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    重庆时时彩官方网站cqsscbcttyl: 趋化因子受体活性的氨基环戊基吡啶并吡嗪酮调节剂.pdf

    关 键 词:
    因子 受体 活性 氨基 环戊基 吡啶 吡嗪酮 调节剂
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    摘要
    申请专利号:

    CN200580003340.9

    申请日:

    2005.01.26

    公开号:

    CN1913778A

    公开日:

    2007.02.14

    当前法律状态:

    终止

    有效性:

    无权

    法律详情: 专利权的视为放弃IPC(主分类):C07D 471/04放弃生效日:20070214|||实质审查的生效|||公开
    IPC分类号: A01N43/64(2006.01); A01N43/66(2006.01); A01N43/58(2006.01); A01N43/60(2006.01); A61K31/53(2006.01); A61K31/495(2006.01); A61K31/50(2006.01); C07D253/08(2006.01); C07D487/00(2006.01); C07D471/00(2006.01); C07D241/36(2006.01) 主分类号: A01N43/64
    申请人: 默克公司;
    发明人: G·布托拉; D·圭亚迪恩; S·科坦达拉曼; M·麦科斯; S·G·米尔斯; 杨立虎
    地址: 美国新泽西州
    优先权: 2004.01.28 US 60/539,691
    专利代理机构: 中国专利代理(香港)有限公司 代理人: 刘健;李炳爱
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN200580003340.9

    授权公告号:

    ||||||

    法律状态公告日:

    2011.07.06|||2007.04.11|||2007.02.14

    法律状态类型:

    专利权的视为放弃|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    式I和式II化合物(其中A、E、j、k、m、n、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R15、R16、R17、R18、R19、R24、R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、X、Y和Z如本文所定义)是趋化因子受体活性的调节剂,并且可用于预防或者治疗某些炎性和免疫调节性病症和疾病、变应性疾病、特异反应性疾病,包括过敏性鼻炎、皮炎、结膜炎和哮喘,以及自身免疫病理学疾病例如类风湿性关节炎和动脉粥样硬化。本发明也涉及含有这些化合物的药物组合物以及这些化合物和组合物在预防或者治疗其中趋化因子受体参与的此类疾病中的应用。

    权利要求书

    1: 式I或式II化合物: 其中: A选自:-CH 2 -、-O-、-N(R 20 )-、-S-、-SO-、-SO 2 -、-N(SO 2 R 14 )- 和-N(COR 13 )-; E独立地选自N和C; X是O、N、S、SO 2 或C; Y选自:-O-、-N(R 20 )-、-S-、-SO-、-SO 2 -和-C(R 21 )(R 22 )-、 -N(SO 2 R 14 )-、-N(COR 13 )-、-C(R 21 )(COR 11 )-、-C(R 21 )(OCOR 14 )- 和-CO-; Z选自C、N或O; R 1 选自:氢、-C 1-6 烷基、-O-C 1-6 烷基、-S-C 1-6 烷基、-SO-C 1-6 烷基、-SO 2 -C 1-6 烷基、-SO 2 NR 12 R 12 、-NR 12 -SO 2 -NR 12 R 12 、-(C 0-6 烷基)-(C 3-7 环烷基)-(C 0-6 烷基)、-CN、-NR 12 R 12 、-NR 12 COR 13 、 -NR 12 SO 2 R 14 、-COR 11 、-CONR 12 R 12 、-NR 12 CONR 12 R 12 、-O-CO-C 1-6 烷基、-O-CO 2 -C 1-6 烷基、羟基、杂环和苯基, 其中所述烷基和环烷基是未取代的或者被1-7个独立地选自下列的 取代基取代:卤素、羟基、未取代或者被1-6个氟取代的-O-C 1-6 烷 基、未取代或者被1-6个氟取代的C 1-6 烷基、-CONR 12 R 12 、- NR 12 CONR 12 R 12 、-COR 11 、-SO 2 R 14 、-NR 12 COR 13 、-NR 12 SO 2 R 14 、 -杂环、=O、-CN、苯基、-SO 2 NR 12 R 12 、-NR 12 -SO 2 -NR 12 R 12 、未取代 或者被1-6个氟取代的-S-C 1-6 烷基、未取代或者被1-6个氟取代 的-SO-C 1-6 烷基、未取代或者被1-6个氟取代的-SO 2 -C 1-6 烷基和 -O-COR 13 , 其中所述苯基和杂环是未取代的或者被1-3个独立地选自下列的取 代基取代:卤素、羟基、-COR 11 、C 1-3 烷基和C 1-3 烷氧基,所述C 1-3 烷基和C 1-3 烷氧基是未取代的或者被1-6个氟取代; 当Z是O时,R 2 和R 3 不存在; 当Z是N时,R 2 不存在,且R 3 是氢或C 1-3 烷基; 当Z是C时,R 2 和R 3 独立地为氢或未取代或者被1-3个氟取代的 C 1-3 烷基; 当E是C时,R 4 选自:氢、未取代或者被1-3个氟取代的C 1-3 烷 基、未取代或者被1-3个氟取代的-O-C 1-3 烷基、羟基、氯、氟、溴、 苯基和杂环; 当E是C时,R 5 选自:氟、氯、溴、-杂环、-CN、-COR 11 、C 4-6 环烷基、-O-C 4-6 环烷基、未取代或者被1-6个氟或羟基或氟和羟基 取代的C 1-6 烷基、未取代或者被1-6个氟取代的-O-C 1-6 烷基、未 取代或者被1-6个氟取代的-CO-C 1-6 烷基、未取代或者被1-6个 氟取代的-S-C 1-6 烷基,未取代或者被一个或多个选自卤素、三氟甲 基、C 1-4 烷基和COR 11 的取代基取代的-吡啶基,未取代或者被一个 或多个选自卤素、三氟甲基、C 1-4 烷基和COR 11 的取代基取代的-苯 基,未取代或者被一个或多个选自卤素、三氟甲基、C 1-4 烷基和COR 11 的取代基取代的-O-苯基,未取代或者被1-6个氟取代的-C 3-6 环烷基, 和未取代或者被1-6个氟取代的-O-C 3-6 环烷基; 当E是C时,R 6 选自:氢、羟基、氯、氟、溴、苯基、杂环、未取 代或者被1-3个氟取代的C 1-3 烷基和未取代或者被1-3个氟取代 的-O-C 1-3 烷基; 当E是N时,R 4 和R 6 独立地选自不存在或O(以形成N-氧化物); 当X是N或C时,R 7 选自:氢、(C 0-6 烷基)-苯基、(C 0-6 烷基)- 杂环、(C 0-6 烷基)-C 3-7 环烷基、(C 0-6 烷基)-COR 11 、(C 0-6 烷基) -(链烯烃)-COR 11 、(C 0-6 烷基)-SO 3 H、(C 0-6 烷基)-W-C 0-4 烷 基、(C 0-6 烷基)-CONR 12 -苯基和(C 0-6 烷基)-CONR 23 -V-COR 11 , 其中W选自:单键、-O-、-S-、-SO-、-SO 2 -、-CO-、-CO 2 -、-CONR 12 - 和-NR 12 -, 其中V选自C 1-6 烷基或苯基, 其中R 23 是氢或C 1-4 烷基,或者R 23 是与V的一个碳原子连接以形成 环的具有1-5个碳原子的连接基团, 其中所述C 0-6 烷基是未取代的或者被1-5个独立地选自下列的取代 基取代:卤素、羟基、-C 0-6 烷基、-O-C 1-3 烷基、三氟甲基和-C 0-2 烷基-苯基, 其中所述苯基、杂环、环烷基和如果存在的话C 0-4 烷基是未取代的 或者被1-5个独立地选自下列的取代基取代:卤素、三氟甲基、羟 基、C 1-3 烷基、-O-C 1-3 烷基、-C 0-3 -COR 11 、-CN、-NR 12 R 12 、 -CONR 12 R 12 和-C 0-3 -杂环, 或者其中所述苯基或杂环与另一杂环稠合,所述另一杂环是未取代的 或者被1-2个独立地选自下列的取代基取代:羟基、卤素、-COR 11 和-C 1-3 烷基, 并且其中所述链烯烃是未取代的或者被1-3个独立地选自下列的取 代基取代:卤素、三氟甲基、C 1-3 烷基、苯基和杂环; 当X是O、S或SO 2 时,R 7 不存在; 当X是C时,R 8 选自:氢、羟基、C 1-6 烷基、C 1-6 烷基-羟基、-O- C 1-3 烷基、-COR 11 、-CONR 12 R 12 和-CN; 当X是O、S、SO 2 或N时,或者当双键连接R 7 和R 10 所连接的碳原 子时,R 8 不存在; 或者,R 7 和R 8 连接以形成选自下列的环:1H-茚、2,3-二氢-1H-茚、 2,3-二氢-苯并呋喃、1,3-二氢-异苯并呋喃、2,3-二氢-苯并噻吩、1,3- 二氢-异苯并噻吩、6H-环戊二烯并[d]异唑-3-醇、环戊烷和环己烷, 其中所述环是未取代的或者被1-5个独立地选自下列的取代基取代: 卤素、三氟甲基、羟基、C 1-3 烷基、-O-C 1-3 烷基、-C 0-3 -COR 11 、 -CN、-NR 12 R 12 、-CONR 12 R 12 和-C 0-3 烷基-杂环; R 9 和R 10 独立地选自:氢、羟基、C 1-6 烷基、C 1-6 烷基-COR 11 、C 1-6 烷基-羟基、-O-C 1-3 烷基、卤素; 或者R 9 和R 10 一起是O(其中O经由双键与环连接); 或者,R 7 与R 9 或者R 8 与R 10 连接以形成是苯基或杂环的稠合环, 其中所述稠合环是未取代的或者被1-7个独立地选自下列的取代基 取代:卤素、三氟甲基、羟基、C 1-3 烷基、-O-C 1-3 烷基、-COR 11 、 -CN、-NR 12 R 12 和-CONR 12 R 12 ; R 11 独立地选自:羟基、氢、C 1-6 烷基、-O-C 1-6 烷基、苄基、苯基、 C 3-6 环烷基,其中所述烷基、苯基、苄基和环烷基是未取代的或者 被1-6个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、C 1-3 烷基、 C 1-3 烷氧基、-CO 2 H、-CO 2 -C 1-6 烷基和三氟甲基; R 12 选自:氢、C 1-6 烷基、苄基、苯基和C 3-6 环烷基,其中所述烷 基、苯基、苄基和环烷基是未取代的或者被1-6个独立地选自下列 的取代基取代:卤素、羟基、C 1-3 烷基、C 1-3 烷氧基、-CO 2 H、 -CO 2 -C 1-6 烷基和三氟甲基; 或者,当两个单独的R 12 基团位于同一碳原子或相邻碳原子上时,所 述两个R 12 基团任选经由C 1-7 烷基连接基团连接而形成3-9元环,所 述连接基团是未取代的或者被1-6个独立地选自下列的取代基取代: 卤素、羟基、C 1-3 烷基、C 1-3 烷氧基、-CO 2 H、-CO 2 -C 1-6 烷基和 三氟甲基; R 13 选自:氢、C 1-6 烷基、-O-C 1-6 烷基、苄基、苯基和C 3-6 环烷基, 其中所述烷基、苯基、苄基和环烷基是未取代的或者被1-6个独立 地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、C 1-3 烷基、C 1-3 烷氧基、 -CO 2 H、-CO 2 -C 1-6 烷基和三氟甲基; R 14 选自:羟基、C 1-6 烷基、-O-C 1-6 烷基、苄基、苯基和C 3-6 环烷 基,其中所述烷基、苯基、苄基和环烷基是未取代的或者被1-6个 独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、C 1-3 烷基、C 1-3 烷氧 基、-CO 2 H、-CO 2 -C 1-6 烷基和三氟甲基; R 15 是氢或C 1-6 烷基,其中所述烷基是未取代的或者被1-3个独立地 选自下列的取代基取代:卤素、羟基、-CO 2 H、-CO 2 C 1-6 烷基和-O-C 1-3 烷基; R 16 选自:氢、氟、C 3-6 环烷基、-O-C 3-6 环烷基、羟基、-COR 11 、 -OCOR 14 ,未取代或者被1-6个选自氟、C 1-3 烷氧基、羟基和-COR 11 的取代基取代的C 1-6 烷基,和未取代或者被1-3个氟取代的-O-C 1-3 烷基; 或者,R 15 和R 16 一起是C 2-4 烷基或C 0-2 烷基-O-C 1-3 烷基,形成环, 所述环是5-7元环; R 17 选自:氢、COR 11 、羟基,未取代或者被1-6个选自氟、C 1-3 烷 氧基、羟基和-COR 11 的取代基取代的-O-C 1-6 烷基,和未取代或者被 1-6个选自氟、C 1-3 烷氧基、羟基和-COR 11 的取代基取代的C 1-6 烷 基,或者,如果R 28 是经由双键与环碳连接,则R 17 不存在; 或者,R 16 和R 17 一起是C 1-4 烷基或C 0-3 烷基-O-C 0-3 烷基,形成环, 所述环是3-7元环; R 18 选自:氢、氟、-O-C 3-6 环烷基、未取代或者被1-6个氟取代的- O-C 1-3 烷基和未取代或者被1-6个氟取代的C 1-6 烷基; 或者,R 16 和R 18 一起是C 2-3 烷基,其中所述烷基是未取代的或者 被1-3个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、-COR 11 、C 1-3 烷基和C 1-3 烷氧基; 或者,R 16 和R 18 一起是C 1-2 烷基-O-C 1-2 烷基,其中所述烷基是未取 代的或者被1-3个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、 -COR 11 、C 1-3 烷基和C 1-3 烷氧基; 或者,R 16 和R 18 一起是-O-C 1-2 烷基-O-,其中所述烷基是未取代的 或者被1-3个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、-COR 11 、 C 1-3 烷基和C 1-3 烷氧基; R 19 选自:氢、COR 11 、SO 2 R 14 、SO 2 NR 12 R 12 和未取代或者被1-6个 独立地选自氟和羟基的取代基取代的C 1-3 烷基; R 20 选自:氢、C 1-6 烷基、苄基、苯基和C 3-6 环烷基,其中所述烷 基、苯基、苄基和环烷基是未取代的或者被1-6个独立地选自下列 的取代基取代:卤素、羟基、C 1-3 烷基、C 1-3 烷氧基、-CO 2 H、-CO 2 -C 1-6 烷基和三氟甲基; R 21 和R 22 独立地选自:氢、羟基、C 1-6 烷基、-O-C 1-6 烷基、苄基、 苯基和C 3-6 环烷基,其中所述烷基、苯基、苄基和环烷基可以是未 取代的或者被1-6个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、C 1-3 烷基、C 1-3 烷氧基、-CO 2 H、-CO 2 -C 1-6 烷基和三氟甲基; R 24 选自:氢、COR 11 、SO 2 R 14 、SO 2 NR 12 R 12 和C 1-3 烷基,其中所述 烷基是未取代的或者被1-6个独立地选自氟和羟基的取代基取代; 或者,R 24 和R 17 一起是C 1-3 烷基桥; R 25 和R 26 独立地选自:=O,其中R 25 和/或R 26 是氧并且经由双键连接, 氢、苯基和C 1-6 烷基,所述烷基是未取代的或者被1-6个选自-COR 11 、 羟基、氟、氯和C 1-3 烷基的取代基取代; R 27 选自:氢、COR 11 、SO 2 R 14 、SO 2 NR 12 R 12 和C 1-3 烷基,其中所述 烷基是未取代的或者被1-6个独立地选自氟和羟基的取代基取代; R 28 选自:氢、羟基、卤素、未取代或者被1-6个独立地选自氟和羟 基的取代基取代的C 1-3 烷基、-NR 12 R 12 、-COR 11 、-CONR 12 R 12 、 -NR 12 COR 13 、-OCONR 12 R 12 、-NR 12 CONR 12 R 12 、-杂环、-CN、 -NR 12 -SO 2 -NR 12 R 12 、-NR 12 -SO 2 -R 14 、-SO 2 -NR 12 R 12 和=O,其 中R 28 经由双键与环连接,并且在同一位置上的R 17 不存在; R 29 和R 33 选自:氢、羟基、C 1-6 烷基、C 1-6 烷基-COR 11 、C 1-6 烷基 -羟基、-O-C 1-3 烷基、三氟甲基和卤素,或者,如果取代位点是不饱 和的,R 29 或R 33 独立地不存在; 或者,R 29 和R 16 一起是C 1-3 烷基桥; R 30 和R 31 独立地选自:羟基、C 1-6 烷基、C 1-6 烷基-COR 11 、C 1-6 烷基-羟基、-O-C 1-3 烷基、卤素和氢,其中所述烷基是未取代的或者 被1-6个独立地选自氟和羟基的取代基取代; 或者,R 30 和R 31 一起是-C 1-4 烷基-、-C 0-2 烷基-O-C 1-3 烷基-或-C 1-3 烷基-O-C 0-2 烷基-,其中所述烷基是未取代的或者被1-2个选自下 列的取代基取代:氧基,其中氧经由双键与桥连接,氟、羟基、甲氧 基、甲基或三氟甲基; R 32 和R 34 独立地选自:氢、羟基、C 1-6 烷基、C 1-6 烷基-COR 11 、C 1-6 烷基-羟基、-O-C 1-3 烷基、三氟甲基和卤素; j是0、1或2; k是0、1或2; m是0、1或2; n是1或2; 虚线代表任选的单键; 及其可药用盐和单独的非对映体。
    2: 权利要求1的化合物,其中所述化合物是式Ia化合物: 及其可药用盐和单独的非对映体。
    3: 权利要求1的化合物,其中所述化合物是式Ib化合物: 及其可药用盐和单独的非对映体。
    4: 权利要求1的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中: A是CH 2 。
    5: 权利要求1的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中: Y是O或CH 2 。
    6: 权利要求1的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中: E是C。
    7: 权利要求1的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中: Z是C。
    8: 权利要求1的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中 R 1 选自:-C 1-6 烷基、-C 0-6 烷基-O-C 1-6 烷基、杂环和-(C 0-6 烷基) -(C 3-7 环烷基)-(C 0-6 烷基),其中所述烷基、杂环和环烷基是未 取代的或者被1-7个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、- O-C 1-3 烷基、三氟甲基、C 1-3 烷基、-O-C 1-3 烷基、-COR 11 、-CN、 -NR 12 R 12 、-CONR 12 R 12 和-NCOR 13 。
    9: 权利要求1的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中 R 1 选自:C 1-6 烷基、被羟基取代的C 1-6 烷基和被1-6个氟取代的 C 1-6 烷基。
    10: 权利要求1的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中 R 1 选自:-CH(CH 3 ) 2 、-C(OH)(CH 3 ) 2 、-CH(OH)CH 3 和-CH 2 CF 3 。
    11: 权利要求1的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中 R 2 、R 3 和R 4 中的一个或多个是氢。
    12: 权利要求1的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中 R 5 选自:被1-6个氟取代的C 1-6 烷基、被1-6个氟取代的-O-C 1-6 烷基、氯、溴和苯基。
    13: 权利要求12的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中 R 5 是三氟甲基。
    14: 权利要求1的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中 R 15 是甲基或氢。
    15: 权利要求1的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中 R 16 选自:氢、未取代或者被1-6个氟取代的C 1-3 烷基、-O-C 1-3 烷 基、氟和羟基。
    16: 权利要求1的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中 R 16 选自:氢、三氟甲基、甲基、甲氧基、乙氧基、乙基、氟和羟基。
    17: 权利要求1的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中 R 17 是氢。
    18: 权利要求1的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中 R 18 选自:氢、甲基和甲氧基。
    19: 权利要求1的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中 R 16 和R 18 一起是-CH 2 CH 2 -或-CH 2 CH 2 CH 2 -。
    20: 权利要求1的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中 R 19 、R 24 和R 25 当中的一个或多个是氢。
    21: 权利要求1的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中 R 26 是O。
    22: 权利要求1的化合物及其可药用盐和单独的非对映体,其中 R 27 、R 28 和R 29 当中的一个或多个是氢。
    23: 选自下列的化合物: 及其可药用盐和单独的非对映体。
    24: 包含惰性载体和权利要求1的化合物的药物组合物。
    25: 调节哺乳动物中趋化因子受体活性的方法,所述方法包括施 用有效量的权利要求1的化合物。
    26: 治疗、改善、控制炎性和免疫调节性病症或疾病或者降低炎 性和免疫调节性病症或疾病危险性的方法,所述方法包括给患者施用 有效量的权利要求1的化合物。
    27: 治疗、改善、控制类风湿性关节炎或者降低类风湿性关节炎 危险性的方法,所述方法包括给患者施用有效量的权利要求1的化合 物。

    说明书


    趋化因子受体活性的氨基环戊基吡啶并吡嗪酮调节剂

        ???????????????????????发明背景

        趋化因子是具有强力趋化活性的小的(70-120个氨基酸)促炎细胞因子的家族。趋化因子是由多种细胞释放以吸引各种细胞例如单核细胞、巨噬细胞、T细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和中性粒细胞至炎症位点的趋化性细胞因子(Schall,Cytokine,3,165-183(1991)和Murphy,Rev.Immun.,12,593-633(1994)中综述)。这些分子最初通过四种保守的半胱氨酸定义并基于第一个半胱氨酸对的排布分为两个亚家族。在CXC-趋化因子家族中,它包括IL-8、CROα、NAP-2和IP-10,这两种半胱氨酸被单一氨基酸分开,而在CC-趋化因子家族中,它包括RANTES、MCP-1、MCP-2、MCP-3、MIP-1α、MIP-1β和嗜酸细胞活化趋化因子,这两个残基是相邻的。

        α-趋化因子例如白介素-8(IL-8)、嗜中性白细胞活化蛋白-2(NAP-2)以及黑素瘤生长刺激活性蛋白(MGSA)主要趋化于嗜中性白细胞,而β-趋化因子例如RANTES、MIP-1α、MIP-1β、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、MCP-2、MCP-3和eotaxin趋向于巨噬细胞、单核细胞、T-细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞(Deng,等人,Nature,381,661-666(1996))。趋化因子通过多种细胞类型分泌并且与存在于白细胞和其它细胞上的特异性G-蛋白偶联受体(GPCR)结合(在Horuk,Trends?Pharm.Sci.,15,159-165(1994)中综述)。这些趋化因子受体形成GPCR的亚家族,其目前由15个已鉴定的成员和多个孤儿受体组成。不像混栖化学引诱物例如C5a、fMLP、PAF和LTB4的受体那样,趋化因子受体更选择性地在白细胞亚组上表达。因此,特异性趋化因子的生成提供特殊白细胞亚组的募集机制。

        在结合它们的关联配体上,趋化因子受体通过相关的三聚化G蛋白传导胞内信号,导致细胞内钙浓度迅速增加。至少有7种人趋化因子受体结合具有下面已确证类型的β-趋化因子或者对其有反应:CCR-1(或“CKR-1”或“CC-CKR-1”)[MIP-1α、MIP-1β、MCP-3、RANTES](Ben-Barruch,等人,J.Biol.Chem.,270,22123-22128(1995);Beote,等人,Cell,72,415-425(1993));CCR-2A和CCR-2B(或“CKR-2A”/”CKR-2A”或“CC-CKR-2A”/”CC-CKR-2A”)[MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4];CCR-3(或“CKR-3”或“CC-CKR-3”)[Eotaxin、Eotaxin2、RANTES、MCP-2、MCP-3](Rollins,等人,Blood,90,908-928(1997));CCR-4(或“CKR-4”或“CC-CKR-4”)[MIP-1α、RANTES、MCP-1](Rollins,等人,Blood,90,908-928(1997));CCR-5(或“CKR-5”或“CC-CKR-5”)[MIP-1α、RANTES,MIP-1β](Sanson,等人,Biochemistry,35,3362-3367(1996));和Duffy血型抗原[RANTES、MCP-1](Chaudhun,等人,J.Biol.Chem.,269,7835-7838(1994))。β-趋化因子包括eotaxin、MIP(“巨噬细胞炎性蛋白”)、MCP(“单核细胞趋化蛋白”)和RANTES(“向上调节活化,正常T细胞表达和分泌”)等其它趋化因子。

        趋化因子受体,比如CCR-1、CCR-2、CCR-2A、CCR-2B、CCR-3、CCR-4、CCR-5、CXCR-3、CXCR-4已作为重要的介质参与炎性和免疫调节性病症和疾病,包括哮喘、鼻炎和变应性疾病,以及自身免疫病症例如类风湿性关节炎和动脉粥样硬化。对于在CCR-5基因上的32-碱基对缺失纯合的人似乎对类风湿性关节炎不太易感(Gomez,等人,Arthritis?&?Rheumatism,42,989-992(1999))。嗜酸性粒细胞在变应性炎症中的作用的综述由Kita,H.,等人,J.Exp.Med.183,2421-2426(1996)提供。趋化因子在变应性炎症中的作用的一般综述由Lustger,A.D.,New?England?J.Med.,338(7),426-445(1998)提供。

        一个亚组的趋化因子为单核细胞和巨噬细胞的有效化学诱导物。这些中鉴定最充分的为MCP-1(单核细胞化学诱导物蛋白-1),其初级受体为CCR2。各种物种,包括啮齿动物和人,在对炎性刺激的反应中,会在多种细胞类型中产生MCP-1,并且刺激单核细胞和一个亚组的淋巴细胞中的趋化性。具体地说,MCP-1产生与炎症部位的单核细胞和巨噬细胞浸润相关。通过小鼠体内同源重组消除MCP-1或者CCR2导致对巯基乙酸注射和单核细胞增生李司忒氏菌(Listeriamonocytogenes)感染的应答的单核细胞募集的显著减弱(Lu等人,J.Exp.Med.,187,601-608(1998);Kurihara等人J.Exp.Med.,186,1757-1762(1997);Boring等人J.Clin.Invest.,100,2552-2561(1997);Kuziel等人Proc.Natl.Acad.Sci.,94,12053-12058(1997))。另外,这些动物显示由注射血吸虫或者分枝杆菌抗原诱导的单核细胞浸润进入肉芽肿性病变部位的减少(Boring等人J.Clin.Invest.,100,2552-2561(1997);Warmington等人Am?J.Path.,154,1407-1416(1999))。这些数据提示MCP-1诱导的CCR2激活在单核细胞对炎症部位的募集中起主要作用,并且这种活性的拮抗作用应产生足够的免疫应答抑制以在免疫炎性疾病和自身免疫疾病中产生治疗效果。

        因此,调节趋化因子受体例如CCR-2受体的活性剂在这样的病症和疾病中应是有用的。

        另外,单核细胞对血管壁上炎性病变的反射增进是致动脉粥样化斑块形成的主要原因。在高胆固醇血症中血管壁损伤后,MCP-1通过内皮细胞和血管内膜平滑肌细胞产生和分泌。作为对释放的MCP-1的应答,对损伤部位募集的单核细胞浸润血管壁并分化为泡沫细胞。目前几个小组已证实与维持高脂肪食物喂饲的APO-E-/-、LDL-R-/-或者ApoB转基因小鼠回交的MCP-1-/-或者CCR-2-/-小鼠中主动脉损害大小、巨噬细胞含量和坏死均减弱或减小(Boring等人Nature,394,894-897(1998);Gosling等人J.Clin.Invest.,103,773-778(1999))。因此,通过修复单核细胞募集和动脉壁上的分化,CCR2拮抗剂可以抑制动脉粥样硬化性损害形成和病变的发展。

        ???????????????????????发明概述

        本发明涉及式I和式II化合物:

        (其中A、E、j、k、m、n、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R15、R16、R17、R18、R19、R24、R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、X、Y和Z如本文所定义),所述化合物是趋化因子受体活性的调节剂并且用于预防或者治疗某些炎性和免疫调节性病症和疾病、变应性疾病、特异反应性疾病,包括过敏性鼻炎、皮炎、结膜炎和哮喘,以及自身免疫病理学疾病例如类风湿性关节炎和动脉粥样硬化。本发明也涉及含有这些化合物的药物组合物以及这些化合物和组合物在预防或者治疗其中趋化因子受体参与的此类疾病中的应用。

        ???????????????????????发明详述

        本发明涉及式I和式II化合物:

        其中:

        A选自:-CH2-、-O-、-N(R20)-、-S-、-SO-、-SO2-、-N(SO2R14)-和-N(COR13)-;

        E独立地选自N和C;

        X是O、N、S、SO2或C;

        Y选自:-O-、-N(R20)-、-S-、-SO-、-SO2-和-C(R21)(R22)-、-N(SO2R14)-、-N(COR13)-、-C(R21)(COR11)-、-C(R21)(OCOR14)-和-CO-;

        Z选自C、N或O;

        R1选自:氢、-C1-6烷基、-O-C1-6烷基、-S-C1-6烷基、-SO-C1-6烷基、-SO2-C1-6烷基、-SO2NR12R12、-NR12-SO2-NR12R12、-(C0-6烷基)-(C3-7环烷基)-(C0-6烷基)、-CN、-NR12R12、-NR12COR13、-NR12SO2R14、-COR11、-CONR12R12、-NR12CONR12R12、-O-CO-C1-6烷基、-O-CO2-C1-6烷基、羟基、杂环和苯基,

        其中所述烷基和环烷基是未取代的或者被1-7个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、未取代或者被1-6个氟取代的-O-C1-6烷基、未取代或者被1-6个氟取代的C1-6烷基、-CONR12R12、-NR12CONR12R12、-COR11、-SO2R14、-NR12COR13、-NR12SO2R14、-杂环、=O、-CN、苯基、-SO2NR12R12、-NR12-SO2-NR12R12、未取代或者被1-6个氟取代的-S-C1-6烷基、未取代或者被1-6个氟取代的-SO-C1-6烷基、未取代或者被1-6个氟取代的-SO2-C1-6烷基和-O-COR13,

        其中所述苯基和杂环是未取代的或者被1-3个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、-COR11、C1-3烷基和C1-3烷氧基,所述C1-3烷基和C1-3烷氧基是未取代的或者被1-6个氟取代;

        当Z是O时,R2和R3不存在;

        当Z是N时,R2不存在,且R3是氢或C1-3烷基;

        当Z是C时,R2和R3独立地为氢或未取代或者被1-3个氟取代的C1-3烷基;

        当E是C时,R4选自:氢、未取代或者被1-3个氟取代的C1-3烷基、未取代或者被1-3个氟取代的-O-C1-3烷基、羟基、氯、氟、溴、苯基和杂环;

        当E是C时,R5选自:氟、氯、溴、-杂环、-CN、-COR11、C4-6环烷基、-O-C4-6环烷基、未取代或者被1-6个氟或羟基或氟和羟基取代的C1-6烷基、未取代或者被1-6个氟取代的-O-C1-6烷基、未取代或者被1-6个氟取代的-CO-C1-6烷基、未取代或者被1-6个氟取代的-S-C1-6烷基,未取代或者被一个或多个选自卤素、三氟甲基、C1-4烷基和COR11的取代基取代的-吡啶基,未取代或者被一个或多个选自卤素、三氟甲基、C1-4烷基和COR11的取代基取代的-苯基,未取代或者被一个或多个选自卤素、三氟甲基、C1-4烷基和COR11的取代基取代的-O-苯基,未取代或者被1-6个氟取代的-C3-6环烷基,和未取代或者被1-6个氟取代的-O-C3-6环烷基;

        当E是C时,R6选自:氢、羟基、氯、氟、溴、苯基、杂环、未取代或者被1-3个氟取代的C1-3烷基和未取代或者被1-3个氟取代的-O-C1-3烷基;

        当E是N时,R4和R6独立地选自不存在或O(以形成N-氧化物);

        当X是N或C时,R7选自:氢、(C0-6烷基)-苯基、(C0-6烷基)-杂环、(C0-6烷基)-C3-7环烷基、(C0-6烷基)-COR11、(C0-6烷基)-(链烯烃)-COR11、(C0-6烷基)-SO3H、(C0-6烷基)-W-C0-4烷基、(C0-6烷基)-CONR12-苯基和(C0-6烷基)-CONR23-V-COR11,其中W选自:单键、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-CO-、-CO2-、-CONR12-和-NR12-,

        其中V选自C1-6烷基或苯基,

        其中R23是氢或C1-4烷基,或者R23是与V的一个碳原子连接以形成环的具有1-5个碳原子的连接基团,

        其中所述C0-6烷基是未取代的或者被1-5个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、-C0-6烷基、-O-C1-3烷基、三氟甲基和-C0-2烷基-苯基,

        其中所述苯基、杂环、环烷基和如果存在的话C0-4烷基是未取代的或者被1-5个独立地选自下列的取代基取代:卤素、三氟甲基、羟基、C1-3烷基、-O-C1-3烷基、-C0-3-COR11、-CN、-NR12R12、-CONR12R12和-C0-3-杂环,

        或者其中所述苯基或杂环与另一杂环稠合,所述另一杂环是未取代的或者被1-2个独立地选自下列的取代基取代:羟基、卤素、-COR11和-C1-3烷基,

        并且其中所述链烯烃是未取代的或者被1-3个独立地选自下列的取代基取代:卤素、三氟甲基、C1-3烷基、苯基和杂环;

        当X是O、S或SO2时,R7不存在;

        当X是C时,R8选自:氢、羟基、C1-6烷基、C1-6烷基-羟基、-O-C1-3烷基、-COR11、-CONR12R12和-CN;

        当X是O、S、SO2或N时,或者当双键连接R7和R10所连接的碳原子时,R8不存在;或者,R7和R8连接以形成选自下列的环:1H-茚、2,3-二氢-1H-茚、2,3-二氢-苯并呋喃、1,3-二氢-异苯并呋喃、2,3-二氢-苯并噻吩、1,3-二氢-异苯并噻吩、6H-环戊二烯并[d]异唑-3-醇、环戊烷和环己烷,其中所述环是未取代的或者被1-5个独立地选自下列的取代基取代:卤素、三氟甲基、羟基、C1-3烷基、-O-C1-3烷基、-C0-3-COR11、-CN、-NR12R12、-CONR12R12和-C0-3烷基-杂环;

        R9和R10独立地选自:氢、羟基、C1-6烷基、C1-6烷基-COR11、C1-6烷基-羟基、-O-C1-3烷基、卤素;

        或者R9和R10一起是O(其中O经由双键与环连接);

        或者,R7与R9或者R8与R10连接以形成是苯基或杂环的稠合环,其中所述稠合环是未取代的或者被1-7个独立地选自下列的取代基取代:卤素、三氟甲基、羟基、C1-3烷基、-O-C1-3烷基、-COR11、-CN、-NR12R12和-CONR12R12;

        R11独立地选自:羟基、氢、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、苄基、苯基、C3-6环烷基,其中所述烷基、苯基、苄基和环烷基是未取代的或者被1-6个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基;

        R12选自:氢、C1-6烷基、苄基、苯基和C3-6环烷基,其中所述烷基、苯基、苄基和环烷基是未取代的或者被1-6个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基;

        或者,当两个单独的R12基团位于同一碳原子或相邻碳原子上时,所述两个R12基团任选经由C1-7烷基连接基团连接而形成3-9元环,所述连接基团是未取代的或者被1-6个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基;

        R13选自:氢、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、苄基、苯基和C3-6环烷基,其中所述烷基、苯基、苄基和环烷基是未取代的或者被1-6个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基;

        R14选自:羟基、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、苄基、苯基和C3-6环烷基,其中所述烷基、苯基、苄基和环烷基是未取代的或者被1-6个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基;

        R15是氢或C1-6烷基,其中所述烷基是未取代的或者被1-3个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、-CO2H、-CO2C1-6烷基和-O-C1-3烷基;

        R16选自:氢、氟、C3-6环烷基、-O-C3-6环烷基、羟基、-COR11、-OCOR14,未取代或者被1-6个选自氟、C1-3烷氧基、羟基和-COR11的取代基取代的C1-6烷基,和未取代或者被1-3个氟取代的-O-C1-3烷基;

        或者,R15和R16一起是C2-4烷基或C0-2烷基-O-C1-3烷基,形成环,所述环是5-7元环;

        R17选自:氢、COR11、羟基,未取代或者被1-6个选自氟、C1-3烷氧基、羟基和-COR11的取代基取代的-O-C1-6烷基,和未取代或者被1-6个选自氟、C1-3烷氧基、羟基和-COR11的取代基取代的C1-6烷基,或者,如果R28是经由双键与环碳连接,则R17不存在;

        或者,R16和R17一起是C1-4烷基或C0-3烷基-O-C0-3烷基,形成环,所述环是3-7元环;

        R18选自:氢、氟、-O-C3-6环烷基、未取代或者被1-6个氟取代的-O-C1-3烷基和未取代或者被1-6个氟取代的C1-6烷基;

        或者,R16和R18一起是C2-3烷基,由此形成5-6元环,其中所述烷基是未取代的或者被1-3个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、-COR11、C1-3烷基和C1-3烷氧基;

        或者,R16和R18一起是C1-2烷基-O-C1-2烷基,由此形成6-8元环,其中所述烷基是未取代的或者被1-3个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、-COR11、C1-3烷基和C1-3烷氧基;

        或者,R16和R18一起是-O-C1-2烷基-O-,由此形成6-7元环,其中所述烷基是未取代的或者被1-3个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、-COR11、C1-3烷基和C1-3烷氧基;

        R19选自:氢、COR11、SO2R14、SO2NR12R12和未取代或者被1-6个独立地选自氟和羟基的取代基取代的C1-3烷基;

        R20选自:氢、C1-6烷基、苄基、苯基和C3-6环烷基,其中所述烷基、苯基、苄基和环烷基是未取代的或者被1-6个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基;

        R21和R22独立地选自:氢、羟基、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、苄基、苯基和C3-6环烷基,其中所述烷基、苯基、苄基和环烷基可以是未取代的或者被1-6个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基;

        R24选自:氢、COR11、SO2R14、SO2NR12R12和C1-3烷基,其中所述烷基是未取代的或者被1-6个独立地选自氟和羟基的取代基取代;

        或者,R24和R17一起是C1-3烷基桥;

        R25和R26独立地选自:=O(其中R25和/或R26是氧并且经由双键连接)、氢、苯基和C1-6烷基,所述烷基是未取代的或者被1-6个选自-COR11、羟基、氟、氯和C1-3烷基的取代基取代;

        R27选自:氢、COR11、SO2R14、SO2NR12R12和C1-3烷基,其中所述烷基是未取代的或者被1-6个独立地选自氟和羟基的取代基取代;

        R28选自:氢、羟基、卤素、未取代或者被1-6个独立地选自氟和羟基的取代基取代的C1-3烷基、-NR12R12、-COR11、-CONR12R12、-NR12COR13、-OCONR12R12、-NR12CONR12R12、-杂环、-CN、-NR12-SO2-NR12R12、-NR12-SO2-R14、-SO2-NR12R12和=O(其中R28经由双键与环连接,在这种情况下,在同一位置上的R17不存在);

        R29和R33选自:氢、羟基、C1-6烷基、C1-6烷基-COR11、C1-6烷基-羟基、-O-C1-3烷基、三氟甲基和卤素,或者,如果取代位点是不饱和的,R29或R33独立地不存在;

        或者,R29和R16一起是C1-3烷基桥;

        R30和R31独立地选自:羟基、C1-6烷基、C1-6烷基-COR11、C1-6烷基-羟基、-O-C1-3烷基、卤素和氢,其中所述烷基是未取代的或者被1-6个独立地选自氟和羟基的取代基取代;

        或者,R30和R31一起是-C1-4烷基-、-C0-2烷基-O-C1-3烷基-或-C1-3烷基-O-C0-2烷基-,其中所述烷基是未取代的或者被1-2个选自下列的取代基取代:氧基(其中氧经由双键与桥连接)、氟、羟基、甲氧基、甲基或三氟甲基;

        R32和R34独立地选自:氢、羟基、C1-6烷基、C1-6烷基-COR11、C1-6烷基-羟基、-O-C1-3烷基、三氟甲基和卤素;

        j是0、1或2;

        k是0、1或2;

        m是0、1或2;

        n是1或2;

        虚线代表任选的单键;

        及其可药用盐和单独的非对映体。

        另外的本发明化合物包括式Ia化合物:

        其中R1、R5、R15、R16、R18和Y如本文所述,及其可药用盐和单独的非对映体。

        其它本发明化合物还包括式Ib化合物:

        其中R1和R16如本文所述,及其可药用盐和单独的非对映体。

        一些本发明实施方案还包括:其中A是CH2的那些;其中Y是O或CH2的那些,其中Y是O的那些,其中E是C的那些和/或其中Z是C的那些。

        本发明另外的实施方案包括定义如下的那些,其中R1选自:-C1-6烷基、-C0-6烷基-O-C1-6烷基、杂环和-(C0-6烷基)-(C3-7环烷基)-(C0-6烷基),其中所述烷基、杂环和环烷基是未取代的或者被1-7个独立地选自下列的取代基取代:卤素、羟基、-O-C1-3烷基、三氟甲基、C1-3烷基、-O-C1-3烷基、-COR11、-CN、-NR12R12、-CONR12R12和-NCOR13。本发明还包括其中R1选自:C1-6烷基、被羟基取代的C1-6烷基和被1-6个氟取代的C1-6烷基的实施方案?;拱ㄆ渲蠷1选自:-CH(CH3)2、-C(OH)(CH3)2、-CH(OH)CH3、-CH2CF3的实施方案。

        在本发明的一些实施方案中,R2是氢。

        在本发明的一些实施方案中,R3是氢。

        在本发明的一些实施方案中,R4是氢。

        在本发明的一些实施方案中,R5选自:被1-6个氟取代的C1-6烷基、被1-6个氟取代的-O-C1-6烷基、氯、溴和苯基?;拱ㄆ渲蠷5是三氟甲基的本发明实施方案。

        在本发明的一些实施方案中,R15是甲基或氢?;拱ㄆ渲蠷15是氢的实施方案。

        在本发明的一些实施方案中,R16选自:氢、未取代或者被1-6个氟取代的C1-3烷基、-O-C1-3烷基、氟和羟基。在本发明的一些其它实施方案中,R16选自:氢、三氟甲基、甲基、甲氧基、乙氧基、乙基、氟和羟基。

        在本发明的一些实施方案中,R17是氢。

        在本发明的一些实施方案中,R18选自:氢、甲基和甲氧基。在本发明的一些其它实施方案中,R18是氢。

        在本发明的一些实施方案中,R16和R18一起是-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-,由此形成环戊基环或环己基环。

        在本发明的一些实施方案中,R19是氢。

        在本发明的一些实施方案中,R24是氢。

        在本发明的一些实施方案中,R25是氢,并且是经由单键连接的。

        在本发明的一些实施方案中,R26是O,并且是经由双键连接的。

        在本发明的一些实施方案中,R27是氢。

        在本发明的一些实施方案中,R28是氢。

        在本发明的一些实施方案中,R29是氢。

        如本领域已知的,通过在此公开的方法学的合适改进,可以实现非对映体和对映体的独立合成或者它们的色谱分离。如果必要,用含已知绝对构型的不对称中心的试剂,通过它们衍生的结晶产物或者结晶中间体的X-射线结晶学,可以测定它们的绝对立体化学。

        如本领域已知的,通过在此公开的方法学的合适改进,可以实现非对映体和对映体的独立合成或者它们的色谱分离。如果必要,用含已知绝对构型的不对称中心的试剂,通过它们衍生的结晶产物或者结晶中间体的X-射线结晶学,可以测定它们的绝对立体化学。

        如本领域技术人员所理解的,本文所用的卤素或卤原子意在包括氯、氟、溴和碘。

        如本文所用的术语“烷基”是指不具有双键或三键的直链、支链和环状碳结构。如C1-8烷基中的C1-8被定义为以直链或支链排列的具有1、2、3、4、5、6、7或8个碳原子的基团,如C1-8烷基具体包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基和辛基。更广义地,Ca-b烷基(其中a和b代表整数)被定义为以直链或支链排列的具有a-b个碳原子基团。如C0烷基中的C0被定义为存在直接的共价键?!盎吠榛笔钦庋耐榛?,其一部分或全部形成3或更多个碳原子的环。

        如本文所用的术语“杂环“意在包括下列基团:苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋喃基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并唑基、咔唑基、咔啉基、噌啉基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、吲嗪基、吲唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异唑基、萘啶基、二唑基、唑基、氧杂环丁烷基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并吡啶基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氢吡喃基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、氮杂环丁烷基、1,4-二烷基、六氢氮杂基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、硫代吗啉基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并唑基、二氢呋喃基、二氢咪唑基、二氢吲哚基、二氢异唑基、二氢异噻唑基、二氢二唑基、二氢唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢三唑基、二氢氮杂丁烷基、亚甲二氧基苯甲?;?、四氢呋喃基和四氢噻吩基及其N-氧化物。

        在此使用的术语“可药用的”指这些化合物、材料、组合物和/或剂型,它们在合理的医学判断的范围内,适用于与人体和动物组织接触而没有过度的毒性、刺激性、变应性应答或者其它的问题或者复杂性,与合适的效益/风险比相匹配。

        如在此使用的,“可药用盐”指衍生物,其中通过制备它们的酸性或者碱性盐修饰母体化合物??梢┯玫难蔚氖道ǖú幌抻诩钚圆谢绨返目笪锼峄蛘哂谢嵫?、酸性残基例如羧酸的碱或者有机盐等??梢┯玫难伟ㄋ纬赡柑寤衔锢绶嵌拘晕藁蛘哂谢岬某9娣嵌拘匝位蛘呒撅а?。例如,这样的常规非毒性盐包括衍生自无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的那些盐;和由有机酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、双羟萘酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、羟乙磺酸等制备的盐。

        通过常规化学方法,自含碱性或者酸性部分的母体化合物可制备本发明的可药用的盐。通常,在水或者在有机溶剂中,或者在两者的混合物中,通过使这些化合物的游离的酸或者碱形式与化学计算量的合适的碱或者酸反应,可制备这样的盐;通常,非水介质例如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或者乙腈为优选。合适的盐从参见例如Remington′s?Pharmaceutical?Sciences,17th?ed.,Mack?PublishingCompany,Easton,PA,1985,p.1418。

        使用实施例和此处公开的化合物举例说明本发明。

        本发明中的具体的化合物包括选自实施例的标题化合物的化合物及其可药用盐盐和它们单独的非对映体。

        本发明化合物可用于调节需要这样调节的患者体内趋化因子受体活性的方法,所述方法包括给予有效量的所述化合物。

        本发明涉及前述化合物作为趋化因子受体活性调节剂的应用。具体地说,这些化合物用作趋化因子受体尤其是CCR-2的调节剂。

        通过本领域已知的方法学,例如由Van?Riper,等人,J.Exp.Med.,177,851-856(1993)公开的趋化因子结合试验,其可方便地适用于测量CCR-2结合,可以证实作为趋化因子受体活性的调节剂的本发明化合物的应用。

        通过测量125I-MCP-1对包括单核细胞、THP-1细胞在内的各种细胞类型的内源性CCR-2受体的抑制作用,或者在真核细胞内的已克隆受体异种表达后,来测定CCR-2结合试验中的受体亲和力。把细胞悬浮于结合缓冲液(50mM?HEPES,pH7.2,5mM?MgCl2,1mMCaCl2,和0.50%BSA)中并在室温下于1小时内加入到受试化合物或者DMSO及125I-MCP-1中以使结合。然后在GFB滤器上收集细胞,用25mM含500mM?NaCl的HEPES缓冲液冲洗并定量确定细胞结合的125I-MCP-1。

        在趋化性试验中,采用分离自静脉全血或者leukophoresed的血的排除了PBMC的T细胞进行趋化性并且通过Picoll-Hypaque离心纯化,随后用神经氨酸酶处理的绵羊红细胞进行玫瑰花瓣试验。一旦分离后,用含0.1mg/ml?BSA的HBSS冲洗细胞并以1×107个细胞/m1悬浮。于37℃在暗处用2μM?Calcien-AM(分子探针)荧光标记细胞30分钟。把已标记的细胞冲洗两次并在RPMI?1640中以5×106个细胞/ml用含0.1mg/ml?BSA的L-谷氨酰胺(无酚红)悬浮。把在相同的培养基中于10ng/ml稀释的MCP-1(Peprotech)或者培养基单独加入到底部孔(27μl)中。用DMSO或者用各种浓度的受试化合物预温育15分钟后,将单核细胞(150000个细胞)加入到滤膜(30μl)的顶部。将等浓度的受试化合物或者DMSO加入到底部孔中以防止通过扩散稀释。于37℃在5%CO2下温育60分钟后,移去滤器并用含0.1mg/ml?BSA的HBSS冲洗顶部以除去未迁移至滤膜上的细胞。在化学引诱物不存在下测量自发迁移(化学激活现象)。

        具体地说,在上面提到的试验中,下面实施例的化合物具有结合CCR-2受体的活性,通常具有约小于1μM的IC50。这样的结果是在用作趋化因子受体活性调节剂的化合物内在活性的指标。

        哺乳动物趋化因子受体提供用于干扰或者促进哺乳动物例如人体内嗜酸性粒细胞和/或淋巴细胞功能的靶标。抑制或者促进趋化因子受体功能的化合物特别适用于调节治疗目的的嗜酸性粒细胞和/或淋巴细胞功能。因此,抑制或者促进趋化因子受体功能的化合物将适用于治疗、预防、改善、控制或者减少广泛种类的炎性和免疫调节性病症和疾病、变应性疾病、包括过敏性鼻炎、皮炎、结膜炎和哮喘在内的特异反应性疾病以及自身免疫病理学例如类风湿性关节炎和动脉粥样硬化的风险。

        例如,可以给予其抑制哺乳动物趋化因子受体(例如人趋化因子受体)一种或者更多种功能的本发明化合物以抑制(即减少或者预防)炎症。结果,一种或者更多种炎症过程,例如白细胞迁移、趋化、胞吐作用(例如,酶、组胺的胞吐作用)或者炎性介质释放受到抑制。

        除灵长类例如人以外,按照本发明的方法可治疗各种其他的哺乳动物。例如,可治疗哺乳动物,包括但不限于牛、绵羊、山羊、马、犬、猫、豚鼠、大鼠或者其他的牛、绵羊、马、犬、猫、啮齿动物或者海洋动物物种。然而,这一方法也可在其他的物种中实践,例如鸟类(例如,鸡)。

        使用本发明的化合物可治疗与炎症和感染有关的疾病和病症。在一个优选的实施方案中,疾病和病症是一种为调节炎性应答而淋巴细胞的作用被抑制或者促进的疾病。

        可用趋化因子受体功能抑制剂治疗的人或其它物种的疾病或状况包括但不限于:炎性或变应性疾病和病情,包括呼吸道变应性疾病如哮喘(特别是支气管哮喘)、变应性鼻炎、过敏性肺疾病、过敏性肺炎、嗜酸性肺炎(例如吕弗勒氏综合征、慢性嗜酸性肺炎)、迟发型过敏、间隙肺疾病(ILD)(例如特发性肺纤维化或与类风湿性关节炎相关的ILD、系统性红斑狼疮、关节强硬性脊椎炎、全身性硬皮症、斯耶革伦氏综合征、多肌炎或皮肤肌炎);全身性过敏反应或过敏性应答、药物过敏(例如对青霉素、头孢菌素过敏)、昆虫蛰伤性过敏;自身免疫疾病例如类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、重症肌无力、青少年糖尿病发作;肾小球性肾炎、自身免疫性甲状腺炎、贝切特氏疾??;移植排斥(例如在移植术中),包括同种异体移植物排斥或移植物抗宿主疾??;炎性肠疾病例如克朗氏病和溃疡性结肠炎;椎关节??;硬皮??;牛皮癣(包括T-细胞介导的牛皮癣)和炎性皮肤病例如皮炎、湿疹、特异反应性皮炎、变应性接触性皮炎、荨麻疹;脉管炎(例如引起坏死的、皮肤的和过敏性脉管炎);嗜酸性肌炎、嗜酸性筋膜炎;伴有皮肤或器官白血球浸润的癌症。其中不合需要的炎性应答被抑制的其它疾病或病征可被治疗,包括但不限于:再灌注损伤、动脉粥样硬化、某些血液学恶性病变、细胞因子诱导的毒性(例如脓毒性休克、嗜伊红趋化原性休克)、多肌炎、皮肤肌炎。

        人或其它物种的可用趋化因子受体功能调节剂治疗的疾病或状况包括但不限于:免疫抑制,例如在患有免疫缺陷综合征如AIDS或其它的病毒感染的个体,经历引起免疫抑制放射疗法、化学疗法、用于自身免疫疾病的疗法或药物疗法(例如皮质类固醇疗法)的个体中;由于先天性的受体功能缺陷或其它原因引起的免疫抑制;和感染疾病例如牛皮癣病,包括但不限于蠕虫感染例如线虫(园线虫)、(鞭虫病、蛲虫病、蛔虫病、钩虫、类圆线虫病、旋毛虫病、丝虫病)、吸虫(吸虫)(恤吸虫病、华支睾吸虫病)、绦虫(绦虫)(棘球蚴病、午肉绦虫病、囊尾蚴病)、内脏蠕虫、内脏蚴虫偏头痛(例如弓蛔虫)、嗜酸性胃肠炎(例如异尖属、Phocanemasp.)和皮肤幼虫偏头痛(巴西钩口线虫、犬钩口线虫)。另外,上述炎性、变应性和自身免疫疾病的治疗也期待趋化因子受体功能的促进剂,如果人们期待传递足够的化合物以通过诱导趋化因子受体内在化引起在细胞上的受体表达减少或者以导致细胞迁移的错误指向的方式传递化合物。

        本发明化合物因此可用于治疗、预防、改善、控制或减少广泛范围的炎性和免疫调节性病症和疾病、变应性疾病、特异反应性疾病以及自身免疫病理学的风险。在具体的实施方案中,本发明涉及本发明化合物用于治疗、预防、改善、控制或减少自身免疫疾病例如类风湿性关节炎或牛皮癣关节炎的风险的应用。

        在另一个方面,本发明可用于评价趋化因子受体包括CCR-2的推定的特异性激动剂或拮抗剂。因此,本发明涉及这些化合物在制备和实施调节趋化因子受体活性的化合物的筛选实验中的应用。例如,本发明的化合物用于分离受体突变体,后者是优越的筛选更有效化合物的工具。另外,本发明的化合物用于建立或确定其它的化合物与趋化因子受体的结合位点,例如通过竞争性抑制。本发明的化合物也用于评价趋化因子受体包括CCR-2的推定的特异性调节剂。如本领域所认识到的,以上趋化因子受体的特异性激动剂和拮抗剂的充分评价因缺乏可利用的对这些受体具有高结合亲和力的非肽基(代谢抗性)化合物而受到阻碍。因此,本发明化合物是用于这些目的的可以购买获得的商业产品。

        本发明另外涉及用于制备在人和动物中调节趋化因子受体活性的药物的方法,所述方法包括使本发明的化合物与药用载体或稀释剂混合。

        发明另外涉及本发明化合物在治疗、预防、改善、控制或减少由逆转录病毒,特别是疱疹病毒或人免疫缺陷病毒(HIV)引起的感染的风险和治疗及延迟跟着发生的病理疾病例如AIDS的发作中的应用。治疗AIDS或者预防或治疗由HIV引起的感染被定义为包括但不限于治疗范围广泛的HIV感染状态:AIDS、ARC(AIDS相关并发症)、有症状和无症状两者、实际上或潜在地暴露于HIV。例如,本发明化合物用于治疗在被怀疑经例如血液输入、器官移植、体液置换、咬合、意外针状物刺入或者在手术期间暴露于患者血液引起的暴露于HIV后由HIV引起的感染。

        在本发明的一个优选方面,本发明化合物可用于抑制靶细胞的趋化因子结合于趋化因子受体比如CCR-2的方法,所述方法包括使靶细胞与一定量的有效抑制趋化因子与趋化因子受体结合的化合物接触。

        用以上方法治疗的受治疗者为哺乳动物,优选为人,男性或女性,其中趋化因子受体活性的调节是需要的。如在此使用的“调节”打算包括拮抗作用、激动作用、部分拮抗作用、反向激动作用和/或部分激动作用。在本发明的一个优选方面,调节指趋化因子受体活性的拮抗作用。术语“治疗有效量”意欲被研究人员、兽医、医生或其他临床医师探寻的对组织、系统、动物或人产生生物学或医学反应的本发明化合物的量。

        如在此使用的术语“组合物”打算包括包含以特定量存在的特定成分的产物以及直接或间接由以特定量存在的特定成分的组合产生的任何产物?!翱梢┯玫摹币庵冈靥?、稀释剂或赋形剂,必须与制剂中的其它成分相适配并且对其接受者无害。

        术语“给药”和/或“给予”化合物应理解为意指需要治疗的个体提供本发明的化合物。

        如在此使用的,术语“治疗”指治疗和预防或预防性治疗以上提及的疾病。

        调节趋化因子受体活性因而用于治疗、预防、改善、控制或减少炎性和免疫调节性病症和疾病,包括哮喘和变应性疾病,以及自身免疫病理学如类风湿性关节炎和动脉粥样硬化和以上指出的那些病理学的风险的联合疗法通过本发明化合物和已知用于这些应用的其它化合物的联合来阐述。

        例如,在治疗、预防、改善、控制或减少炎症的风险中,本发明化合物可与抗炎或镇痛药例如阿片激动剂、脂氧合酶抑制剂如5-脂氧合酶的抑制剂、环加氧酶抑制剂如环加氧酶-2抑制剂、白介素抑制剂如白介素-1抑制剂、NMDA拮抗剂、氧化氮抑制剂或氧化氮合成的抑制剂、非甾体抗炎药或抑制细胞因子的抗炎药一起使用,例如,与化合物如对乙酰氨基酚、阿司匹林、可待因、依那西普(embrel)、芬太尼、布洛芬、吲哚美辛、酮咯酸、吗啡、萘普生、非那西丁、吡罗昔康、甾体镇痛药、舒芬太尼、舒林酸、替尼达普等一起使用。相似地,本发明化合物可与疼痛缓解药;增效剂如咖啡因、H2-拮抗剂、西甲硅油、氧化铝或氢氧化镁;减充血药如去氧肾上腺素、苯丙醇胺、伪麻黄碱、羟甲唑啉、肾上腺素、萘甲唑啉、赛洛唑啉、丙己君或左-脱氧-麻黄碱;镇咳药如可待因、氢可酮、卡拉美芬、喷托维林或右美沙芬(dextramethorphan);利尿药和镇静性或非镇静性抗组胺药一起给药。

        同样地,本发明化合物可与用于治疗/预防/抑制或改善本发明化合物是有用的疾病或状况的其它药物联合使用。这样的其它药物可以通过途径和以常规使用的量,与本发明化合物同时或连续给药。当本发明化合物与一种或更多种其它药物同时使用时,除本发明化合物以外,还包含这样的其它药物的药物组合物为优选。因此,本发明的药物组合物包括除包含本发明化合物以外,还包含一种或更多种其它活性成分的那些药物组合物。

        可与本发明化合物联合给药(或者分开给药或者以在相同的药物组合物中给药)的其它活性成分的实例包括但不限于:(a)VLA-4拮抗剂,例如在US?5510332、WO?95/15973、WO?96/01644、WO96/06108、WO?96/20216、WO?96/22966、WO?96/31206、WO?96/40781、WO?97/03094、WO?97/02289、WO?98/42656、WO?98/53814、WO98/53817、WO?98/53818、WO?98/54207和WO?98/58902中描述的那些;(b)甾体类例如倍氯米松、甲泼尼龙、倍他米松、泼尼松、地塞米松和氢化可的松;(c)免疫抑制剂例如环胞菌素、他克莫司、雷帕霉素和其它的FK-506型免疫抑制剂;(d)抗组胺药(H1-组胺拮抗剂)例如溴苯那敏、氯苯那敏、右氯苯那敏、曲普利啶、氯马斯汀、苯海拉明、二苯拉林、曲吡那敏、羟嗪、甲地嗪、异丙嗪、阿利马嗪、阿扎他定、赛庚啶、安他唑啉、非尼拉明、美吡拉敏、阿司咪唑、特非那定、氯雷他定、地氯雷他定、西替利嗪、非索非那定、去乙氧羰基氯雷他定(descarboethoxyloratadine)等;(e)非甾体抗哮喘药例如β2-激动剂(特布他林、奥西那林、非诺特罗、异他林、沙丁胺醇、比托特罗和吡布特罗)、茶碱、色甘酸二钠、阿托品、异丙托溴铵、白三烯拮抗剂(乙鲁司特、孟鲁司特、普仑司特、伊拉司特、泊比司特、SKB-106203)、白三烯生物合成抑制剂(齐留通、BAY-1005);(f)非甾体抗炎药(NSAID)例如丙酸衍生物(阿明洛芬、苯嗯洛芬、布氯酸、卡洛芬、芬布芬、非诺洛芬、氟洛芬、氟比洛芬、布洛芬、吲哚洛芬、酮洛芬、咪洛芬、萘普生、嗯丙嗪、吡洛芬、普拉洛芬、舒洛芬、瘗洛芬酸和硫嗯洛芬)、乙酸衍生物(吲哚美辛、阿西美辛、阿氯芬酸、环氯茚酸、双氯芬酸、芬氯酸、芬克洛酸、芬替酸、呋罗芬酸、异丁芬酸、伊索克酸、oxpinac、舒林酸、硫平酸、托美丁、齐多美辛和佐美睃)、灭酸类衍生物(氟芬那酸、甲氧芬那酸、甲芬那酸、尼氟酸和托芬那酸)、联苯羧酸衍生物(二氟尼柳和氟苯柳)、昔康类(伊索昔康、吡罗昔康、舒多昔康和替诺昔康)、水杨酸酯类(乙酰水杨酸、柳氮磺吡啶)和吡唑酮类(阿扎丙宗、bezpiperylon、非普拉宗、莫非布宗、羟布宗、保泰松);(g)环加氧酶-2(COX-2)抑制剂;(h)磷酸二酯酶IV(DE-IV)抑制剂;(i)趋化因子受体尤其是CCR-1、CCR-2、CCR-3、CXCR-3和CCR-5的其它的拮抗剂;(j)降低胆固醇药物例如HMG-CoA还原酶抑制剂(洛伐他汀、辛伐他汀和普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀、罗苏伐他汀和其它的他汀类)、螯合剂(考来烯胺和考来替泊)、胆固醇吸收抑制剂(依泽替米贝)、烟酸、非诺贝酸衍生物(吉非贝齐、氯贝丁酯、非诺贝特和苯扎贝特)和丙丁酚;(k)抗糖尿病药例如胰岛素、磺酰脲类、双胍类(二甲双胍)、α-葡萄糖苷酶抑制剂(阿卡波糖)和格列酮类(曲格列酮和吡格列酮);(l)干扰素β的制剂(干扰素β-1α、干扰素β-1β);(m)其它的化合物例如5-氨基水杨酸和它们的前药、抗代谢药例如硫唑嘌呤和6-巯基嘌呤以及细胞毒的癌化学治疗药物。

        本发明化合物与第二种活性成分的重量比例可以变化并且依每一种成分的有效剂量而定。通常使用每一种成分的有效剂量。因此,例如,当本发明的化合物与NSAID联合时,本发明化合物与NSAID的重量比例通常在约1000∶1-1∶1000,优选为约200∶1-1∶200的范围内。本发明的化合物与其它活性成分的联合通常也在上述范围内,但是在每一种情况中,应使用每一种活性成分的有效剂量。

        在这样的联合中,本发明的化合物与其它活性药物可以分开或一起给药。另外,一种成分可在给予其它药物之前、同时或随后给药。

        本发明化合物可通过口服、胃肠外(例如肌内、腹膜内、静脉内、ICV、脑池内注射或灌输、皮下注射或埋入),通过吸入喷雾、鼻、阴道、直肠、舌下或局部给药途径给药,并且可单独或一起,以包含常规非毒性可药用的载体、佐剂和适合于每一种给药途径的媒介物的合适的剂量单位制剂配制。除了治疗温血动物例如小鼠、大鼠、马、牛、绵羊、狗、猫、猴等,本发明的化合物有效用于人中。

        用于给予本发明的化合物的药物组合物可便利地以剂型存在并且可通过药学领域熟知的任何方法制备。所有的方法包括使活性成分与构成一种或更多种辅助成分的载体混合在一起的步骤。通常,通过使活性成分与液体载体或细分的固体载体或两者均匀和紧密地混合在一起,然后如果必要,使产物成型为所需的制剂来制备药物组合物。除了药物组合物以外,活性的本发明化合物以足以对疾病的过程或状况产生所需作用的量被包括在内。如在此使用的,术语“组合物”打算包括包含以具体量存在的具体成分的产物以及其直接或间接由以具体量存在的具体成分的组合产生的任何产物。

        含活性成分的药物组合物可以适合于口服应用,例如作为片剂、糖锭剂(boches)、锭剂、含水或油混悬剂、可分散粉剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊或者糖浆剂或酏剂的形式存在。按照对药物组合物制备领域已知的任何方法可制备打算用于口服应用的组合物,并且这样的组合物可包含一种或更多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的物质,以提供药学上精致的和适口的制剂。片剂包含与非毒性可药用的适合于制备片剂的赋形剂混合在一起的活性成分。这些赋形剂可为例如惰性稀释剂如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠;制粒和崩解剂例如玉米淀粉或藻酸;粘合剂例如淀粉、明胶或阿拉伯胶和润滑剂例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂可为未包衣的或者它们可通过已知技术包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收,开且因此提供较长时间的持续作用。例如,可使用时间延迟原料如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。它们也可通过在美国专利4256108、4166452和4265874号中描述的技术包衣,以形成用于控制释放的渗透治疗片剂。

        用于口服应用的制剂也可作为其中活性成分与惰性固体稀释剂如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合在一起的硬明胶胶囊,或作为其中活性成分与水或油介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合在一起的软明胶胶囊存在。

        含水悬浮液包含与适合于制备含水悬浮液的赋形剂混合在一起的活性原料。这样的赋形剂为悬浮剂,例如羧基甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶;分散剂或甜味剂可为天然存在的磷脂,例如卵磷脂,或者环氧烷与脂肪酸的缩合产物例如聚氧乙烯硬脂酸酯,或者环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物例如十七碳乙烯氧基十六烷醇的缩合产物,或者环氧乙烷与衍生于脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯,或者环氧乙烷与衍生于脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物例如聚乙烯山梨糖单油酸酯。含水悬浮液也可包含一种或更多种防腐剂例如乙基或正丙基、对羟基苯甲酸酯,一种或更多种着色剂、一种或更多种矫味剂和一种或更多种甜味剂例如蔗糖或糖精。

        通过把活性成分悬浮于植物油例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油中,或悬浮于矿物油例如液体石蜡中,可配制油状悬浮液。油状悬浮液可包含增稠剂例如黄蜡、硬石蜡或鲸蜡醇??杉尤肜缫陨喜龅哪切┨鹞都梁徒梦都烈蕴峁┛煽诘目诜萍?。通过加入抗氧化剂例如抗坏血酸,这些组合物可被防腐。

        适合于通过加入水制备含水悬浮液的可分散粉剂和颗粒剂提供与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或更多种防腐剂混合在一起的活性成分。合适的分散或润湿剂和悬浮剂通过以上已经提及的那些举例说明。另外的赋形剂,例如甜味剂、矫味剂和着色剂,也可存在。

        本发明的药物组合物也可以以水包油乳剂的形式存在。油相可为植物油例如橄榄油或花生油,或者矿物油例如液体石蜡或这些油的混合物。合适的乳化剂可为天然存在的树胶例如阿拉伯胶或黄蓍胶、天然存在的磷脂例如豆油、卵磷脂和衍生于脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯例如山梨醇单油酸酯,和所述部分酯与环氧乙烷的缩合产物例如脱水聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯。乳剂也可包含甜味剂和矫味剂。

        糖浆剂和酏剂也可用甜味剂例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配制。这样的制剂也可包含湿润剂、防腐剂和矫味剂及着色剂。

        药物组合物可以以灭菌可注射含水或油状悬浮液的形式存在。按照已知技术,使用以上已经提及的那些合适的分散剂或甜味剂和悬浮剂可配制这个悬浮液。灭菌可注射制剂也可为在非毒性非肠道可接受的稀释剂或溶剂中的灭菌可注射溶液剂或悬浮液,例如作为在1,3-丁二醇中的溶液剂。在可接受的媒介物和溶剂中,可使用的为水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外,灭菌的固定油被常规用作溶剂或悬浮介质。为此目的,任何品牌的固定油可被使用,包括合成的单-或二甘油酯。另外,脂肪酸例如油酸发现在注射剂的制备中具有应用。

        本发明的化合物也可以用于直肠给药的栓剂形式给药。通过把药物与合适的非刺激性赋形剂混合可制备这些组合物,该赋形剂在常温下为固体但是在直肠温度下为液体并且因此在直肠熔化以释放药物。这样的原料为可可脂和聚乙二醇。

        对于局部使用,使用包含本发明的化合物的霜剂、软膏剂、凝胶剂、溶液剂或悬浮液等。(为了这个应用的目的,局部应用应包括口腔洗剂和漱口水)

        本发明的药物组合物和方法可另外包括如在此指出的通常用于治疗这样病理疾病的其它的治疗活性化合物。

        在治疗、预防、改善、控制或减少需要趋化因子受体调节的疾病的风险中,合适的剂量水平通常为约每天0.01-500mg/kg患者体重,其可以单或多剂量给药。优选地,剂量水平为每天约0.1-250mg/kg,或者为每天约0.5-100mg/kg。合适的剂量水平可为每天约0.01-250mg/kg、约每天0.05-100mg/kg,或每天约0.1-50mg/kg。在这个范围内,剂量范围可为每天0.05-0.5、0.5-5或5-50mg/kg。为了口服给药,组合物优选以包含1.0-1000mg的活性成分,优选2.0-500,更优选3.0-200,特别是1、5、10、15、20、25、30、50、75、100、125、150、175、200、250、300、400、500、600、750、800、900和1000mg活性成分的片剂形式提供,根据症状调节给予所治疗患者的剂量?;衔锟砂凑彰刻?-4次,优选每天一或两次的方案给药。

        然而,应理解对于任何具体患者的具体的剂量水平和给药频率可以改变并且将依多种因素而定,包括所使用的具体化合物的活性、所述化合物的代谢稳定性和作用时间长度、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药方式和次数、排泄速率、药物联合、具体病症的严重性和宿主经历的疗法。

        下面的反应方案和实施例中描述了制备本发明化合物的几种方法。原料是通过已知方法或者如下所示制得的。

        上述趋化因子活性调节剂1-4可通过两种几本途径中的一种成功地合成。根据其中的一种途径,在合适的活化后,将?;さ拇渴中?Eliel,E.E.,Wilen,S.H.,Stereochemistry?of?Organic?Compounds,John?Wiley?&?Sons,Inc.,New?York)氨基酸1-1与8-三氟甲基-1,2,3,4-四氢-6H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-6-酮(1-2,中间体3,或其类似物)偶联,然后除去?;せ?Greene,T.,Wuts,P.G.M.,Protective?Groups?inOrganic?Chemistry,John?Wiley?&?Sons,Inc.,New?York,NY?1991)。该途径如反应方案1A.所示。

        ???????????????????????反应方案1A

        在另一方法,反应方案1B中,将完全装配的纯手性3-氨基-取代的环戊烷甲酰胺1-6用酮1-5还原烷基化,如果需要的话,通过合适的色谱法或通过其它物理方法来分离所形成的非对映体。该环戊烷甲酰胺还可能携带3-氧代-基团(1-8),通过用合适的,如果需要的话,纯手性胺1-7进行还原胺化,可类似地将其转化成所需终产物。后一方法可不变地生成非对映体混合物,可通过合适的色谱法或其它物理方法来分离这些非对映体混合物。

        ???????????????????????反应方案1B

        这两种一般方法都具有它们的优点和缺点:反应方案1A中描述的合成途径的优点在于,手性合成步骤以及非对映体分离可以以大规模用易于获得的材料进行。酰胺形成是作为倒数第二个步骤进行的,减少了合成操作的数目,在所述合成操作中必须进行敏感的吡啶酮操作。另一方面,在反应方案1B中描述的合成途径使得在合成中有更大的可变性,并且通常更短。然而,该途径需要非对映体分离作为最后的步骤。

        反应方案2中描绘了第一种一般合成途径的实例。当R1基团是简单的或支链烷基例如异丙基,并且胺携带没有任何取代基的简单的脂环族基团时(R16=H),该合成顺序可以最成功地施用。

        根据该方法,将商购获得的(1R,4S)-4-氨基环戊烯甲酸的氨基用例如叔丁氧基羰基?;?Greene,T.,Wuts,P.G.M.,ProtectiveGroups?in?Organic?Chemistry,John?Wiley?&?Sons,Inc.,New?York,NY?1991),然后将包含在5元环内的双键饱和(2-3)。酯2-4可以通过用苄基溴将合适的酸式盐烷基化来生成,但是其它方法也是合适的。在标准酸性条件下除去?;せ?,形成了二苯甲酮席夫碱(2-6),以随后帮助引入R1基团。碱介导的2-6的C1-烷基化可从与氨基在同一侧发生,生成反式异构体,或者可从相反一侧发生(主产物),生成顺式异构体2-7。这些异构体可通过柱色谱法容易地进行,并且用所需的顺式异构体继续进行以后的操作。

        ???????????????????????反应方案2

        为了帮助分离和纯化2-8,在酸催化的席夫碱裂解之后,进行标准BOC-?;?2-8),在合适的?;ぶ?,在常用条件下除去BOC-基团。通过例如用合适的酮进行还原烷基化,可完成该分子的胺部分,获得2-10。必须?;?-11中的仲胺,三氟乙?;翘乇鸷鲜实???赏ü嘀址椒ń谢チ呀?,发现可采用钯催化的氢解,以获得2-12。

        反应方案2中还描绘了稍短一些的制备2-12的方法。根据该方法,如上所述将在2-13中的BOC?;せ?,在2-14与合适的酮例如四氢吡喃-4-酮之间进行还原胺化,生成完全的胺部分。然后将仲胺?;?,例如作为三氟乙酰胺?;て鹄?,在“一勺烩”钯催化的氢化中除去包含在该分子的环戊烷核内的双键以及苄基酯,获得2-12。

        当R16代表氢以外的取代基时,就产生另外的手性中心。这进一步增加了必须在合成操作期间分离的非对映体的数目。施用在反应方案1A中描绘的一般操作仍然是有利的。有关合成操作的顺序和特征类似于反应方案2描述的那些,并且方法描述在反应方案3中。根据该方法,将不饱和苄基酯2-14用合适的酮(在该实例中是3-甲基-四氢吡喃-4-酮)还原烷基化,获得3-1。该胺代表非对映体混合物,其分离在该阶段相当困难。因此,将混合物3-1通过C1-烷基化步骤,其中连接上R1取代基。这是通过碱介导的烯醇化物形成,然后用低级卤代烷烃烷基化来完成的??墒褂枚嘀旨罾床┐蓟?,六甲基二硅氮烷钾是特别有用的。因为烷化剂可以从与胺在相同或相反的一侧接近烯醇化物,所以由此形成了两种异构体产物(3-2)。在该阶段,将该混合物分离成各个成分是一个问题,因此,让该化合物直接进入下一步骤是有利的。通过将3-2与三氟乙酸酐在合适的碱创造性反应,将仲胺以三氟乙酰胺形式?;て鹄?。在该阶段,可通过硅胶柱色谱法将在烯醇化物烷基化步骤中产生的各顺式和反式异构体分离成两种非对映体。然后将顺式产物3-3氢化成饱和双键以及除去苄基酯?;せ?,获得3-4,或者通过制备手性柱色谱法将其分离成单独异构体(3-5和3-6)。制备手性柱色谱法可使用Chiralpak?AD柱(Diacel)和乙醇与己烷的混合物作为洗脱剂来容易地进行。如在3-3的情况下,在“一勺烩”氢化中除去苄基酯?;せ退??;蛘?,将不饱和苄基酯2-14在碱性氮上作为氨基甲酸叔丁酯3-9?;て鹄?,然后如上所述经由其烯醇化物来烷基化,获得顺式/反式异构体混合物??赏ü鲜龉杞褐追ń浞掷氤傻ザ赖姆嵌杂程?。然后将各自的顺式异构体3-10脱?;?,把使得胺3-11进行还原烷基化。然后如上所述将仲胺3-12作为三氟乙酰胺3-3?;て鹄?。

        ???????????????????????反应方案3

        对映体纯的样本3-7也可以通过这样的合成方法获得,其中使用合适的酮将苄基酯2-9还原烷基化,在该实例中,合适的酮是3-甲基-四氢吡喃-4-酮,获得3-12,反应方案3。将该异构体混合物转化成各自的三氟乙酰胺,通过小心进行的硅胶色谱分离将其分离。然后将3-13进行简单的例如氢解脱苄基化,获得酸中间体3-7。

        其制备描述在该文件中的更大数目的中间体和实例可按照反应方案1B中描绘的一般方法来合成,根据该方法,用酮1-5将完全装配的氨基衍生物1-6还原烷基化,或者,将3-氧代-衍生物1-8还原胺化,获得所需产物。前一方法易于适用于这样的情况,其中R1是低级烷基例如三氟乙基,并且酰胺键可通过简单的偶联方法产生。相关化学步骤总结在反应方案4中。

        ???????????????????????反应方案4

        根据该方法,将可商购获得的(1S)-(+)-2-氮杂二环[2.2.1]庚-5-烯-3-酮(4-1)氢化,以把5元环内存在的双键饱和,并且在酸性条件下将内酰胺水解打开。酸催化的酯化引入甲基酯(4-3),并且可以如上所述将氨基以席夫碱形式?;て鹄???梢允褂们考罾缍毂被纬甚ハ┐蓟?,然后用合适的卤代烷烃烷基化。前一步骤使得在环戊烷环的C1上的立体化学混乱,因为烷化剂可从与C3的氨基在相同一侧(生成反式产物)或相反一侧(生成顺式产物)接近烯醇化物。然后可用酸将亚胺?;せ呀?,然后用叔丁氧基羰基再?;?4-5)。在该阶段,可使用柱色谱法将两种异构体容易地分离,然后用所需的顺式异构体进一步操作。碱催化的酯水解将释放羧基,标准酰胺键形成将获得异喹啉酮1-2。然后可用酸除去BOC-?;せ?,获得1-6。

        在这种情况下,当结构1-4中的R1基团代表更复杂的取代的烷基时,或者,当其含有手性中心时,通过完全装配的中间体1-1来合成上述趋化因子活性调节剂,反应方案1A。反应方案5中描述了该方法的一个实例。在这种情况下,R1基团代表1-苯甲?;?1-乙基。根据该方法,将3-氧代环戊烷甲酸(Stetter,H.,Kuhlmann,H.,LiebigsAnn.Chem.,1979,7,944-9)转化成其叔丁酯??墒褂枚嘀址椒ɡ唇懈米?。在较小规模,使用O-叔丁基-N,N’-二异丙基脲是特别有利的。然后将3-氧代基团作为缩醛?;て鹄?,烯醇化物(用强碱形成的)与乙醛之间的Claisen缩合就形成所希望的C1-羟基乙基中间体5-3。该缩合可用多种同系醛和酮成功地进行。在该阶段,有利的是,除去缩醛?;せ?酸性条件),然后用例如苯甲?;;げ嗔吹聂腔?5-6)。该中间体含有两个手性中心,因此由两个非对映体对(苏型和赤型)组成。这些非对映体可使用硅胶柱色谱法来成功地分离,然后使用含有C1-(S)-绝对立体化学的非对映体对(5-6)进一步操作。然后通过用手性或如果可能的话纯手性胺(1-7)进行还原烷基化来完成氨基。使用硅胶柱分离所需的顺式非对映体,将并且使用半制备chiralcel?OD柱将该侧链非对映体的混合物分离出单独的对映体。为了保证胺和羧基都可以正交操作,将仲胺以三氟乙酰胺形式?;て鹄?5-8)。这时可除去酯?;せ?,并且这将提供倒数第二个酸5-9。

        ???????????????????????反应方案5

        在这种情况下,当希望保留包含在环戊烷核内的双键时,经由反应方案1B中描绘的途径来进行是有利的。根据该方法(反应方案6),将纯手性不饱和4(S)-氨基环戊烷甲酸甲酯(6-1)以2,5-二甲基吡咯的形式?;て鹄?,将可通过将胺与2,5-戊二酮在高温下反应来获得(6-2)。然后将用强碱形成的烯醇化物用合适的卤代烷烃,在该实例中用2-碘丙烷烷基化。然后再一次使用柱色谱法分离出所希望的顺式产物,并且在该合成中进一步进行??稍诙嘀痔跫陆悯チ呀?,在该实例中,可成功地使用高温下碱催化的水解。酰胺键形成需要酸的活化,可通过形成混合酸酐,在该实例中使用甲磺酰氯形成混合酸酐来实现酸的活化。根据胺的性质,活化的酸将在室温或稍高温度下反应以形成所需的酰胺。在该制备阶段,可使用例如羟基胺盐酸盐溶液于高温下除去胺?;せ?。

        ???????????????????????反应方案6

        最终的趋化因子活性调节剂可通过将这些预先获得的中间体与胺或酮根据一般反应方案1A和1B反应来合成。用于这些转化的简单的胺或酮可商购获得或者通过下述方法获得。

        关键的8-三氟甲基-1,2,3,4-四氢-6H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-6-酮的制备描述在反应方案7中。根据其中一个开发的方法(反应方案7A),将商购获得的2,6-二氯-4-三氟甲基吡啶与叔丁醇钾反应。在该转化中,起始吡啶中存在的一个氯原子被醇盐置换,形成掩蔽的吡啶基团。在下一步中,第二个氯被氰化物基团置换,该转化最好使用Pd0催化来进行。腈的氢化生成氨基甲基,然后与邻硝基苯磺酰氯反应,生成7-5。由于磺酰胺基团的酸性特征,可使用弱碱(例如碳酸钾)来用1,2-二溴乙烷进行所希望的N-烷基化,并且由于掩蔽的吡啶基团,烷化剂可大大过量使用。使用酸进行吡啶的去掩蔽,碱介导的闭环完成第二个环,7-8。最好用苯硫酚钾来进行磺酰胺的除去,并且为了帮助产物分离,在标准条件下使用BOC2O将粗产物?;?。这时可通过例如快速柱色谱法纯化产物,并且标准酸催化的BOC-裂解完成该合成。

        ???????????????????????反应方案7A

        另一方法描述在反应方案7B中。在标准条件下使用NBS将商购获得的4-三氟甲基-6-氯-2-甲基吡啶进行侧链溴化。然后用叠氮基置换卤化物(7-13),将其还原成各自的胺。之后可如上所述进行磺酰胺形成和随后的烷基化。随后的芳环氯置换依赖于通过分子内闭环的邻近氮的活化。形成该吡啶物质7-17之后,在高温下使用水来影响所希望的置换。这避免了不希望的副反应,在该转化期间采用酸性条件。加入抗氧化剂例如L-抗坏血酸来保持高产率是有利的。然后如上所述进行最后一组操作。

        ???????????????????????反应方案7B

        反应方案7C中描述了另一种合成方案,通过该方案,可合成吡啶酮7-10。根据该方法,二二取代的乙炔在一系列分子内亲核加成中环合,在一连串过程中形成环系。根据该方法,将单?;さ囊叶?-19与硝基苯磺酰氯7-18如上所述进行反应。将酸性磺酰胺基团在弱碱例如碳酸钾存在下用炔丙基溴进行烷基化。然后β-碘γ-三氟丙酸乙酯的Pd0催化的偶联引入吡啶环的构成单元。这时除去BOC-?;せ?,然后加入氯化汞(II)以引起环合。随后的步骤如上所述。

        ???????????????????????反应方案7C

        在这些合成操作中经常使用2,3,5,6-四氢吡喃-4-酮的某些3-取代的类似物。这些化合物是购买的或者根据已知方法制备的。然而,为了制备某些尤其是纯手性物质,必须独立地开发合成方法。反应方案8A和8B显示了这些方法的实例。

        手性3-甲氧基四氢吡喃-4-酮的制备描述在反应方案8A中。根据该反应方案,将商购获得的2,3,5,6-四氢吡喃-4-酮用强碱处理,以形成各自的烯醇化物,可将烯醇化物?;?,以获得各自的O-苯甲?;┐济?-2。手性环氧化可以用L-Epoxone成功地进行,次要的不希望的对映体可以通过手性HPLC(Chiralpak?AD)容易地分离。纯手性环氧-酯的酸催化的甲醇分解,生成3-羟基-4,4-二甲氧基-四氢吡喃8-4。

        ???????????????????????反应方案8

        其各自的甲基醚可以通过标准Williamson醚化来形成。显然,该方法也适于制备外消旋体。

        3-甲基-2,3,5,6-四氢吡喃-4-酮和相应的对映体纯的4(S)-氨基-3(R)-甲基-2,3,5,6-四氢吡喃的制备描述在反应方案8B中。

        ???????????????????????反应方案8B

        该合成方案用上述四氢吡喃酮8-1开始,使用六甲基二硅氮烷锂将其转化成其烯醇化物,用甲基碘进行烷基化??赏ü枚郊装方谢乖坊?,然后催化裂解掉二苯甲基来引入氮。然后可用例如苄氧基羰基将所得胺8-8?;?,可使用柱色谱法分离出不希望的(次要)反式异构体。各个单独的异构体可使用Chiralpak?AD柱,通过制备手性HPLC分离来获得。苄氧基羰基的裂解可使用披钯炭作为催化剂通过氢来容易地进行。

        可使用其制备如上所述的中间体,按照反应方案1A和1B中描绘的一般合成途径来制备最终的趋化因子活性调节剂。

        下面是用于制备在下列实施例中使用的化合物或可用来代替不能商购获得的在下列实施例中使用的化合物的化合物的代表性方法。

        在某些情况下,为了有助于反应或避免不希望的反应产物,可改变进行上述反应方案的顺序。提供下列实施例仅是为了举例说明,并且不是限制本发明。

        溶液的浓缩通常在减压下于旋转蒸发仪中进行??焖偕追ㄔ诠杞?230-400目)上进行。除非另有说明,在CDCl3溶液中获得NMR光谱。偶合常数(J)的单位为赫兹(Hz)。缩写:二乙基醚(乙醚)、三乙胺(TEA)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)、饱和水溶液(sat′d)、室温(rt)、小时(h)、分钟(min)。

        ???????????????????????中间体1

        方法A

        步骤A

        将叔丁醇钾(13.16g,117.29mmol)在无水二甲基甲酰胺(60mL)中的溶液冷却至0℃,滴加2,6-二氯-4-三氟甲基吡啶(Lancaster,12184)(16.89g,78.20mmol)在二甲基甲酰胺(40mL)中的溶液,继续在0℃搅拌2小时。通过倒入饱和氯化铵溶液(100mL)内来中止反应,用己烷(3×100mL)萃取粗产物。将合并的有机相干燥(无水硫酸镁)并将溶剂蒸发至干。通过梯度硅胶柱色谱进一步纯化产物,使用乙酸乙酯/己烷混合物作为洗脱剂,将乙酸乙酯浓度逐渐从0增加至10%,获得了16.54g(65.21mmol,84%)。1H?NMR(500MHz,CDCl3):7.04(s,1H),6.80(s,1H),1.62(s,9H).

        步骤B

        将得自前一步骤的氯化物(11.14g,44mmol)、氰化锌(10.33g,88mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(3.90g,3.52mmol)在无水二甲基甲酰胺(50mL)中的混合物通过氮气/真空循环来充分脱气,在95℃搅拌过夜。通过倒入200mL水内来中止反应,把产物萃取到己烷内。经由硅藻土塞过滤有机层,蒸发至干,获得了12.10g含有三苯基膦作为主要污染物的粗产物。将该残余物溶解在四氢呋喃(50mL)中。加入过氧化氢水溶液(10mL,30%),将该混合物在室温搅拌30分钟。将溶剂蒸发至干,通过在步骤A中描述的柱色谱法(乙酸乙酯在己烷中的混合物,0-5%)将产物与三苯基膦氧化物分离开。根据该方法,获得了4.59g(18.79mmol,43%)纯产物。1H?NMR(500MHz,CDCl3):7.40(s,1H),7.09(s,1H),1.63(s,9H).

        步骤C

        将得自步骤B的腈(4.39g,18mmol)和阮内镍(27g)在乙醇(160mL)与氢氧化铵水溶液(40mL)的混合物中的溶液在帕尔摇动器内于50psi的压力下氢化4小时。过滤出催化剂,在旋转蒸发仪上除去溶剂。所得粗产物(4.01g)不用进一步纯化直接用于下一步骤。

        步骤D

        将得自前一步骤的胺(997mg,4.01mmol)和二异丙基乙胺(1.40mL,8.03mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液冷却至0℃,通过注射器加入2-硝基苯磺酰氯(Aldrich)在二氯甲烷(10mL)中的溶液。将该反应混合物在没有冷却的情况下搅拌30分钟,用水中止反应。用二氯甲烷(3×30mL)萃取粗产物,将合并的有机萃取液干燥(硫酸镁),并将溶剂蒸发至干。将残余物(1.9261g)通过如上所述的硅胶柱进行纯化,使用0-80%的乙酸乙酯进行梯度洗脱。通过该方法获得了964mg(2.15mmol,53%)纯产物。1H?NMR(500MHz,CDCl3):8.08(dd,J=7.3,1.1Hz,1H),7.84(d,J=7.6Hz,1H),7.70(m,2H),6.92,(s,1H),6.73(s,1H),6.25(bt,J=5.26Hz,1H),4.40(d,J=6.0Hz,2H),1.58(s,9H).

        步骤E

        将其合成描述在步骤D中的磺酰胺(333mg,0.769mmol)、碳酸钾(1.29g,15.38mmol)在二甲基甲酰胺(6mL)中的混合物用二溴乙烷(1.44g,7.69mmol)处理,在60℃加热2小时。将该反应混合物倒入30mL水内,用己烷(3×30mL)萃取。将合并的有机相用盐水回洗,用无水硫酸镁干燥,蒸发至干,获得了336.8mg(0.623mmol,82%)纯产物。1H?NMR(500MHz,CDCl3):8.02(dd,J=7.8,1.0Hz,1H),7.70(bm,3H),6.94(s,1H),6.79(s,1H),4.68(s,2H),3.82(t,J=7.3Hz,2H),3.38(t,J=7.6Hz,2H),1.58(s,9H).

        步骤F

        向得自前一步骤的叔丁基醚(330mg,0.611mmol)在二氯甲烷(9mL)内的溶液中加入三氟乙酸(1.0mL),将该混合物在室温搅拌15分钟。将溶剂蒸发至干,用己烷稀释残余物,蒸发几次,获得了367mg灰白色固体形式的粗产物。1H?NMR(500MHz,DMSO-D6)):8.07(d,J=8.01Hz,1H),7.97(d,J=J=7.78Hz,1H),7.86(t,J=7.6Hz,1H),7.79(t,J=7.78Hz,1H),4.55(s,2H),3.81(t,J=6.86Hz,2H),3.56(t,J=6.87Hz,2H).

        步骤G

        将得自前一步骤的溴化物(164mg,0.338mmol)在THF(12mL)中的溶液和无水碳酸钾(140mg,1.014mmol)通过氮气/真空循环来充分脱气,在室温搅拌3小时。将该反应混合物用乙醚(50mL)稀释,用含有3%L-抗坏血酸的10%柠檬酸水溶液中止反应。将水层再萃取3次,合并有机相,用无水硫酸镁干燥,真空除去溶剂,获得了108.3mg(0.269mmol,80%)纯产物。1H?NMR(500MHz,CDCl3):8.09(dd,J=7.6,1.6Hz,1H),7.75(m,4H),6.77(s,1H),6.29(s,1H),4.60(s,2H),4.23(t,J=5.8Hz,2H),3.78(t,J=6.0Hz,2H).

        方法B

        步骤A

        将2-氯-6-甲基-4-三氟甲基吡啶(21.18g,108.3mmol,MaybridgeCD?10452)、N-溴琥珀酰亚胺(21.20g,119.2mmol,Aldrich)在四氯甲烷(200mL)中的溶液于轻微回流下搅拌,同时滴加2,2’-偶氮二异丁腈(1.87mL)在四氯甲烷(50mL)中的溶液。继续加热3小时,然后让该反应混合物冷却至室温,用水(4×100mL)洗涤,用无水硫酸镁干燥并蒸发至干。将粗产物(34g)通过硅胶柱纯化,使用乙酸乙酯/己烷混合物洗脱,其中乙酸乙酯浓度从0%逐渐增加至分离结束时的5%。以该方式获得了:9.6g?2-(α,α-二溴甲基)-6-氯-4-三氟甲基吡啶,13.1g所需的2-(α-溴甲基)-6-氯-4-三氟甲基吡啶(44%)和9.03g未反应的原料。

        2-(α,α-二溴甲基)-6-氯-4-三氟甲基吡啶:1H?NMR(500MHz,CDCl3):7.95(s,1H),7.53(s,1H),6.62(s,1H).2-(α-溴甲基)-6-氯-4-三氟甲基吡啶:1H?NMR(500MHz,CDCl3):7.62(s,1H),7.51(s,1H),4.55(s,2H).

        步骤B

        将得自前一步骤的溴化物(3.78g,13.62mmol)和叠氮化钠(8.85g,136.2mmol)在二甲基甲酰胺(15mL)中的混合物于室温和氮气下搅拌24小时。加入水(50mL),用己烷∶乙醚/9∶1(3×50mL)混合物萃取产物。将合并的有机相用无水硫酸镁干燥,真空除去溶剂。如步骤1中所述进一步纯化残余物(3.75g),但是在纯化结束时乙酸乙酯的浓度达到20%。以该方式可获得2.51g(78%)纯产物。1H?NMR(500MHz,CDCl3):7.55(s,1H),7.53(s,1H),4.61(s,2H).

        步骤C

        将得自前一步骤的叠氮化物(10.4g,44.25mmol)和三苯基膦(13.93g,53.11mmol)在含有10mL水的THF(200mL)中的溶液于室温搅拌过夜,然后将其在60℃加热1小时。将溶剂真空蒸发,把残余物溶解在100mL?2N?HCl中。将非碱性副产物用二氯甲烷(4×50mL)萃取,将合并的有机萃取液用2N?HCl回洗。将合并的有机相经由硅藻土过滤,并蒸发至干,获得了盐酸盐形式的粗产物。其不用任何进一步纯化直接用于下一步骤。

        步骤D

        将胺盐酸盐(6.07g,24.57mmol)和2-硝基苯磺酰氯(5.44g,24.57mmol)在甲苯(100mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)的混合物中的溶液剧烈搅拌3小时。分离出有机层,用二氯甲烷萃取水层。将合并的有机萃取液用无水硫酸镁干燥,真空除去溶剂。通过硅胶柱快速色谱法进一步纯化粗产物(11.05g),使用二氯甲烷(100%)作为洗脱剂,获得了6.13g(63%)纯产物。1H?NMR(500MHz,CDCl3):8.01(dd,J=7.8,1.4Hz,1H),7.91(dd,J=7.8,1.1Hz,1H),7.73(dt,J=7.6,1.4Hz,1H),7.67(dt,J=7.8,1.4Hz,1H),7.49(s,1H),7.38(s,1H),6.46(t,J=6.2Hz,1H),4.56(d,J=6.5Hz,2H).

        步骤E

        将得自前一步骤的酰胺(3.0g,7.58mmol)、二溴乙烷(3.3mL,37.9mmol)和无水碳酸钾(10.47g,75.8mmol)在DMF(25mL)中的溶液于60℃搅拌2小时。让该反应混合物冷却至室温,通过倒入10%柠檬酸水溶液(200mL)来中止反应。将产物用己烷和乙醚的混合物(4∶1,4×100mL)萃取。将合并的有机萃取液用无水硫酸镁干燥,真空除去溶剂。将粗产物(5.91g)通过硅胶柱色谱进一步纯化,使用二氯甲烷(100%)作为洗脱剂。以该方式获得了1.876g(49%)纯产物。其不耽搁直接用于下一反应。1H?NMR(500MHz,CDCl3):8.07(dd,J=7.8,1.6Hz,1H),7.70(bm,3H),7.49(s,1H),7.44(s,1H),4.82(s,2H),3.82(t,J=7.3Hz,2H),3.50(t,J=7.1Hz,2H).

        步骤F

        将得自前一步骤的溴化物(1.87g,3.72mmol)和L-抗坏血酸(1.1g,6.23mmol)在乙酸(25mL)和水(25mL)的混合物中的溶液于110℃搅拌1小时。将溶剂蒸发至干,把残余物水(100mL)与二氯甲烷(100mL)之间分配。将水相用DCM萃取4次,浓缩(2.51g)并如上所述通过梯度色谱法纯化,使用0-100%的乙酸乙酯梯度。将产物(952mg,67%)通过用乙醚研制来脱色,获得了899mg灰白色固体。该化合物的光谱和色谱特性都与标准样品匹配。

        方法C

        步骤A

        于0℃,将10.0g(60.2mmol)4,4,4-三氟-2-丁酸乙酯在乙醚(150ml)中的溶液用HI(80.0mmol,10.01mL,57%水溶液)处理,将该混合物在0℃搅拌1小时。在室温反应1小时后,用硫代硫酸钠水溶液中止反应,用碳酸氢钠水溶液萃取。将有机层用盐水洗涤,干燥(MgSO4),过滤并真空浓缩?;竦昧吮颈晏獠?不用进一步纯化),为黄色油状物,14.6g(82%)。1H?NMR(CDCl3,400MHz):δ7.11(s,1H),4.24-4.30(q,2H),1.29-1.33(t,3H).

        步骤B

        于0℃和氮气氛下,向10.0g(62.4mmol)N-(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯在无水DCM(200ml)内的搅拌着的溶液中加入26.0ml(187.2mmol)三乙胺,然后以少量多次的方式加入2-硝基苯磺酰氯。然后将所得澄清黄色溶液在0℃搅拌30分钟,之后在室温搅拌2小时。将溶剂蒸发,把所得油状物用乙醚稀释,用水(×2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤,干燥(MgSO4)并真空浓缩?;竦昧吮颈晏獠?1.49g(100%),为油状物,不用进一步纯化。1H?NMR(CDCl3,500MHz):δ8.14-8.16(m,1H),7.88-7.90(m,1H)7.75-7.78(m,2H),4.86(b,1H),3.28-3.31(t,2H),3.24-3.26(t,2H),1.44(s,9H).LC-MS:C13H19N3O6S[M+H]+的计算值:346.10,实测值:346.25.

        步骤C

        将21.40g(61.96mmol)磺酰胺中间体(其制备描述在步骤B中)和碳酸钾(17.10g,123.9mmol)在无水DMF(200ml)中的悬浮液冷却至0℃,通过注射器缓慢地加入炔丙基溴。将该混合物在0℃搅拌30分钟,在室温搅拌2小时。将所得混合物用乙酸乙酯稀释,用水萃取。将合并的有机层用盐水洗涤,干燥(MgSO4),并真空浓缩。通过快速色谱法纯化(洗脱剂是20%乙酸乙酯/己烷),获得了本标题化合物(22.76g,96%),为固体。1H?NMR(CDCl3400MHz):δ8.01-8.04(m,1H),7.60-7.68(m,3H),4.47(b,1H),4.22(s,2H),3.48-3.52(t,2H),3.33-3.35(t,2H),2.14(s,1H),1.39(s,9H).

        步骤D

        在氮气氛下,向火焰干燥的250ml三颈圆底烧瓶内加入14.6g(49.65mmol)碘代中间体(其合成描述在步骤A中)、0.895g(4.51mmol)碘化铜(I)、2.62g(2.26mmol,5mole%)[(Ph3P)3]4Pd和24.95g(180.56mmol)碳酸钾。加入无水THF(125ml),然后加入17.3g(45.14mmol)得自步骤C的炔烃,将所得混合物在70℃搅拌5小时。过滤出过量碳酸钾,将所得黑色滤液浓缩。通过快速色谱法纯化(洗脱剂是15-25%乙酸乙酯/己烷),获得了17.69g(71%)本标题产物,为油状物。1H?NMR(CDCl3400MHz):δ8.00-8.02(m,1H),7.64-7.59(m,3H),6.55(s,1H),4.69(b,1H),4.52(s,2H),4.18(q,2H),3.55-3.58(t,2H),3.36-3.38(t,2H),1.39(s,9H),1.24-1.30(t,3H).LC-MS:C22H26F3N3O8S[M+H]+的计算值:550.14,实测值:450.05,(m-100).

        步骤E

        在0℃,将得自前一步骤的BOC-?;さ陌?17.69g,32.19mmol)在EtOAc(100ml)中的溶液用200ml?EtOAc/HCl的饱和溶液处理,将该混合物搅拌2小时。将溶剂蒸发,获得了14.70g本标题化合物,为黄褐色固体结晶(HCl盐)。LC-MS:C17H18F3N3O6S[M+H]+的计算值:450.09,实测值:450.05.

        步骤F

        在室温和氮气氛下,将得自前一步骤的炔烃(14.6g,30.04mmol)在无水1,4-二氧杂环己烷(100ml)内的搅拌着的溶液用0.81g(3.00mmol)氯化汞(II)和8.22mL(60.08mmol)三乙胺处理。将所得悬浮液于室温搅拌5分钟,然后在65℃搅拌30分钟,将溶剂蒸发。通过快速色谱法纯化(用15-35%乙酸乙酯/甲基叔丁基醚洗脱),获得了10.09g(83%)本标题化合物(用乙醚研制的)。1H?NMR(CDCl3500MHz):δ8.09-8.12(dd,1H),7.72-7.80(m,3H),6.79(s,1H),6.29(s,1H),4.61(s,2H),4.24-4.26(t,2H),3.78-3.80(t,2H).LC-MS:C15H12F3N3O5S[M+H]+的计算值:404.04,实测值:404.05.

        ???????????????????????中间体2

        向250mL反应烧瓶内加入碳酸钾(8.55g,61.88mmol),在高度真空下进行火焰干燥。让其在氮气氛下冷却至室温。向其中加入固体中间体1(8.32g,20.63mmol),将该反应烧瓶置于静态氮气氛下,通过注射器加入DMF(50mL)。通过真空/氮气循环将该悬浮液脱气,在室温通过注射器加入苯流酚(2.65mL,25.8mmol)。继续在室温搅拌1小时,之后HPLC分析证实磺酰胺原料消失。加入固体BOC2O(13.50g,61.88mmol),将该悬浮液于室温再搅拌3小时。将该反应混合物用乙醚(300mL)稀释,通过倒入柠檬酸(100g)和L-抗坏血酸(25g)在500mL水中的溶液内来中止反应。用乙醚(5×100mL)萃取产物,将合并的萃取液用无水硫酸钠干燥,真空除去溶剂。将残余物(22g)通过梯度MPLC纯化,使用乙酸乙酯-己烷混合物(0-100%乙酸乙酯)作为洗脱剂,获得了4.95g(75%)纯产物。1HNMR(CDCl3,500MHz):6.76(s,1H),6.24(s,1H),4.55(s,2H),4.22(t,J=5.7Hz,2H),3.70(bt,J=5.3Hz,2H),1.42(s,9H).LC-MS:C14H17F3N2O3[M+H+]的计算值:319.12实测值:319.10.

        ???????????????????????中间体3

        将中间体2(4.54g,14.26mmol)在20mL?4N?HCl的二氧杂环己烷溶液中的溶液于室温搅拌2小时。真空除去溶剂,将残余物与甲苯一起共蒸馏几次,在高度真空下干燥直至不再有进一步的重量损失?;竦昧搜嗡嵫涡问降乃璨?3.65g,100%)。把该固体在室温用50mL乙醚研制并过滤,实现了进一步的纯化(2.87g,79%,灰白色粉末)。LC-MS:C9H9F3N2O[M+H+]的计算值:219.07,实测值:219.05.

        ???????????????????????中间体4

        方法A

        步骤A

        将(1R,4S)-4-氨基-环戊-2-烯甲酸(127g,1.0mol)、水(250mL)、碳酸氢钠(168g,2.0mol)和THF(750mL)的混合物搅拌30分钟,然后加入固体Boc2O(230g,1.05mol)。继续搅拌一个周末,过滤并蒸发以除去THF。在0℃,向残余物中加入2N盐酸(~500mL)直至pH=3.0。通过过滤收集所得沉淀,用水洗涤,并真空干燥过夜。以该方式获得了白色固体形式的酸需要的酸(227g,100%)。1H?NMR(400MHz,CD3OD):5.95(m,1H),5.79(m,1H),4.80(br?s,1H),3.45(m,1H),2.50(m,1H),1.79(m,1H),1.44(s,9H).

        步骤B

        将酸(步骤A,方法A,中间体4)(227g,1.0mol)和10%Pd/C(5.0g)在500mL甲醇中的溶液于50lb氢气下氢化1小时。通过过滤除去催化剂,将滤液蒸发至干。把残余物溶解在二氯甲烷中,用无水硫酸钠干燥。将滤液蒸发至干,并真空干燥?;竦昧吮颈晏饣衔?,为浅黄色固体(226.0g,99%)。LC-MS:C11H19NO4[M+H+]的计算值:230,实测值:230.13718080890

        步骤C

        向酸(步骤B,方法A,中间体4)(226.0g,1.0mol)在500mLDMF内的机械搅拌着的溶液中加入固体碳酸钾(210g,1.5mol)。将所得混合物搅拌20分钟,然后一次性加入纯净的苄基溴(118mL,1.0mol)。观察到放热反应。于室温搅拌3小时后,将整个混合物倒入冰水混合物(1000mL)内,用乙醚(2×800mL)萃取粗产物。将合并的有机层用水洗涤,用无水硫酸钠干燥,过滤并蒸发,获得了黄色固体。将该固体与4N?HCl/二氧杂环己烷(400mL)混合,搅拌过夜并浓缩。通过过滤收集所得固体,用乙醚洗涤,并真空干燥?;竦昧搜嗡嵫涡问降谋颈晏獠?140g,55%)。1H?NMR(400MHz,CD3OD):5.15(s,2H),3.65(m,1H),3.02(q,J=8Hz,1H),2.50(m,1H),2.15(m,1H),2.05(m,2H),1.90(m,1H),1.75(m,1H).

        步骤D

        将氨基苄基酯盐酸盐(步骤C,方法A,中间体4)(127g,0.5mol)悬浮在500mL二氯甲烷中。加入二苯甲酮亚胺(91g,0.5mol)。将所得混合物搅拌过夜,过滤以除去无机盐。将滤液用水和盐水洗涤,用硫酸钠干燥并蒸发至干。将残余物溶解在200mL甲苯中,再次蒸发。将该操作再重复一次?;竦昧?1S,3R)-3-[(二苯基亚甲基)氨基]环戊烷甲酸苄酯(178g),为棕色油状物,不用进一步纯化用于下一步骤。1H?NMR(400MHz,CDCl3):1.80(m,1H),1.95(m,2H),2.15(m,2H),2.50(m,1H),2.89(m,1H),3.61(m,1H),5.20(s,2H),7.18(d,2H),7.38(m,8H),7.47(m,3H),7.64(d,2H)。

        步骤E

        在氮?;て障?,将在300mL?THF中的席夫碱(步骤D,方法A,中间体2)(76.6g,200mmol)冷却至-78℃。在搅拌下,用20分钟加入LDA(2.0M,110mL,220mmol)在庚烷中的溶液。将该混合物在-78℃搅拌30分钟,加入68mL异丙基碘(440mmol)在50mL?THF中的溶液。继续搅拌30分钟。通过移去冷却浴让反应温度升至0℃。搅拌2小时后,将该反应混合物蒸发以除去THF。将残余物溶解在乙醚(1000mL)中,用水和盐水洗涤,用硫酸钠干燥并蒸发。将粗产物溶解在500mL?THF中,与400mL?1N?HCl混合,搅拌1小时,在50℃蒸发以除去THF。将水溶液用己烷(3×)萃取,用饱和碳酸钠水溶液碱化(pH>9),与Boc2O(53g)在500mL二氯甲烷中的溶液混合,搅拌30分钟。分离出有机相,用二氯甲烷(3×)萃取水相。将合并的有机相用硫酸钠干燥,并蒸发。通过快速色谱法纯化残余物(10%EtOAc/己烷),获得了本标题化合物,为顺式和反式异构体的混合物(~1∶1,24g)。在MPLC上进一步纯化(5%EtOAc/己烷),获得了单独的顺式异构体(快洗脱下来的,5.0g)和反式异构体(慢洗脱下来的,4.3g)。ESI-MS,C21H31NO4的计算值:361;实测值:362(M+H)+.

        步骤F

        将上述顺式-Boc氨基酯(1.25g,3.45mmol)与20mL?4N?HCl/二氧杂环己烷一起搅拌1小时,蒸发并在高度真空下干燥,获得了(1S,3R)-3-氨基-1-异丙基环戊烷甲酸苄酯盐酸盐(1.05g,100%).ESI-MS,C16H23NO2的计算值:261;实测值:262(M+H)+.

        步骤G

        将上述氨基酯(HCl?salt,1.05g,3.45mmol)、四氢-4H-吡喃-4-酮(1.0g,10mmol)、分子筛(4,1.0g)、DIEA(0.78g,6mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(1.33g,6mmol)在30mL二氯甲烷中的混合物搅拌过夜。用饱和碳酸钠水溶液中止反应,过滤并除去不溶物。将粗产物萃取到二氯甲烷内,用无水硫酸钠干燥,蒸发并在高度真空下干燥。粗产物不用进一步纯化直接用于下一步骤.

        步骤H

        向氨基酯粗产物(步骤G,方法A,中间体4)(6.85g,19.84mmol)、Et3N(5.6mL,39.68mmol)和DCM(50mL)的混合物中缓慢地加入TFAA(6.91mL,49.6mmol)。将该反应于室温搅拌1小时。将其用1N?HCl和盐水洗涤,用无水MgSO4干燥,并真空浓缩。粗产物通过MPLC纯化(20/80,EtOAc/己烷),获得了本标题化合物(3.7g,42.2%)。LC-MS:C23H31F3NO4[M+H+]的计算值:442.21,实测值:442.3.

        步骤I

        将酰胺(步骤H,方法A,中间体2)(4.7g,10.7mmol)、10%Pd/C(500mg)和MeOH(50mL)的混合物在氢气囊下搅拌2小时,然后经由硅藻土过滤,并真空浓缩,获得了目标酸(3.92g,99%).LC-MS:C16H25F3NO4[M+H+]的计算值:352.17,实测值:352.15.

        方法B

        步骤A

        向Boc-氨基酸(步骤A,方法A,中间体4)(159g,0.7mol)在500mL?DMF内的机械搅拌着的溶液中加入固体碳酸钾(138g,1.0mol)。将所得混合物搅拌20分钟,一次性加入纯净的苄基溴(84mL,0.7mol)。观察到放热反应。在室温搅拌过夜后,将整个混合物倒入冰水混合物(1000mL)内。将粗产物用乙酸乙酯(2×800mL)萃取。将合并的有机层用水洗涤,用硫酸钠干燥,过滤并蒸发,获得了棕色油状物。将该油状物与4N?HCl/二氧杂环己烷(350mL)混合,搅拌直至不再观察到气体释放。加入乙醚(500mL),通过过滤收集沉淀,用乙醚和己烷洗涤?;竦昧搜嗡嵫涡问降乃璨?164g,93%)。1HNMR(400MHz,CD3OD):7.38(m,5H),6.25(m,1H),5.94(m,1H),5.20(s,2H),4.32(br?s,1H),3.80(br?s,1H),2.67(m,1H),2.14(m,1H).

        步骤B

        向氨基酯HCl盐(步骤A,方法B,中间体4)(38g,150mmol)、四氢-4-H-吡喃-4-酮(15g,150mmol)、DIEA(20.6g,160mmol)和分子筛(4,20g)在200mL二氯甲烷内的混合物中以少量多次的方式加入三乙酰氧基硼氢化钠(42.4g,200mmol)。加入完成后,将该混合物在室温搅拌过夜,用饱和碳酸钠水溶液中止反应,经由硅藻土过滤。将粗产物萃取到二氯甲烷(3×)内,用硫酸钠干燥并蒸发。通过快速色谱法纯化残余物(NH4OH水溶液+MeOH/1∶9)/DCM(1∶9))。合并所需级份并蒸发。将残余物与THF混合并蒸发,溶解在搅拌中,蒸发并真空干燥,获得了浅棕色油状物(38g,84%)。1HNMR(400MHz,CDCl3):7.38(m,5H),5.98(m,1H),5.85(m,1H),3.98(m,3H),3.54(m,1H),3.40(m,2H),2.82(m,1H),2.44(m,1H),1.90(m,1H),1.79(m,2H),1.70(m,1H),1.44(m,2H).

        步骤C

        在氮气氛下,向含有二-(三甲基甲硅烷基)氨基钾(30g,151mmol)的圆底烧瓶中加入500mL无水THF,在-78℃冷却。用20分钟加入氨基酯(步骤B,方法B,中间体4)(38g,126mmol)在100mL?THF中的溶液。将干冰-丙酮浴替换为干冰-水(~-15℃)。将该混合物在-15℃搅拌1小时,再次冷却至-78℃。加入异丙基碘的纯净溶液(65mL,378mmol)。将烧瓶置于-15℃浴内。几分钟后,观察到形成了大量白色沉淀。将该反应混合物再搅拌1小时,倒入冰水混合物内,用乙醚(3×)萃取。将乙醚层用水和盐水洗涤,用硫酸钠干燥并蒸发。将残余物溶解在二氯甲烷中,再次用硫酸钠干燥,并蒸发。把粗产物在二氯甲烷(200mL)中的溶液冷却至0℃。向该溶液中滴加吡啶(33mL,400mmol)和三氟乙酸酐(27mL,190mmol)。1小时后,用水中止该反应。分离出有机相,用2N盐酸、水和盐水洗涤。通过快速色谱法纯化粗产物(20%EtOAc/己烷),获得了浅棕色油状物(41g,74%)。1H-NMR表明5∶1的顺式/反式异构体混合物。1H?NMR(400MHz,CDCl3):顺式-异构体:6.06(m,1H),5.68(m,1H),反式:5.92(m,0.2H),5.79(m,0.2H).LC-MS:C23H28F3NO4[M+H+]的计算值:440,实测值:440.

        步骤D

        将不饱和苄基酯(步骤C,方法B,中间体4)(41g)和10%Pd/C(2.0g)在乙酸乙酯(100mL)50psi氢气下氢化过夜。通过经由硅藻土垫过滤除去催化剂。将滤液蒸发,溶解在二氯甲烷中,蒸发并且真空干燥过夜?;竦昧怂璧乃?,为树胶状白色固体(32.5g,100%)。LC-MS:C16H24F3NO4[M+H+]的计算值:352,实测值:352.

        ???????????????????????中间体5

        方法A

        步骤A

        在16℃(水浴),用60分钟经由插管向Bz2O(58.8g,259.8mmol)、DMAP(1.3g,10.8mmol)、THP酮(20mL,216.5mmol)在THF(600mL)中的溶液加入KHMDS(0.5M在甲苯中的溶液,520mL)。加入后,将悬浮液再搅拌1小时,然后真空浓缩至约200mL。然后用饱和NaHCO3水溶液(500mL)中止该反应。将该混合物在己烷与水之间分配。分离出水层,用己烷(3×400mL)萃取。合并有机层,用无水Na2SO4干燥并浓缩。将所需产物1(21g,47%)从剩余油状物中蒸馏出来(115-118℃,1.0mmHg)。H1NMR(500MHz,CDCl3)δ8.09(d,J=15Hz,1H)),7.75-7.40(m,3H),5.61(bs,1H),4.30(bs,2H),3.99(t,J=11Hz,2H),2.45(bs,2H).

        步骤B

        使用机械搅拌器,将得自步骤A的烯醇醚(12.34g,60.5mmol)、Bu4HSO4(820mg,2.42mmol)、CH3CN(750mL)、缓冲溶液(500mL0.05M?Na2B4O7在4×10-4?M?Na2EDTA中)和D-Epoxone(4.7g,18.1mmol)的混合物在冰浴中搅拌。同时在冰浴中,使用两个加液漏斗用1.5小时向该冰冷混合物中加入Oxone(52g,84.7mmol)在250mL4×10-4M?Na2EDTA溶液和K2CO3(48.5g,350mmol)在水(250mL)中的溶液。加入后,将该混合物再搅拌0.5小时,然后在乙醚(1.5L)与H2O(1L)之间分配。分离出水层,进一步用乙醚(3×1L)萃取。合并有机相,用无水Na2SO4干燥,浓缩并通过快速色谱法纯化(15%EtOAc/己烷),获得了所需的环氧化物2(6~7g,50~60%,80%ee)。某些原料可能与产物一起洗脱出来。手性HPLC分离(AD柱)后可除去该杂质。Rf=0.2(50%EtOAc/己烷).NMR(500MHz,CDCl3)H1δ8.05(d,J=8Hz,1H),7.65-7.20(m,3H),4.05(dd,J=13.7Hz,2.1Hz?1H),3.94(d,J=13.7Hz,1H),3.62(m,2H),3.45(d,J=1.5Hz),2.52(m,1H),2.28(m,1H);C13δ200.4,165.0,133.7,129.9,128.6,80.9,64.8,62.4,56.6,29.0.

        步骤C

        于室温,向得自前一步骤的环氧化物(11g,100%ee,50mmol)在CH2Cl2(120mL)和无水甲醇(38mL)内的溶液中加入CSA(580mg,2.5mmol)。4小时后,将该反应用三乙胺(1.05mL)中止反应,然后浓缩至油状物。将该油状物直接在MPLC上纯化(50-60%EtOAc/己烷),获得了3(8g,99%)。H1NMR(500MHz,CDCl3)δ3.85-3.80(m,2H),3.74-3.68(m,2H),3.50(dt,J=14,1.8Hz,1H),3.29(s,3H),3.28(s,3H),2.0-1.95(m,1H),1.85-1.78(m,1H).

        步骤D

        在冰浴内,向NaH(2.37g?of?95%,98.8mmol)在THF(200mL)内的悬浮液中非?;郝丶尤氲米圆街鐲的醇(8g,49.4mmol)在THF(30mL)中的溶液。当气体释放停止后,移去冰浴,加入MeI(9.2mL,98.8mmol)。将该反应在室温搅拌过夜。TLC表明反应完全。然后用浓盐酸(2mL?of?37%,~20mmol)处理该反应直至PH~7。加入水(5mL)。再加入2mL浓盐酸以使得PH~1。将该反应再搅拌1小时,TLC表明该二甲基醚完全水解。把该溶液直接负载到大的硅胶柱上,用乙酸乙酯洗脱,获得了所需的甲氧基酮5(5.5-6g,85%-90%)。

        ???????????????????????中间体6

        步骤A

        将(1S)-(+)-2-氮杂二环[2.2.1]庚-5-烯-3-酮(10.3g,94.4mmol)在乙酸乙酯(200mL)和10%Pd/C(0.5g)的混合物于室温氢化。24小时后,将该混合物过滤并蒸发,获得了10.4g(100%)粗产物。将其置于250mL甲醇中,加入HCl(12M,6mL)。将所得混合物在室温搅拌直至反应完全(72小时)。将溶剂蒸发,把粗产物在高度真空下干燥,获得了本标题化合物,为灰白色固体(16.0g,96%)。1HNMR(500MHz,D2O):δ3.70(s,3H),3.01(m,1H),2.38(m,1H),2.16-1.73(m,6H)。

        步骤B

        To?a?suspension?of?the?ester中间体from向得自步骤A的酯中间体(10.2g,56.8mmol)在无水二氯甲烷(200mL)内的悬浮液中加入二苯甲酮亚胺(10.2g,56.8mmol),将所得混合物于室温搅拌24小时。将该反应混合物过滤,将滤液蒸发。把剩余油状物用乙醚(100mL)研制,过滤并蒸发。过滤出氯化铵沉淀,该操作重复再2次以保证产物不含氯化铵。将所得油状物在真空下充分干燥,获得了本标题化合物(18.03g,>100%),无需进一步纯化。1H?NMR(500MHz,CDCl3):δ7.5-7.18(m,10H),3.75(m,1H),3.7(s,3H),2.78(m,1H),2.26-1.71(m,6H)。

        步骤C

        向火焰干燥的1000mL圆底烧瓶中加入400mL无水四氢呋喃,置于氮气下并且使用丙酮/干冰浴冷却至-78℃。通过注射器加入二异丙基胺(27.4mL,195mmol)。将所得溶液缓慢地用正丁基锂(55mL,140mmol,2.5M在己烷中的溶液)处理。搅拌5分钟后,通过注射器滴加在100mL四氢呋喃中的其制备描述在步骤B中的亚胺(40g,130mmol),将所得混合物在-78℃搅拌2小时。然后通过注射器滴加2-碘-1,1,1-三氟乙烷(47mL,480mmol),将所得混合物搅拌过夜,让其缓慢地温热至室温。用饱和氯化铵溶液(400mL)中止反应,分离出有机层。用乙酸乙酯(3×150mL)萃取水层,将有机萃取液合并,用无水硫酸钠干燥,过滤并减压蒸发。粗产物不用进一步纯化直接用于下一步骤。LC-MS:C22H22F3NO2的计算值:389.26,实测值:[M+H+]390.4。

        步骤D

        向得自步骤C的产物(130mmol,假定100%转化)在200mL四氢呋喃内的溶液中加入200mL?2N盐酸,将所得混合物于室温搅拌过夜。将该溶液真空浓缩以除去大部分四氢呋喃,用二氯甲烷(300mL)稀释。在剧烈搅拌下,通过缓慢地加入5N氢氧化钠将水层的平衡调节至10。分离出有机层,用二氯甲烷(2×150mL)萃取水层。合并有机萃取液,用无水硫酸钠干燥,并过滤。向滤液中加入二异丙基乙胺(22.7mL,130mmol)和二碳酸二叔丁酯(32.7g,150mmol),将所得溶液在室温搅拌过夜。用1N盐酸洗涤该混合物,然后用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥,过滤,并减压蒸发至干。通过MPLC纯化(分几批,每次运转约5g),获得了5.87g(14%)所需的顺式(R,S)异构体和12.31g(29%)反式(S,S)异构体以及5.22g(12%)两种非对映体的1∶1混合物。1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ(第一种所需异构体)5.05?and?4.40(单峰,1H),3.76(s,3H),2.73(ddd,J=11.0,12.8,14.8Hz,1H),2.38(ddd,J=10.7,12.8,15.0Hz,1H)2.32-2.26(m,1H),2.21(br?dd,J=3.6,14.5Hz,1H),2.18-2.11(m,1H),2.02(dd,J=8.8,14.4Hz,1H),1.61(dd,J=7.8,13.2Hz,1H)1.52(br?s,10H).1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ(第二种异构体)4.52?and?4.06(单峰,1H),3.72(s,3H),2.72(dd,J=7.1,13.5Hz,1H),2.66(ddd,J=10.6,12.8,15.0Hz,1H),2.53(ddd,J=11.0,12.8,14.9Hz,1H)2.26(app?dd,J=7.1,13.5Hz,1H),2.18-2.07(m,1H),1.78(dd,J=8.6,13.5Hz,1H),1.57-1.48(m,2H)1.46(s,9H)。

        步骤E

        向其制备描述在前一步骤中的顺式(R,S)产物(4.0g,12mmol)在四氢呋喃/甲醇/水的1∶1∶1溶液(84mL)内的混合物中加入固体LiOH(2.60g,62.0mmol),将所得溶液在60℃搅拌18小时。让该混合物冷却至室温,浓缩以除去有机溶剂。通过加入6N盐酸将水层酸化(pH4-5),用二氯甲烷(3×100mL)萃取产物。合并有机层,用无水硫酸钠干燥,过滤,减压蒸发,获得了中间体6(3.86g,99%),为黄色油状物。

        步骤F

        向其合成描述在前一步骤中的酸中间体(46mg,0.1475mmol)、中间体3(49mg,0.1475作为三氟乙酸盐)、二异丙基乙胺(26μL,0.1475mmol)和催化量的二甲基氨基吡啶二氯甲烷(4mL)中的溶液用1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC,85mg,0.4425mmol)处理,在室温搅拌过夜。将该反应混合物用二氯甲烷稀释,用水(2×)萃取。将合并的水萃取液用DCM回洗,将有机萃取液合并,干燥(无水硫酸钠)并真空除去溶剂。通过制备TLC纯化粗产物(131mg),获得了18mg纯产物。LC-MS:C22H27F6N3O3[M+H-BOC]+的计算值:412.19,实测值:412.50。

        步骤G

        将得自前一步骤的BOC-中间体(18mg,0.0352mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液用三氟乙酸(1mL)处理,继续在室温搅拌4小时。真空除去溶剂,粗产物盐不用进一步纯化直接用于下面的还原胺化。LC-MS:C22H27F6N3O3[M+H]+的计算值:412.19,实测值:412.10.

        ???????????????????????中间体7

        该制备是用6批同时进行的,将这6批合并进行后处理:将500mL火焰干燥的反应烧瓶置于静态氮气氛下,加入150mL无水THF。通过注射器加入纯净的二异丙基胺(8.76mL,62.5mmol),将该溶液冷却至-78℃。通过注射器向该溶液中加入正丁基锂(25mL,2.5M在己烷中的溶液,62.5mmol),然后加入无水HMPA(8.70mL),继续冷搅拌15分钟。然后通过注射器加入纯净的四氢-4H-吡喃-4-酮(5g,50mmol),让阴离子在-50℃形成2小时。加入甲基碘(12.45mL,200mmol),让该溶液温热至室温并保持过夜。用饱和氯化铵溶液(50mL)中止该反应,将所有6批反应合并。将粗产物用乙醚(4×250mL)萃取。将合并的有机萃取液在Vigreaux柱上于常压下浓缩。通过梯度色谱法纯化残余物,使用乙醚与戊烷的混合物洗脱(开始用10%乙醚,最后乙醚浓度是40%)。合并含有纯产物的级份,再次使用Vigreaux蒸馏柱于常压下除去溶剂。通过将该残余物在常压下蒸馏来获得纯产物(11.05g,33%),沸点为169-171℃。

        ???????????????????????中间体8

        步骤A

        按照类似于文献中描述的方法(Allergretti,M.,Berdini,V.,Cesta,M.C.,Curti,R.,Nicolini,L.,和Topai,A.,Tetrahedron?Lett.,2001,42,(25),4257-9)由3-甲基四氢吡喃-4-酮(中间体7)获得3-甲基-4-氨基-四氢吡喃的顺式-外消旋体。

        步骤B

        在氮气氛下于室温,将得自前一步骤的胺(1.54g,10.3mmol)和二异丙基乙胺(4.46mL,25.6mmol)在无水二氯甲烷中的溶液用纯净的苄氧羰基氯(1.61mL,11.3mmol)处理,将所得混合物于室温搅拌2小时。将其用二氯甲烷稀释,用10%柠檬酸水溶液萃取。将水相用二氯甲烷反萃取,将合并的有机萃取液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。干燥(无水硫酸镁)后,真空除去溶剂,通过柱色谱法纯化(硅胶,乙酸乙酯∶己烷/2∶3),获得了1.8347g(72%)纯产物。使用ChiralPakAD半制备柱,通过手性HPLC获得各个对映体。通过将游离胺衍生化,然后进行NMR光谱测定以及单晶下-射线衍射分析表明,较快洗脱下来的异构体(Tr=13.0分钟,己烷∶EtOH/93∶7,9mL/分钟)的绝对构型是(3R,4S)。1H?NMR(500MHz,CDCl3):7.47(bm,5H),5.12(bs,2H),4.65(bd,J=8.7Hz,1H),3.98(dd,J=11.44,3.43Hz,1H),3.87(dd,J=11.4,4.3Hz,1H),3.45(m,2H),3.08(t,J=11.40Hz,1H),1.95(d,J=11.60Hz,1H),1.50(m,2H),0.90(d,J=6.63Hz,3H)。

        步骤C

        将得自前一步骤的CBZ-?;さ陌?284mg,1.14mmol)在乙醇(15mL)中的溶液使用133mg?Pd/C(10%)于气囊的常压氢气下氢化30分钟。过滤出催化剂,将溶液真空浓缩,获得了158mg(91%)所需产物。

        ???????????????????????中间体9

        方法A

        步骤A

        将(1R,4S)-1-氨基-4-苄氧基羰基-环戊-2-烯盐酸盐(8.94g,35.0mmol)(其制备描述在中间体4,步骤A-C下面)、酮中间体8(7.04g,69.91mmol)在50mL二氯乙烷中的溶液用粉碎的4分子筛(10g)、二异丙基乙胺(6.1?mL,35mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(29.5g,140mmol)处理,将该反应混合物在室温搅拌36小时。加入二氯甲烷(300mL),用饱和碳酸氢钠溶液(100mL)中止反应。将水层用DCM再萃取3次,将合并的有机相干燥,过滤,并真空除去溶剂。该异构体的粗制混合物(15.0711g)不用进一步纯化直接用于下一反应步骤。

        步骤B

        向火焰干燥的500mL反应烧瓶中加入六甲基二硅氮烷钾(9.07g,45.50mmol),置于静态氮气氛下。通过套管加入四氢呋喃(300mL),将该溶液冷却至-78℃。然后通过注射器加入得自前一步骤的酯粗产物(15.07g)在四氢呋喃(20mL)中的溶液,继续冷搅拌90分钟。然后加入纯净的异丙基碘(10.48mL,105.0mmol),继续在-78℃搅拌30分钟,然后让其温热至-40℃。将该反应混合物倒入饱和氯化铵溶液(200mL)内,用二氯甲烷(4×150mL)萃取粗产物。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥,过滤,并真空除去溶剂,获得了异构体的粗制混合物。在这时不进行任何纯化,将该混合物以所获得的形式用于下一步骤。

        步骤C

        在0℃,将其制备描述在前一步骤中的胺(11.74g,max.32.9mmol)和二异丙基乙胺(28.6mL,164.2mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液用三氟乙酸酐(13.8mL,65.8mL)处理。移去冷却浴,继续搅拌2小时。用饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)中止该反应,用二氯甲烷(4×100mL)萃取粗产物。将合并的有机萃取液干燥(无水硫酸钠)并真空除去溶剂、粗产物通过梯度色谱法纯化(0%-30%乙酸乙酯在己烷中的混合物),获得了9.93g(66%,三步)。在这些条件下,主要的环戊烷-顺式-异构体可以与次要的反式异构体成功地分离开。该产物仍然是在四氢吡喃环上的异构体的混合物。LC-MS:C24H30F3NO4[M+H]+的计算值:424.21,实测值:454.10.

        方法B

        步骤A

        将(1R,4S)-4-叔丁氧基羰基氨基-环戊-2-烯甲酸(15.0g,66.0mmol)(其制备描述在中间体4,步骤A下面)、苄基溴(7.85g,66mmol)在DMF(30mL)中的溶液和碳酸钾(13.7g,99mmol)于室温剧烈搅拌2小时。将该反应混合物用己烷(200mL)稀释,用水(100mL)中止反应。分离出有机相,萃取再重复3次。将合并的有机相干燥(无水硫酸钠)并真空除去溶剂。通过梯度色谱法纯化粗产物,使用乙酸乙酯和己烷的混合物作为洗脱剂。将乙酸乙酯的浓度从0%逐渐增加至最终的40%。这获得了19.39g(93%)所需产物。LC-MS:C18H23NO4[M+Na]+的计算值:340.20,实测值:340.10.1HNMR(500MHz,CDCl3)δ7.35?to?7.40(m,5H),5.90(bs,2H),5.16(s,2H),3.54(dd,J=8.7,4.4Hz,1H),2.53(ddd,J=14.0,8.5,8.5Hz,1H),1.92(ddd,J=14.0,4.1,4.1Hz,1H),1.46(s,9H).13C?NMR(500MHz,CDCl3)δ155.1,135.6,134.9,131.0,128.6,128.3,128.0,66.7,55.7,49.3,34.5,28.4。

        步骤B

        向火焰干燥的500mL烧瓶中加入六甲基二硅氮烷锂(10.9g,65.18mmol),置于静态氮气氛下。通过套管加入THF(40mL),将该溶液冷却至-78℃。然后通过注射器加入得自前一步骤的酯(9.40g,29.63mmol)在THF(20mL)中的溶液,让阴离子形成30分钟。然后通过注射器加入纯净的异丙基碘(3.55mL,35.56mmol),将该反应混合物在-40℃搅拌30分钟,然后在-15℃搅拌3小时。用10%柠檬酸水溶液中止反应,用乙醚(3×150mL)萃取产物。将合并的溶剂干燥(无水硫酸钠)并真空除去溶剂。通过梯度色谱法纯化粗产物,使用乙酸乙酯和己烷的混合物作为洗脱剂。在纯化期间,乙酸乙酯的浓度从0%逐渐增加至35%。以该方式获得了4.1211g(39%)纯的顺式异构体。LC-MS:C21H29NO4[M+Na]+的计算值:382.21,实测值:382.25.1H?NMR(500MHz,CDCl3)δ7.36(bm,5H),5.80(m,2H),5.13(ABq,J=12.3Hz,2H),2.30(m,2H),2.03(m,1H),1.46(s,9H),0.83(d,J=6.6Hz,3H),0.8(d,J=6.6,3H).

        步骤C

        将得自前一步骤的BOC-?;さ陌分屑涮?4.66g,13.0mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液用三氟乙酸(2.0mL)处理,在室温搅拌6小时。真空除去溶剂,所获得的胺—三氟乙酰胺(6.1g)不用进一步纯化直接用于随后的步骤。LC-MS:C16H21NO2[M+H]+的计算值:260.16,实测值:260.15.

        步骤D

        将得自前一步骤的胺(6.12g,12.96mmol)、中间体7(2.76g,24.18mmol)、二异丙基乙胺(2.26mL,12.96mmol)、粉碎的4分子筛(5.0g)和三乙酰氧基硼氢化钠(8.25g,38.88mmol)在二氯甲烷(40mL)中的混合物于室温搅拌过夜。将其倒入饱和碳酸氢钠溶液内,用二氯甲烷萃取粗产物。将合并的萃取液用无水硫酸钠干燥,过滤,并真空除去溶剂,获得了4.66g(100%,2步)异构体混合物形式的所需产物。其不用进一步纯化直接用于随后的步骤。LC-MS:C22H31NO3[M+H]+的计算值:358.23,实测值:358.25.

        步骤E

        将其制备描述在前一步骤中的胺(2.51g,7.04mmol)和二异丙基乙胺(6.13mL,35.21mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液冷却至0℃,用三氟乙酸酐(1.98mL,14.08mmol)处理。将该反应混合物在室温搅拌30分钟,用10%柠檬酸水溶液(50mL)中止反应。用二氯甲烷萃取产物,将合并的有机萃取液用无水硫酸钠干燥,并真空除去溶剂。将该粗产物(3.81g)通过梯度色谱法进一步纯化(乙酸乙酯-己烷s,0?to?50%?of乙酸乙酯),获得了2.49g(78%)所需产物,为四氢吡喃衍生的异构体的混合物。LC-MS:C24H30F3NO4[M+H]+的计算值:424.21,实测值:454.10.

        ???????????????????????中间体10

        具有所指定的绝对立体化学的单独异构体,中间体10是使用ChiralPak?AD半制备柱通过色谱分离而由中间体9获得的,是作为较快洗脱下来的主要异构体分离出来。洗脱剂由己烷与乙醇的比例为4∶1的混合物组成,采用的流速为9mL/分钟。在类似分析柱上(流速为1.0mL/分钟)的保留时间为8.58分钟。NMR(500MHz,CDCl3)δ7.38bs,5H,6.01(dd,J=5.5,2.1Hz,1H),5.76,bs?1H,5.21s,2H,5.0s,1H,3.85(d,J=8.7Hz,1H),3.60(d,J=11.2Hz,1H),2.30(m,3H),1.74bs,1H),1.20m,5H,0.84m,6H.

        ???????????????????????中间体11

        中间体11是使用分离中间体10所述的条件,从异构体混合物(该异构体混合物的制备描述在中间体9下面)获得的,是作为较慢洗脱下来的主要异构体分离出来。该异构体在分析ChiralPak?AD柱上的保留时间为9.55分钟,保持1.0mL/分钟的流速。

        ???????????????????????中间体12

        将苄基酯中间体9(9.93g,21.89mmol)在乙醇(100mL)中的溶液和披钯炭(520mg,10%)一起在帕尔摇动器上于50psi氢化4小时。过滤出催化剂,真空除去溶剂,获得了所需产物(8.21g,定量),为在四氢吡喃环上的异构体混合物。LC-MS:C17H26F3NO4[M+H]+的计算值:366.18,实测值:366.20.

        ???????????????????????中间体13

        方法A

        将中间体10(650mg,1.43mmol)在乙醇中的溶液(50mL)在帕尔摇动器上于Pd/C(10%,200mg)存在下在50psi压力下氢化4小时。过滤出催化剂,并将溶剂蒸发至干,获得了白色固体(512mg,98%)。LC-MS:C17H27F3NO4[M+H]+的计算值:366.18,实测值:366.05.

        方法B

        步骤A

        将(1R,4S)-4-氨基-环戊-2-烯甲酸(130g,1.0mol)、水(250mL)、碳酸氢钠(170g,2.0mol)和四氢呋喃(750mL)的混合物搅拌30分钟,然后加入二碳酸二叔丁酯(230g,1.05mol)。将该混合物搅拌一个周末,过滤以除去不溶物,蒸发以除去四氢呋喃,并冷却至0℃。向该残余物中加入2N盐酸直至pH达到3(~500mL)。通过过滤收集使得沉淀,用水洗涤,并真空干燥过夜?;竦昧怂璧乃?,为白色固体(230g,100%)。1H?NMR(400MHz,CD3OD):δ5.95(m,1H),5.79(m,1H),4.80(br?s,1H),3.45(m,1H),2.50(m,1H),1.79(m,1H),1.44(s,9H).

        步骤B

        将在500mL甲醇中的步骤A中制备的酸(230g,1.0mol)和10%Pd/C(5.0g)放置在帕尔装置上,于50psi氢气下氢化1小时。通过过滤除去催化剂,将滤液蒸发。把残余物溶解在二氯甲烷中,用无水硫酸钠干燥。过滤后,将滤液蒸发,真空干燥?;竦昧吮颈晏饣衔?,为浅黄色固体(230g,99%)。LC-MS:C11H19NO4的计算值:229,实测值:[M+H]+230.

        步骤C

        向在步骤B中制得的酸、中间体9(230g,1.00mol)在500mL?N,N-二甲基甲酰胺内的机械搅拌着的溶液中加入固体碳酸钾(210g,1.5mol)。将使得混合物搅拌20分钟,一次性加入纯净的苄基溴(120mL,1.0mol)。观察到放热反应,在室温搅拌3小时后,将整个混合物倒入冰水混合物(1000mL)内。用乙醚(2×800mL)萃取粗产物。将合并的乙醚层用水洗涤,用硫酸钠干燥,过滤并蒸发,获得了黄色固体。将该固体与4N?HCl在二氧杂环己烷中的溶液(400mL)混合,搅拌过夜,并浓缩。通过过滤收集使得固体,用乙醚洗涤并真空干燥?;竦昧吮颈晏獠?,为盐酸盐(140g,55%)。1H?NMR(400MHz,CD3OD):δ5.15(s,2H),3.65(m,1H),3.02(q,J=8Hz,1H),2.50(m,1H),2.15(m,1H),2.05(m,2H),1.90(m,1H),1.75(m,1H).

        步骤D

        将在步骤C中制得的氨基苄基酯HCl盐(130g,0.50mol)悬浮在500mL二氯甲烷中。加入二苯甲酮亚胺(91g,0.50mol)。将使得混合物搅拌过夜,过滤以除去无机盐。将滤液用水和盐水洗涤,用硫酸钠干燥,并蒸发。将残余物溶解在200mL甲苯中,并蒸发。该操作再重复一次?;竦昧吮颈晏饣衔?178g),为棕色油状物,其不用进一步纯化直接用于下一步骤。1H?NMR(400MHz,CDCl3):δ1.80(m,1H),1.95(m,2H),2.15(m,2H),2.50(m,1H),2.89(m,1H),3.61(m,1H),5.20(s,2H),7.18(d,2H),7.38(m,8H),7.47(m,3H),7.64(d,2H).

        步骤E:

        在氮气下,将在300mL四氢呋喃中的得自步骤D的席夫碱苄基酯(76.6g,200mmol)冷却至-78℃。在搅拌下用20分钟加入二异丙基氨基锂(2.0M,110mL,220mmol)在庚烷中的溶液。将该混合物在-78℃搅拌30分钟,然后加入68mL异丙基碘(440mmol)在50mL四氢呋喃中的溶液,让该混合物搅拌30分钟。通过移去冷却浴将该反应混合物升至0℃。搅拌2小时后,将整个混合物蒸发以除去四氢呋喃。把残余物溶解在乙醚(1000mL)中,用水和盐水洗涤,用硫酸钠干燥,并蒸发。将该粗产物溶解在500mL四氢呋喃中,与400mL?1N盐酸混合,搅拌1小时,并在50℃蒸发以除去四氢呋喃。将该水溶液用己烷(3×)萃取,用饱和碳酸钠水溶液碱化(pH>9),用二碳酸二叔丁酯(53g)在500mL二氯甲烷中的溶液处理。将所得反应混合物搅拌30分钟。分离出有机相,用二氯甲烷(3×)萃取水相。将合并的有机相用硫酸钠干燥,并蒸发。通过快速色谱法纯化残余物(硅胶,10%乙酸乙酯/己烷),获得了本标题化合物的混合物,为顺式和反式异构体的混合物(~1∶1,24g)。通过MPLC进一步纯化(8%乙酸乙酯/己烷),获得了所需的单独顺式异构体(较快洗脱下来的,7.3g)和不希望的反式异构体(较慢洗脱下来的)。ESI-MS:C21H31NO4的计算值:361;实测值:[M+H]+362.1H?NMR(500MHz,CDCl3):δ7.36(m,5H),5.14(s,2H),4.77(m,1H),4.01(d,J=5.0Hz,1H),2.17(m,1H),1.99-1.53(m,5H),1.42(m,9H),0.85(d,J=7.0Hz,6H)。

        步骤F

        于室温,将在二氯甲烷(100mL)中的BOC-?;さ陌?15.73g,43.52mmol)用三氟乙酸(25mL)处理,在室温搅拌2小时。真空除去溶剂,将残余物再与甲苯共蒸馏2次。减压除去溶剂,获得了纯的盐酸盐形式的所需的胺。

        步骤G

        将其制备描述在前一步骤中的胺盐酸盐(1.82g,6.11mmol)、酮中间体7(697mg,6.11mmol)、粉碎的4分子筛(3.2g)、二异丙基乙胺(1.0mL,6.11mmol)在无水二氯甲烷中的溶液用三乙酰氧基硼氢化钠(3.9g,18.33mmol)处理,在室温搅拌过夜。通过加入饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)来中止反应,用二氯甲烷(4×100mL)萃取。将合并的有机萃取液用盐水回洗,用无水硫酸钠干燥并真空除去溶剂?;竦昧?.54g粗产物,其不用另外的纯化直接用于下一反应步骤。ESI-MS:C22H33NO3的计算值:359.25;实测值:[M+H]+360.25.

        步骤H

        将粗产物(2.54g)溶解在无水二氯甲烷(40mL)中,加入二异丙基乙胺(3.7mL,21.21mmol),将该混合物冷却至0℃。向该冷溶液中加入纯净的三氟乙酸酐(1.20mL,8.49mmol),将该反应混合物冷搅拌30分钟。将其倒入1N盐酸内,分离出有机层,将水层用二氯甲烷再萃取3次。将合并的有机萃取液干燥并真空除去溶剂。通过小心地进行梯度快速硅胶色谱,使用乙酸乙酯和己烷的混合物,其中乙酸乙酯的浓度从开始时的0%逐渐增加至洗脱结束时的40%,来获得具有所需觉得立体化学的特定对映体。在这些条件下,首先洗脱下来所需的顺式异构体(910mg)。

        步骤I

        将其制备描述在前一步骤中的苄基酯中间体(3.20g,8.90mmol)和披钯炭(520mg,10%)在乙醇(250mL)中的溶液于常压下氢化2小时。过滤出催化剂,并真空除去溶剂?;竦昧?.27g(70%)所需的酸。

        ???????????????????????中间体14

        步骤A

        方法A

        将3-氧代-环戊烷甲酸(Stetter,H.,Kuhlmann,H.Liebigs?Ann.Chem.,1979,7,944-9)(5.72g,44.6mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液用N,N’-二异丙基-O-叔丁基-异脲(21.2mL,89.3mmol)处理,将该反应混合物于室温搅拌过夜。过滤出沉淀的N,N’-二异丙基脲,将滤液真空浓缩,通过蒸馏来纯化残余物(bp:125-129℃@18mmHg),获得了4.74g(58%)纯产物。1H?NMR(500MHz,CDCl3):δ3.02(p,J=7.8Hz,1H),2.05-2.50(m,6H),1.45(s,9H).13CNMR(125MHz,CDCl3):δ217.00,173.47,80.99,41.88,41.14,27.94,26.57。

        方法B

        向2L?RBF内加入无水硫酸镁(113g,940mmol)和二氯甲烷(940mL)。在搅拌下,将该悬浮液用浓硫酸(12.5mL,235mmol)处理,然后用15分钟加入3-氧代-环戊烷甲酸(30.1g,235mmol)。搅拌15分钟后,加入叔丁醇(87g,1.2mol)。用塞子将该反应容器密封,以帮助保留异丁烯,在室温搅拌72小时。经由硅藻土塞过滤出固体,把滤液的体积降至约500mL,用饱和碳酸氢钠溶液(2×150mL)洗涤。将有机相用无水硫酸镁干燥,过滤,并通过减压蒸馏(180mmHg)除去溶剂。通过蒸馏来纯化粗产物,获得了39.12g(90%)纯产物。

        步骤B

        在对甲苯磺酸(400mg)存在下,将3-氧代环戊烷甲酸叔丁酯(11.54g,62.64mmol)在二氯甲烷(200mL)中的溶液用原甲酸三甲酯(41.4mL,251mmol)处理,在室温搅拌48小时。将该深色反应混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液内,用二氯甲烷萃取粗产物。将合并的有机萃取液用无水硫酸镁干燥,真空除去溶剂,通过蒸馏来纯化粗产物(bp.:104℃@4mmHg),获得了12.32g(85%)所需产物。1H?NMR(500MHz,CDCl3):δ3.21(s,3H),3.20(s,3H),2.80(m,1H),2.10?to?1.80(bm,6H),1.46(s,9H).13C?NMR(125MHz,CDCl3):δ174.9,111.2,80.3,67.8,49.2,42.5,37.4,33.8,28.3,22.0.

        步骤C:

        向火焰干燥的500mL园底烧瓶中加入100mL无水THF,置于氮气下,使用丙酮/干冰浴冷却至-78℃。通过注射器向冷却的溶剂中加入二异丙基胺(7.9mL,56mmol),然后缓慢地加入2.5M正丁基锂在己烷中的溶液(22.6mL,56.45mmol)。搅拌5分钟后,通过注射器滴加在50mL?THF中的缩醛(描述在步骤B中,中间体6,10.0g,43.4mmol),将所得混合物在-78℃搅拌2小时。然后通过注射器滴加乙醛(7.3mL,130mmol),将所得混合物在-78℃搅拌2小时。通过将该混合物倒入10%柠檬酸溶液(300mL)来中止该反应,然后用二氯甲烷(2×150mL)萃取。合并有机层,用无水硫酸镁干燥,过滤,并减压蒸发。在反应或后处理期间有某些缩醛水解为酮,因此,粗产物混合物不用纯化直接用于下一步骤。

        步骤D

        将中间体粗产物(描述在步骤C中,中间体6,56.45mmol,假定步骤C是100%转化)用10%三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液处理,将所得混合物在室温搅拌过夜。将该反应真空浓缩,然后用水稀释,用二氯甲烷萃取。合并有机层,用无水硫酸镁干燥,过滤,并减压蒸发,获得了8.04g(83%)粗产物,其不用纯化直接使用。

        步骤E

        将得自前一步骤的醇(2.86g,12.529mmol)、苯甲酸(1.54g,13.782mmol)、DMAP(300mg)在二氯甲烷(50mL)中的溶液用EDC处理,将该反应混合物在室温搅拌过夜。用水(50mL)中止反应,把粗产物萃取到二氯甲烷(4×50mL)内。将合并的有机相用无水硫酸镁干燥,过滤,并真空除去溶剂(4.92g)。各赤型和苏型非对映体对可易于使用梯度柱色谱法分离开,使用乙酸乙酯和己烷的混合物作为洗脱剂。将乙酸乙酯的浓度从开始分离时的0%增加到结束时的50%。以该方式,可获得1.309g(32%)较高洗脱下来的和1.322g较低洗脱下来的非对映体对。使用半制备手性柱色谱将较低洗脱下来的非对映体对进一步分离成其成分:Chiralcel?OD,己烷+乙醇(98∶2),流速9.0mL/分钟。在这些条件下,活性异构体第二个被洗脱下来,获得了518mg纯产物。其在类似分析条件(1.0mL/分钟流速)的保留时间:第一个异构体以10.01分钟的保留时间被洗脱下来,而所需的第二个异构体以11.39分钟的保留时间被洗脱下来。LC-MS:C19H24O5[M+H+Na]+的计算值:355.15,实测值:355.10.

        步骤F

        将得自前一步骤的酮(500mg,1.5043mmol)、中间体8(228mg盐酸盐,1.5043mmol)、粉碎的4分子筛(2.5g)、二异丙基乙胺(263μL,1.5043mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液用三乙酰氧基硼氢化钠(956mg,4.51mmol)处理,在室温搅拌72小时。然后将该反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)内,用二氯甲烷(4×50mL)萃取产物。将合并的有机相干燥(无水硫酸镁),过滤,并真空除去溶剂。将残余物(590mg)通过制备TLC纯化(二氯甲烷+甲醇+氢氧化铵/90+9+1),获得了538mg所需产物,为环戊烷衍生的顺式和反式异构体的混合物。该混合物不用进一步纯化直接用于下一步骤。LC-MS:C25H37NO5[M+H]+的计算值:432.27,实测值:432.20.

        步骤G

        将得自前一步骤的胺(478mg,1.1mmol)、三乙胺(460mg,3.3mmol)在二氯甲烷(6mL)中的溶液冷却至0℃,在搅拌下通过注射器加入三氟乙酸酐(253μL,1.66mmol)。继续在0℃搅拌30分钟,通过倒入饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)来中止反应。用二氯甲烷萃取产物(4×30mL),将合并的有机萃取液干燥(无水硫酸镁),减压除去溶剂。将残余物(676mg)通过梯度色谱法纯化(乙酸乙酯∶己烷/0-60%乙酸乙酯),获得了460mg所需产物,为环戊烷衍生的顺式和反式异构体的混合物。顺式异构体是通过半制备手性色谱法,使用Chiralcel?OD柱,并且使用己烷和乙醇(98∶2)的混合物作为洗脱剂获得的。在这些条件下,反式异构体是首先洗脱下来的(在分析柱上的保留时间是6.36分钟,流速1.0mL/分钟)(38%),顺式异构体是第二个洗脱下来,分析保留时间是9.34分钟(68%)。该分离获得了240mg单独异构体形式的所需产物。LC-MS:C23H28F3NO6[M+H-tBuO-]+的计算值:454.18,实测值:432.454.10.

        步骤H

        将得自前一步骤的酯(159mg,0.3016mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液用三氟乙酸(2mL)处理,在室温搅拌90分钟。真空除去溶剂,粗产物不用进一步纯化直接用于随后的步骤。LC-MS:C23H28F3NO6[M-OH]+的计算值:454.18,实测值:432.454.10.

        ???????????????????????中间体15

        步骤A

        在20℃于氮气下,将固体氨基环戊烯甲酯盐(1.076kg,6.059mol)溶解在MeOH(3L,2M)中。加入二异丙基乙胺(DIEA,0.78kg,6.059mol),然后加入丙酮基丙酮(0.711kg,6.241mol)。该混合物具有放热,使得温度增加至32-35℃。然后将该反应混合物在25℃老化16天。将该混合物用IPAc(9-10L)稀释,用10%NH4Cl(2×3L)和5%盐水(2×3L)洗涤。将该IPAc混合物用硫酸钠干燥,过滤并浓缩至油状物。使用THF(3L)作为冲洗液,再次浓缩至油状物。将该空气敏感的吡咯-?;さ陌被肺煜┘姿狨?1189g,92%产率)在氮气下于5-7℃贮存直至用于烷基化步骤。

        步骤B

        在-20℃,用40分钟将溶解在THF(1.2L)中的吡咯甲基酯(1189g)滴加到1M六甲基二硅氮烷锂(LHMDS)在THF(8.65L,8.650mol)内的溶液中。将该反应混合物老化30分钟,用1小时加入2-碘丙烷。将该反应混合物老化1小时,然后用2小时让其温热至20℃,在20℃老化直至通过HPLC表明反应完全(<0.5%原料)。将该反应混合物倒入6%NH4Cl溶液(10L)内。加入IPAc(20L),分离各层。将有机层用6%NH4Cl水溶液(10L)、5%盐水(2×10L)洗涤,浓缩至油状物。将该空气敏感的烷基化吡咯甲基酯(1419g,98%产率)在氮气下于5-7℃贮存直至进行皂化。

        步骤C

        将烷基化吡咯甲基酯(1.38kg,5.197mol)溶解在MeOH(7.7L)中。加入DI水(2.5L),然后加入10N?NaOH(2.08L,20.786mol)。将该反应混合物在65℃加热16小时。将该混合物冷却至10℃。通过用浓盐酸将pH调节至4.5来将产物结晶。将该浆液老化1小时,向该混合物中加入DI水(15L)。将该浆液在20-25℃老化18小时。过滤该固体,用10%MeOH/DI水洗涤,在真空烘箱中干燥(40-50℃,25-26”Hg),获得了烷基化吡咯环戊烯酸(1223g,95%产率)。

        步骤D

        将得自前一步骤的酸(1.50g,6.05mmol)、二异丙基乙胺(2.11mL,12.1mmol)在THF(20mL)中的溶液冷却至0℃,在搅拌下加入纯净的甲磺酰氯(468μL,6.05mmol)。移去该冷却浴,在室温继续搅拌45分钟。将反应混合物的少量样本用甲醇中止反应,然后进行HPLC分析,证实完全转化成甲基酯。LC-MS:C16H23NO2[M+H]+(甲基酯)的计算值:262.17,实测值:262.10。该混合酸酐的溶液不用进一步延迟直接用于酰胺形成步骤。

        步骤E

        将中间体3(盐酸盐,1.54g,6.05mmol)和二异丙基乙胺(2.11mL,12.10mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液冷却至0℃,通过注射器加入得自前一步骤的混合酸酐溶液。移去冷却浴,继续在室温搅拌1小时。这时通过上述甲醇处理不能检测到任何活性混合酸酐,并且观察到出现了与所需产物相对应的新峰。加入水(50mL),用二氯甲烷(4×50mL)萃取产物。将合并的有机萃取液干燥,并真空除去溶剂。将粗产物(3.76g)通过梯度色谱法进一步纯化(硅胶,乙酸乙酯/己烷,0%-100%的乙酸乙酯),获得了2.51g(93%)所需产物。LC-MS:C24H28N3O2[M+H]+的计算值:448.21,实测值:448.20。1H?NMR(500MHz,CDCl3):6.80(s,1H),6.26(s,1H),6.20(dd,J=5.7,2.5Hz,1H),6.02(dd,J=6.0,2.1Hz,1H),5.75(s,2H),5.31(m,1H),4.81(bs,1H),4.65(bs,1H),4.24(m,2H),4.13(m,2H),3.93(m,2H),2.68(dd,J=13.5,8.7Hz,1H),2.20(bm,7H),2.05(s,1H),1.28()m,1H),0.96(d,J=6.64,3H),0.94(d,J?6.9Hz,3H).

        步骤F

        将得自前一步骤的吡咯(2.51g,5.61mmol)在乙醇(80mL)中的溶液用羟基胺盐酸盐(7.8g,112.2mmol)处理,然后加入氢氧化钠水溶液(11.2mL,5N,水溶液),将该反应混合物在轻微回流条件下搅拌过夜。真空除去溶剂,将残余物置于50mL碳酸氢钠水溶液内,用氯仿与异丙醇的混合物(85∶15,6×100mL)萃取产物。将合并的萃取液干燥,减压除去溶剂。该产物不用进一步纯化直接用于随后的还原胺化步骤。

        ???????????????????????实施例1

        步骤A

        将酸中间体4(289mg,0.8225mmol)在无水二氯甲烷(6mL)中的溶液冷却至0℃,通过注射器加入纯净的草酰氯(215μL,2.47mmol),然后加入3滴无水DMF。移去冷却浴,将该反应混合物在室温搅拌2小时。真空除去溶剂,将残余物使用kugelrohr装置蒸馏(250℃@0.01mmHg),获得了303mg(100%)不稳定的氯化物,其不用任何延迟直接在下一反应步骤中反应。用甲醇处理后分析样本:LC-MS:C17H26F3NO4(甲基酯)[M+H]+的计算值:365.18,实测值:366.20.

        步骤B

        将中间体3的盐酸盐(142mg,0.5561mmol)在无水二氯甲烷(8mL)中的悬浮液用二异丙基乙胺(773μL,4.44mmol)处理,冷却至0℃。在搅拌下,通过注射器加入其合成描述在步骤A中的酰氯(302mg,0.8166mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液。将该反应混合物在室温搅拌30分钟,用二氯甲烷(50mL)稀释,倒入饱和碳酸氢钠水溶液内。分离出有机层,用含有10%柠檬酸和3%L-抗坏血酸的溶液洗涤。将有机相干燥,真空除去溶剂,获得了具有令人满意纯度的所需产物(302mg,100%)。LC-MS:C25H31F6N3O4[M+H]+的计算值:551.22,实测值:366.20.

        步骤C

        将得自前一步骤的酰胺(150mg,0.278mmol)在乙醇(12mL)中的溶液用硼氢化钠(210mg,5.56mmol)在2个小时的时间内分几批处理。将溶剂蒸发至干,用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)处理残余物,用氯仿萃取粗产物。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥,真空除去溶剂,将残余物(135.6mg)通过制备TLC纯化,使用乙酸乙酯、乙醇和氢氧化铵(90∶8∶2)的混合物作为洗脱剂,获得了纯的所需产物(60.4mg?47%)。LC-MS:C23H32F3N3O3[M+H]+的计算值:456.24,实测值:456.20.

        ???????????????????????实施例2

        将中间体6(28mg,0.0352mmol)、四氢吡喃-4-酮(10.6mg,0.106mmol)、二异丙基乙胺(6.1μL)在4mL二氯甲烷中的溶液用粉碎的4分子筛(170mg)和三乙酰氧基硼氢化钠(37mg,0.176mmol)处理,在室温搅拌过夜。用饱和碳酸氢钠中止该反应,用二氯甲烷萃取粗产物。将合并的有机萃取液用无水硫酸钠干燥,过滤并真空除去溶剂。将剩余粗产物(47.5mg)通过制备TLC进一步纯化,使用乙酸乙酯/乙醇/氢氧化铵(90∶8∶2)的混合物作为洗脱剂。以该方式获得了22mg纯产物。LC-MS:C22H27F6N3O3[M+H]+的计算值:496.20,实测值:496.10。

        ???????????????????????实施例3

        由中间体6(85mg,0.1171mmol)和外消旋形式的中间体5(91mg,0.6992)开始,按照类似于制备实施例2所述的方法,制得了在本实施例下面描述的最终化合物。LC-MS:C23H29F6N3O4[M+H]+的计算值:526.21,实测值:526.30。两种顺式-THP非对映体是使用ChiralcelOD半制备手性柱分离的,使用己烷/乙醇(85∶15)混合物,流速为9mL/分钟。

        ???????????????????????实施例4

        方法A

        步骤A

        将酸中间体12(757mg,2.17mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液冷却至0℃,用草酰氯(568μL,6.52)处理,然后加入3滴DMF。移去冷却浴,将该反应混合物在室温搅拌2小时,然后用甲醇中止反应,HPLC分析证实了酸全部转化成了酰氯。真空除去反应溶剂,将残余物进行Kugelrohr蒸馏(250℃,0.1mmHg),获得了纯的酰氯(730mg,87%)。LC-MS:C18H28F3NO4[M+H]+(甲基酯)的计算值:380.20,实测值:380.15.

        步骤B

        在0℃,将胺中间体3(248mg,0.974mmol盐酸盐)和二异丙基乙胺(678μL,3.896mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液用得自前一步骤的酰氯(448mg,1.169mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液处理。移去冷却浴,将该反应混合物在室温搅拌2小时。碳酸氢钠(饱和水溶液,40mL)中止反应,用二氯甲烷萃取粗产物(654mg)。通过制备TLC纯化,使用乙酸乙酯和己烷(1∶1)的混合物作为洗脱剂,获得了309mg(47%)所需产物,为四氢吡喃环衍生的异构体的混合物。LC-MS:C26H33F6N3O4[M+H]+的计算值:566.24,实测值:566.20.

        步骤C

        将得自前一步骤的三氟乙酰胺中间体(310mg,0.5484mmol)在乙醇(15mL)中的溶液用硼氢化钠(207mg,5.48mmol)分几批处理。用饱和碳酸氢钠水溶液中止反应,用氯仿萃取产物。将合并的有机萃取液干燥(无水硫酸钠),真空除去溶剂,获得了粗产物(246mg),该粗产物含有两种主要的四氢吡喃-顺式-异构体以及各种部分饱和的六氢异喹啉酮的混合物。

        步骤D

        The?respective?isomers?were?separated?using?a使用Chiralpak?AD半制备手性柱分离各个异构体,用己烷和乙醇(85∶15)的混合物作为洗脱剂,流速为9.0mL/分钟?;竦昧吮颈晏饣衔?,为较快洗脱下来的异构体(Tr=10.70分钟,m=24.4mg).LC-MS:C24H34F3N3O3[M+H]+的计算值:470.26,实测值:470.15.

        方法B

        步骤A

        步骤B

        将酸中间体13(120mg,0.328mmol)在二氯甲烷(6mL)中的溶液于氮气的惰性气氛下冷却至0℃,通过注射器加入草酰氯(85μL,0.9852mmol),然后加入3滴DMF。移去冷却浴,将该反应混合物搅拌3小时。真空除去溶剂,通过如本实施例方法A步骤A中所述的Kugelrohr蒸馏进一步纯化酰氯粗产物,获得了170mg所需的酰氯。所得酰氯立即使用。

        步骤C

        将中间体3(盐酸盐形式,84mg,0.328mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液用二异丙基乙胺(285μL,1.64mmol)处理,向该溶液中加入其制备描述在前一步骤中的酰氯溶液。将该反应混合物在室温搅拌过夜,然后通过加入饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)来中止反应。用二氯甲烷(3×30mL)萃取粗产物,将合并的有机萃取液浓缩(212mg),通过制备TLC纯化(100%乙酸乙酯作为洗脱剂),获得了70mg(37%)纯产物。LC-MS:C26H33F6N3O4[M+H]+的计算值:566.24,实测值:566.22.1H?NMR(500MHz,CDCl3):6.79(s,1H),6.25(s,1H),4.73(m,2H),4.20,(m,2H),3.91(m,3H),3.71(dd,(J=11.4,3.0Hz,1H),3.50(dd,J=11.4,2.5Hz,1),3.42(dt,J=11.0,3.0Hz,1H),3.09(bs,1H),2.90(bs,1H),2.54(bs,1H),2.1(m,1H),1.92(bm,4H),1.60(m,3H),1.0(d,J=6.9H,3H),0.93(d,J=6.6Hz,3H),0.86(d,J=6.6Hz,3H)。

        步骤D

        将得自前一步骤的三氟乙酰胺(70mg,0.1238mmol)在乙醇(6mL)中的溶液用硼氢化钠(46mg,1.24mmol)在3小时期间内分几批处理。真空除去溶剂,把残余物置于饱和碳酸氢钠水溶液内,用二氯甲烷萃取几次。将合并的有机萃取液干燥(无水硫酸钠),过滤,并真空浓缩。把残余物(47mg)通过制备TLC纯化(DCM+(MeOH+NH4OH/9∶1)/9∶1),获得了31.3mg(54%)纯产物。其光谱和色谱特性与本实施例方法A步骤C中描述的较快洗脱下来的异构体相同。

        方法C

        步骤A

        将中间体13(487mg,1.33mmol)和二异丙基乙胺(923μL,2.66mmol)在无水THF中的溶液冷却至0℃,通过注射器加入纯净的甲烷磺酰氯。通过定期对反应混合物取样并且比较起始酸与通过最小处理所产生的甲基酯的峰强度来监测反应进程。在室温1小时后,酸酐的形成完全。该中间体不用任何进一步的后处理或纯化、不用任何不必要的延迟而用于下面的步骤。

        步骤B

        向其制备描述在前一步骤中的中间体酸酐的溶液中加入含有二异丙基乙胺(923μL,2.66mmol)的中间体3(380mg,1.59mmol)的二氯甲烷溶液中。将该反应混合物在室温搅拌1小时,然后将其倒入饱和碳酸氢钠溶液内。把粗产物萃取到二氯甲烷内,合并有机萃取液,干燥并真空除去溶剂。如本实施例方法步骤C中所述进一步纯化粗产物,获得了793mg纯产物。

        步骤C

        将得自前一步骤的三氟乙酰胺(790mg,1.44mmol)在乙醇(10mL)中的溶液用硼氢化钠(550mg,14.4mmol)分几批处理。2小时后,真空除去溶剂,加入碳酸氢钠水溶液(10mL),用氯仿与异丙醇的混合物(4∶1,3×30mL)萃取粗产物。将合并的有机萃取液干燥,并真空除去溶剂。如本实施例方法B步骤D所述进一步纯化,或者使用Chralcel?OD柱通过制备色谱法进一步纯化,使用己烷与乙醇的混合物(95∶5)作为洗脱剂。光谱和色谱特性与标准样本相同。

        方法D

        步骤A

        将中间体15(684mg,1.156mmol)、BOC2O(510mg,2.31mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)处理,并在室温剧烈搅拌2小时。分离出有机层,将水层用二氯甲烷(3×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水回洗,用无水硫酸钠干燥,过滤,并真空除去溶剂。通过梯度硅胶色谱法纯化残余物,使用乙酸乙酯-己烷混合物作为洗脱剂。乙酸乙酯的浓度从0逐渐增加至100%。以该方式获得了304mg(56%)所需产物。1H?NMR(500MHz,CDCl3):6.8(s,1H),6.3(s,1H),6.07(dd,J=5.7,1.8Hz,1H),5.80(dd,5.7,1.8Hz,1H),4.75(m,4H),4.2(bt,J=5.3Hz,2H),3.91(bt,5.7Hz,2H),2.68(dd,J=13.0,7.8Hz,1H),2.1(m,1H),1.86(dd,J=13.0,4.8Hz,1H),1.43(s,9H),0.88(d,J=6.9Hz,3G),0.82(d,J=6.9Hz,3H).

        步骤B

        将得自前一步骤的烯烃(84mg,0.1789mmol)和Pd/C(83mg,10%)在乙醇(10mL)中的溶液于常压下氢化2小时。过滤出催化剂,减压除去溶剂,获得了84mg粗产物。使用制备TLC进一步纯化(乙酸乙酯+己烷/4∶1),获得了10.4mg纯净的产物。1H?NMR(500MHz,CDCl3):6.8(s,1H),6.2(s,1H),4.84(m,2H),4.65(m,2H),4.2(m,2H),3.91(m,2H),2.68(m,1H),2.24(m,2H),2.1(m,4H),1.86(m,2H),1.43(s,9H),0.82(m?7H).

        步骤C

        将得自前一步骤的BOC-?;さ陌?275mg,0.584mmol)溶解在4N?HCl的二氧杂环己烷溶液中,在室温搅拌2小时。真空除去溶剂,获得了240.6mg盐酸盐形式的纯产物。LC-MS:C18H24F3N3O2[M+H]+的计算值:382.18,实测值:382.4.

        步骤D

        将其制备描述在前一步骤中的胺(240.6mg,0.584mmol)、酮中间体7(200mg,1.752mmol)、4分子筛(1.7g)、二异丙基乙胺(100μL,0.584mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液用三乙酰氧基硼氢化钠(618mg,2.92mmol)处理,在室温搅拌24小时。将该反应混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液内,用二氯甲烷(4×50mL)萃取产物。将合并的萃取液干燥(无水硫酸钠)并真空除去溶剂。把残余物通过制备TLC纯化,使用二氯甲烷+甲醇+氢氧化铵/90∶9∶1混合物作为洗脱剂。该非对映体混合物在反相色谱分析上显示单峰,该峰的质谱分析证实了预计的分子量:LC-MS:C24H34F3N3O3[M+H]+的计算值:470.26,实测值:470.50.

        步骤E

        使用Chiralcel?OD柱,通过半制备手性色谱法获得了该单独的异构体,使用己烷与乙醇的87∶13混合物,以9.0mL/分钟的流速洗脱。在这些条件下,本标题化合物作为第三个色谱峰洗脱下来,其分析(分析Chiralcel柱,相同洗脱剂,流速为1.0mL/分钟)保留时间为47.4分钟。该样本的所有光谱以及所记录的色谱参数与独立地合成的标准样本匹配。

        ???????????????????????实施例5

        方法A

        本标题化合物是使用半制备Chiralpak?AD柱,通过色谱分离而由异构体混合物获得的,所述异构体混合物的制备描述在实施例4步骤A-C下面。采用在实施例4步骤C下面描述的条件,并且本标题化合物是作为较慢洗脱下来的异构体获得的(Tr=12.01分钟,m=25.4mg)。

        方法B

        步骤A

        该酸是按照类似于中间体13方法A中描述的方法由酯中间体11制得的。

        步骤B

        本标题化合物是按照与实施例4方法B步骤A-C中描述的相同方法,但是使用中间体11作为原料合成的。其光谱和色谱特性与较慢洗脱下来的异构体(其制备描述在实施例4步骤C中)相同。

        方法C

        使用Chiralcel?OD柱,通过半制备手性色谱法获得了该单独的异构体,使用己烷与乙醇的87∶13混合物,以9.0mL/分钟的流速洗脱。在这些条件下,本标题化合物作为第四个色谱峰洗脱下来,其分析(分析Chiralcel柱,相同洗脱剂,流速为1.0mL/分钟)保留时间为47.4分钟。该样本的所有光谱以及所记录的色谱参数与独立地合成的标准样本匹配。

        ???????????????????????实施例6

        将得自实施例4的胺(22.7mg,0.0483mmol)、甲醛(100μL,0.96mmol)、二异丙基乙胺(9μL,0.0483mmol)和粉碎的4分子筛(400mg)在二氯甲烷(6mL)中的溶液用三乙酰氧基硼氢化钠(53mg,0.24mmol)处理,在室温搅拌过夜。通过倒入饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)来中止反应,用二氯甲烷(4×10mL)萃取粗产物。将合并的有机萃取液干燥,并真空除去溶剂。通过制备TLC进一步纯化(二氯甲烷∶甲醇∶氢氧化铵(90∶9∶1),获得了7.2mg所需产物。LC-MS:C25H36F3N3O3[M+H]+的计算值:484.27,实测值:484.60.

        ???????????????????????实施例7

        步骤A

        将胺中间体15(2.00g,5.41mmol)、酮中间体7(1.00g,8.13mmol)、粉碎的4分子筛(4g)在二氯甲烷(20mL)中的溶液用三乙酰氧基硼氢化钠(3.44g,16.22mmol)处理,在室温搅拌24小时。将该反应混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液(80mL)内,用氯仿(5×80mL)萃取产物。将合并的有机萃取液干燥,减压除去溶剂。将残余物(2.72g,浓油状物)通过柱色谱法纯化(硅胶,二氯甲烷+甲醇+氢氧化铵(90∶9∶1),获得了1.2979g两种顺式非对映体的非对映体混合物。

        步骤B

        通过手性半制备Chiralcel?OD柱,使用己烷与乙醇的混合物(9∶1)作为洗脱剂,并且使用9.0mL/分钟的流速,将两种顺式非对映体的混合物分离成本标题(THP-3S,4S)异构体。在U类似分析条件下(1.0mL流速,相同柱),本标题异构体第一个洗脱下来,Tr=23.30分钟,而THP-3R,4R异构体(实施例8)第二个洗脱下来,Tr=25.65分钟。

        ???????????????????????实施例8

        本标题化合物是在实施例7描述的分离中,作为第二个洗脱下来的异构体获得的。

        ???????????????????????实施例9

        本标题化合物是按照类似于制备实施例7中描述的方法,由中间体15和中间体5合成的。使用类似于实施例8中描述的手性半制备HPLC分离,可以分离出少量其它非对映THP-顺式异构体(结构参见实施例10)。LC-MS:C24H32F3N3O4[M+H]+的计算值:484.23,实测值:484.50.1H?NMR(500MHz,CDCl3):6.80(s,1H),6.28(s,1H),6.03(dd,J=6.0,1.8Hz,1H),5.91(dd,J?6.0,1.8Hz,1H),4.75(s,2H),4.26(m,1H),4.13(m,1H),4.03(dd,J=12.1,3.4Hz,1H),3.95(m,4H),3.34(m,6H),2.80(m,1H),2.44(dd,J=13.3,7.8Hz,1H),2.14(m,1H),1.8(bm,7H),1.3(m,1H),0.87(m,.7H)。

        ???????????????????????实施例10

        通过如实施例9所述的半制备手性色谱分离,可以获得少量该异构体。LC-MS:C24H32F3N3O4[M+H]+的计算值:484.23,实测值:484.50.

        ???????????????????????实施例11

        将得自实施例9的烯烃(69mg,0.144mmol)和Pd/C(51mg,10%)在乙醇中的溶液于常压和常温下氢化。过滤出催化剂,将滤液真空蒸发至干。如果需要的话,可以通过半制备手性HPLC柱(Chiralcel?OD,80%烷,20%醇)来除去异构体污染物。LC-MS:C24H34F3N3O4[M+H]+的计算值:486.25,实测值:486.55.

        ???????????????????????实施例12

        该单独的异构体是通过半制备手性色谱法,使用Chiralcel?OD柱,用己烷与乙醇的87∶13混合物洗脱,使用9.0mL/分钟的流速,由异构体混合物(其制备描述在实施例4方法D中)获得的。在这些条件下,本标题化合物作为第一个色谱峰洗脱下来,其分析(分析Chiralcel柱,相同洗脱剂,1.0mL/分钟的流速)保留时间为29.4分钟。

        ???????????????????????实施例13

        该单独的异构体是通过半制备手性色谱法,使用Chiralcel?OD柱,用己烷与乙醇的87∶13混合物洗脱,使用9.0mL/分钟的流速,由异构体混合物(其制备描述在实施例4方法D中)获得的。在这些条件下,本标题化合物作为第二个色谱峰洗脱下来,其分析(分析Chiralcel柱,相同洗脱剂,1.0mL/分钟的流速)保留时间为34.2分钟。

        ???????????????????????实施例14

        步骤A

        将酸中间体14(171mg,0.3016mmol)、二异丙基乙胺(105μL,0.6032mmol)在THF中的溶液冷却至0℃,加入纯净的甲磺酰氯(302μL,0.3016mmol)。继续在0℃搅拌,直至用甲醇进行微处理,HPLC表明完全形成甲基酯,这是表示完全形成了混合酸酐的信号。向该溶液中加入中间体3(77mg,0.3016mmol,作为盐酸盐)、三乙胺(105μL,0.6032mmol)在THF(2mL)中的混合物,移去冷却浴。继续在室温搅拌1小时。真空除去溶剂,加入水(20mL),将产物萃取到二氯甲烷(4×20mL)内。将合并的有机萃取液干燥(无水硫酸钠),过滤并减压除去溶剂。通过制备TLC纯化残余物,获得了24mg纯的所需产物。LC-MS:C32H35F6N3O6[M+H]+的计算值:672.24,实测值:672.25.

        步骤B

        将得自前一步骤的三氟乙酰胺(25mg,0.0372mmol)在乙醇(6mL)中的溶液以少量多次的方式用硼氢化钠(38mg,1mmol)处理,在室温搅拌2小时。真空除去溶剂,通过制备TLC纯化残余物,使用二氯甲烷∶甲醇∶氢氧化铵(90∶9∶1)作为洗脱剂。以该方式获得了15.4mg纯产物。LC-MS:C30H36F3N3O5[M+H]+的计算值:576.26,实测值:576.30。

        ???????????????????????实施例15

        将得自实施例14的酯(15mg,0.0261mmol)在甲醇(3.0mL)中的溶液用氢氧化锂水溶液(600μL,1N)处理,在室温搅拌3小时。减压除去挥发物,用二氯甲烷萃取产物。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥,过滤,并将溶剂真空蒸发。通过制备TLC纯化残余物,使用二氯甲烷∶甲醇∶氢氧化铵(90∶9∶1)作为洗脱剂。以该方式获得了5.4mg所需产物。LC-MS:C23H32F3N3O4[M+H]+的计算值:472.23,实测值:472.25.

        虽然已经描述了本发明,并且用一些其具体实施方案举例说明了本发明,但是本领域技术人员应当理解,在不背离本发明的实质和范围的情况下,可以进行方法和方案的各种适应性改变、改动、修饰、替换、删除或加入。例如,对于任何适应症,作为进行治疗的哺乳动物对于上述本发明化合物的反应性的改变的结果,可以采用在本文提出的特定剂量之外的有效剂量。同样,所观察到的特定药理反应可根据和依赖于所选择的特定活性化合物或者是否存在药物载体以及采用的制剂类型和给药方式而改变,并且这样的预计的结果改变或不同根据本发明的目的和实施是可以涉及的。因此,本发明应当通过权利要求书来限定,并且这样的权利要求书应当做最宽的合理解释。

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