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    重庆时时彩的网址是多少: 测定土茯苓药材有效成分的方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN200910194384.4

    申请日:

    2009.12.04

    公开号:

    CN101716277A

    公开日:

    2010.06.02

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 专利权人的姓名或者名称、地址的变更IPC(主分类):G01N 30/02变更事项:专利权人变更前:广州敬修堂(药业)股份有限公司变更后:广州白云山敬修堂药业股份有限公司变更事项:地址变更前:510130 广东省广州市荔湾区人民南路179号变更后:510130 广东省广州市荔湾区人民南路179号|||授权|||实质审查的生效IPC(主分类):A61K 36/896申请日:20091204|||公开
    IPC分类号: A61K36/896; G01N30/02; A61P29/00; A61P15/00; A61P31/06; A61P17/00; A61P19/00; A61P19/08 主分类号: A61K36/896
    申请人: 广州敬修堂(药业)股份有限公司
    发明人: 陈婷; 周翔; 徐强; 严志标; 曾利杰; 陆颂规; 彭红英
    地址: 510130 广东省广州市荔湾区人民南路179号
    优先权:
    专利代理机构: 广州创颖专利事务所 44222 代理人: 曹可芬
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN200910194384.4

    授权公告号:

    |||101716277B||||||

    法律状态公告日:

    2014.06.11|||2012.06.20|||2010.07.21|||2010.06.02

    法律状态类型:

    专利权人的姓名或者名称、地址的变更|||授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    测定土茯苓药材有效成分的方法,涉及药物分析领域。本发明建立以落新妇苷色谱峰为内参比峰的指纹图谱。具体是:(a)供试品溶液的制备;(b)取落新妇苷为对照品,用甲醇配成每1mL含0.10mg落新妇苷的溶液作为对照品溶液;(c)色谱条件:色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填料;采用梯度洗脱;检测波长325±2nm;柱温为30±5℃;理论塔板数以落新妇苷峰计算,不低于3000;(d)测定。以土茯苓醇溶性提取物建立起来的指纹图谱,包含着土茯苓主要药理活性的有效物质。以指纹图谱作判断土茯苓的质量,避免了只测定一、二个化学成分判断土茯苓质量的片面性。方法简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握,可快速、准确地鉴别产品的真伪优劣。

    权利要求书

    1: 一种测定土茯苓药材有效成分的方法,其特征在于采用高效液相色谱法建立以落新妇苷色谱峰为内参比峰为特征峰的指纹图谱,具体是采取如下方法: (a)供试品溶液的制备:精密称取干燥的土茯苓药材粉末1g,置于25mL容量瓶中,加入60%的乙醇水溶液,超声提取,定容,摇匀,取上清液过滤,即得供试品溶液; (b)对照品溶液的制备:取落新妇苷对照品,用甲醇溶解配成每1mL含0.10mg落新妇苷的溶液; (c)色谱条件:色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填料;采用梯度洗脱,流动相:由A相为甲醇,B相为0.3%(V/V)的乙酸水溶液组成的梯度洗脱液;流速为0.8mL/min;检测波长325±2nm;柱温为30±5℃;理论塔板数以落新妇苷峰计算,不低于3000; (d)测定:分别吸取落新妇苷对照品溶液及供试品溶液5μL,注入高效液相色谱仪,依法测定,记录色谱图。
    2: 如权利要求1所述的测定土茯苓药材有效成分的方法,其特征在于:所说的以落新妇苷色谱峰为内参比峰为特征峰的指纹图谱,土茯苓药材的标准指纹图谱至少有12个特征共有峰: 1号峰平均相对保留时间为0.113,RSD为1.55% 2号峰RT为0.575,RSD为0.95% 3号峰RT为0.648,RSD为0.50% 4号峰RT为0.663,RSD为0.50% 5号峰RT为0.728,RSD为0.40% 6号峰RT为0.829,RSD为0.29% 7号峰RT为0.863,RSD为1.92% 8号峰RT为0.964,RSD为0.03% 9号峰RT为1.00,此峰为内参比峰 10号峰RT为1.085,RSD为0.39% 11号峰RT为1.117,RSD为0.11% 12号峰RT为1.165,RSD为0.13%

    说明书


    测定土茯苓药材有效成分的方法

        所属技术领域

        本发明涉及药物分析领域,具体是建立测定土茯苓药材有效成分的指纹图谱方法。

        背景技术

        土茯苓为百合科植物光叶菝葜(Smilax?glabra?Roxb.)的干燥根茎;具有除湿,解毒,通利关节。用于湿热淋浊、带下、痈肿、瘰疬、疥癣、梅毒及汞中毒所致的肢体拘挛,筋骨疼痛。由于在采收、流通、临床应用等环节不太注重品种的鉴别,因此在土茯苓生产经营中品种比较混乱,质量大有差别。例如:Smilax属菝葜S.china?L.为混淆品。黑果菝葜S.glauco-china?Warb.在四川南川作红土苓,江苏镇江称“鲜土苓”,为地方习用品。白土苓为同科肖菝葜属(Heterosmilax属)植物华肖菝葜H?chinensis?Wang、短柱肖菝葜H.yunnanensis?Gagnep.及肖菝葜H?japonica?Kunth.的根茎。前两种为白土苓的主流种,在四川、湖北、河北、山东、新疆、宁夏、浙江等地分布及使用。

        目前,在国家药典委员会的网(//www.chp.org.cn/)上,2010年版《中国药典》征求意见,中药(一部品种),2010年版药典(一部)部分增修订及新增品种名单(第四批)公示期(2009.8.7~2009.8.31),对2010年版中国药典征求意见稿中所公开的中药材土茯苓的质量标准,采用高效液相色谱法测定土茯苓药材中落新妇苷的含量。药典征求意见稿中的方法只是检测土茯苓药材中的一个化学成分,由于中药的组分复杂,因此评价其质量应采用与之相适应的,能提供丰富鉴别信息的检测方法。药典征求意见稿中的分析方法仅针对中药材的某个有效成分进行定性、定量分析,并不能有效地控制中药材质量,故无法满足生产上对药材质量控制的需要。

        为此需研究一种能有效控制土茯苓药材质量的检测方法。

        【发明内容】

        本发明的目的是建立土茯苓药材的标准指纹图谱,并用此方法来测定土茯苓中有效成分,作为质量控制及真伪鉴别的指标之一。

        为达到本发明目的采用高效液相色谱法建立以落新妇苷色谱峰为内参比峰的指纹图谱,具体是采取如下方法:

        (a)供试品溶液的制备:精密称取干燥的土茯苓药材粉末1g,置于25mL容量瓶中,加入60%(V/V)的乙醇水溶液,超声提取,定容,摇匀,取上清液过滤,即得供试品溶液;

        (b)对照品溶液的制备:取落新妇苷对照品,用甲醇溶解配成每1mL含0.1mg落新妇苷的溶液;

        (c)色谱条件:色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填料;采用梯度洗脱,流动相:由A相为甲醇,B相为0.3%(V/V)的乙酸水溶液组成的梯度洗脱液;流速为0.8mL/min;检测波长325±2nm;柱温为30±5℃;理论塔板数以落新妇苷峰计算,不低于3000;

        (d)测定:分别吸取落新妇苷对照品溶液及供试品溶液5μL,注入高效液相色谱仪,依法测定,记录色谱图。

        按照本发明所提供的方法测定土茯苓药材,以落新妇苷的色谱峰为内参比峰,其保留时间为1,计算相对保留时间,得土茯苓药材的标准指纹图谱至少有12个特征共有峰:

        1号峰平均相对保留时间(简称RT,以下同)为0.113,RSD为1.55%

        2号峰RT为0.575,RSD为0.95%

        3号峰RT为0.648,RSD为0.50%

        4号峰RT为0.663,RSD为0.50%

        5号峰RT为0.728,RSD为0.40%

        6号峰RT为0.829,RSD为0.29%

        7号峰RT为0.863,RSD为1.92%

        8号峰RT为0.964,RSD为0.03%

        9号峰RT为1.00,此峰为内参比峰

        10号峰RT为1.085,RSD为0.39%

        11号峰RT为1.117,RSD为0.11%

        12号峰RT为1.165,RSD为0.13%

        本发明的优点如下:

        1)以土茯苓药材醇溶性提取物建立起来的HPLC指纹图谱,包含着土茯苓药材主要药理活性的有效物质。

        2)以指纹图谱作判断土茯苓药材的质量,避免了因只测定一、二个化学成分判断土茯苓药材质量的片面性。

        3)本发明方法简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握,可快速、准确地鉴别产品的真伪优劣。

        【附图说明】

        图1落新妇苷的HPLC图谱

        图2土茯苓药材标准指纹图谱

        图310个不同批次的土茯苓药材的指纹图谱的组合图

        图4按2010年版药典(一部)国家药典委员会公开征求意见稿中所公开的方法“土茯苓药材的落新妇苷含量测定方法”,用高效液相色谱法测定S2批药材所得的谱图。

        下面结合具体实施例和附图进一步阐述本发明的技术方案

        【具体实施方式】

        实施例1高效液相色谱法测定土茯苓药材有效成分,建立以落新妇苷色谱峰为内参比峰的标准指纹图谱

        1仪器与试药

        1.1仪器

        高效液相色谱仪:Agilent1100高效液相色谱仪,二极管阵列检测器。

        1.2试药

        对照品落新妇苷,自制,无色针状结晶,mp?182-186℃,薄层图谱上为一个单一斑点,HPLC检测基本为单峰(如图1所示),面积归一化法测定含量大于99%。土茯苓药材购于药材市场。

        2方法与结果

        色谱条件:色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱,型号为Lichrospher?C-18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:A相为甲醇,B相为0.3%(V/V)的乙酸水溶液组成梯度洗脱液进行梯度洗脱,洗脱条件见表1;流速:0.8mL·min-1;检测波长:325±2nm;检测时间:105min;柱温:35℃;进样量:5μL。理论塔板数以落新妇苷峰计算,应不低于3000。

        表1指纹图谱梯度洗脱条件

        注:表中A相为甲醇,B相为0.3%(V/V)的乙酸水溶液。

        对照品溶液的制备取落新妇苷对照品,用甲醇溶解配成每1mL含0.10mg落新妇苷的溶液,作为对照品溶液;

        供试品溶液制备精密称取土茯苓药材干燥粉末1克,置于25mL容量瓶中,加入60%乙醇的水溶液,充分浸泡后超声提取3小时,提取结束后放冷,定容,摇匀,静置;取上清液过滤,即得药材供试品溶液。

        测定

        分别吸取落新妇苷对照品溶液及供试品溶液5μL,注入高效液相色谱仪,依法测定,记录色谱图,见附图1、2;以落新妇苷的色谱峰为内参比峰,其保留时间为1计算相对保留时间。

        实施例2测定10批土茯苓药材的指纹图谱,确定土茯苓药材的特征共有峰

        试验方法同实施例1。结果如图3所示。10批药材分别购于广西(批号分别是S1、S2、S3、S4),湖南(批号分别是S5、S6、S7),浙江(批号分别是S8、S9、S?10)三地。

        以上10批药材共有峰相对保留时间统计结果见表2。从表2的结果看,12个共有峰的相对保留时间(简称RT,以下同)的相对标准偏差(简称RSD,以下同)均小于2%,比较稳定。

        通过对10批土茯苓药材指纹图谱测定,比较其色谱图,确定共有峰为12个:

        1号峰平均相对保留时间为0.113,RSD为1.55%

        2号峰RT为0.575,RSD为0.95%

        3号峰RT为0.648,RSD为0.50%

        4号峰RT为0.663,RSD为0.50%

        5号峰RT为0.728,RSD为0.40%

        6号峰RT为0.829,RSD为0.29%

        7号峰RT为0.863,RSD为1.92%

        8号峰RT为0.964,RSD为0.03%

        9号峰RT为1.00,此峰为内参比峰

        10号峰RT为1.085,RSD为0.39%

        11号峰RT为1.117,RSD为0.11%

        12号峰RT为1.165,RSD为0.13%

        相似度评价??采用中国药典委员会推荐地中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版计算相似度。结果见表3,十个不同批次的土茯苓药材相似度均大于0.9。经匹配后的指纹图谱见附图3。

        表3土茯苓药材指纹图谱相似度计算结果

        实施例3本发明的方法的精密度试验:

        以土茯苓药材S2批为供试品,取同一份供试品溶液,在上述色谱条件下重复进样6次,记录各特征峰的保留时间和峰面积,以落新妇苷为参照,计算各特征峰的相对保留时间和峰面积。结果表明,各共有峰相对保留时间的RSD不大于1.0%,相对峰面积的RSD不大于1.5%。结果见表4、表5。

        表4精密度试验共有峰相对保留时间统计

        表5精密度试验共有峰相对峰面积统计

        指纹图谱重现性试验:

        精密称取干燥的土茯苓药材S2批粉末6份,每份1.0g,按“2.1”项下制备供试品溶液,在上述色谱条件下进行HPLC分析,记录各特征峰的保留时间和峰面积,以落新妇苷为参照,计算各特征峰的相对保留时间和峰面积。结果表明,各共有峰相对保留时间的RSD不大于1.0%,相对峰面积的RSD不大于2.0%。结果见表6、表7。

        表6重现性试验共有峰相对保留时间统计

        表7重现性试验共有峰相对峰面积统计

        指纹图谱稳定性试验:

        取土茯苓药材S2批供试品溶液分别在0,2,4,8,12,24h进样分析,记录各特征峰的保留时间和峰面积,以落新妇苷为参照,计算各特征峰的相对保留时间和峰面积。结果表明,各共有峰相对保留时间的RSD不大于1.75%,相对峰面积的RSD不大于2.5%,说明供试品溶液在24h内稳定。结果见表8、表9。

        表8稳定性试验共有峰相对保留时间统计

        表9稳定性试验共有峰相对峰面积统计

        以上试验显示,该方法稳定可靠,符合方法学验证的要求。

        实施例4取S2的土茯苓药材批供试品溶液,按2010年版药典(一部)国家药典委员会公开征求意见稿中所公开的土茯苓药材的落新妇苷含量测定方法,用高效液相色谱仪测定土茯苓药材的落新妇苷含量,图谱见图4。

        具体的测定方法:

        色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.1%冰醋酸溶液(39∶61)为流动相;检测波长为291nm。流速为0.8ml/分钟;理论板数按落新妇苷峰计算应不低于5000。

        对照品溶液的制备??取落新妇苷对照品适量,精密称定,加60%甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液,即得。

        供试品溶液的制备??取本品粉末(过二号筛)0.8g,精密称定,置圆底烧瓶中,精密加入60%甲醇100ml,称定重量,加热回流1小时,放冷,再称定重量,用60%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

        测定法??分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。

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