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    重庆时时彩3星和值: 一种蛋白质的检测试剂、检测方法及检测仪器.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN200910012461.X

    申请日:

    2009.07.10

    公开号:

    CN101718790A

    公开日:

    2010.06.02

    当前法律状态:

    驳回

    有效性:

    无权

    法律详情: 发明专利申请公布后的驳回IPC(主分类):G01N 33/68申请公布日:20100602|||著录事项变更IPC(主分类):G01N 33/68变更事项:发明人变更前:苏福海 全灿 张庆和 李红梅 高德江变更后:苏福海 全灿 张庆合 李红梅 高德江|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/68申请日:20090710|||公开
    IPC分类号: G01N33/68; G01N21/27 主分类号: G01N33/68
    申请人: 中国计量科学研究院
    发明人: 苏福海; 全灿; 张庆和; 李红梅; 高德江
    地址: 100013 北京市北三环东路18号
    优先权:
    专利代理机构: 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 代理人: 周秀梅;许宗富
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN200910012461.X

    授权公告号:

    |||||||||

    法律状态公告日:

    2014.01.15|||2010.09.08|||2010.07.21|||2010.06.02

    法律状态类型:

    发明专利申请公布后的驳回|||著录事项变更|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开了一种蛋白质的检测试剂、检测方法及检测仪器,该试剂以重量百分比,取0.1~10份的酸性橙-12溶解在1~500份的磷酸缓冲溶液中,再加入1~500份的冰醋酸,最后用1~5000份的水稀释,振荡混合则得到所述的蛋白质的检测试剂。与传统方法相比它可以有效检测真蛋白质含量,能够在较宽的范围内进行蛋白质的检测,非蛋白质含氮化合物如尿素、三聚氰胺等基本不干扰检测的准确性。本发明的仪器结构小巧,便于携带。能够广泛用于基层以及现场的奶制品快速检测的需要。

    权利要求书

    1: 一种蛋白质的检测试剂,其特征在于:以重量百分比,取0.1~10份的酸性橙-12溶解在1~500份的磷酸缓冲溶液中,再加入1~500份的冰醋酸,最后用1~5000份的水稀释,振荡混合则得到所述的蛋白质的检测试剂。
    2: 根据权利要求1所述的蛋白质的检测试剂,其特征在于:取2g酸性橙-12溶解在100ml的磷酸缓冲溶液中,再加入100ml的冰醋酸,最后用1000ml的水稀释。
    3: 根据权利要求1或2所述的蛋白质的检测试剂,其特征在于:磷酸缓冲溶液中磷酸二氢钾的浓度为0.01~0.05mol/l,pH为2~
    4: 6。 4.根据权利要求3所述的蛋白质的检测试剂,其特征在于:磷酸缓冲溶液中磷酸二氢钾的浓度为0.01mol/l,pH为3。
    5: 一种使用权利要求1所述的蛋白质检测试剂的检测方法,包括如下步骤: 1)称量一定质量的样品和蛋白质检测试剂10~60g; 2)然后将样品添加到蛋白质检测试剂中,振荡混合1~10分钟,后静置1~10分钟; 3)过滤沉淀,滤液收集于仪器的比色瓶中,测定其数值; 4)再测定未加样品的检测试剂的数值; 5)经仪器处理给出蛋白质含量并打印结果,同时储存结果与检测装置中。
    6: 根据权利要求5所述的检测蛋白质的方法,其特征在于:蛋白质检测试剂的质量为40g。
    7: 根据权利要求6所述的检测蛋白质的方法,其特征在于:过滤采用针头过滤器过滤。
    8: 一种用于检测权利要求1所述的蛋白质检测试剂的检测仪器,其特征在于:该仪器包括光源(1)、比色池(2)和检测器(3),其中微处理器(5)通过信号控制与放大???4)分别与光源(1)、检测器(3)连接;光源(1)发出的光透射过比色池(2)被检测器(3)检测,检测器(3)将检测到的信号经信号控制与放大???4)传送给微处理器(5),信号控制与放大???4)控制光源(1),微处理器(5)分别与显示???6)、打印机(8)和按键(7)连接;比色瓶位于比色池(2)内,比色瓶为扁长方体。
    9: 根据权利要求8中所述的蛋白质检测仪器,其特征在于:比色瓶的内腔厚度为1mm。
    10: 根据权利要求9中所述的蛋白质检测仪器,其特征在于:比色池(2)上安装光电传感器。

    说明书


    一种蛋白质的检测试剂、检测方法及检测仪器

        【技术领域】

        本发明涉蛋白质的检测试剂、检测方法及检测仪器,具体来说是为原料乳及乳制品、食品原料与加工食品、宠物食品等含蛋白质食品中蛋白质总量的检测提供检测试剂、检测方法及检测仪器。

        背景技术

        蛋白质检测对我们日常生产生活都是至关重要的,牛奶里之所以掺三聚氰胺,是因为检测部门想要检测牛奶合格与否,实际上就是检测里面蛋白质的含量;因为蛋白质的检测比较困难,则以往普遍运用的方法根据蛋白质中含的N检测蛋白质,结果出现了掺三聚氰胺假冒蛋白质的事件,则提供一种科学准确的检测蛋白质的方法是势在必行。

        传统的蛋白质检测主要包括以下几种方法:凯式定氮法、杜马斯燃烧法、双缩脲法、紫外吸收法、考马斯亮蓝显色法、酸性橙染料12褪色法、SDS(十二烷基硫酸钠)或者CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)等表面活性剂滴定法等,表1列出了目前常用的蛋白质测量方法的比较。

        表1几种蛋白质测定方法的比较

        ??方法?灵敏度??时间??原理??说明??凯氏定氮法?灵敏度低,适用于?0.2~1.0mg??费时??8~10h??将蛋白质转化为??氮,用酸吸收后滴??定??用于标准蛋白质??含量的准确测??定,干扰少,费??时太长??双缩脲法?灵敏度低,适用于?1~20mg??中速8~10h??多肽键+碱性??Cu2+紫色络合物??用于快速测定,??但是灵敏度不??高,不同蛋白质??显色相似??紫外吸收法?较为灵敏,?50~100μg??快速??5~10min??蛋白质中酪氨酸??和色氨酸残基在??280nm的光吸收??用于层析柱流出??液的检测,核酸??的吸收可以校正

        ??方法?灵敏度??时间??原理??说明??考马斯亮蓝法?灵敏度高,1~5μg??快速??5~15min??考马斯亮蓝染料??与蛋白质结合,最??大吸收波长由??465nm变为??595nm??干扰物质少,颜??色稳定,颜色深??浅随蛋白质种类??性质不同而变??化,混合蛋白定??量困难。

        在上述蛋白质测量方法中,凯式定氮法与杜马斯燃烧法的主要问题是通过测量样品中的总氮元素后折算为样品中的蛋白质总量,对于添加的非蛋白质类含氮化合物如尿素、三聚氰胺等不能够区分,反映出来的是蛋白质总量提高,非法添加正是利用了上述两种方法检测的缺陷。双缩脲法与紫外吸收法是在特定波长进行检测,相对而言灵敏度较低,容易受基体干扰,如果基体中包括在该波长测定有影响的化合物,会影响测量结果的准确性??悸硭沽晾斗槊舳冉细?,但是对于乳制品、食品中的含蛋白质较高的样品来说,取样量很少,容易引入较大的称量误差;另外,考马斯亮蓝试剂与不同种类、性质的蛋白质的灵敏度不同,线性有明显差异,因此对于不同基体样品中蛋白质测定结果存在明显的差异。

        【发明内容】

        本发明所要解决的技术问题是提供一种蛋白质的检测试剂、方法及检测仪器,它可以检测出含蛋白质的样品中的真蛋白质检测,避免非蛋白质氮的干扰与传统方法对不同性质与种类蛋白质定量结果不准确的问题。

        为了解决上述问题,本发明提供了如下的技术方案:

        一种蛋白质的检测试剂,以重量百分比,取0.1~10份的酸性橙-12溶解在1~500份的磷酸缓冲溶液中,再加入1~500份的冰醋酸,最后用1~5000份的水稀释,振荡混合则得到所述的蛋白质的检测试剂。

        取2g酸性橙-12溶解在100ml的磷酸缓冲溶液中,再加入100ml的冰醋酸,最后用1000ml的水稀释;

        磷酸缓冲溶液中磷酸二氢钾的浓度为0.01~0.05mol/l,pH为2~4.6;

        磷酸缓冲溶液中磷酸二氢钾的浓度为0.01mol/l,pH为3。

        一种蛋白质检测试剂的检测方法,包括如下步骤:

        1)称量一定质量的样品和蛋白质检测试剂10~60g;

        2)然后将样品添加到蛋白质检测试剂中,振荡混合1~10分钟,后静置1~10分钟;

        3)过滤沉淀,滤液收集于仪器的比色瓶中,测定其数值;

        4)再测定未加样品的试剂的数值;

        5)经仪器处理给出蛋白质含量并打印结果,同时储存结果与检测装置中。

        蛋白质检测试剂的质量为40g;

        过滤采用针头过滤器过滤;

        振荡混合3分钟,后静置3分钟。

        一种蛋白质检测试剂的检测仪器,该仪器包括光源、比色池和检测器,其中微处理器通过信号控制与放大??榉直鹩牍庠?、检测器连接;光源发出的光透射过比色池被检测器检测,检测器将检测到的信号经信号控制与放大??榇透⒋砥?,信号控制与放大??榭刂乒庠?,微处理器分别与显示???、打印机和按键连接;比色瓶位于比色池内,比色瓶为扁长方体。

        比色瓶的内腔厚度为1mm;

        比色池上安装光电传感器。

        与现有技术相比,本发明具有如下优点:

        1、采用酸性橙-12作为蛋白质的检测试剂,其结合原理是:

        与传统方法相比它可以有效检测真蛋白质含量,能够在较宽的范围内进行蛋白质的检测,非蛋白质含氮化合物如尿素、三聚氰胺等基本不干扰检测的准确性。

        2、酸性条件下,酸性橙-12能够与蛋白质残基定量结合并沉淀,使染料溶液褪色,通过测定所结合染料的量计算得到蛋白质总量,避免了凯式定氮法、杜马斯燃烧法等方法测量时非蛋白质氮所引起的结果偏差。

        3、本发明地检测试剂可以准确测定真蛋白质的量,结果准确可靠、设备仪器比较简单。

        4、本发明的方法是基于染料与蛋白质结合使得染料褪色,然后测定溶液中剩下的染料溶液的量进行测定,该方法具有抗干扰能力强,颜色随蛋白质含量增加而变浅的特点。

        5、本发明优选检测试剂的添加量40g,它既兼顾了仪器本身的检测线性范围,保证了结果的可靠性,又使待测样品的用量能够在一个合理的称量范围,降低了称量所带了的误差;而样品的量则是根据检测试剂的量和不同样品性质来确定。

        6、本发明检测试剂中添加磷酸缓冲溶液和冰醋酸,即可调节试剂的pH值,又优化酸性橙-12与蛋白质的结合。

        7、本发明的仪器结构小巧,便于携带。能够广泛用于基层以及现场的奶制品快速检测的需要。

        8、本发明采用超高亮LED发光二极管为光源,它既作光源(发光强度2000MCD以上)又作单色器;由于LED光源能耗低(20mA以下),使用寿命可达10万小时。通过完善LED光源代替传统分光光度计上的钨灯光源(使用寿命3000小时),防止了钨灯光源强度降低、测量精度下降和光源使用寿命问题,同时,LED自身发射出单色光,完全可以满足光度法技术要求。

        9、本发明专门设计的短光程比色瓶和与之吻合的比色池,其光程仅为1mm,能够在吸光度线性范围内检测较宽的浓度范围。

        10、本发明的检测器采用光频转换技术的TSL系列集成光电传感器,与传统检测器相比,它不但具有能耗低、体积小、重量轻、可靠性高、动态线性范围宽等特点,而且它不需要放大A/D转换系统,可将接收到的光信号直接转变为频率输出给微处理器。

        【附图说明】

        图1是本发明蛋白质测定仪器结构图。

        【具体实施方式】

        实施例1:蛋白质的检测试剂,取2g酸性橙-12溶解在100ml的磷酸缓冲溶液中,再加入100ml的冰醋酸,最后用1000ml的水稀释,即得到检测试剂。

        实施例2:使用酸性橙-12检测试剂检测蛋白质的方法,液体乳中蛋白质含量的测量:在50毫升塑料离心试管中加入0.1~1.5克样品,用天平记录称量的质量,然后加入蛋白质定量试剂40克,天平准确称量染料试剂的质量并储存在专用仪器中,振荡溶液充分混合3分钟后静置3分钟,采用一次性注射器吸取上清液并用针头过滤器过滤,滤液收集于专用仪器的样品瓶中,放入专用仪器中测定数值。每批次未加样品的专用试剂的测定数值记录于仪器中。仪器自动计算,给出蛋白质含量并打印结果,同时储存结果与检测装置中。

        表1三种液态奶样品中蛋白质含量测量结果

        实施例3:奶粉中蛋白质含量的测量

        在50毫升塑料离心试管中加入0.02~0.5克样品,用天平记录称量的质量,然后加入蛋白质定量试剂40克,天平准确称量染料试剂的质量并储存在专用仪器中,振荡溶液充分混合3分钟后静置3分钟,采用一次性注射器吸取上清液并用针头过滤器过滤,滤液收集于专用仪器的样品瓶中,放入专用仪器中测定数值。每批次未加样品的专用试剂的测定数值记录于仪器中。仪器自动计算,给出蛋白质含量并打印结果,同时储存结果与检测装置中。

        表2三种奶粉样品中蛋白质含量测量结果

        实施例4:豆奶粉中蛋白质含量的测量

        在50毫升塑料离心试管中加入0.02~0.5克样品,用天平记录称量的质量,然后加入蛋白质定量试剂40克,天平准确称量染料试剂的质量并储存在专用仪器中,振荡溶液充分混合3分钟后静置3分钟,采用一次性注射器吸取上清液并用针头过滤器过滤,滤液收集于专用仪器的样品瓶中,放入专用仪器中测定数值。每批次未加样品的专用试剂的测定数值记录于仪器中。仪器自动计算,给出蛋白质含量并打印结果,同时储存结果与检测装置中。

        表3不同称样量时测定豆奶粉中蛋白质含量

        ?豆奶粉量(g)??0.0289??0.058??0.086??0.111?蛋白含量%??18.00??18.16??18.00??18.09

        实施例5:微处理器5采用单片机作为控制器件,其控制信号通过信号控制与放大???与光源1连接;光源1采用LED发光二极管为光源,可直接发出单色光,该单色光照射过比色池2固定的比色瓶中的样品后的滤光经光电传感器采集到检测器3中,检测器3的光电传感器(本实施例采用TSL系列集成光电传感器)安装于比色池2上,检测器3将透射过的滤光信号转换成电信号,并将该电信号经信号控制与放大???转换成数字信号传送给微处理器5。微处理器5通过控制信号经信号控制与放大???控制光源1的开与关,微处理器5分别与显示???和打印机8连接,输出检测结果。微处理器5与按键7连接,便于操作;比色瓶为扁长方体,内腔厚度为1mm,比色池2上设有凹槽,与比色瓶完全吻合。

        本仪器不但适用于酸性橙-12检测蛋白质,还适用于其它试剂或样品的检测。

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    一种 蛋白质 检测 试剂 方法 仪器
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