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    重庆时时彩怎么玩的: 鱼类胚胎玻璃化冷冻保存方法.pdf

    摘要
    申请专利号:

    重庆时时彩单双窍门 www.4mum.com.cn CN03112417.8

    申请日:

    2003.05.29

    公开号:

    CN1552200A

    公开日:

    2004.12.08

    当前法律状态:

    终止

    有效性:

    无权

    法律详情: 专利权的终止(未缴年费专利权终止)授权公告日:2005.10.5|||授权|||实质审查的生效|||公开
    IPC分类号: A01K61/00 主分类号: A01K61/00
    申请人: 中国水产科学研究院黄海水产研究所;
    发明人: 陈松林; 田永胜
    地址: 266071山东省青岛市南京路106号
    优先权:
    专利代理机构: 青岛联智专利商标事务所有限公司 代理人: 袁和善
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN03112417.8

    授权公告号:

    |||1221164||||||

    法律状态公告日:

    2008.07.30|||2005.10.05|||2005.02.09|||2004.12.08

    法律状态类型:

    专利权的终止(未缴年费专利权终止)|||授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    一种鱼类胚胎玻璃化冷冻保存方法,通过比较不同抗冻剂的毒性效应和玻璃化性能,筛选出适宜海水鱼类胚胎的玻璃化液配方;确定适宜玻璃化处理的胚胎发育时期,研制出特定的洗脱溶液,采用分步平衡、快速降温和解冻的技术路线,建立了鱼类胚胎玻璃化冷冻保存技术。对牙鲆不同发育时期胚胎进行了8次玻璃化冷冻实验中共获得冷冻复活胚20粒,最高复活率达32%。其中5次实验中获得冷冻复活胚胎发育孵化出鱼苗的结果。在20枚冷冻复活胚胎中,有14枚冻胚孵化出鱼苗,孵化率高达70%。冻胚孵出的鱼苗,胚体透明,形态正常,无畸形。本发明技术无需昂贵的仪器设备,操作简单,成本低廉,易于推广,可用于牙鲆等海水鱼类胚胎超低温(-196℃)冷冻保存。

    权利要求书

    1: 一种鱼类胚胎玻璃化冷冻保存方法,其特征在于它的操作技术是, 包括鱼类胚胎收集、制备基础液和筛选抗冻剂、配制玻璃化液、胚胎冷冻 前的平衡处理、投入到液氮中予以冷冻保存等,之后待需时,予以解冻培 育,其鱼类胚胎收集:为体节出现期—出膜前期;玻璃化液配制:是基础 液和抗冻剂的混合液,基础液(BS2)为:NaCl
    2: 472%、KCl?0.086%、 CaCl 2 ·2H 2 O?0.146%、MgCl 2 ·6H 2 O?0.486%、NaHCO 3 ?0.019%;抗冻剂为: 1,2-丙二醇(PG)、甲醇(MeOH);玻璃化液配方是:BS2:50-67%,PG: 20-30%,MeOH:13-20%;胚胎冷冻前的平衡处理:将胚胎逐级依次在浓度 为25%、33%、50%、67%及100%的玻璃化液中分五次进行平衡处理,处理 45-55min,每步9-11min;液氮中速冻保存:将平衡好的胚胎9-13粒连同 250ul的玻璃化液吸入到直径3mm、长10cm麦管内,热压封口后,以2000 ℃/min的降温速率投入到-196℃液氮中速冻保存;解冻和培育:将麦管从 液氮中移出,在1-2秒钟时间内快速插入39-40℃水浴中使其迅速解冻,在 胚胎乳白色即将消失时,剪开麦管,用2ml?0.125M的蔗糖洗脱液,将胚胎 冲入器皿中进行洗脱,时间为10min,之后添加14-16℃灭菌海水进行培育。

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    鱼类 胚胎 玻璃化 冷冻 保存 方法
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