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    重庆时时彩不给提现: 一种基于电位控制固定抗体的免疫传感器制备方法.pdf

    关 键 词:
    一种 基于 电位 控制 固定 抗体 免疫 传感器 制备 方法
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    摘要
    申请专利号:

    CN201310411853.X

    申请日:

    2013.09.11

    公开号:

    CN103513028A

    公开日:

    2014.01.15

    当前法律状态:

    终止

    有效性:

    无权

    法律详情: 未缴年费专利权终止IPC(主分类):G01N 33/553申请日:20130911授权公告日:20150812终止日期:20160911|||授权|||实质审查的生效IPC(主分类):G01N 33/553申请日:20130911|||公开
    IPC分类号: G01N33/553 主分类号: G01N33/553
    申请人: 辽宁师范大学
    发明人: 冯春梁; 孙越; 李杨
    地址: 116029 辽宁省大连市沙河口区黄河路850号
    优先权:
    专利代理机构: 大连非凡专利事务所 21220 代理人: 高学刚
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    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201310411853.X

    授权公告号:

    |||||||||

    法律状态公告日:

    2017.11.03|||2015.08.12|||2014.02.19|||2014.01.15

    法律状态类型:

    专利权的终止|||授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明公开一种基于电位控制固定抗体的免疫传感器制备方法,其特征在于:所述的方法按照以下步骤进行:基础电极的清洁处理:对电极进行抛光、浸泡和清洗处理,去除其表面杂质后,获得表面新鲜洁净的电极;在基础电极上形成带有氨基的有机膜;将带有氨基有机膜的基础电极与参比电极、辅助电极构成三电极系统,将基础电极放置在pH2.0至10.0、浓度为0.1至10mg/mL的缓冲溶液中,在-800至+400mV的电位条件下处理1至60min,最终实现抗体膜在有机膜上的固定。这是一种在抗体固化的过程中无需使用交联剂或偶联剂,无需酶标记或荧光标记,成本低廉,简单易行的免疫传感器制备方法。

    权利要求书

    权利要求书
    1.  一种基于电位控制固定抗体的免疫传感器制备方法,其特征在于:所述的方法按照以下步骤进行:
    基础电极的清洁处理:对电极进行抛光、浸泡和清洗处理,去除其表面杂质后,获得表面新鲜洁净的电极,
    在基础电极上形成带有氨基的有机膜,
    将带有氨基有机膜的基础电极与参比电极、辅助电极构成三电极系统,将基础电极放置在pH2.0至10.0、浓度为0.1至10mg/mL的IgG型抗体溶液中,在-800至+400mV的电位条件下处理1至60min,最终实现抗体膜在有机膜上的固定。

    2.  根据权利要求1所述的基于电位控制固定抗体的免疫传感器制备方法,其特征在于:所述的基础电极选用铂、金、银、铜、石墨、炭糊或玻炭中的一种。

    3.  根据权利要求2所述的基于电位控制固定抗体的免疫传感器制备方法,其特征在于:所述的带有氨基的有机膜通过自组装法或电聚合方法附着在以铂、金、银或铜为材质的基础电极上,通过电聚合方法附着在以石墨、炭糊或玻炭为材质的基础电极上。

    4.  根据权利要求1所述的基于电位控制固定抗体的免疫传感器制备方法,其特征在于:所述的带有氨基的有机膜为氨基硫酚及其衍生物、硫脲类化合物、胱氨及其衍生物、硫堇及其衍生物、苯胺及其衍生物中的一种或多种。

    5.  根据权利要求1所述的基于电位控制固定抗体的免疫传感器制备方法,其特征在于:所述的抗体膜为IgG型单克隆抗体或IgG型多克隆抗体。

    6.  根据权利要求1所述的基于电位控制固定抗体的免疫传感器制备方法,其特征在于:所述的抛光步骤为:首先将基础电极的表面用金相砂纸打磨,然后依次用1.0μm、0.3μm、0.05μm的γ至氧化铝浆在麂皮上抛光,之后依次用丙酮、纯水淋洗干净;
    所述的浸泡步骤为:将经抛光处理后的基础电极浸入piranha溶液中在50℃的条件下浸泡20min,然后用蒸馏水冲洗基础电极5次,上述的浸泡和冲洗步骤需进行2次操作;
    所述的清洗步骤为:将基础电极取出后用纯水淋洗5次,并将其浸入纯水中进行超声清洗3次,每次清洗时间为5min,最后取出基础电极并用N2吹干。

    7.  根据权利要求3所述的基于电位控制固定抗体的免疫传感器制备方法,其特征在于:所述的自组装方法为:将经过清洁处理后的基础电极浸入0.1~25mmol/L氨基有机物的溶液中浸泡24h,以在基础电极上形成末端为氨基的单层分子膜或多层分子膜,其中氨基有机物为氨基硫酚及其衍生物、硫脲类化合物、胱氨及其衍生物中的一种或多种。

    8.  根据权利要求3所述的基于电位控制固定抗体的免疫传感器制备方法,其特征在于:所述的电聚合方法为:在 0.01~0.05mol/L氨基有机物溶液中,将经过清洁处理后的基础电极作为三电极系统的工作电极,以50mV/s的扫速在至500至+500mV的电位范围内循环扫描10至50圈后,用纯水淋洗基础电极5次,以在基础电极表面上形成带有自由氨基或亚氨基的聚合物薄膜,其中氨基有机物为硫堇及其衍生物、苯胺及其衍生物中的一种或多种。

    说明书

    说明书一种基于电位控制固定抗体的免疫传感器制备方法
    技术领域
    本发明涉及一种免疫分析领域中传感器的制备方法,特别是一种基于电位控制固定抗体的免疫传感器制备方法。
    背景技术
    免疫分析的提出及发展是生物分析化学最伟大的成就之一。免疫分析技术结合了抗原、抗体分子间的特异性识别和电化学、光谱学、声学等技术的灵敏、方便等特点,已广泛应用于临床诊断、生物化学、环境分析、食品安全及军事医学等领域。免疫传感器作为一种新兴免疫分析手段,具有检测速度快,操作简便,成本较低等特点,受到人们愈来愈广泛的关注。
    抗体的固定化是免疫传感器制备的关键技术之一。常用的有包埋法、交联法、共价键法及静电吸附法等,这些固定方法通常具有以下缺点:1.固定抗体时需占用一个免疫活性位点,造成抗体的活性损失或抗体膜不稳定,致使免疫传感器性能减弱,如检测灵敏度低、检测范围窄。2.使用的交联或偶联试剂昂贵,部分固定方法步骤繁琐,不易大规模操作、实施。因此现在需要一种能够解决上述问题的新的抗体固定方法。
    发明内容
    本发明是为了解决现有技术所存在的上述不足,提出一种在抗体固化的过程中无需使用交联剂或偶联剂,无需酶标记或荧光标记,成本低廉,简单易行的免疫传感器制备方法。
    本发明的技术解决方案是:一种基于电位控制固定抗体的免疫传感器制备方法,其特征在于:所述的方法按照以下步骤进行:
    基础电极的清洁处理:对电极进行抛光、浸泡和清洗处理,去除其表面杂质后,获得表面新鲜洁净的电极,
    在基础电极上形成带有氨基的有机膜,
    将带有氨基有机膜的基础电极与参比电极、辅助电极构成三电极系统,将基础电极放置在pH2.0至10.0、浓度为0.1至10mg/mL的IgG型抗体溶液中,在-800至+400mV的电位条件下处理1至60min,最终实现抗体膜在有机膜上的固定。
    所述的基础电极选用铂、金、银、铜、石墨、炭糊或玻炭中的一种。
    所述的带有氨基的有机膜通过自组装法或电聚合方法附着在以铂、金、银或铜为材质的基础电极上,通过电聚合方法附着在以石墨、炭糊或玻炭为材质的基础电极上。
    所述的带有氨基的有机膜为氨基硫酚及其衍生物、硫脲类化合物、胱氨及其衍生物、硫堇及其衍生物、苯胺及其衍生物中的一种或多种。
    所述的抗体膜为IgG型单克隆抗体或IgG型多克隆抗体。
    所述的抛光步骤为:首先将基础电极的表面用金相砂纸打磨,然后依次用1.0μm、0.3μm、0.05μm的γ至氧化铝浆在麂皮上抛光,之后依次用丙酮、纯水淋洗干净;
    所述的浸泡步骤为:将经抛光处理后的基础电极浸入piranha溶液中在50℃的条件下浸泡20min,然后用蒸馏水冲洗基础电极5次,上述的浸泡和冲洗步骤需进行2次操作。
    所述的清洗步骤为:将基础电极取出后用纯水淋洗5次,并将其浸入纯水中进行超声清洗3次,每次清洗时间为5min,最后取出基础电极并用N2吹干。
    所述的自组装方法为:将经过清洁处理后的基础电极浸入0.1~25mmol/L氨基有机物的溶液中浸泡24h,以在基础电极上形成末端为氨基的单层分子膜或多层分子膜,其中氨基有机物为氨基硫酚及其衍生物、硫脲类化合物、胱氨及其衍生物中的一种或多种。
    所述的电聚合方法为:在 0.01~0.05mol/L氨基有机物溶液中,将经过清洁处理后的基础电极作为三电极系统的工作电极,以50mV/s的扫速在至500至+500mV的电位范围内循环扫描10至50圈后,用纯水淋洗基础电极5次,以在基础电极表面上形成带有自由氨基或亚氨基的聚合物薄膜,其中氨基有机物为硫堇及其衍生物、苯胺及其衍生物中的一种或多种。
    本发明同现有技术相比,具有如下优点:
    利用本发明所公开的方法制备的免疫传感器,与现有的免疫传感器相比,具有以下优点:这种免疫传感器的构造简单,在抗体固化的过程中无需使用交联剂或偶联剂,无需酶标记或荧光标记,成本低廉,简单易行;并且该传感器的检测下限低、检测范围宽,操作简单,能够广泛应用于临床检验、生物医学、环境监测、食品安全、医药工业及军事、医学等领域。因此可以说这种制备方法具备了多种优点,具备广泛的市场前景和科研前景。
    附图说明
    图1是利用本发明所述方法制备出的免疫传感器的制备过程示意图。
    图2是免疫传感器制备过程及对抗原检测后的循环伏安图。
    图3是免疫传感器制备过程及对抗原检测后的交流阻抗谱。
    图4是免疫传感器对抗原检测的工作曲线图。
    具体实施方式
    下面将结合附图说明本发明的具体实施方式。
    图2中的a为基础电极,b为氨基有机膜修饰电极,c为免疫传感器,d为传感器对抗原检测后的传感器。
    图3中的a为基础电极,b为氨基有机膜修饰电极,c为免疫传感器,d为传感器对抗原检测后的传感器,内嵌图为曲线a和b的放大图。
    实施例一
    选择金电极作为基础电极,硫脲为氨基化合物,以羊抗至小鼠IgG抗体制备免疫传感器。
    首先将金电极用金相砂纸打磨,依次用l.0、0.3、0.05μm的γ至氧化铝浆在麂皮上抛光,接着依次用丙酮、纯水淋洗干净。将抛光后的电极浸入新配制的piranha溶液中(30%H2O2:浓H2SO4=1:3,体积比),50℃下浸泡20min,2次。取出电极用纯水淋洗5次,纯水中反复超声清洗3次,每次5min,用N2吹干。最后,将电极浸入25mmol/L 硫脲溶液中,浸泡24h,电极表面上形成硫脲自组装单分子膜。取出电极(硫脲修饰电极),作为工作电极浸入pH 3.0、1mg/mL的抗体溶液中,以Ag/AgCl电极为参比电极,铂电极为对电极,在至400mV电位下,组装抗体10min,制得免疫传感器。利用制得的免疫传感器对抗原(小鼠IgG)进行检测,检测下限可达10-2ng/mL,检测范围为10-2-103ng/mL。  
    实施例二 
    选择铂电极作为基础电极,对氨基苯硫酚与半胱氨酸混合物为氨基化合物,以山羊抗至兔IgG抗体制备免疫传感器。
    首先将铂电极用金相砂纸打磨,依次用l.0、0.3、0.05μm的γ至氧化铝浆在麂皮上抛光,接着依次用丙酮、纯水淋洗干净。将抛光后的电极浸入新配制的piranha溶液中(30%H2O2:浓H2SO4=1:3,体积比),50℃下浸泡20min,2次。取出电极用纯水淋洗5次,纯水中反复超声清洗3次,每次5min,用N2吹干。最后,将电极浸入0.1mmol/L 对氨基苯硫酚与半胱氨酸混合溶液中,浸泡24h,电极表面上形成氨基有机膜。取出氨基有机膜修饰电极,作为工作电极浸入pH 2.0、10mg/mL抗体溶液中,以Ag/AgCl电极为参比电极,铂电极为对电极,在+400mV电位下,组装抗体60min,制得免疫传感器。利用制得的免疫传感器对抗原(兔IgG)进行检测,检测下限可达10-2ng/mL,检测范围为10-2-103ng/mL。
    实施例三 
    选择玻碳电极作为基础电极,邻苯二胺为氨基化合物,以兔抗至人IgG抗体制备免疫传感器。
    首先将玻碳电极用金相砂纸打磨,依次用l.0、0.3、0.05μm的γ至氧化铝浆在麂皮上抛光,接着依次用丙酮、纯水淋洗干净。接着将电极浸入新配制的piranha溶液中(30%H2O2:浓H2SO4=1:3,体积比),50℃下浸泡20min,2次。取出电极用纯水淋洗5次,纯水中反复超声清洗3次,每次5min,用N2吹干后,在 0.05mol/L邻苯二胺溶液中,以清洁处理好的电极为工作电极。以50mV/s的扫速在至500~500mV的电位范围内循环扫描50圈后,用纯水淋洗5次,得到修饰了氨基的电极表面。将该电极作为工作电极浸入pH 10.0、0.1mg/mL抗体溶液中,以Ag/AgCl电极为参比电极,铂电极为对电极,在-800mV电位下,组装抗体1min,制得免疫传感器。利用制得的免疫传感器对抗原(人IgG)进行检测,检测下限可达10-2ng/mL,检测范围为10-2-103ng/mL。

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