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    盈彩网重庆时时彩计划: 鹿产品中维生素E的分析检测方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN201310277855.4

    申请日:

    2013.07.03

    公开号:

    CN103323554A

    公开日:

    2013.09.25

    当前法律状态:

    终止

    有效性:

    无权

    法律详情: 未缴年费专利权终止IPC(主分类):G01N 30/02申请日:20130703授权公告日:20141203终止日期:20170703|||授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 30/02申请日:20130703|||公开
    IPC分类号: G01N30/02 主分类号: G01N30/02
    申请人: 大连民族学院
    发明人: 胡文忠; 姜爱丽; 姜波; 王艳颖; 田密霞; 刘程惠; 何煜波; 刘成; 肖振铎
    地址: 116600 辽宁省大连市金州新区辽河西路18号
    优先权:
    专利代理机构: 大连东方专利代理有限责任公司 21212 代理人: 贾汉生;李馨
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201310277855.4

    授权公告号:

    |||103323554B||||||

    法律状态公告日:

    2018.07.24|||2014.12.03|||2013.10.30|||2013.09.25

    法律状态类型:

    专利权的终止|||授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开一种鹿产品中维生素E的分析检测方法。将鹿产品干燥,粉碎,过100目筛,取0.2~0.5g的鹿产品加入1mL正己烷,用甲醇定容至10mL,超声波破碎3min,过滤得滤液;取所得滤液用ODS5μm色谱柱分析,以100%甲醇为流动相,柱温为30℃,流速为0.8mL/min,进样量为20μL;对柱流出液,采用二极管阵列检测器检测,检测波长为204nm,色谱峰出峰时间为:α构型为8.8±0.2min、γ(和β)构型为9.9±0.2min、δ构型为11.1±0.2min;以峰面积计算各种构型维生素E的含量即能够将鹿产品中的α、γ和β、δ构型维生素E含量的同时快速、准确的检测。

    权利要求书

    权利要求书
    1.   鹿产品中维生素E的分析检测方法,其特征在于,具体包括如下步骤:
    (1)将鹿产品干燥,粉碎,过100目筛,按每0.2~0.5g的鹿产品加入1mL正己烷,用甲醇定容至10mL的比例配制混合液,超声波破碎3min,过滤得滤液;
    (2)取步骤(1)所得滤液用ODS5μm色谱柱分析,以100%甲醇为流动相,柱温为30℃,流速为0.8mL/min,进样量为20μL;
    (3)对步骤(2)的柱流出液,采用二极管阵列检测器检测,检测波长为204nm,色谱峰出峰时间为:α构型为8.8±0.2min、γ和β构型为9.9±0.2min、δ构型为11.1±0.2min;
    (4)以峰面积计算各种构型维生素E的含量。

    2.   根据权利要求1所述的鹿产品中维生素E的分析检测方法,其特征在于,所述鹿产品为鹿茸、鹿胎、鹿角帽和鹿鲜血中的一种。

    3.   根据权利要求2所述的鹿产品中维生素E的分析检测方法,其特征在于,所述鹿鲜血经过冷冻干燥。

    4.   根据权利要求2或3所述的鹿产品中维生素E的分析检测方法,其特征在于,所述鹿鲜血为公鹿血、母鹿血或其混合物。

    5.   根据权利要求2所述的鹿产品中维生素E的分析检测方法,其特征在于,所述鹿茸、鹿胎、鹿角帽分别在80℃下进行干燥预处理。

    6.   根据权利要求1所述的鹿产品中维生素E的分析检测方法,其特征在于,所述ODS5μm色谱柱的规格为4.6mm×25cm。

    7.   根据权利要求1所述的鹿产品中维生素E的分析检测方法,其特征在于,所述步骤(1)中,鹿茸、鹿胎、鹿角帽称取的质量为0.2g;鹿血干粉称取的质量为0.5g。

    说明书

    说明书鹿产品中维生素E的分析检测方法
    技术领域
    本发明属于来源于动物的药物中有效成分的分析方法的技术范围。具体涉及在含有鹿产品中维生素E成分的分析检测。
    背景技术
    维生素E(Vitamin E)是一种脂溶性维生素,又称生育酚,是最主要的抗氧化剂之一。溶于脂肪和乙醇等有机溶剂中,不溶于水,对热、酸稳定,对碱不稳定,对氧敏感,对热不敏感。生育酚能促进性激素分泌,使男子精子活力和数量增加;使女子雌性激素浓度增高,提高生育能力,预防流产,还可用于防治男性不育症、烧伤、冻伤、毛细血管出血、更年期综合症、美容等方面。近来还发现维生素E可抑制眼睛晶状体内的过氧化脂反应,使末稍血管扩张,改善血液循环,预防近视发生和发展等。
    维生素E主要有四种衍生物,按甲基位置分为α、β、γ和δ四种。不同构型的维生素E,其活性也不相同。其中活性最高的是α构型,其次为β构型,γ和δ构型活性要低得多。
    维生素E含量的测定,一般采用高效液相色谱法,但通常不能分离不同的构型。鹿产品中维生素E含量较高,但目前尚无鹿产品中维生素E含量的分析检测方法,特别是其中4种构型的分析检测方法。
    发明内容
    本发明的目的在于提供一种对鹿产品(鹿茸、鹿胎、鹿角帽、公鹿血、母鹿血及其混合物)中,将α、γ(和β)、δ构型维生素E含量同时检测的快速、准确的分析方法。其中γ和β两种构型分不开,所以检测结果为两种构型的合量。
    为达到本发明的目的所采用的技术方案:用高效液相色谱法建立三种构型维生素E含量的方法,具体为采用高效液相色谱法在同一波长下,同时测定鹿中药材中三种构型维生素E含量,具体的色谱峰出峰顺序为:α构型为8.8±0.2min、γ(和β)为9.9±0.2min、δ为11.1±0.2min。其中γ和β两种构型分不开,两者出峰时间、峰形和峰面积都是一样的,所以检测结果为两种构型的合量。
    通过考察不同的实验参数,最终确立了最佳的色谱条件,在样品的测定中得到了基线平稳、分离效果好、色谱峰形好的色谱图。
    具体包括如下步骤:
    (1)将鹿产品干燥,粉碎,过100目筛,按每0.2~0.5g的鹿产品加入1mL正己烷,用甲醇定容至10mL的比例配制混合液,超声波破碎3min,过滤得滤液;
    (2)取步骤(1)所得滤液用ODS5μm色谱柱分析,以100%甲醇为流动相,柱温为30℃,流速为0.8mL/min,进样量为20μL;
    (3)对步骤(2)的柱流出液,采用二极管阵列检测器检测,检测波长为204nm,色谱峰出峰时间为:α构型为8.8±0.2min、γ(和β)构型为9.9±0.2min、δ构型为11.1±0.2min;
    (4)以峰面积计算各种构型维生素E的含量。
    对于上述技术方案中,优选的情况下,所述鹿产品为鹿茸、鹿胎、鹿角帽和鹿鲜血中的一种。
    对于上述技术方案中,优选的情况下,所述鹿鲜血先经过冷冻干燥预处理。其中,所述鹿鲜血为公鹿血、母鹿血或其混合物。
    对于上述技术方案中,优选的情况下,所述鹿茸、鹿胎、鹿角帽分别在80℃下进行干燥至恒重,此为预处理步骤。
    对于上述技术方案中,优选的情况下,所述ODS5μm色谱柱的规格为4.6mm×25cm。
    对于上述技术方案中,优选的情况下,所述步骤(1)中,鹿茸、鹿胎、鹿角帽称取的质量为0.2g;鹿血干粉称取的质量为0.5g。
    本发明的方法,其准确度以加标回收率试验测得,其回收率分别是:α构型95.30~98.66%,γ(和β)构型95.68~100.03%,δ构型97.44~98.82%。其稳定性RSD(相对标准偏差)分别为:α构型1.23,γ(和β)构型5.51,δ构,4.47。其最小检出限分别为:α构型为0.00431mg/L,γ(和β)构型为0.00269mg/L,δ构型为0.00510mg/L。其精密度,在测定次数n=3,X±RSD中的RSD值均在±0.016~0.050间。
    本发明突出的特点是能够快速、准确地同时测定鹿产品中三种不同构型的维生素E的含量。
    附图说明
    图1:标准样品和样品溶剂的色谱图。其中:横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度,从图中可以看出,在2.1~7.0min有一系列的溶剂色谱峰;
    图2:α、γ、δ三种构型维生素E标准溶液的色谱图。为保留时间0.0~18.0min的色谱图。其中:横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度,7min以前出峰为溶剂的色谱峰;图中8.8min色谱峰所示,结果为α构型维生素E的色谱峰,证明了α构型维生素E的存在;9.9min色谱峰所示,结果为γ构型维生素E的色谱峰,证明了γ构型维生素E的存在;11.1min色谱峰所示,结果为δ构型维生素E的色谱峰,证明了δ构型维生素E的存在;
    图3:α、γ、δ三种构型维生素E标准溶液的色谱图。为保留时间为7.5~15.0min的色谱图,与图2一致,只是去除了溶剂的色谱峰,仅表示了8.8min色谱峰为α构型维生素E;9.9min色谱峰为γ构型维生素E的色谱峰,11.1min色谱峰为δ构型维生素E的色谱峰;
    图4:α构型维生素E标准曲线。其中:横纵坐标分别代表α构型维生素E标准样品溶液的浓度和对应的峰面积,从图中的线性回归方程y=387724x-16780所示,相关系数R结果为0.9981,证明了该曲线的线性关系好;
    图5:γ构型维生素E标准曲线。其中:横纵坐标分别代表γ构型维生素E标准样品溶液的浓度和对应的峰面积,从图中的线性回归方程y=517994x-5937.6所示,相关系数R结果为0.9996,证明了该曲线的线性关系好;
    图6:δ构型维生素E标准曲线。其中:横纵坐标分别代表δ构型维生素E标准样品溶液的浓度和对应的峰面积,从图中的线性回归方程y=305508x-3827.2所示,相关系数R结果为0.9998,证明了该曲线的线性关系好;
    图7:鹿茸溶液色谱图。其中:横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度。从图中的8.9min色谱峰所示,结果为α构型维生素E的色谱峰,证明了α构型维生素E的存在;9.9min色谱峰所示,结果为γ(和β)构型维生素E的色谱峰,证明了γ(和β)构型维生素E的存在;11.4min色谱峰所示,结果为δ构型维生素E的色谱峰,证明了δ构型维生素E的存在;
    图8:鹿胎溶液色谱图。其中:横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度。从图中的8.7和8.9min色谱峰所示,结果为α构型维生素E的色谱峰,证明了α构型维生素E的存在;9.9min色谱峰所示,结果为γ(和β)构型维生素E的色谱峰,证明了γ(和β)构型维生素E的存在;11.4min色谱峰所示,结果为δ构型维生素E的色谱峰,证明了δ构型维生素E的存在;
    图9:鹿角帽溶液色谱图。其中:横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度。从图中的8.8min色谱峰所示,结果为α构型维生素E的色谱峰,证明了α构型维生素E的存在;9.9min色谱峰所示,结果为γ(和β)构型维生素E的色谱峰,证明了γ(和β)构型维生素E的存在;11.4min无色谱峰,证明了无δ构型维生素E的存在;
    图10:公鹿血溶液色谱图。其中:横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度。从图中的8.9min色谱峰所示,结果为α构型维生素E的色谱峰,证明了α构型维生素E的存在;9.9min色谱峰所示,结果为γ(和β)构型维生素E的色谱峰,证明了γ(和β)构型维生素E的存在;11.2min色谱峰所示,结果为δ构型维生素E的色谱峰,证明了δ构型维生素E的存在;
    图11:母鹿血溶液色谱图。其中:横纵坐标分别代表保留时间和色谱峰强度。从图中的8.6min色谱峰所示,结果为α构型维生素E的色谱峰,证明了α构型维生素E的存在;9.8min色谱峰所示,结果为γ(和β)构型维生素E的色谱峰,证明了γ(和β)构型维生素E的存在;11.4min色谱峰所示,结果为δ构型维生素E的色谱峰,证明了δ构型维生素E的存在;
    具体实施方式
    下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明,但不以任何方式限制本发明。
    以下用实施例对本发明作进一步说明。
    实施例1
    仪器:日本岛津公司LC?20AD型高效液相色谱仪,LC?20AB二极管阵列检测器,日本岛津公司UV?2201型紫外?可见分光光度计,超声波破碎仪。
    试剂:甲醇:色谱纯;正己烷:优级纯。
    维生素E标准样品:Sigma公司。
    样品来源:鹿茸、鹿胎、鹿角帽、鹿血均来自于吉林鹿业生物制品有限公司。
    流动相的选择:用甲醇和不同比例的甲醇水溶液,乙腈和不同比例的乙腈水溶液,以及加入不同比例的丙酮、乙酸乙酯、异丙醇等作为流动相,经过反复多次试验,发现用浓度为100%的甲醇作为流动相分离效果较佳。具体的色谱峰出峰时间为:α构型为8.8min、γ(和β)为9.9min、δ为11.1min。
    检测波长的选择:维生素E标准样品用含正己烷10%(v/v)的甲醇溶液溶解稀释后,经紫外?可见吸收分光光度计在190~400nm波长范围内扫描得:α构型最大吸收波长为291.965nm和203.353nm,β构型最大吸收波长为295.607nm和203.353nm,γ构型最大吸收波长为296.821nm和204.566nm、δ构型最大吸收波长为298.035nm和204.566nm。在204nm和295nm对不同构型维生素E标准样品(浓度均为0.5mg/L)进行HPLC分析,实验结果表明在204nm下检测的色谱峰面积要远高于295nm波长下,也就是说在204nm波长下分析的灵敏度要高于在295nm波长下,具体数据见表1,所以204nm选择为检测波长。
    表1不同波长下HPLC检测的峰面积

    其中γ和β两种构型分不开,所以检测结果为两种构型的合量。
    溶剂峰:含10%正己烷的甲醇溶液作为处理标准样品和样品的溶剂,其色谱峰见图1。
    标准溶液色谱图见图2。
    由图1和图2可见溶剂的色谱峰均集中在7min以前出峰,而三种构型维生素E的色谱峰在8.8min?11.1min之间,所以选用的溶剂对三种构型维生素E的检测不构成干扰。
    色谱条件:采用ODS5μm(4.6mm×25cm)色谱柱,以100%甲醇为流动相,柱温30℃,流速为0.8mL/min,进样量:20μL。二极管阵列检测器,在最大吸收波长下进行检测,检测波长为204nm。色谱峰出峰时间为:α构型为8.8±0.2min、γ(和β)构型为9.9±0.2min、δ构型为11.1±0.2min。
    标准曲线和相关系数:分别称取不同构型的维生素E,用正己烷溶解,配成浓度为50mg/L的标准溶液。分别从上述标准溶液中取出一定量于10ml容量瓶中,使其中含有10%正己烷,用甲醇定容,配成不同浓度的混合标准溶液,见表2,色谱图见图3,三种构型维生素E的标准曲线分别见图4、图5、图6。
    因为γ和β两种构型分不开,所以配制α、γ、δ的标准溶液的方法,不包括β构型。
    表2

    加标回收率:按照表3所示的方法配制鹿茸样品,即在含有鹿茸样品溶液的不同的10mL容量瓶中分别准确加入不同量的三种构型维生素E的混合标准溶液,测定其回收率,实验结果见表3。以峰面积计算各种构型维生素E的含量。
    表3


    精密度实验:见实施例2。
    最低检出限:按如下公式计算三种构型维生素E的检出限:
    Ci=2*HNC/H
    其中:Ci为最小检测浓度;HN为噪声峰高;C为标准样品浓度;H为标准样品峰高。
    α、γ、δ三种构型维生素E标准溶液浓度C均为0.25mg/L。对于α构型维生素E噪声峰高HN为0.05,标准样品峰高H为5.80,则计算得α构型维生素E的最小检测浓度Ci为0.00431mg/L;对于γ构型维生素E噪声峰高HN为0.05,标准样品峰高H为9.32,则计算得γ构型维生素E的最小检测浓度Ci为0.00268mg/L;对于δ构型维生素E噪声峰高HN为0.05,标准样品峰高H为4.93,则计算得δ构型维生素E的最小检测浓度Ci为0.00507mg/L。
    稳定性实验:
    分别从已配成浓度为50mg/L的α、γ、δ三种构型维生素E标准溶液中取出一定量于10ml容量瓶中,使其中含有体积比为10%的正己烷,用甲醇定容,配成混合标准溶液,用于做维生素E混标的稳定性实验,实验结果见表4。
    表4

    由表4可见,三种构型维生素E在48小时内基本是稳定的。
    实施例2
    (一)仪器:日本岛津公司LC?20AD型高效液相色谱仪,LC?20AB二极管阵列检测器,日本岛津公司UV?2201型紫外?可见分光光度计,超声波破碎仪。
    试剂:甲醇:色谱纯;正己烷:优级纯。
    色谱条件:采用ODS5μm(4.6mm×25cm)色谱柱,以100%甲醇为流动相,柱温30℃,流速为0.8mL/min,进样量:20μL。二极管阵列检测器,在最大吸收波长下进行检测,检测波长为204nm。色谱峰出峰时间为:α构型为8.8min、γ(和β)构型为9.9min、δ构型为11.1min。以峰面积计算各种构型维生素E的含量。
    样品来源:鹿茸、鹿胎、鹿角帽、鹿血均来自于吉林鹿业生物制品有限公司
    (二)样品处理
    (1)将鹿样品中的鹿茸、鹿胎、鹿角帽在80℃下干燥,粉碎,过100目筛。将鹿鲜血冷冻干燥(所述鹿血为公鹿血、母鹿血或其混合物),研磨,过100目筛。
    (2)准确称取鹿茸、鹿胎、鹿角帽各0.2g,或鹿血干粉0.5g,加入正己烷1mL,用甲醇定容至10mL,超声波破碎3min,抽滤,滤液进行分析。
    (3)采用ODS5μm(4.6mm×25cm)色谱柱,以100%甲醇为流动相,柱温30℃,流速为0.8mL/min,进样量:20μL。
    (4)二极管阵列检测器,在最大吸收波长下进行检测,检测波长为204nm。色谱峰出峰时间为:α构型为8.8±0.2min、γ(和β)构型为9.9±0.2min、δ构型为11.1±0.2min。
    (5)以峰面积计算各种构型维生素E的含量。
    (三)样品的测定及结果:测定鹿茸、鹿胎、鹿角帽、公鹿和母鹿血中α、γ(和β)、δ三种构型维生素E含量,鹿茸样品溶液色谱图见图7、鹿胎样品溶液色谱图见图8、鹿角帽样品溶液色谱图见图9、公鹿血样品溶液色谱图见图10、母鹿血样品溶液色谱图见图11,样品中三种构型维生素E含量结果见表5,同时精密度试验结果(测定次数n=3)见表5,表中数据为X±RSD。
    检测结果如表5

    从表5所测得的结果证明:本发明方法不仅能够快速地同时测定鹿产品中三种不同构型的维生素E的含量,且具有很好的精度。

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