• 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03
    • / 6
    • 下载费用:30 金币  

    重庆时时彩飞马团队: 利用基质辅助激光解吸质谱检测乌头碱体外代谢产物的方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN200910217943.9

    申请日:

    2009.12.02

    公开号:

    CN101710097A

    公开日:

    2010.05.19

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 专利权的转移IPC(主分类):G01N 27/64变更事项:专利权人变更前权利人:中国科学院长春应用化学研究所变更后权利人:常州储能材料与器件研究院变更事项:地址变更前权利人:130022 吉林省长春市人民大街5625号变更后权利人:213000 江苏省常州市河海东路9号登记生效日:20130930|||授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 27/64申请日:20091202|||公开
    IPC分类号: G01N27/64 主分类号: G01N27/64
    申请人: 中国科学院长春应用化学研究所
    发明人: 刘淑莹; 王曦烨; 宋凤瑞; 刘志强
    地址: 130022 吉林省长春市人民大街5625号
    优先权:
    专利代理机构: 长春科宇专利代理有限责任公司 22001 代理人: 马守忠
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN200910217943.9

    授权公告号:

    |||101710097B||||||

    法律状态公告日:

    2013.10.30|||2012.11.07|||2010.07.07|||2010.05.19

    法律状态类型:

    专利申请权、专利权的转移|||授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明提供了利用基质辅助激光解吸质谱检测乌头碱体外代谢产物的方法。该方法将乌头碱加入含有健康大鼠新鲜粪便的普通厌氧菌培养基中培养一周,得到培养液,培养液以二氯甲烷萃取,二氯甲烷萃取液经离心,上清液经过微孔滤膜过滤后,利用基质辅助激光解吸质谱分析其中的乌头碱体外代谢产物。该方法分析出了18种乌头碱的体外代谢产物,具有简单易行,快速高效的特点。

    权利要求书

    1: 利用基质辅助激光解吸质谱检测乌头碱体外代谢产物的方法,步骤和条件如下: 将0.5~1.5毫克乌头碱放入10毫升含有0.2克健康大鼠粪便的普通厌氧菌培养基中,37℃厌氧条件下培养4~7日,取100~200微升培养液以1毫升二氯甲烷萃取,二氯甲烷萃取液以3000~5000转/分钟速率离心,所得上清液经0.45微米微孔滤膜过滤后,上清液与基质混合,上清液与基质的体积比为1∶0.5~1∶2,所获得的混合液利用基质辅助激光解吸质谱进行分析; 所述的基质为如下方法得到的:(1)取α-氰基-4-羟基肉桂酸2~3毫克,加入到200~300微升的乙腈和水的体积比为3∶7~7∶3的混合溶剂中,最后加入8~10微升三氟乙酸;或者, (2)取2,5-二羟基苯甲酸2~3毫克,加入到200~300微升的乙腈和水的体积比为3∶7~7∶3的混合溶剂中,最后加入8~10微升三氟乙酸。

    说明书


    利用基质辅助激光解吸质谱检测乌头碱体外代谢产物的方法

        【技术领域】

        本发明涉及利用基质辅助激光解吸质谱检测乌头碱体外代谢产物的方法。

        技术背景

        毛莨科乌头属植物附子,川乌和草乌是常用的中药材,具有强心,止痛及消炎等多种药理活性,同时也具有一定毒性。乌头碱是其中的主要有效成分和毒性成分之一。由于中药一般多为口服用药,其有效成分在到达吸收的靶器官之前,在肠道内均会受到肠内菌群的作用。乌头碱能够在肠内菌群的作用下代谢为单酯型生物碱,双酯型生物碱及脂类生物碱。(赵宇峰等,高等学?;аПǎ篤ol.28(11),2007,2051-2055)现代药理学研究证明,双酯型生物碱活性较强,但毒性也较大。脂型生物碱具有镇痛,消炎等显著的生物活性,与双酯型生物碱比较,其毒性较小,是一类具有广泛药理活性的化学成分,具有重要的研究价值和广阔的应用前景。由于乌头碱的体外代谢过程极其复杂,代谢产物种类繁多,因此要求有一种快捷且准确的方法对代谢产物予以分析。

        【发明内容】

        本发明是利用基质辅助激光解吸质谱(MALDI-MS)检测乌头碱体外代谢产物的方法。本发明方法可对乌头碱体外代谢产物予以快速准确的分析。

        利用基质辅助激光解吸质谱(MALDI-MS)检测乌头碱体外代谢产物的方法,步骤和条件如下:

        将0.5~1.5毫克乌头碱放入10毫升含有0.2克健康大鼠粪便的普通厌氧菌培养基(GAM培养基)中,37℃厌氧条件下培养4~7日,取100~200微升培养液以1毫升二氯甲烷萃取,二氯甲烷萃取液以3000~5000转/分钟速率离心,所得上清液经0.45微米微孔滤膜过滤后,上清液与基质混合,上清液与基质的体积比为1∶0.5~1∶2,所获得的混合液利用基质辅助激光解吸质谱进行分析;

        所述的基质为如下方法得到的:(1)取α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)2~3毫克,加入到200~300微升的乙腈和水的体积比为3∶7~7∶3的混合溶剂中,最后加入8~10微升三氟乙酸;或者,

        (2)取2,5-二羟基苯甲酸(DHB)2~3毫克,加入到200~300微升的乙腈和水的体积比为3∶7~7∶3的混合溶剂中,最后加入8~10微升三氟乙酸。

        有益效果:本发明提供的的利用基质辅助激光解吸质谱检测乌头碱体外代谢产物的方法,经基质辅助激光解吸质谱分析后表明,乌头碱(质谱中的相对质荷比为m/z?646)经体外代谢后可得到以下十八种代谢产物,包括:单酯型生物碱:去乙酸乌头碱(m/z?586),苯甲酰乌头原碱(m/z?604);双酯型生物碱:去氧乌头碱(m/z?630),16-0-去甲基乌头碱(m/z?632),10-OH-乌头碱(m/z?662);脂类生物碱:8-丙酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?660),8-丁酰-苯甲酰乌头原碱(m/z674),8-戊酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?688),8(3-羟基)-丁酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?690),8-己烯酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?700),8-己酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?702),8-十四烷酰-苯甲酰乌头原碱(m/z814),8-十五烷酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?828),8-十六烷酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?842),8-十七碳烯酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?854),8-甲基十六烷酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?856),8-十八碳烯酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?868),8-十八烷酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?870)。实验结果表明,利用基质辅助激光解吸质谱分析乌头碱代谢产物的方法具有简单易行,高效准确的特点。

        【附图说明】

        图1是实施例1的质谱谱图。图中:质荷比604(苯甲酰乌头原碱)为典型的单酯型生物碱,质荷比630(去氧乌头碱)为典型的双酯型生物碱,质荷比700(8-己烯酰-苯甲酰乌头原碱)为典型的脂类生物碱。

        【具体实施方式】

        实施例1:将0.5毫克乌头碱放入10毫升含有0.2克健康大鼠粪便的普通厌氧菌培养基(GAM培养基)中,37℃厌氧条件下培养4日,取100微升培养液以1毫升二氯甲烷萃取,二氯甲烷萃取液以3000转/分钟速率离心,所得上清液经0.45微米微孔滤膜过滤后,上清液与基质混合,上清液与基质的体积比为1∶0.5,所获得的混合液利用基质辅助激光解吸质谱进行分析。

        基质为:α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)2毫克,加入200微升乙腈和水的体积比为3∶7的混合溶剂中,最后加入8微升三氟乙酸。

        经质谱检测,得到乌头碱的十八种体外代谢产物,包括:单酯型生物碱:去乙酸乌头碱(m/z?586),苯甲酰乌头原碱(m/z?604);双酯型生物碱:去氧乌头碱(m/z?630),16-O-去甲基乌头碱(m/z?632),10-OH-乌头碱(m/z?662);脂类生物碱:8-丙酰-苯甲酰乌头原碱(m/z660),8-丁酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?674),8-戊酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?688),8(3-羟基)-丁酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?690),8-己烯酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?700),8-己酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?702),8-十四烷酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?814),8-十五烷酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?828),8-十六烷酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?842),8-十七碳烯酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?854),8-甲基十六烷酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?856),8-十八碳烯酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?868),8-十八烷酰-苯甲酰乌头原碱(m/z?870)。

        实施例2:将1.5毫克乌头碱放入10毫升含有0.2克健康大鼠粪便的普通厌氧菌培养基(GAM培养基)中,37℃厌氧条件下培养7日,取200微升培养液以1毫升二氯甲烷萃取,二氯甲烷萃取液以5000转/分钟速率离心,所得上清液经0.45微米微孔滤膜过滤后,上清液与基质混合,上清液与基质的体积比为1∶2,所获得的混合液利用基质辅助激光解吸质谱进行分析。

        基质为:α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)3毫克,加入300微升乙腈和水的体积比为7∶3的混合溶剂中,最后加入10微升三氟乙酸。

        经质谱检测,得到乌头碱的十八种体外代谢产物(同实施例1)。

        实施例3:将1毫克乌头碱放入10毫升含有0.2克健康大鼠粪便的普通厌氧菌培养基(GAM培养基)中,37℃厌氧条件下培养5日,取150微升培养液以1毫升二氯甲烷萃取,二氯甲烷萃取液以3500转/分钟速率离心,所得上清液经0.45微米微孔滤膜过滤后,上清液与基质混合,上清液与基质的体积比为1∶1,所获得的混合液利用基质辅助激光解吸质谱进行分析。

        基质为:α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)2.5毫克,加入250微升乙腈和水的体积比为1∶1的混合溶剂中,最后加入9微升三氟乙酸。

        经质谱检测,得到乌头碱的十八种体外代谢产物(同实施例1)。

        实施例4:将0.85毫克乌头碱放入10毫升含有0.2克健康大鼠粪便的普通厌氧菌培养基(GAM培养基)中,37℃厌氧条件下培养6日,取120微升培养液以1毫升二氯甲烷萃取,二氯甲烷萃取液以3600转/分钟速率离心,所得上清液经0.45微米微孔滤膜过滤后,上清液与基质混合,上清液与基质的体积比为1∶0.8,所获得的混合液利用基质辅助激光解吸质谱进行分析。

        基质为:2,5-二羟基苯甲酸(DHB)2.2毫克,加入220微升乙腈和水的体积比为3∶7的混合溶剂中,最后加入8微升三氟乙酸。

        经质谱检测,得到乌头碱的十八种体外代谢产物(同实施例1)。

        实施例5:将1.2毫克乌头碱放入10毫升含有0.2克健康大鼠粪便的普通厌氧菌培养基(GAM培养基)中,37℃厌氧条件下培养7日,取100微升培养液以1毫升二氯甲烷萃取,二氯甲烷萃取液以4500转/分钟速率离心,所得上清液经0.45微米微孔滤膜过滤后,上清液与基质混合,上清液与基质的体积比为1∶1,所获得的混合液利用基质辅助激光解吸质谱进行分析。

        基质为:2,5-二羟基苯甲酸(DHB)3毫克,加入300微升乙腈和水的体积比为7∶3的混合溶剂中,最后加入10微升三氟乙酸。

        经质谱检测,得到乌头碱的十八种体外代谢产物(同实施例1)。

        实施例6:将1.4毫克乌头碱放入10毫升含有0.2克健康大鼠粪便地普通厌氧菌培养基(GAM培养基)中,37℃厌氧条件下培养5日,取200微升培养液以1毫升二氯甲烷萃取,二氯甲烷萃取液以4000转/分钟速率离心,所得上清液经0.45微米微孔滤膜过滤后,上清液与基质混合,上清液与基质的体积比为1∶0.6,所获得的混合液利用基质辅助激光解吸质谱进行分析。

        基质为:2,5-二羟基苯甲酸(DHB)2.7毫克,加入270微升乙腈和水的体积比为1∶1的混合溶剂中,最后加入9微升三氟乙酸。

        经质谱检测,得到乌头碱的十八种体外代谢产物(同实施例1)。

    关 键 词:
    利用 基质 辅助 激光 解吸 检测 乌头 体外 代谢 产物 方法
      专利查询网所有资源均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
    关于本文
    本文标题:利用基质辅助激光解吸质谱检测乌头碱体外代谢产物的方法.pdf
    链接地址://www.4mum.com.cn/p-5781961.html
    关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服客服 - 联系我们

    [email protected] 2017-2018 www.4mum.com.cn网站版权所有
    经营许可证编号:粤ICP备17046363号-1 
     


    收起
    展开
  • 四川郎酒股份有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度环保奖 2019-05-13
  • 银保监会新规剑指大企业多头融资和过度融资 2019-05-12
  • 韩国再提4国联合申办世界杯 中国网友无视:我们自己来 2019-05-11
  • 中国人为什么一定要买房? 2019-05-11
  • 十九大精神进校园:风正扬帆当有为 勇做时代弄潮儿 2019-05-10
  • 粽叶飘香幸福邻里——廊坊市举办“我们的节日·端午”主题活动 2019-05-09
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-05-09
  • 拜耳医药保健有限公司获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-05-08
  • “港独”没出路!“梁天琦们”该醒醒了 2019-05-07
  • 陈卫平:中国文化内涵包含三方面 文化复兴表现在其中 2019-05-06
  • 人民日报客户端辟谣:“合成军装照”产品请放心使用 2019-05-05
  • 【十九大·理论新视野】为什么要“建设现代化经济体系”?   2019-05-04
  • 聚焦2017年乌鲁木齐市老城区改造提升工程 2019-05-04
  • 【专家谈】上合组织——构建区域命运共同体的有力实践者 2019-05-03
  • 【华商侃车NO.192】 亲!楼市火爆,别忘了买车位啊! 2019-05-03