MR(500MHZ,CDCl3)δ8.00(s,1H),7.80(d,J=1.8Hz,1H),7.75(dd,J=6.6,2.1Hz,1H),7.67(d,J=8.5Hz,1H),7.52(s,1H),7.46(d,J=8.5Hz,1H),7.06(d,J=8.7Hz,1H)?4.70-4.78(m,1H),2.65(s,3H),1.47(d,J=6.0Hz,6H).

        步骤E:3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,3-噻唑-2-基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯

        标题化合物按照实施例91步骤D介绍的类似方法制备,用5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-2-(4-溴-2-甲基苯基)-1,3-噻唑(步骤D)替代2-(3-氰基-4-异丙基噻吩基)-5-(4-溴-2-甲基苯基)-1,3,4-噻二唑:

        ???????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ8.00(s,1H),7.81(s,1H),7.76(dd,J=6.8,2.0Hz,1H),7.73(d,J=8.0Hz,1H),7.21(s,1H),7.18(d,J=8.0Hz,1H),7.06(d,J=8.7Hz,1H),4.70-4.78(m,1H),4.15-4.25(m,2H),3.02(t,J=7.7Hz,2H),2.70(t,J=7.7Hz,3H),2.66(s,3H0,1.48(d,J=6.0Hz,6H),1.28-1.38(m,3H).

        步骤F:3-(4-(5-(3-氰基-4-(2-丙氧基)苯基)-1,3-噻唑-2-基)-3-甲基苯基)丙酸

        将2mg?LiOH的1ml水和1ml?THF溶液加入到3-(4-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1,3-噻唑-2-基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯(0.003g,步骤E)中,将反应物在50℃加热2小时。反应物用0.5M?HCl(25ml)酸化,产物用乙酸乙酯(25ml)萃取。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。用硅胶色谱法纯化(用10%甲醇/二氯甲烷洗脱),得到1.8mg标题化合物:

        ????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ7.99(s,1H),7.79(d,J=2.0Hz,1H),7.75(dd,J=6.9,2.0Hz,1H),7.72(d,J=8.0Hz,1H),7.20(s,1H),7.18(d,J=8.0Hz,1H),7.05(d,J=8.7Hz,1H),4.70-4.77(m,1H),3.02(t,J=7.7Hz,2H),2.76(t,J=7.7Hz,2H),2.64(s,3H),1.47(d,J=6.0Hz,6H).

        ???????????????????????实施例125

        3-(4-(5-(3-氰基-4-(2-丙氧基)苯基)-1,3-_唑-2-基)-3-甲基苯基)丙酸

        步骤A:2-(4-溴-2-甲基苯基)-4,5-2氢-1,3-_唑

        将乙二酰氯(5ml)加入到4-溴-2-甲基苯甲酸(1.1g,4.72mmol)的二氯甲烷(20ml)和DMF(2滴)溶液中,在室温下搅拌1小时。浓缩反应混合物后干燥。将2-溴乙胺氢溴酸盐(0.88g,4.29mmol)溶于苯(20ml),加入三乙胺(3.01ml;21.45mmol)。将酰氯缓慢加入到反应混合物中,将其在90℃剧烈搅拌18小时。将反应混合物倒入50ml水中,产物用二氯甲烷(2×200ml)萃取。合并的有机物经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。用硅胶色谱法纯化(依次用10%乙酸乙酯/己烷、15%乙酸乙酯/己烷洗脱),得到0.33g所需产物:

        1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ7.71(d,J=8.3Hz,1H),7.43(s,1H),7.39(d,J=8.4Hz,1H),4.41(t,J=9.5Hz,2H),4.11(t,J=9.6Hz,2H),2.60(s,3H).

        步骤B:2-(4-溴-2-甲基苯基)-5-溴_唑

        将2-(4-溴-2-甲基苯基)-4,5-二氢-1,3-_唑(0.33g,1.38mmol,步骤A)溶于四氯化碳。依次加入AIBN(0.003g)和N-溴丁二酰亚胺(0.18g,4.14mmol),将混合物用氩气脱气5分钟,然后在85℃加热24小时。过滤反应物,用二氯甲烷(200ml)稀释,用饱和亚硫酸氢钠(2×100ml)洗涤。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。用硅胶色谱法纯化(用3%乙酸乙酯/己烷洗脱),得到60mg所需产物:

        ?????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ7.83(d,J=8.5Hz,1H),7.49(s,1H),7.45(d,J=8.2Hz,1H),7.16(s,1H),2.67(s,3H).

        步骤C:3-(4-(5-(3-氰基-4-(2-丙氧基)苯基)-1,3-_唑-2-基)-3-甲基苯基)丙酸

        标题化合物按照实施例124步骤C-F介绍的类似方法制备,在实施例124步骤C中用2-(4-溴-2-甲基苯基)-5-溴_唑(步骤B)替代5-溴-2-(4-溴-2-甲基苯基))-1,3-噻唑:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????1HNMR(500MHZ,CDCl3)δ7.99(d,J=7.8Hz,1H),7.90(s,1H),7.83(d,J=8.4Hz,1H),7.42(s,1H),7.20(s,2H),7.06(d,J=8.7Hz,1H),4.70-4.78(m,1H),2.98-3.05(m,2H),2.70-2.78(m,5H),1.46(d,J=6.0Hz,6H).

        ??????????????????????????实施例126

        3-(4-(5-(3-氰基-4-(2-丙氧基)苯基)-1,2,3,4-四唑-5-基)-3-甲基苯基)丙酸

        步骤A:3-氰基-4-氟苯甲醛对甲苯磺酰腙

        将3-氰基-4-氟苯甲醛(1.0g,6.71mmol)和对甲苯磺?;?1.37g,7.38mmol)溶于2-丙醇(25ml),在50℃加热1小时。真空浓缩反应混合物。通过硅胶色谱(用100%乙酸乙酯洗脱),得到所需产物:ESI-MS(m/z)318.1;HPLC?A:3.10min。

        步骤B:5-(3-氰基-4-氟苯基)-2-(4-溴-2-甲基苯基)-1,2,3,4-四唑

        将4-溴-2-甲基苯胺(1.25g,6.71mmol)溶于50%乙醇水溶液(15ml)、浓HCl(2ml),冷却至-10℃。将亚硝酸钠(0.46;6.71mmol)溶于水(1ml),缓慢加入到反应物中,然后在室温下搅拌1小时。在单独的烧瓶中,将3-氰基-4-氟苯甲醛对甲苯磺酰腙(1.25g,6.71mmol,步骤A)溶于吡啶(50ml),冷却至-10℃。在-10℃将重氮_盐混合物缓慢加入到对甲苯磺?;耆芤褐?,将所得混合物在低温下搅拌30分钟,然后升至室温30分钟。将反应物用二氯甲烷(200ml)稀释,用水(1×100ml)、1N?HCl和碳酸氢钠水溶液(1×100ml)洗涤。水层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。用硅胶色谱法纯化(用10%乙酸乙酯/己烷洗脱),得到0.5g所需产物:ESI-MS(m/z)359.1;HPLC?A:3.13min。

        步骤C:3-(4-(5-(3-氰基-4-(2-丙氧基)苯基)-1,2,3,4-四唑-2-基)-3-甲基苯基)丙酸

        标题化合物按照实施例124步骤C-F介绍的类似方法制备,在实施例124步骤C中用5-(3-氰基-4-氟苯基)-2-(4-溴-2-甲基苯基)-1,2,3,4-四唑(步骤B)替代5-溴-2-(4-溴-2-甲基苯基))-1,3-噻唑:

        ?????????????????????????????????1H?NMR(500MHZ,CDCl3)δ8.44(s,1H),8.41(dd,J=7.1,1.7Hz,1H),7.61(d,J=8.0Hz,1H),7.31(s,1H),7.14(d,J=9.0Hz,1H),4.78-4.82(m,1H),3.08(t,J=7.6Hz,2H),2.79(t,J=7.6Hz,2H),2.43(s,3H),1.49(d,J=6.0Hz,6H)

        ???????????????????????实施例127

        3-(4-(5-(3-氰基-4-(2-丙氧基)苯基)噻吩-2-基)-3-甲基苯基)丙酸

        步骤A:2-(4-溴-2-甲基苯基)噻吩

        在氩气氛下,将4-溴-2-甲基碘代苯(1.0mmol)与2-噻吩基溴化锌的THF溶液(2.0mmol)在烘箱干燥的试管中混合。将所得溶液在室温用稳定的氩气流脱气10分钟。向此混合物中加入固体(Ph3P)4Pd(0.1mmol),将混合物用氩气脱气2分钟,然后在室温下搅拌8小时。将反应混合物与1M?HCl(100ml)和乙酸乙酯(200ml)混合。分离出有机层,依次用1M盐酸(50ml)和盐水(50ml)洗涤,经硫酸钠干燥。通过硅胶快速色谱(用己烷作为洗脱剂)分离出所需产物:

        ???????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)7.45(d,J=1.0,1H),7.39(d,J=5.6,1H),7.37(dd,J=1.0,5.0,1H),7.28(d,J=5.0,1H),7.13(m,1H),7.08(d,J=5.6,1H);HPLC?A?4.09min;ESI-MS(m/z)=252,254.

        步骤B:5-溴-2-(4-溴-2-甲基苯基)噻吩

        在室温、搅拌下,用注射器向2-(4-溴-2-甲基苯基)噻吩(5.0mmol,步骤A)、乙酸钠(10mmol)和乙酸(25ml)的均匀溶液在20-30分钟内滴加溴(5.0mmol),将所得混合物搅拌1小时。将反应混合物与1M氢氧化钠(250ml)和乙酸乙酯(250ml)混合。分离出有机层,依次用1M氢氧化钠(100ml)和盐水(100ml)洗涤,经硫酸钠干燥。通过硅胶色谱(用己烷作为洗脱剂),得到标题化合物:

        ??????????????????????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)7.46(d,J=0.6,1H),7.38(dd,J=3.9,0.6,1H),7.24(d,J=3.9,1H),7.09(d,J=2.9,1H),6.83(d,J=2.9,1H),2.43(s,3H);HPLC?A?4.41min,ESI-MS(m/z)=334.

        步骤C:5-(3-氰基-4-氟苯基)-2-(4-溴-2-甲基苯基)噻吩

        标题化合物按照实施例127步骤A介绍的类似方法制备,用5-溴-2-(4-溴-2-甲基苯基)噻吩(步骤B)替代4-溴-2-甲基碘代苯,并且用3-氰基-4-氟苯基溴化锌替代2-噻吩基溴化锌:

        ?1H?NMR(CDCl3)7.85(m,2H),7.47(d,J=2.0,1H),7.40(dd,J=2.0,9.0,1H),7.29(m,3H),7.07(d,J=6.5,1H),2.47(s,3H).HPLC?A?4.20min.

        步骤D:5-(3-氰基-4-(2-异丙氧基)苯基)-2-(4-溴-2-甲基苯基)噻吩

        将5-(3-氰基-4-氟苯基)-2-(4-溴-2-甲基苯基)噻吩(0.2mmol,步骤C)与2-丙醇(0.1ml)、四氢呋喃(2ml)和氢化钠(50mg)在烘箱干燥的容器中混合。将反应容器用特氟隆压力盖封闭,封闭加热反应混合物2小时。将所得混合物与50ml乙酸乙酯混合,用50ml水洗涤,经硫酸钠干燥,浓缩。通过硅胶色谱获得标题化合物:

        ????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)7.80(d,J=2.0,1H),7.75(dd,J=2.0,9.0,1H),7.47(d,J=1.0,1H),7.37(dd,J=1.0,8.5,1H),7.31(d,J=8.0,1H),7.22(d,J=6.0,1H),7.04(d,J=6.0,1H),7.02(d,J=9.0,1H),4.71(sep,J=1.0,1H),2.47(s,3H),1.46(d,J=1,6H).HPLC?A?4.54min.ESI-MS(m/z)=412,414.

        步骤E:(4-(5-(3-氰基-4-(2-丙氧基)苯基)-噻吩-2-基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯

        标题化合物按照实施例127步骤A介绍的类似方法制备,用5-(3-氰基-4-(2-异丙氧基)苯基)-2-(4-溴-2-甲基苯基)噻吩(步骤D)替代4-溴-2-甲基碘代苯,并且用2-乙氧基羰基-1-乙基溴化锌替代2-噻吩基溴化锌:HPLC?A?4.33min;ESI-MS(m/z)=434。

        步骤F:(4-(5-(3-氰基-4-(2-丙氧基)苯基)-噻吩-2-基)-3-甲基苯基)丙酸

        将(4-(5-(3-氰基-4-(2-丙氧基)苯基)-噻吩-2-基)-3-甲基苯基)丙酸乙酯(步骤E)与200mg氢氧化锂、3ml四氢呋喃和1ml水混合。将反应混合物加热至55℃6小时,与50ml乙酸乙酯、50ml?1M盐酸溶液混合。分离出有机层,用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,浓缩。通过硅胶快速色谱(用10%甲醇/二氯甲烷溶液作为洗脱剂)分离出标题化合物:

        ????????????1H?NMR(CDCl3)7.81(d,J=2.0,1H),7.74(dd,J=2.0,9.0,1H),7.38(d,J=8.0,1H),7.22(d,J=4.0,1H),7.16(d,J=1.0,1H),7.11(dd,J=1.0,8.0,1H),7.03(d,J=4.0,1H),7.00(d,J=8.0,1H),4.70(sep,J=1.0,1H),3.00(t,J=1.5,2H),2.75(t,J=1.5,2H),2.47(s,3H),1.42(d,J=1.0,6H);HPLC?A?3.78min;ESI-MS(m/z)=406.

        ???????????????????????????实施例128

        (R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-甲基-茚满

        ???????????????????????????-1-基)乙酸

        步骤A:2-(2-(R)-(5-氰基-4-甲基-2,3-二氢-1-H-茚满-1-基))乙醇

        在烘箱干燥的圆底烧瓶中,将(R)-(5-氰基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(600mg,2.65mmol,实施例110步骤J)在氩气氛下溶于10ml无水二氯甲烷中。在-78℃,向此溶液中滴加二异丁基氢化铝(2.65mmol)。让反应物升至室温,将反应混合物与100ml?1M盐酸溶液和100ml二氯甲烷混合。分离出有机层,用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,浓缩。将粗制油状物溶于30ml甲醇,在-78℃一次性加入固体硼氢化钠。让所得混合物在2小时内达到室温,用100ml?1M盐酸溶液和100ml二氯甲烷稀释。分离出有机层,用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,浓缩。通过硅胶色谱(洗脱剂:己烷/乙酸乙酯=2/1)分离出所需产物:

        1H?NMR(CDCl3)7.47(d,J=3.5,1H),7.13(d,J=3.5,1H),3.82(m,2H),3.38(m,1H),2.95(m,1H),2.82(m,1H),2.47(s,3H),2.42(m,1H),2.18(m,1H),1.80(m,1H),1.75(m,1H),1.39(m,1H).

        步骤B:2-(2-(R)-(5-氰基-4-甲基-2,3-二氢-1-H-茚满-1-基)-1-苄氧基乙烷

        在烘箱干燥的圆底烧瓶中,将2-(2-(R)-(5-氰基-4-甲基-2,3-二氢-1-H-茚满-1-基))乙醇(400mg,2.0mmol,步骤A)与苄基溴(3.0mmol)和10ml无水四氢呋喃在氩气氛下混合。在室温下,向此混合物中加入氢化钠,然后将反应物加热至55℃2小时。反应物用100ml?1M盐酸溶液和100ml二氯甲烷稀释。分离出有机层,用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,浓缩。通过硅胶色谱(洗脱剂:己烷/乙酸乙酯=10/1)分离出所需产物:

        1H?NMR(CDCl3)7.44(d,J=3.5,1H),7.38(m,4H),7.32(m,1H),7.11(d,J=3.5,1H),4.56(dd,J=4.0,8.5),3.61(m,2H),3.36(m,1H),2.89(m,1H),2.81(m,1H),2.47(s,3H),2.35(m,1H),2.18(m,1H),1.77(m,2H).

        步骤C:2-(2-(R)-(5-甲?;?4-甲基-2,3-二氢-1-H-茚满-1-基)-1-苄氧基乙烷

        在氩气氛下,将2-(2-(R)-(5-氰基-4-甲基-2,3-二氢-1-H-茚满-1-基)-1-苄氧基乙烷(600mg,2.06mmol,步骤B)在烘箱干燥的圆底烧瓶中溶于10ml无水二氯甲烷。在-78℃,向此溶液中滴加二异丁基氢化铝(2.30mmol)。让反应物升至室温,将反应混合物与100ml?1M盐酸溶液和100ml二氯甲烷混合。分离出有机层,用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,浓缩。通过硅胶色谱(洗脱剂:己烷/乙酸乙酯=10/1)分离出所需产物:

        ???????????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)10.25(s,1H),7.66(d,J=3.5,1H),7.38(m,4H),7.32(m,1H),7.22(d,J=3.5,1H),4.58(dd,J=4.0,8.5),3.60(m,2H),3.38(m,1H),2.95(m,1H),2.83(m,1H),2.47(s,3H),2.37(m,1H),2.22(m,1H),1.78(m,2H).

        步骤D:2-(2-(R)-(5-羧基-4-甲基-2,3-二氢-1-H-茚满-1-基)-1-苄氧基乙烷

        将2-(2-(R)-(5-甲?;?4-甲基-2,3-二氢-1-H-茚满-1-基)-1-苄氧基乙烷(500mg,步骤C)与20ml乙腈、0.5ml?30%过氧化氢水溶液、0.16g磷酸二氢钠和2ml水混合。在10℃,在30分钟内向此混合物加入0.8g次氯酸钠的7ml水溶液。将混合物在10℃搅拌1小时,然后在室温下搅拌1小时。加入固体亚硫酸氢钠(1g),将混合物搅拌5分钟。将反应物与100ml?1M盐酸溶液和100ml乙酸乙酯混合。分离出有机层,用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,浓缩,得到标题化合物:

        ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)7.90(d,J=3.5,1H),7.39(m,4H),7.30(m,1H),7.11(d,J=3.5,1H),4.58(dd,J=4.0,8.5),3.63(m,2H),3.36(m,1H),2.97(m,1H),2.86(m,1H),2.57(s,3H),2.32(m,1H),2.21(m,1H),1.76(m,2H).

        步骤E:2-(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)-1-苄氧基乙烷

        标题化合物按照实施例87步骤A和B以及实施例127步骤D介绍的类似方法制备,在实施例87步骤A中用2-(2-(R)-(5-羧基-4-甲基-2,3-二氢-1-H-茚满-1-基)-1-苄氧基乙烷(步骤D)替代3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸,并且用3-氰基-4-氟苯甲酰肼替代4-溴-2-甲基苯甲酰肼:HPLC?A?4.41分钟,ESI-MS(m/z)=510。

        步骤F:2-(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙醇

        将2-(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)-1-苄氧基乙烷(12mg,步骤G)溶于乙酸乙酯,与10mg钯/活性碳(装载量10%w/w)混合,将所得混合物在1atm氢气氛下氢化8小时。通过Celite_过滤反应混合物,浓缩,得到标题化合物:HPLCA?3.50分钟,ESI-MS(m/z)=420。

        步骤G:2-(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸

        将2-(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙醇(10mg,步骤F)与3ml乙腈、4mg?TEMPO、1.5mlpH=7缓冲液混合,加热至35℃。在35℃、5分钟内,同时加入0.1ml漂白剂、0.1ml水以及100mg次氯酸钠的0.5ml水溶液。将反应物加热至35℃4小时。加入固体亚硫酸氢钠(1g),将混合物搅拌5分钟。将反应物与100ml?1M盐酸溶液和100ml乙酸乙酯混合。分离出有机层,用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,浓缩。通过硅胶色谱(洗脱剂:10%甲醇/二氯甲烷溶液)分离出所需产物:HPLC?A?3.52分钟,ESI-MS(m/z)=434。

        ?????????????????????实施例129

        (R)-(5-(5-(5-氯-6-(2,2,2-三氟乙氧基)吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-4-

        ?????????????????甲基-茚满-1-基)乙酸

        步骤A:(R)-(5-(5-(5,6-二氯吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        向5,6-二氯烟酸(558mg,2.90mmol)的乙腈(5.0ml)和THF(5.0ml)溶液中加入EDC·HCl(557mg,2.90mmol)。将所得溶液在室温下搅拌30分钟,加入(R)-(5-(N-羟基甲脒基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(545mg,2.90mmol,实施例110步骤K)。1小时后,真空浓缩反应混合物。将残余物溶于EtOAc中,用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。将混合物过滤,真空浓缩后溶于THF(5ml)。加入1.0M?TBAF的THF溶液(2.08ml,2.08mmol),将所得黄色溶液在室温下搅拌16小时。将反应混合物真空浓缩,溶于EtOAc中,用水、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。将混合物过滤,真空浓缩,通过硅胶快速色谱法纯化(3,5%EtOAc/己烷),得到482mg标题化合物(白色固体):

        ??????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.44(d,6H,J=6.2Hz),1.78-1.85(m,1H),2.43-2.46(m,1H),2.49(dd,1H,J=9.3,15.6Hz),2.56(s,3H),2.81(dd,1H,J=5.5,15.5Hz),2.86-2.93(m,1H),3.73(s,3H),5.49,(septet,1H,J=6.2Hz),7.14(d,1H,J=7.8Hz),7.85(d,1H,J=7.8Hz),8.38(d,1H,J=2.3Hz),8.85(d,1H,J=2.3Hz).

        步骤B:(R)-(5-(5-(5-氯-6-(2,2,2-三氟乙氧基)吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸

        在封闭管中,将(R)-(5-(5-(5,6-二氯吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(30mg,0.0718mmol,步骤A)的THF(1ml)和2,2,2-三氟乙醇(150μl)溶液用60%氢化钠(10mg,0.144mmol)处理。将反应混合物密封,加热至80℃。15小时后,冷却混合物至室温,在EtOAc和5%柠檬酸之间分配。有机层用水、盐水洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。残余物通过HPLC?B纯化,得到25mg标题化合物:

        ???????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.71-1.75(m,1H),2.34-2.41(m,2H),2.49(s,3H),2.77(dd,1H,J=5.5,15.8Hz),2.82-2.85(m,1H),2.93-2.98(m,1H),3.48-3.55(m,1H),5.19-5.24(m,2H),7.25(d,1H,J=8.0Hz),7.78(d,1H,J=8.0Hz),8.67(d,1H,J=2.1Hz),8.95(d,1H,J=1.8Hz);HPLC?A:rt=4.01min,m/z=468.2(M+H)+,470.2(M+H+2)+.

        以下实施例按照实施例129介绍的类似方法制备,在步骤B中用适当醇替代2,2,2-三氟乙醇:

        ??????????????????????实施例134

        (R)-(5-(5-(5-氯-6-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-

        ???????????????基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸

        步骤A:(R)-(5-(5-(5-氯-6-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        在封闭管中,将(R)-(5-(5-(5,6-二氯吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(40mg,0.0956mmol,实施例129步骤A)的THF(1ml)溶液、3,3-二氟吡咯烷盐酸盐(21mg,0.0.144mmol)和三乙胺(40μl,0.287mmol)加热至80℃16小时。将反应混合物冷却至室温,真空浓缩,溶于乙酸乙酯。有机层用水和盐水洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(5,10%EtOAc/己烷),得到43mg标题化合物:

        ??????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.81-1.88(m,1H),2.44-2.54(m,4H),2.58(s,3H),2.83(dd,1H,J=5.5,15.6Hz),2.89-2.93(m,1H),3.01-3.06(m,1H),3.68-3.71(m,1H),3.76(s,3H),4.11(t,2H,J=7.4Hz),4.24(t,2H,J=13.0Hz),7.17(d,1H,J=8.0Hz),7.87(d,1H,J=7.8Hz),8.28(d,1H,J=2.1Hz),8.88(d,1H,J=1.8Hz).

        步骤B:(R)-(5-(5-(5-氯-6-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸

        向(R)-(5-(5-(5,6-二氯吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(43mg,0.0881mmol,步骤A)的THF(2ml)溶液中加入1.0N?NaOH(0.88mmol),将反应混合物在室温下搅拌。15小时后,将反应混合物真空浓缩,溶于乙酸乙酯。有机层用水和盐水洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。通过HPLC?B纯化,得到19mg标题化合物:

        ????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.72-1.78(m,1H),2.24-2.39(m,2H),2.50(s,3H),2.54-2.58(m,2H),2.78(dd,1H,J=5.5,15.8Hz),2.81-2.87(m,1H),2.91-3.04(m,1H),3.42-3.61(m,1H),4.03(t,2H,J=7.3Hz),4.21(t,2H,J=13.0Hz),7.27(d,1H,J=8.0Hz),7.74(d,1H,J=7.8Hz),8.31(s,1H),8.86(s,1H);HPLC?A:rt=3.97min,m/z=475.1(M+H)+,477.1(M+H+2)+.

        以下化合物按照实施例134介绍的类似方法制备,在步骤A中用适当的胺替代3,3-二氟吡咯烷:

        ??????????????????????实施例139

        (R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-1-

        ??????????????????(1H-四唑-5-基)甲基茚满

        步骤A:(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酰胺

        向(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸(934mg,2.00mmol,实施例110)的二氯甲烷(10ml)和DMF(1滴)溶液中加入乙二酰氯(570μl,1.17mmol)。45分钟后,真空浓缩反应混合物,残余物与苯(3×5ml)共沸。将所得粗制的酰氯溶于EtOAc(5ml),用浓NH4OH(7ml)处理。15分钟后,将反应混合物真空浓缩,与EtOAc(3×5ml)共沸。将残余物溶于EtOAc(15ml),用水洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩后得到871mg标题化合物:

        ??????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.45(d,6H,J=6.2Hz),1.72-1.81(m,1H),2.35-2.43(m,2H),2.55(s,3H),2.72(dd,1H,J=6.2,14.2Hz),2.88-2.95(m,1H),3.01-3.08(m,1H),3.63-3.69(m,1H),5.54(七重峰,1H,J=1H),7.25(d,1H,J=7.8Hz),7.84(d,1H,J=8.0Hz),8.46(d,1H,J=2.1Hz),8.89(d,1H,J=2.0Hz);HPLC?A:rt=3.89min,m/z=427.0(M+H)+,429.0(M+H+2)+.

        步骤B:(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙腈

        向(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酰胺(871mg,2.00mmol,步骤A)的二氯甲烷(6ml)和三乙胺(625μl,4.48mmol)冰冷溶液中加入三氟乙酸酐(320μl,2.24mmol),让反应混合物升至室温。30分钟后,加入二氯甲烷(10ml),有机层用饱和NaHCO3(1×5ml)、盐水(1×5ml)洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(10%EtOAc/己烷),得到728mg标题化合物:

        ????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.47(d,6H,J=5.7Hz),1.95-2.03(m,1H),2.52-2.66(m,5H),.77(dd,1H,J=5.8,16.8Hz),2.94-3.05(m,1H),3.07-3.13(m,1H),3.59-3.64(m,1H),5.53(七重峰,1H,J=1H),7.29(d,1H,J=7.8Hz),7.93(d,1H,J=7.8Hz),8.41(s,1H),8.89(s,1H);HPLC?A:rt=4.37min,m/z=409.0(M+H)+,411.0(M+H+2)+.

        步骤C:(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-1-(1H-四唑-5-基)甲基茚满

        将(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙腈(500mg,1.22mmol,步骤B)、三正丁基氧化锡(152mg,0.611mmol)和三甲基甲硅烷基叠氮(1.62ml,12.0mmol)的甲苯(5ml)溶液加热至回流。15小时后,冷却反应混合物至室温,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(1,3%CH3OH/CH2Cl2/1%NH4OH),得到257mg标题化合物(白色固体):

        ?????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.38(d,6H,J=6.4Hz),1.78-1.83(m,1H),2.23-2.26(m,1H),2.49(s,3H),2.81-2.88(m,1H),2.93-2.99(m,1H),3.06(dd,1H,J=8.9,14.9Hz),3.40(dd,1H,J=5.7,14.9Hz),3.66-3.69(m,1H),5.44(七重峰,1H,J=5.5,5.9Hz),7.15(d,1H,J=8.0Hz),7.77(d,1H,J=7.8Hz),8.53(d,1H,J=1.9Hz),8.91(d,1H,J=2.1Hz);HPLC?A:rt=4.00min,m/z=452.0(M+H)+454.0(M+H+2)+.

        ???????????????????????实施例140和141

        (R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-1-(1-

        ??甲基四唑-5-基)甲基茚满和(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-

        ?????1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-1-(2-甲基四唑-5-基)甲基茚满

        向(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-1-(1H-四唑-5-基)甲基茚满(50mg,0.111mmol,实施例139)的DMF(2ml)溶液中加入60%氢化钠(4.6mg,0.116mmol)。10分钟后,加入甲基碘,将反应混合物在室温下搅拌。15小时后,反应混合物在Et2O和H2O之间分配。干燥(MgSO4)有机层,过滤,真空浓缩。通过HPLCB纯化,得到两种N-甲基四唑区域异构体。(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-1-(1-甲基四唑-5-基)甲基茚满:10.5mg;

        ??????????????????????????????????????????????10.5mg;1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.48(d,6H,J=6.1Hz),1.97-2.01(m,1H),2.45-2.53(m,1H),2.60(s,3H),2.98-3.01(m,2H),3.11(dd,1H,J=8.5,15.1Hz),3.26(dd,1H,J=6.4,15.1Hz),3.86(s,3H),3.88-3.91(m,1H),5.53(七重峰,1H,J=6.0,6.2Hz),7.00(d,1H,J=7.8Hz),7.88(d,1H,J=7.8Hz),8.41(d,1H,J=1.8Hz),8.90(d,1H,J=1.6Hz);HPLC?A:rt=4.33min,m/z=466.3(M+H)+,468.3(M+H+2)+.

        (R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-1-(2-甲基四唑-5-基)甲基茚满:7.7mg;

        ????????????????????????????????????????????7.7mg;1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.47(d,6H,J=6.4Hz),1.91-1.99(m,1H),2.33-2.40(m,1H),2.58(s,3H),2.88-2.94(m,1H),3.01-3.04(m,1H),3.08(dd,1H,J=9.7,14.7Hz),3.41(dd,1H,J=5.0,14.9Hz),3.75-3.81(m,1H),4.36(s,3H),5.51(七重峰,1H,J=6.2,6.4Hz),7.19(d,1H,J=8.0Hz),7.88(d,1H,J=7.8Hz),8.40(d,1H,J=2.3Hz),8.89(d,1H,J=2.0Hz);HPLC?A:rt=4.33min,m/z=466.3(M+H)+,468.3(M+H+2)+.

        ???????????????????????????实施例142

        (R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基)-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-1-(5-

        ????????????????氧代-1,2,4-_二唑-3-基)甲基茚满

        步骤A:N-羟基(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙脒

        向(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙腈(100mg,0.245mmol,实施例139步骤B)的甲醇(3ml)溶液中加入羟胺盐酸盐(22mg,0.318mmol)和三乙胺(51μl,0.367mmol),将反应混合物加热至回流。15小时后,真空浓缩反应物,通过快速色谱法纯化(60,80%EtOAc/己烷),得到60mg原料和13mg标题化合物。将回收的原料置于上述反应条件,又获得5.6mg标题化合物(总共18.6mg):

        ???????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.46(d,6H,J=6.2Hz),1.78-1.95(m,1H),2.33-2.44(m,2H),2.56(s,3H),2.65(dd,1H,J=5.6,14.5Hz),2.86-2.92(m,1H),2.98-3.04(m,1H),3.52-3.58(m,1H),4.68(brs,2H),5.50(七重峰,1H,J=6.2Hz),7.22(d,1H,J=8.0Hz),7.87(d,1H,J=8.0Hz),8.38(d,1H,J=2.1Hz),8.87(d,1H,J=2.1Hz).

        步骤B:(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-1-(5-氧代-1,2,4-_二唑-3-基)甲基茚满

        将N-羟基(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙脒(17mg,0.0385mmol,步骤A)和1,1′-羰基二咪唑(CDI)(38.5mg,0.237mmol)的溶液在封闭管中于80℃加热。15小时后,再加入62mg?CDI,将反应混合物在100℃再加热15小时。将反应混合物真空浓缩,通过快速色谱法纯化(4%CH3OH/CH2Cl2/0.1%HCO2H),得到5.1mg标题化合物:

        ??????????????????????????????????????????????????????????????????????1HNMR(500MHz,CDCl3)δ1.47(d,6H,J=6.2Hz),1.90-1.93(m,1H),2.47-2.51(m,1H),2.60(s,3H),2.86(dd,1H,J=8.2,15.4Hz),2.97-3.00(m,1H),3.02-3.05(m,1H),3.10(dd,1H,J=5.2,15.4Hz),3.67-3.70(m,1H),5.52(七重峰,1H,J=6.0,6.4Hz),7.22(d,1H,J=7.7Hz),7.95(d,1H,J=7.8Hz),8.41(d,1H,J=2.1Hz)8.70(s,1H),8.90(d,1H,J=2.1Hz);HPLC?A:rt=4.19min,m/z=468.0(M+H)+,470.0(M+H+2)+.

        ???????????????????????????实施例143

        (R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-1-

        ????????????????(1H-3-羟基吡唑-5-基)甲基茚满

        向(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸(121mg,0.283mmol,实施例110)的THF(1ml)溶液中加入1,1′-羰基二咪唑(53mg,0.325mmol)和DMAP(1晶体),将所得溶液在室温下搅拌16小时(溶液A)。在单独的烧瓶中,将丙二酸单乙酯钾盐(53mg,0.311mmol)溶于乙腈(1ml),用三甲基甲硅烷基氯(39μl,0.311mmol)处理,在室温下搅拌(溶液B)。15小时后,将溶液B冷却至0℃,依次用1,8-二氮杂双环(5.4.0)十一碳-7-烯(92μl,0.616mmol)、溶液A处理。将反应混合物升至室温,搅拌16小时,在EtOAc和5%柠檬酸之间分配。有机层用水、饱和NaHCO3洗涤,经硫酸镁干燥,真空浓缩。硅胶快速色谱法纯化(10%EtOAc/己烷),得到23mg无色薄膜,将其溶于EtOH(1ml),用肼(4滴)处理,在室温下搅拌。15小时后,过滤混合物,用甲醇处理,过滤,得到2.0mg标题化合物:

        1H?NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.38(d,6H,J=6.2Hz),1.73-1.75(m,1H),2.20-2.22(m,1H),2.49(s,3H),2.62-2.70(m,1H),2.80-2.84(m,1H),2.90-2.95(m,2H),3.46-3.49(m,1H),5.44(七重峰,1H,J=6.2Hz),7.16(d,1H,J=6.6Hz),7.77(d,1H,J=7.5Hz),8.53(d,1H,J=2.0Hz),8.91(d,1H,J=2.1Hz);HPLC?A:rt=3.63min,m/z=466.1(M+H)+,468.1(M+H+2)+.

        ???????????????????????实施例144

        (R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-_唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)

        ??????????????????????????乙酸

        步骤A:2-异丙氧基-3-氯-5-(2-氯乙?;?吡啶

        将5-氯-6-异丙氧基烟酸(1.0g,4.64mmol)和亚硫酰二氯(5ml)的混合物加热至回流。1.5小时后,冷却反应混合物至室温,真空浓缩,与甲苯(2×10ml)共沸。然后在0℃将所得酰氯加入到重氮甲烷(~8.8mmol)的乙醚溶液中。在0℃搅拌反应混合物1.5小时,升至室温,然后再冷却至0℃。滴加4.0M?HCl的二_烷溶液(4ml),将反应物升至室温。有机层用2.0NHCl(2×10ml)、饱和碳酸氢钠(2×10ml)、盐水(1×10ml)洗涤,然后经硫酸镁干燥。过滤混合物,真空浓缩滤液,残余物通过硅胶快速色谱法纯化(5%EtOAc/己烷),得到1.15g标题化合物(白色固体):

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.41(d,6H,J=6.2Hz),4.58(s,2H),5.46(七重峰,1H,J=6.2Hz),8.18(d,1H,J=2.3Hz),8.64(d,1H,J=2.3Hz).

        步骤B:2-异丙氧基-3-氯-5-(2-氨基乙?;?吡啶盐酸盐

        向2-异丙氧基-3-氯-5-(2-氯乙?;?吡啶(275mg,1.11mmol,步骤A)的DMF(2.5ml)溶液中一次性加入叠氮化锂(60mg,1.22mmol),将所得溶液在室温下搅拌。1.5小时后,将反应混合物用EtOAc(10ml)稀释,用水(5×3ml)和盐水(1×3ml)洗涤。有机层经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到217mg白色固体α-叠氮酮。向此产物中加入10%Pd-C(40mg)、甲醇(5ml),然后加入1.0M?HCl/Et2O(1.0ml),通入1个大气压的氢气。15分钟后,通过Celite_过滤混合物,真空浓缩。将残余物与Et2O研磨,得到214mg标题化合物(白色粉末):

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.40(d,6H,J=6.2Hz),4.54(s,2H),5.51(七重峰,1H,J=6.2Hz),8.30(d,1H,J=2.1Hz),8.74(d,1H,J=2.3Hz).

        步骤C:(R)-(5-甲?;?4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        向(R)-(5-氰基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(1.00g,4.36mmol,实施例110,步骤J)、吡啶(28ml)、乙酸(15ml)、水(15ml)和NaH2PO2(3.07g,34.9mmol)的溶液中加入Rainey镍(1.0g),将混合物加热至50℃。5小时后,真空浓缩反应物,通过Celite_过滤。真空浓缩滤液,在EtOAc(150ml)和水(50ml)之间分配。有机层用5.0N?HCl(7×50ml)、饱和NaHCO3(2×50ml)、盐水(1×50ml)洗涤后干燥(MgSO4)。将混合物过滤,真空浓缩,通过快速色谱法纯化(10%EtOAc/己烷),得到882mg标题化合物(白色固体):

        1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.76-1.84(m,1H),2.41-2.51(m,2H),2.57(s,3H),2.78(dd,1H,J=5.5,15.6Hz),2.81-2.87(m?1H),2.93-2.99(m,1H),3.61-3.67(m,1H),3.72(s,3H),7.16(d,1H,J=7.8Hz),7.63(d,1H,7.8Hz),10.2(s,1H).

        步骤D:(R)-(5-羧基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        向(R)-(5-甲?;?4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(872mg,3.76mmol,步骤C)、NaH2PO4(150mg)、30%H2O2(500μl)、乙腈(10ml)和H2O(2.5ml)的冰冷溶液中滴加NaClO2(615mg)的水(4ml)溶液,在1小时内让反应混合物升至室温。再过1小时后,加入NaHSO3(1.0g),混合物在EtOAc(30ml)和2.0N?HCl(15ml)之间分配。分离各层,有机层用H2O(2×15ml)、盐水(1×15ml)洗涤,干燥(MgSO4),过滤。真空浓缩滤液,得到854mg标题化合物(白色固体):

        ????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.74-1.82(m,1H),2.40-2.50(m,2H),2.56(s,3H),2.78(dd,1H,J=5.5,15.5Hz),2.82-2.93(m,1H),2.94-2.99(m,1H),3.61-3.66(m,1H),3.73(s,3H),7.07(d,1H,J=7.8Hz),7.89(d,1H,J=8.0Hz),10.8-12.0(br,s?1H);HPLC?A:rt=2.74min,m/z=249(M+H)+.

        步骤E:(R)-(5-(N-((5-氯-6-异丙氧基)烟?;?甲基)甲酰氨基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        向(R)-(5-羧基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(103mg,0.415mmol,步骤D)的CH2Cl2(2ml)和1滴DMF溶液(冷却至0℃)中加入COCl2(1.06μl,1.25mmol)。30分钟后,将反应混合物真空浓缩,与苯(3×1ml)共沸。将所得残余物溶于CH2Cl2(2ml),冷却至0℃。加入2-异丙氧基-3-氯-5-(2-氨基乙?;?吡啶盐酸盐(116mg,0.436mmol,步骤B)和吡啶(71μl,0.872mmol),撤去冷却浴。15小时后,将反应混合物真空浓缩,残余物溶于EtOAc(10ml)。有机层用1.0N?HCl(2×3ml)、饱和NaHCO3(1×3ml)、盐水(1×3ml)洗涤后干燥(MgSO4)。将混合物过滤,真空浓缩,通过硅胶快速色谱法纯化(15,30%EtOAc/己烷),得到134mg标题化合物,为浅黄色固体:

        ????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.43(d,6H,J=6.2Hz),1.74-1.82(m,1H),2.38(s,3H),2.39-2.49(m,2H),2.76(dd,1H,J=5.5,15.5Hz),2.80-2.85(m,1H),2.89-2.95(m,1H),3.60-3.66(m,1H),3.73(s,3H),4.87(d,2H,J=4.4Hz),5.48(七重峰,1H,J=6.2Hz),6.76(t,1H,J=4.2Hz),7.05(d,1H,J=7.8Hz),7.31(d,1H,J=7.7Hz),8.21(d,1H,J=2.1Hz),8.69(d,1H,J=2.0Hz).

        步骤F:(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-_唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        向(R)-(5-(N-((5-氯-6-异丙氧基)烟?;?甲基)甲酰氨基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(32.0mg,0.0697mmol,步骤E)的甲苯(1.0ml)溶液中加入吡啶(56μl,0.139mmol)和Burgess试剂(33mg,0.697mmol),将反应混合物加热至100℃。2小时后,再加入吡啶(56μl)和Burgess试剂(33mg)。将反应混合物在80℃再加热2小时,冷却至室温。将残余物溶于EtOAc(5ml),用2.0N?HCl(2×2ml)、饱和NaHCO3(1×2ml)、盐水(1×2ml)洗涤后干燥(MgSO4)。过滤混合物,真空浓缩,通过制备型TLC纯化(5%EtOAc/己烷),得到17.0mg标题化合物(白色固体):

        ?????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)δ1.42(d,6H,J=6.2Hz),1.77-1.85(m,1H),2.43-2.52(m,2H),2.63(s,3H),2.80(dd,1H,J=5.5,15.5Hz),2.86-2.91(m,1H),2.92-3.03(m,1H),3.65-3.70(m,1H),3.74(s,3H),5.40(七重峰,1H,J=6.2Hz),7.13(d,1H,J=8.0Hz),7.39(s,1H),7.86(d,1H,J=7.8Hz),7.90(d,1H,J=2.0Hz),8.39(d,1H,J=2.3Hz);HPLC/MS?441(M+H)+,442(M+H+2)+.

        步骤G:(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-_唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸

        向(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-_唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(17.0mg,0.0386mmol,步骤F)的THF(2.0ml)溶液中加入5.0N?NaOH(50μl),将反应混合物加热至回流。2小时后,冷却反应混合物至室温,在EtOAc(3ml)和5%柠檬酸(3ml)之间分配。分离各层,有机层用水(3×1ml)、盐水(1×1ml)洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。残余物通过HPLC?B纯化,得到17.0mg标题化合物(柠檬黄固体):

        ????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.39(d,6H,J=6.1Hz),1.77-1.85(m,1H),2.40-2.47(m,2H),2.58(s,3H),2.78(dd,1H,J=5.5,15.5Hz),2.85-2.91(m,1H),2.98-3.04(m,1H),3.59-3.62(m,1H),5.41(七重峰,1H,J=6.2Hz),7.20(d,1H,J=8.0Hz),7.59(s,1H),7.79(d,1H,J=8.0Hz),8.10(d,1H,J=2.3Hz),8.45(d,1H,J=2.3Hz);HPLC?A:rt=4.02min,m/z=427(M+H)+,429(M+H+2)+,

        ??????????????????????????实施例145

        (R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)

        ?????????????????????????????乙酸

        步骤A:(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        在封闭管中,将Lawesson试剂(189mg,0.466mmol)加入到(R)-(5-(N-((5-氯-6-异丙氧基)烟?;?甲基)甲酰氨基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(214mg,0.466mmol,实施例144步骤E)的THF(3.5ml)溶液中。将反应物密封,加热至100℃。20小时后,真空浓缩反应混合物,通过硅胶快速色谱法纯化(0,2,4%丙酮/己烷),得到103mg标题化合物,为灰白色固体:

        ??????????????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)δ1.40(d,6H,J=6.2Hz),1.76-1.84(m,1H),2.40-2.49(m,5H),2.77(dd,1H,J=5.6,15.5Hz),2.82-2.88(m,1H),2.93-2.98(m,1H),3.62-3.72(m,1H),3.72(s,3H),5.37(七重峰,1H,J=6.2Hz),7.07(d,1H,J=7.8Hz),7.49(d,1H,J=8.0Hz),7.82(d,1H,J=2.0Hz),7.93(s,1H),8.25(d,1H,J=2.0Hz).

        步骤B:(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸

        标题化合物用(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(步骤A)按照实施例144步骤G介绍的类似方法制备:

        ?????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.38(d,6H,J=6.1Hz),1.78-1.86(m,1H),2.41-2.47(m,2H),2.49(s,3H),2.77(dd,1H,J=5.8,15.8Hz),2.85-2.91(m,1H),2.98-3.04(m,1H),3.58-3.64(m,1H),5.41(七重峰,1H,J=6.2Hz),7.16(d,1H,J=8.0Hz),7.49(d,1H,J=7.8Hz),7.84(s,1H),8.27(d,1H,J=2.3Hz),8.65(d,1H,J=2.3Hz);HPLC?A:rt=4.19min,m/z=443(M+H)+,445(M+H+2)+.

        ????????????????????????实施例146

        (R)-(5-(4-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)

        ???????????????????????????乙酸

        步骤A:(R)-(5-硫代甲酰氨基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯/乙酯

        在闪烁小瓶中,将(R)-(5-氰基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(1.12g,4.88mmol,实施例110步骤J)溶于二硫代磷酸二乙酯(3.0ml)和水(6滴),密封后加热至50℃。15小时后,反应混合物用EtOAc(15ml)稀释,用饱和碳酸氢钠(5×5ml)、盐水(1×5ml)洗涤,然后经硫酸镁干燥。将混合物过滤,真空浓缩滤液,残余物通过硅胶快速色谱法纯化(10,20,30%EtOAc/己烷),得到1.01g标题化合物(白色固体):1HNMR(500MHz,CDCl3)表明产物是甲酯∶乙酯混合物(4∶1)。对于甲酯:

        ????????δ1.72-1.79(m,1H),2.36(s,3H),2.37-2.40(m,1H),2.41(dd,1H,J=9.2,15.6Hz),2.73(dd,1H,J=5.5,15.6Hz)2.74-2.81(m,1H),2.88(ddd,1H,J=5.1,8.7,13.8Hz),3.55-3.61,(m,1H),3.71(s,3H),6.94(brs,1H),7.01(d,1H,J=7.8Hz),7.22(d,1H,J=7.8Hz),7.77(br,s,1H).

        步骤B:(R)-(5-(4-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        在封闭管中,将(R)-(5-硫代甲酰氨基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯/乙酯(45.0mg,0.171mmol,步骤A)的二_烷(1.5ml)溶液用2-异丙氧基-3-氯-5-(2-氯乙?;?吡啶(47.0mg,0.188mmol,实施例144步骤A)处理。将所得混合物在50℃搅拌1小时,在回流下搅拌15小时。将反应物冷却至室温,真空浓缩后通过硅胶快速色谱法纯化(2,4%EtOAc/己烷),得到54.5mg无色薄膜状标题化合物。1H?NMR(500MHz,CDCl3)(对于甲酯):

        ???????????????????????????????????????????δ1.42(d,6H,J=6.2Hz),1.77-1.84(m,1H),2.41-2.51(m,2H),2.53(s,3H),2.79(dd,1H,J=5.7,15.4Hz),2.85-2.90(m,1H),2.91-3.02(m,1H),3.63-3.70(m,1H),3.73(s,3H),5.41(七重峰,1H,J=6.2Hz),7.09(d,1H,J=8.0Hz),7.42(s,1H),7.53(d,1H,J=7.8Hz),8.20(d,1H,J=2.1Hz),8.62(d,1H,J=2.0Hz).

        步骤C:(R)-(5-(4-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸

        向(R)-(5-(4-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯(54.5mg,0.119mmol,步骤B)的THF(1.0ml)溶液中加入1.0N氢氧化钠(358μl,0.358mmol),将反应混合物加热至回流。4小时后,冷却反应混合物至室温,真空浓缩。残余物在EtOAc(5ml)和5%柠檬酸(2ml)之间分配,有机层用水(2×2ml)、盐水(1×2ml)洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。通过HPLC?B纯化,得到27.0mg标题化合物(白色固体):

        ??????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.38(d,6H,J=6.1Hz),1.78-1.86(m,1H),2.41-2.47(m,2H),2.49(s,3H),2.77(dd,1H,J=5.8,15.8Hz),2.85-2.91(m,1H),2.98-3.04(m,1H),3.58-3.64(m,1H),5.41(七重峰,1H,J=6.2Hz),7.16(d,1H,J=8.0Hz),7.49(d,1H,J=7.8Hz),7.84(s,1H),8.27(d,1H,J=2.3Hz),8.65(d,1H,J=2.1Hz).

        ???????????????????实施例147

        (R)-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸

        步骤A:(R)-(5-(噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯/乙酯

        向(R)-(5-硫代甲酰氨基-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯/乙酯(542mg,~2.00mmol,实施例146步骤A)的二甲氧基乙烷(2.0ml)溶液中加入氯乙醛(45%水溶液,8.00mmol,1.43ml)和碳酸氢钾(824mg,8.00mmol),将所得混合物在室温下搅拌。15小时后,将反应混合物过滤,真空浓缩滤液。将残余物溶于EtOAc(15ml),用水(3×5ml)、盐水(1×5ml)洗涤,经硫酸镁干燥。将混合物过滤,滤液溶于二氯甲烷(5ml),冷却至0℃。加入三乙胺(613μl,4.40mmol)后滴加三氟乙酸酐(311μl,2.20mmol)。15分钟后,有机层用NaHCO3(1×5ml)、盐水(1×5ml)洗涤,经硫酸镁干燥,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(5,7%EtOAc/己烷),得到583mg黄色薄膜状标题化合物。对于甲酯:

        ????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.76-1.83(m,1H),2.40-2.50(m,5H),2.79(dd,1H,J=5.7,15.4Hz),2.83-2.89,(m,1H),2.94-3.03(m,1H),3.62-3.68(m,1H),3.72(s,3H),7.07(d,1H,J=7.8Hz),7.35(d,1H,J=3.2Hz),7.47(d,1H,J=7.8Hz),7.89(d,1H,J=3.2Hz).

        步骤B:(R)-(5-(5-溴-噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯/乙酯

        向(R)-(5-(噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯/乙酯(379mg,~1.44mmol,步骤B)的乙腈(7.0ml)溶液中加入N-溴丁二酰亚胺(261mg,~1.44mmol),将所得溶液加热至50℃。1.5小时后,冷却反应混合物至室温,真空浓缩。将残余物溶于EtOAc(20ml),用NaHCO3(2×10ml)、盐水(1×10ml)洗涤,经硫酸镁干燥。将混合物过滤,真空浓缩后通过硅胶快速色谱法纯化(2,5%EtOAc/己烷),得到278mg黄色油状标题化合物。对于甲酯:

        ??????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.76-1.84(m,1H),2.41-2.50(m,5H),2.77(dd,1H,J=5.8,15.6Hz),2.82-2.89(m,1H),2.92-3.02(m,1H),3.65-3.71(m,1H),3.73(s,3H),7.08(d,1H,J=8.7Hz),7.40(d,1H,J=8.8Hz),7.76(s,1H).

        步骤C:(R)-(5-(5-(3-氰基-4-氟苯基)噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯/乙酯

        将(R)-(5-(5-溴-噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯/乙酯(252mg,~0.690mmol,步骤B)和3-氰基-4-氟苯基硼酸(125mg,0.757mmol)、THF(10ml)和1.0M?Na2CO3水溶液(2.5ml)(167mg,3.98mmol)的溶液用氩气脱气。加入Pd(PPh3)4(4.1mg,0.00355mmol)。将反应混合物加热至80℃。1.5小时后,冷却反应混合物至室温,在EtOAc和H2O之间分配。有机层用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(5,10,15%EtOAc/己烷),得到217mg标题化合物(黄色固体)。对于甲酯:

        ???????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.88-1.85(m,1H),2.42-2.52(m,5H),2.79(dd,1H,J=5.8,15.6Hz),2.82-2.91(m,1H),2.96-3.02(m,1H),3.63-3.69(m,1H),3.73(s,3H),7.10(d,1H,J=7.7Hz),7.28(t,1H,J=8.5Hz),7.51(d,1H,J=7.7Hz),7.79-7.83(m,2H),8.01(s,1H).

        步骤D:(R)-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸

        在封闭小瓶中,将(R)-(5-(5-(3-氰基-4-氟苯基)噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸甲酯/乙酯(步骤C)溶于THF(1.5ml)和i-PrOH(150μl)。一次性加入氢化钠(60%分散于矿物油中,11.3mg,0.283mmol),将小瓶加盖并密封,加热至回流。2小时后,冷却反应混合物至室温,在EtOAc(5ml)和5%柠檬酸(2ml)之间分配。分离各层,有机层用H2O(1×2ml)、盐水(1×2ml)洗涤,经硫酸镁干燥。将混合物过滤,真空浓缩,通过HPLC?B纯化,得到标题化合物(白色固体):

        ????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.41(d,1H,J=6.0Hz),1.78-1.85(m,1H),2.43-2.47(m,5H),2.77(dd,1H,J=5.7,15.6Hz),2.84-2.90(m,1H),2.97-3.03(m,1H),3.59-3.62(m,1H),4.78-4.82(m,1H),7.17(d,1H,J=8.0Hz),7.26(d,1H,J=8.9Hz),7.44(d,1H,J=8.7Hz),7.89(dd,1H,J=2.3,8.7Hz),7.94(d,1H,J=2.3Hz),8.10(s,1H);HPLC?B:rt=3.78min,m/z=433.2(M+H)+,434.2(M+H+2)+.

        ?????????????????实施例148-160

        以下化合物按照实施例147介绍的类似方法制备,在步骤D中用适当醇替代异丙醇。

        ?????????????????????????实施例161

        (R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-噻唑-2-基)-4-甲基-1-(1H-四唑-

        ?????????????????????5-基)甲基茚满

        步骤A:(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酰胺

        向(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酸(101mg,0.221mmol,实施例145)的二氯甲烷(2ml)和DMF(1滴)溶液中加入乙二酰氯(100μl,1.17mmol)。45分钟后,真空浓缩反应混合物,残余物与苯(3×1ml)共沸。将所得粗制的酰氯溶于THF(5ml),用浓NH4OH(1.0ml)处理。15分钟后,将反应混合物真空浓缩,与EtOAc(3×5ml)共沸。将残余物溶于EtOAc(5ml),经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到88mg标题化合物:

        ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.42(d,6H,J=6.1Hz),1.66-1.86(m,1H),2.40(dd,1H,J=8.6,14.8Hz),2.45-2.50(m,4H),2.68(dd,1H,J=5.9,14.6Hz),2.86-2.92(m,1H),2.95-3.01(m,1H),3.69-3.74(m,1H),5.36-5.41(m,3H),7.15(d,1H,J=8.0Hz),7.51(d,1H,J=8.0Hz),7.84(d,1H,J=2.3Hz),7.94(s,1H),8.27(d,1H,J=2.3Hz).

        步骤B:(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙腈

        向(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙酰胺(86mg,0.202mmol,步骤A)的二氯甲烷(1.5ml)和三乙胺(62μl,0.444mmol)的冰冷溶液中加入三氟乙酸酐(32μl,0.222mmol),让反应混合物升至室温。30分钟后,加入二氯甲烷(10ml),有机层用饱和碳酸氢钠(1×3ml)、盐水(1×3ml)洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(10,20%EtOAc/己烷),得到70mg黄色薄膜状标题化合物:

        ??????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.42(d,6H,J=6.2Hz),1.92-1.98(m,1H),2.51-2.55(m,4H),2.60(dd,1H,J=7.6,16.7Hz),2.72(dd,1H,J=6.1,16.8Hz),2.89-2.96(m,1H),3.02-3.08(m,1H),3.55-3.60(m,1H),5.39(七重峰,1H,J=6.2Hz),7.21(d,1H,J=7.8Hz),7.56(d,1H,J=7.8Hz),7.84(d,1H,J=2.1Hz),7.95(s,1H),8.26(d,1H,J=2.3Hz).

        步骤C:(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-噻唑-2-基)-4-甲基-1-(1H-四唑-5-基)甲基茚满

        将(R)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-噻唑-2-基)-4-甲基-茚满-1-基)乙腈(67mg,0.158mmol,步骤B)、三正丁基氧化锡(20mg,0.0790mmol)和三甲基甲硅烷基叠氮(210μl,1.58mmol)的甲苯(2ml)溶液加热至回流。15小时后,冷却反应混合物至室温,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(1,3%?CH3OH/CH2Cl2/1%?NH4OH),然后用热甲醇(1.25ml)重结晶,得到25.0mg标题化合物(白色固体):

        ???????????????????????????1H?NMR(500MHz,CD3OD)δ1.38(d,6H,J=6.2Hz),1.85-1.92(m,1H),2.31-2.36(m,1H),2.43(s,3H),2.86-2.92(m,1H),2.95-3.01(m,1H),3.11(dd,1H,J=8.9,14.9Hz),3.40(dd,1H,J=6.0,14.9Hz),3.69-3.74(m,1H),5.39(七重峰,1H,J=6.2Hz),7.01(d,1H,J=7.8Hz),7.45(d,1H,J=8.0Hz),8.08(d,1H,J=2.1Hz),8.10(s,1H),8.35(d,1H,J=2.1Hz);HPLC?B:rt=4.00min,m/z=467.1(M+H)+,469.0(M+H+2)+.

        ??????????????????????????实施例162

        (R/S)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚

        ????????????????????????满-2-基)乙酸

        步骤A:(R/S)5-氰基-4-甲基-茚满-2-甲酸

        向5-氰基-4-甲基-茚满-2-甲酸甲酯(121mg,0.562mmol)的甲醇(2ml)溶液中加入1.0N?NaOH(1.69ml,1.69mmol),搅拌反应混合物过夜。将反应混合物酸化,用EtOAc萃取,有机层用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到98mg标题化合物:

        ???????????????????1H?NMR(CDCl3)δ2.48(s,3H),3.26-3.48(m,5H),7.16(d,1H,J=7.7Hz),7.47(d,1H,J=7.8Hz).

        步骤B:(R/S)-(5-氰基-4-甲基-茚满-2-基)乙酸甲酯

        向(R/S)5-氰基-4-甲基-茚满-2-甲酸(98mg,0.487mmol,步骤A)的THF(1.5ml)溶液(冷却至0℃)中加入三乙胺(68μl,0.487mmol)中,然后滴加氯甲酸乙酯(46μl,0.487mmol)。30分钟后,加入重氮甲烷(~1.46mmol)的Et2O(2ml)溶液。让反应混合物升至室温,搅拌45分钟,真空浓缩。将残余物溶于EtOAc中,用饱和NaHCO3、H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩??焖偕追ù炕?,得到44mg所需α-重氮甲酮。

        ????????1H?NMR(CDCl3)δ2.49(s,3H),3.15-3.27(m,3H),3.33-3.37(m,2H),5.38(brs,1H),7.15(d,1H,J=8.0Hz),7.47(d,1H,J=7.8Hz).

        将此产物(44mg,0.194mmol)溶于甲醇(1ml)、三乙胺(140μl,0.972mmol),冷却至0℃。加入苯甲酸银(I),将反应混合物在室温下避光搅拌1小时。真空浓缩反应混合物,将残余物溶于EtOAc中,用饱和NaHCO3、H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。通过快速色谱法纯化,得到33mg标题化合物:

        ????????1H?NMR(CDCl3)δ2.46(s,3H),2.55(d,2H,J=7.6Hz),2.63(dd,1H,J=7.1,16.2Hz),2.75(dd,1H,J=7.4,16.2Hz),2.93-2.99(m,1H),3.18(dd,1H,J=8.2,15.9Hz),3.24(dd,1H,J=8.5,16.5Hz),3.74(s,3H),7.13(d,1H,J=7.8Hz),7.45(d,1H,J=7.6Hz).

        步骤C:(R/S)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-2-基)乙酸甲酯

        向(R/S)-(5-氰基-4-甲基-茚满-2-基)乙酸甲酯(33mg,0.149mmol,步骤B)的甲醇溶液中加入羟胺(13mg,0.187mmol)和三乙胺(30μl,0.216mmol),将反应混合物加热至回流。15小时后,冷却反应混合物,真空浓缩。将残余物溶于二氯甲烷(5ml),用1.0N?HCl(2.5ml)洗涤。干燥(MgSO4)有机层,过滤,真空浓缩,得到27mg原料。水层用1.0N?NaOH(2.5ml)中和,用EtOAc(5ml)萃取。EtOAc层用饱和NaHCO3(2.5ml)、盐水(2.5ml)洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩,得到3.5mg相应的偕胺肟。将回收的原料置于上述反应条件,又分别获得6.7mg偕胺肟和15mg原料。

        向5-氯-6-异丙氧基烟酸(10.0mg,0.0467mmol)的乙腈(1.0ml)溶液中加入EDC·HCl(9.0mg,0.0467mmol)。30分钟后,加入上述偕胺肟(10.2mg,0.0389mmol),将反应混合物在室温下搅拌1小时。真空浓缩反应混合物,在EtOAc(5ml)和H2O(2.5ml)之间分配。有机层用饱和NaHCO3(2.5ml)、盐水(2.5ml)洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。将所得残余物溶于THF(1.0ml),加入四丁基氟化铵(TBAF,40ml,0.0389mmol)。15小时后,将反应混合物真空浓缩,通过硅胶快速色谱法纯化(5%EtOAc/己烷),得到7.3mg标题化合物。

        步骤D:(R/S)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-2-基)乙酸

        向(R/S)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)-4-甲基-茚满-2-基)乙酸甲酯(7.3mg,0.0165mmol,步骤C)的THF(1.0ml)和水(300μl)溶液中加入氢氧化锂(7.0mg,0.0165mmol),将反应混合物加热至50℃。15小时后,冷却反应混合物至室温,真空浓缩。残余物在EtOAc和5%柠檬酸之间分配。分离各层,有机层用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。通过RP-HPLC纯化,得到2.9mg标题化合物:

        ???????????????????1H?NMR(DMSO-d6)δ1.38(d,6H,J=6.1Hz),2.43-2.45(m,2H),2.49(s,3H),3.13(m,2H),5.43(七重峰,1H,J=6.2Hz),7.22(d,1H,J=7.7Hz),7.76(d,1H,J=7.8Hz),8.52(d,1H,J=2.1Hz),8.90(d,1H,J=2.0Hz);HPLC?A:rt=4.19min,m/z=428(M+H)+,430(M+H+2)+.

        ??????????????????????实施例163

        (R/S)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)茚满-1-基)

        ???????????????????????乙酸

        步骤A:(2E)-(5-甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-1-亚基)乙酸甲酯

        将5-甲氧基-1-茚满酮(2.50g,15.4mmol)和溴代乙酸甲酯(1.84ml,20.0mmol)的THF(15ml)溶液滴加到活性锌粉(1.51g,23.1mmol)的THF(10ml)的混合物中。在加料期间,反应混合物达到回流温度,在加入完毕后再维持回流1小时。在冷却至室温后,将反应混合物倒入冰冷的2.0N?HCl中,用EtOAc萃取。有机层用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(10%EtOAc/己烷),得到2.45g标题化合物:

        ????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)δ3.04-3.07(m,2H),3.30-3.33(m,2H),3.77(s,3H),3.85(s,3H),6.19(t,1H,J=2.5Hz),6.83(dd,1H,J=2.3,8.7Hz),6.85(8,1H),7.52(d1?H?J=8.5Hz).

        步骤B:(R/S)-(5-甲氧基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        在氮气氛下,向10%Pd/C(200mg)和甲醇(10ml)的混合物中加入固体(2E)-(5-甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-1-亚基)乙酸甲酯(2.00g,9.16mmol,步骤A)。将混合物抽空,充入1个大气压的氢气。1小时后,通过Celite_垫过滤混合物,真空浓缩滤液。残余物与甲苯共沸,得到2.00g标题化合物:

        ??????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)δ1.78-1.84(m,1H),2.40-2.50(m,2H),2.79(dd,1H,J=5.7,15.3Hz),2.87-2.98(m,2H),3.57-3.60(m,1H),3.77(s,3H),3.83(s,3H),6.77(dd,1H,J=2.3,8.2Hz),6.83(d,1H,J=1.9Hz),7.12(d,1H,J=8.2Hz).

        步骤C:(R/S)-(5-羟基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        将1.0M三溴化硼的二氯甲烷(22.7ml,22.7mmol)溶液加入到(R/S)-(5-甲氧基-茚满-1-基)乙酸甲酯(2.00g,9.08mmol,步骤B)的二氯甲烷(15ml)冰冷溶液。撤去冷却浴,在室温下搅拌反应混合物。1小时后,将反应混合物缓慢转移到甲醇冰冷溶液(50ml)。真空除去甲醇,残余物在EtOAc和饱和NaH2PO4之间分配。有机层用水、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。将混合物过滤,真空浓缩,通过硅胶快速色谱法纯化(15,20%EtOAc/己烷),得到1.74g标题化合物:

        ????????1H?NMR(CDCl3)δ1.72-1.79(m,1H),2.35-2.42(m,1H),2.46(dd,1H,J=8.5,15.3Hz),2.76(dd,1H,J=5.9,15.3Hz),2.80-2.92(m,2H),3.50-3.55(m,1H),3.75(s,3H),5.63-5.86(brs,1H),6.67(dd,1H,J=2.4,8.1Hz),6.74(d,1H,J=2.0Hz),7.01(d,1H,J=8.3Hz).

        步骤D:(R/S)-(5-三氟甲基磺酰氧基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        向吡啶(820μl,10.1mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液(冷却至0℃)中加入三氟甲磺酸酐(1.56ml,9.28mmol)。将所得混合物搅拌5分钟,加入(R/S)-(5-羟基-茚满-1-基)乙酸甲酯(1.74g,8.44mmol,步骤C)。让反应混合物升至室温,搅拌1小时,用二氯甲烷稀释。有机层用水、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。将混合物过滤,真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(10%EtOAc/己烷),得到2.63g标题化合物(浅黄色液体):

        ????????1H?NMR(CDCl3)δ1.83-1.88(m,1H),2.47-2.55(m,2H),2.78(dd,1H,J=6.0,15.8Hz),2.92-3.01(m,2H),3.62-3.65(m,1H),3.76(s,3H),7.09(dd,1H,J=2.3,8.3Hz),7.16(s,1H),7.25(d,1H,J=8.2Hz).

        步骤E:(R/S)-(5-氰基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        在氩气氛下,向(R/S)-(5-三氟甲基磺酰氧基-茚满-1-基)乙酸甲酯(2.63g,7.80mmol,步骤D)的N-甲基吡咯烷酮(20ml)溶液中加入氰化锌(733mg,6.24mmol)、Pd2dba3(36mg,39.0μmol)和dppf(52.0mg,93.6μmol),将反应混合物加热至100℃。16小时后,将反应混合物真空浓缩,在EtOAc和H2O之间分配。分离各层,有机层用水、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。将混合物过滤,真空浓缩滤液,残余物通过硅胶快速色谱法纯化(5,10%EtOAc/己烷),得到1.40g标题化合物(白色固体):

        ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(CDCl3)δ1.80-1.84(m,1H),2.43-2.48(m,1H),2.52(dd,1H,J=8.5,15.8Hz),2.77(dd,1H,J=6.0,15.8Hz),2.92-3.00(m,2H),3.62-3.66(m,1H),3.74(s,3H),7.27(d,1H,J=5.5Hz),7.47(d,1H,J=7.8Hz),7.51(s,1H).

        步骤F:(R/S)-(5-(N-羟基脒基-茚满-1-基)乙酸甲酯

        向(R/S)-(5-氰基-茚满-1-基)乙酸甲酯(724mg,3.16mmol,步骤E)的甲醇(10ml)溶液中加入羟胺盐酸盐(285mg,4.11mmol)和三乙胺(660μl,474mmol),加热至回流。14小时后,冷却反应混合物至室温,真空浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化(50,60%EtOAc/己烷),得到1.40g标题化合物:

        ?????????1H?NMR(CDCl3)δ1.76-1.80(m,1H),2.40-2.49(m,2H),2.78(dd,1H,J=5.8,15.6Hz),2.87-2.96(m,2H),3.59-3.62(m,1H),3.74(s,3H),4.94(s,2H),7.20(d,1H,J=7.8Hz),7.45(d,1H,J=7.7Hz),7.51(s,1H).

        步骤G:(R/S)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)茚满-1-基)乙酸甲酯

        向5-氯-6-异丙氧基烟酸(52mg,0.242mmol)的乙腈(3.0ml)溶液中加入EDC·HCl(46mg,0.242mmol)。将所得溶液在室温下搅拌30分钟,加入(R/S)-(5-(N-羟基脒基-茚满-1-基)乙酸甲酯(60mg,0.242mmol,步骤F)。1小时后,真空浓缩反应混合物。将残余物溶于EtOAc中,用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。将混合物过滤,真空浓缩后溶于THF(3.0ml)。加入1.0M?TBAF的THF溶液(242μl,0.242mmol),将所得黄色溶液在室温下搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩,溶于EtOAc中,用水、盐水洗涤,经硫酸镁干燥。将混合物过滤,真空浓缩,通过硅胶快速色谱法纯化(5%EtOAc/己烷),得到59mg标题化合物(白色固体):

        ?????????????????????????????????????????????????????????????????????1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ1.49(d,6H,J=6.2Hz),1.84-1.90(m,1H),2.47-2.57(m,2H),2.86(dd,1H,J=5.8,15.6Hz),2.98-3.09(m,2H),3.68-3.71(m,1H),3.78(s,3H),5.53,(七重峰,1H,J=6.2Hz),7.35(d,1H,J=8.0Hz),8.01(d,1H,J=7.8Hz),8.04(s,1H),8.43(d,1H,J=2.1Hz),8.90(d,1H,J=2.3Hz).

        步骤H:(R/S)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)茚满-l-基)乙酸

        向(R/S)-(5-(5-(5-氯-6-异丙氧基吡啶-3-基))-1,2,4-_二唑-3-基)茚满-1-基)乙酸甲酯(59mg,0.138mmol,步骤G)的THF(3ml)和H2O(1ml)溶液中加入氢氧化锂一水合物(58mg,1.38mmol)。将反应混合物加热至50℃3小时,冷却至室温,在EtOAc和5%柠檬酸之间分配。有机层用H2O、盐水洗涤,经硫酸镁干燥,过滤,真空浓缩。残余物通过制备型硅胶TLC纯化(2%CH3OH/CH2Cl2/0.2%?HCO2H),得到36mg标题化合物(白色固体):1H?NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.40(d,6H,J=6.2Hz),1.70-1.78(m,1H),2.30-2.46(m,2H),2.78(dd,1H,J=5.6,15.9Hz),2.84-2.95(m,1H),2.96-3.06(m,1H),3.45-3.57(m,1H),5.45(七重峰,1H,J=6.1Hz),7.45(d,1H,J=7.7Hz),7.91(d,1H,J=7.7Hz),7.94(s,1H),8.50(d,1H,J=2.1Hz),8.92(d,1H,J=1.8Hz);HPLC?A:rt=4.16min,m/z=414.1(M+H)+,416.1(M+H)+.

        以下实施例按照实施例163介绍的类似方法制备,在步骤G中用3-氰基-4-(2-三氟甲基乙氧基)苯甲酸替代5氯-6-异丙氧基苯甲酸:

        

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    本文标题:作为鞘氨醇1-磷酸内皮分化基因受体激动剂的3,4-二取代丙酸酯.pdf
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